WT1基因在乳腺癌组织中表达的研究

目的探讨乳腺癌组织中WT1基因表达水平及其临床意义。方法采用实时定量RT—PCR方法,检测110例乳腺肿瘤及其邻近正常乳腺组织中的WT1基因及内参照GAPDH的表达水平,以WT1N=（WT1拷贝数／GAPDH拷贝数）×10^4计算WT1表达水平,并计算同一患者肿瘤组织与正常组织中WT1。比值,定义为T／NWT1比值,分析WT1基因表达（T／NWT1）水平与临床病理参数的关系。结果102例乳腺癌组织中WT1N明显高于其周围邻近正常乳腺组织中的表达（P〈0．01）,而8例乳腺良性肿瘤组织与其相应的正常乳腺组织中WT1N表达水平差异无统计学意义（P〉0．05）。乳腺癌组织中WT1N及其T／NWT1比值明显高于乳腺良性肿瘤组织（P〈0．01）,且T／NWT1比值与有无淋巴结转移、乳腺癌病理类型、雌激素受体（ER）状态及孕激素受体（PR）状态无相关性。WT1基因表达水平与IL-8基因表达水平具有很好的相关性（r=0．723,P〈0．01）。结论乳腺癌组织高表达WT1,乳腺癌组织中WT1表达水平可作为评价疾病进展及判断预后的指标。     

WT1基因在急性白血病中的表达及其临床意义

 【摘要】　目的　探讨急性白血病（AL）患者体内WT1基因的表达情况及其临床意义。方法　采用荧光定量聚合酶链反应对急性髓系、淋巴细胞白血病66例患者WT1基因进行检测,并比较髓系各亚型之间的基因表达量差异,观察基因表达水平与病程及预后之间的相关性,同时分析造血干细胞移植患者的病程与WT1基因表达之间的关系。结果　66例患者中,87.5 %（14／16）的急性淋巴细胞白血病及76.0 %（38／50）的急性髓系白血病患者WT1基因表达阳性;髓系各亚型中,M3的表达水平低于其他各亚型（与M1、M2、M4、M5相比,P值分别为0.040、0.007、0.006、0.010）。WT1基因的表达水平与疾病状态密切相关,完全缓解组表达水平明显低于未缓解组（P＝0.018）及复发组（P＝0.003）,其滴度的再次升高可提前1.5个月预测复发。WT1基因与造血干细胞移植患者的预后相关,WT1基因转阴的患者较持续表达及一度下降后再次上升的患者预后好。结论　WT1基因在AL患者中的表达可代表微小残留病灶,急性髓系白血病各亚型中M3表达水平相对较低,WT1表达水平与临床病程及预后密切相关。     

白血病患者WT1基因表达及其临床意义

目的:探讨WT1基因在白血病中表达情况与临床意义。方法:采用筑巢式逆转录聚合酶链反应(NestRT-PCR)检测K562白血病细胞系、78例急性白血病(AL)患者、10例慢性粒细胞白血病(CML)患者和22例正常对照骨髓或外周血细胞的WT1基因表达。结果:60例初治或复发AL中有44例患者高表达WT1基因,阳性率73.3%。在急性非淋巴细胞白血病(ANLL)和急性淋巴细胞白血病(ALL)阳性率分别为70.8%和83.3%,两组无显著性差异。随着WT1基因表达水平的升高,完全缓解(CR)率有明显下降的趋势,CR后WT1基因表达水平明显下降,复发后又显著升高。结论:用NestRT-PCR测定WT1基因的表达可用作检测白血病微小残留病(MRD)的一项指标。     

NB4细胞诱导分化过程中WT1(17AA+/-)剪接变异体表达的研究

目的探讨WT1(17AA /-)剪接变异体表达的改变与NB4细胞诱导分化的关系.方法建立了实时定量RT-PCR方法检测看家基因GAPDH、WT1基因及其WT1(17AA )剪接变异体的表达水平,以同一份标本(WT1拷贝数/GAPDH拷贝数)×104来计算WT1表达水平,定义为WT1N(normalized WT1 expressionlevel),同样定义WT1(17AA )N,并用流式细胞仪检测NB4细胞表面抗原CD11b的变化.结果随着NB4细胞向粒系终末分化WT1基因及其WT1(17AA )剪接变异体的表达水平迅速下降,全反式维甲酸(ATRA)作用0,6,12,18,24,48,72 h后WT1N的平均表达水平分别为191.11,121.17,66.72,43.47,18.29,4.04和3.79,WT1(17AA )N剪接变异体的表达水平分别为105.12,46.89,20.50,10.38,8.85,2.16和1.92,两者均与CD11b的变化呈负相关(r=-0.65,P＜0.01;r=-0.77,P＜0.01),而且值得注意的是在AT-RA作用后开始的18 h内,WT1(17AA )N/WT1N比值逐渐下降,24 h后与药物作用前水平无统计学差异,表明在ATRA诱导NB4细胞分化早期以WT1(17AA )剪接变异体表达下降为主.结论WTl基因高表达与NB4白血病细胞分化阻滞有关,WT1(17AA )剪接变异体可能在分化阻滞中起主要作用.     

哺乳类雷帕霉素靶蛋白在白血病患者中表达的意义

目的 研究白血病细胞中哺乳类雷帕霉素靶蛋白(mTOR)表达情况.方法 采用实时荧光定量PCR检测白血病患者的mTOR mRNA表达情况.结果白血病患者中新近诊断组及复发组mTOR mRNA表达水平明显高于健康对照组和完全缓解组.未缓解组mTOR mRNA表达水平明显高于健康对照组.与新近诊断组和复发组差异无统计学意义.结论 mTOR mRNA表达水平的增高与白血病的发生密切相关.     

哺乳类雷帕霉素靶蛋白在白血病患者中表达的意义

 目的　研究白血病细胞中哺乳类雷帕霉素靶蛋白（mTOR）表达情况。方法　采用实时荧光定量PCR检测白血病患者的mTOR mRNA表达情况。结果　白血病患者中新近诊断组及复发组mTOR mRNA表达水平明显高于健康对照组和完全缓解组。未缓解组mTOR mRNA表达水平明显高于健康对照组,与新近诊断组和复发组差异无统计学意义。结论　mTOR mRNA表达水平的增高与白血病的发生密切相关。     

白血病患者WT1基因表达及其临床意义

本文探讨ＷＴ１基因在各种白血病中的表达及其临床意义。应用逆转录酶链反应法测定Ｋ５６２细胞株,２３例白血患者,其中ＡＭＬ１２例,ＡＬＬ３例,ＣＭＬ７例,ＣＬＬ１例;２例恶性淋巴瘤患者骨髓或外周血及１０例正常人外周血ＷＴ１基因表达。     

WT1基因在骨髓增生异常综合征患者中的表达

 目的　探讨WT1基因在骨髓增生异常综合征（MDS）诊断和预后判断中的意义。方法　采用骨髓涂片提取RNA,通过荧光定量RT-PCR方法,检测45例MDS患者及10例健康人骨髓涂片中WT1表达水平。结果　MDS各亚型WT1基因表达与健康对照组差异有统计学意义,与MDS患者的疾病进展呈正相关;半年内发展为难治性贫血伴原始细胞过多（RAEB）／转化中的难治性贫血伴原始细胞过多（RAEBt）的难治性贫血（RA）患者,其 WT1表达明显高于半年内病情稳定的RA患者;在RA期间,WT1表达水平的波动小于1个对数级,从RA发展到RAEB时,WT1表达水平增长1个对数级以上。结论　WT1基因可作为MDS疾病进程的标志物;若WT1表达水平比健康对照平均值高2个对数级,提示可能诊断为RA;若RA患者的WT1表达水平上升大于1个对数级,提示MDS近期内可能发生疾病进展。     

急性白血病患者WT1基因表达水平及其临床意义

目的：探讨WT1基因与急性髓系白血病（AML）、急性淋巴细胞白血病（ALL）患者预后的关系及其用于微小残留病（MRD）监测的可能性。方法收集58例初发AML、32例初发ALL、40例AML-完全缓解（CR）、28例ALL-CR患者及31例同期三系增生活跃患者（对照组）骨髓单个核细胞,利用荧光定量聚合酶链反应（PCR）方法检测WT1基因的表达,建立WT1基因在各组间的表达阈值,以WT1拷贝数／ABL拷贝数×100%表示WT1基因的相对表达量。结果初发AML患者与对照组间WT1基因中位相对表达量差异有统计学意义[20.880%（3.550%～48.500%）比0.026%（0～0.240%）,Z＝-7.74,P＜0.0001]。AML-CR患者[0.102%（0～5.380%）]与初发AML患者间WT1基因中位相对表达量差异有统计学意义（Z＝-8.34,P＜0.0001）。此外,WT1基因表达高于阈值（20.880%）的AML患者第1个疗程CR率为60.7%（17／28）,而表达低的患者为76.7%（23／30）。AML患者复发时WT1表达升高。与对照组相比,初发ALL患者WT1基因中位相对表达量[0.350%（0.021%～10.780%）]升高（Z＝-2.58,P＜0.05）,但与ALL-CR患者[0.038%（0～2.800%）]相比,WT1基因中位相对表达量差异无统计学意义（P＝0.065）。结论 WT1基因在AML中的表达相对较高,其可能成为AML患者预后评估及MRD监测的有效指标,但并不适用于ALL患者。     

WT 1基因与恶性肿瘤靶向免疫治疗

WT1（Wilm＇s tumor gene）基因在白血病及各种实体瘤包括肺癌和乳腺癌中高表达，且在这些恶性肿瘤中起癌基因作用，提示了WT1蛋白可以作为一个新的超表达的肿瘤抗原。WT1九聚肽体外树突状细胞诱导细胞毒性T淋巴细胞（CTL）产生WT1肽特异性CTL，这种CTL可以杀伤内源性表达WT1的白血病和实体瘤细胞。Ⅰ期临床试验结果提供了WT1肽可能作为免疫制剂而用于临床的依据。     

急性髓细胞白血病儿童Wilms瘤基因1及其剪接异构体的表达及临床意义

目的:探讨急性髓细胞白血病(acute myeloblastic leukemia,AML)患儿骨髓细胞中Wilms瘤基因1(Wilms tumor gene1,WT1)及其剪接异构体WT1(17AA+)的表达及临床意义。方法:应用实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative-PCR,RFQ-PCR)检测112例次AML患儿不同阶段骨髓细胞中WT1和WT1(17AA+)mRNA的相对表达量,计算WT1(17AA+)/WT1的比值,并以同期30例非白血病患儿作为对照。结果:AML初诊组患儿的WT1和WT1(17AA+)mRNA相对表达量均明显高于非白血病对照组及缓解期患儿(P<0.05)。复发组患儿的WT1和WT1(17AA+)mRNA相对表达量与初诊组和耐药组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。缓解组患儿的WT1(17AA+)/WT1比值明显低于初诊组、复发组和耐药组(P<0.05)。3例AML患儿的动态监测结果显示,临床耐药或复发患儿的WT1和WT1(17AA+)mRNA相对表达量以及WT1(17AA+)/WT1比值均呈持续高表达,或者表现为一过性下降后的再度上升。结论:WT1及WT1(17AA+)mRNA剪接异构体可能成为判断AML预后及临床治疗疗效的指标。     

黏蛋白1基因在白血病中的表达及其临床意义

 目的　探讨各种类型白血病中黏蛋白1（MUC1）基因的表达及其在临床诊断、预后及治疗上的意义。方法　运用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术,对白血病患者42例和非血液恶性疾病患者或正常人24例的骨髓中MUC1基因的表达进行检测。结果　急性白血病MUC1基因的表达率（43.3 %）显著高于对照组（8.3 %）（P＜0.01）,慢性白血病MUC1基因的表达率（54.5 %）亦高于对照组（8.3 %）（P＜0.05）。急性白血病MUC1基因表达阳性者完全缓解率（16.7 %）低于阴性表达者的完全缓解率（75.0 %）,差异有统计学意义（P＜0.05）。血液学完全缓解（CR）患者10例中检测出MUC1基因表达5例。结论　MUC1基因作为一种肿瘤标志物,在各种类型、亚型白血病患者中高表达,可辅助白血病的诊断,MUC1基因表达的RT-PCR分析法监测白血病微小残留病,较常规血细胞形态学具有更高的敏感性,可为白血病预后的观测指标。     

WT1基因在白血病患者中的表达及临床意义

 目的 探讨WT1基因在白血病患者中的表达及其临床意义。方法 运用RT-PCR方法检测 WT1基因在50例白血病患者中的表达。结果 急性髓细胞白血病（AML）和急性淋巴细胞白血病（ALL）WT1表达阳性率分别为77.3 %（17／22）和54.5 %（6／11）。慢性粒细胞白血病（CML）慢性期WT1表达均阴性,急变期55.6 %（5／9）表达阳性。WT1阳性患者化疗缓解率低于阴性患者（分别为31.3 %和69.2 %,P <0.05）。结论 WT1在白血病患者中高表达,可作为临床评估预后、检测微小残留病（MRD）的标志。     

WT1基因异构体WTA对NB4细胞基因表达谱影响的研究

目的:探讨WT1基因异构体比例的改变对急性早幼粒细胞性白血病细胞株NB4基因表达谱的影响。方法:用电穿孔法将携带WT1基因异构体WTA(-17AA/-KTS)全长cDNA的重组真核表达载体及其对照质粒pCB6 转染入白血病细胞株NB4,建立WT1基因异构体表达比例改变的单克隆细胞株NB4/WTA。运用cDNA微阵列技术检测WT1基因异构体表达比例的转变对NB4细胞基因表达谱的影响。并用RTPCR方法验证cyclinA1及CDK7基因表达的改变。结果:转染WT1基因异构体WTA后,外源基因在mRNA及蛋白水平上稳定表达,NB4细胞中共89个细胞周期相关基因、细胞凋亡相关基因、癌基因以及细胞信号和传递蛋白等基因出现2倍以上表达水平的改变。RTPCR证实与细胞周期相关的cyclinA1基因表达上调,CDK7基因表达下调。结论:WT1基因异构体WTA表达比例增加能引起NB4细胞基因表达谱的改变,这些基因的改变可能对白血病细胞增殖、分化和凋亡等生物学行为产生影响。     

骨肉瘤中抑癌基因p33/ING1 mRNA的表达及意义

目的研究骨肉瘤中抑癌基因p33/ING1 mRNA的表达与临床病理特征的关系。方法应用RT-PCR技术对40例骨肉瘤标本及其相邻的正常软组织、2例骨肉瘤细胞株(OS732和SaOS2)和1例原代培养的骨膜细胞中ING1基因的表达进行研究。结果在40例骨肉瘤标本中,27例(67.5%)检测到p33/ING1 mRNA较其相邻的正常软组织高表达。p33/ING1 mRNA高表达患者肿瘤转移发生率明显高于低表达的患者,两者比较差异有显著意义(t=2.52,P<0.05);而在临床分期方面差异无显著意义。2例骨肉瘤细胞株与原代培养的骨膜细胞相比较,1例(OS732)检测到p33/ING1 mRNA的低表达,1例(SaOS2)检测到p33/INC1 mRNA的高表达。结论抑癌基因p33/ING1mRNA的高表达在骨肉瘤的发生发展中起到一定作用,且与肿瘤转移有关。     

急性白血病Survivin和B7-1基因的表达及临床意义

 目的　研究Survivin和B7-1基因在急性白血病（AL）患者中的表达及临床意义。方法　应用RT-PCR检测64例AL患者Survivin和B7-1 mRNA的表达水平，14例健康人为对照，K562、HL-60细胞株为阳性对照。结果　Survivin的阳性表达率高于健康对照，且在初治AL中的表达水平较健康对照组明显升高，治疗缓解后Survivin表达下降，复发时表达水平升高；同时患者B7-1基因的表达率于对照组没有差异，但半定量后的表达水平明显较正常低，且初发和缓解患者表达量差异无统计学意义；在初治AL患者中Survivin阳性患者缓解率低于表达阴性的患者。结论　Survivin和B7-1基因表达的紊乱可能在AL的发病中起着重要作用，并与AL复发和预后相关。     

初治急性髓系白血病患者Bcl11a基因表达水平及其与预后的关系

目的 探讨急性髓系白血病（AML）患者Bcl11a基因表达水平及其临床意义.方法 通过实时荧光定量PCR方法检测80例初治AML患者及16例对照组Bcl11a基因的表达水平,分析其表达水平与疾病特征及临床疗效之间的关系.结果 初治AML患者Bcl11a表达水平高于对照组[0.039（0～ 0.504）比0.014（0.002 ～ 0.086）,P=0.004].以80例初治AML患者Bcl11a基因表达量的中位数作为分界点,将患者分为Bcl11a高表达组和低表达组各40例.Bcl11a低表达组AML患者中位年龄低于高表达组患者（29.5岁比41.0岁）,而初治AML患者在不同分层的性别、FAB分型、外周血象、骨髓原始细胞比例、遗传学危险度分层、免疫分型CD34表达间Bcl11a基因表达水平差异均无统计学意义（均P＞0.05）.Bcl11a基因低表达组患者完全缓解率高于高表达组[90％（36/40）比53％（21/40）,P=0.000],中位生存时间延长（268.0d比101.5 d,P=0.042）.结论 Bcl11a基因表达水平和AML患者年龄、疗效和预后存在一定的关系,Bcl11a基因高表达的AML患者预后较差.