nm23-H1基因点突变对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981的GSK-3β激酶活性的影响

背景与目的我们的前期研究结果表明nm23-H1基因的肺癌转移抑制作用可能与上调Wnt信号通路中关键激酶GSK-3β的活性、进而抑制Wnt信号通路相关.本研究的目的是探讨nm23-H1点突变对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981中胞质和胞核的GSK-3β激酶活性的影响,为阐明nm23-H1基因调控肺癌转移相关信号传导通路的分子机制提供实验依据.方法将原代人低转移大细胞肺癌细胞株NL9980、原代人高转移大细胞肺癌细胞株L9981、空载体转染细胞株L9981-pEGFP、稳定转染nm23-H1基因的细胞株L9981-nm23-H1-pEGFP以及稳定转染在44、96、118、120号位点发生突变后的nm23-H1基因的转基因肺癌细胞株L9981-nm23-H1 S44A-pEGFP、L9981-nm23-H1P96S-pEGFP、L9981-nm23-H1H118F-pEGFP和L9981-nm23-H1S120G-pEGFP作为研究对象,应用免疫共沉淀同位素闪烁计数法测定上述肺癌细胞株胞质和胞核中的GSK-3β激酶活性.结果nm23-H1基因发生点突变后,所有转基因肺癌细胞株细胞胞质和胞核中的GSK-3β活性均较突变前有所下降.L9981-nm23-H1S44A-pEGFP、L9981-nm23-H1P96S-pEGFP、L9981-nm23-H1 H118F-pEGFP、L9981-nm23-H1 S120G-pEGFP分别与L9981-nm23-H1-pEGFP比较,胞质与胞核中GSK-3β激酶活性均存在显著性差异(P＜0.05),其中L9981-nm23-H1P96S-pEGFP与L9981-nm23-H1-pEGFP胞质中GSK-3β活性存在极显著差异(P＜0.01),L9981-nm23-H1S44A-pEGFP、L9981-nm23-H1P96S-pEGFP和L9981-nm23-H1 H118F-pEGFP与L9981-nm23-H1-pEGFP的胞核中GSK-3β活性存在极显著差异(P＜0.01).结论①nm23-H1基因突变能显著影响其对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981胞质和胞核中GSK-3β激酶活性的调控作用;②nm23-H1基因可能通过调控L9981中GSK-3β激酶活性来抑制L9981细胞株中Wnt信号传导.     

mm23-H1基因点突变对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981的GSK-3β激酶活性的影响

背景与目的 我们的前期研究结果表明nm23-H．基因的肺癌转移抑制作用可能与上调Wnt信号通路中关键激酶GSK-3β的活性、进而抑制Wnt信号通路相关。本研究的目的是探讨nm23-H1点突变对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981中胞质和胞核的GSK-3β激酶活性的影响，为阐明nm23-H1基因调控肺癌转移相关信号传导通路的分子机制提供实验依据。方法 将原代人低转移大细胞肺癌细胞株NL9980、原代人高转移大细胞肺癌细胞株L9981、空载体转染细胞株L9981-pEGFP、稳定转染nm23-H1基因的细胞株L9981-nm23-H1-pEGFP以及稳定转染在44、96、118、120号位点发生突变后的nm23-H1基因的转基因肺癌细胞株L9981-nm23-H1^S44A-pEGFP、L9981-nm23-H1^P965-pEGFP、L9981-nm23-H1H118F-pEGFP和L9981nm23-H1^S120G-pEGFP作为研究对象，应用免疫共沉淀同位素闪烁计数法测定上述肺癌细胞株胞质和胞核中的GSK-3B激酶活性。结果 nm23-H1基因发生点突变后，所有转基因肺癌细胞株细胞胞质和胞核中的GSK-3β活性均较突变前有所下降。L9981-nm23-H1^S44A-pEGFP、L9981-nm23-H1^P96S-pEGFP、L9981-nm23-H1^H18F-pEGFP、L9981-nm23-H1S120G-pEGFP分别与L9981-nm23-H1-pEGFP比较，胞质与胞核中GSK-3β激酶活性均存在显著性差异（P〈0．05），其中L9981-nm23-H1^P96S-pEGFP与L9981-nm23-H1-pEGFP胞质中GSK-3β活性存在极显著差异（P〈0．01），L9981-nm23-H1^S44A-pEGFP,L9981-nm23-H1^P96S-pEGFP和L9981-nm23-H1H118F-pEGFP与L9981-nm23-H1-pEGFP的胞核中GSK-3B活性存在极显著差异（P％0．01）。结论 ①nm23-H1基因突变能显著影响其对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981胞质和胞核中GSK-3B激酶活性的调控作用；②nm23-H1基因可能通过调控L9981中GSK-3B激酶活性来抑制L9981细胞株中Wnt信号传导。     

nm23-H1基因转染对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981中β-catenin表达的影响

目的探讨nm23-H1基因转染对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981中β-catenin和磷酸化β-catenin表达水平的影响,为阐明nm23-H1基因逆转肺癌转移的分子机制提供实验依据.方法以原代L9981、转染nm23-H1基因的L9981-nm23-H1和转染空载体的L9981-pLXSN三株肺癌细胞株为研究对象,应用Western Blot检测比较各细胞株胞浆、胞核中β-catenin和磷酸化β-catenin表达水平的变化,以确定nm23-H1基因转染是否能调控人高转移大细胞肺癌细胞株L9981中β-catenin和磷酸化β-catenin表达.结果①β-catenin在L9981-nm23-H1细胞株胞浆中表达量(IOD)(3 649±118)显著高于L9981(1 401±31)和L9981-pLXSN(1 350±55)细胞株(P＜0.001);②β-catenin在L9981-nm23-H1细胞株胞核中表达量(2 945±68)与L9981(2 604±23)和L9981-pLXSN(2 652±53)细胞株比较均无显著性差异(P＞0.05);③磷酸化β-catenin在L9981-nm23-H1细胞株胞浆中表达量(3 123±102)显著低于L9981(4 362±131)和L9981-pLXSN(4 500±117)细胞株(P＜0.001);④磷酸化β-catenin在L9981-nm23-H1细胞株胞核中表达量(5 136±112)显著高于L9981(2 666±116)和L9981-pLXSN(2 661±66)细胞株(P＜0.001);⑤在L9981和L9981-pLXSN细胞株间β-catenin和磷酸化β-catenin在胞浆和胞核中的表达均无显著性差异(P＞0.05).结论①nm23-H1基因能够显著上调人高转移大细胞肺癌细胞株L9981胞浆中的β-catenin表达,但并未引起胞核中β-catenin聚积;②nm23-H1基因能够显著上调L9981细胞株胞核中磷酸化β-catenin表达水平,下调胞浆中磷酸化β-catenin的表达水平;③调控Wnt信号通路关键分子β-catenin表达可能是nm23-H1基因逆转人高转移大细胞肺癌细胞株侵袭转移和调控"肺癌转移抑制级联"的重要分子机理之一.     

nm23-H1基因转染对肺癌L9981细胞黏附分子表达的影响

目的:探讨nm23-H1基因转染对肺癌L9981细胞黏附分子表达的影响。方法:利用细胞黏附实验、Boyden小室法研究转染前后肺癌L9981细胞黏附、侵袭能力的改变。分别利用逆转录-PCR(RT-PCR)和流式细胞术检测转染前后E-cadherin、integrin β1和integrin β3 mRNA和蛋白的表达。结果:转染后L9981细胞株黏附性以及侵袭性均降低。与转染空载体组相比,转染nm23-H1质粒后L9981细胞E-cadherin mRNA和蛋白表达均增强,integrin β1和integrin β3 mRNA和蛋白表达均减弱,差异均具有统计学意义(P均<0.05)。结论:nm23-H1基因具有逆转肺癌恶性转移表型的能力,其对肺癌L9981细胞株E-cadherin表达具有正调控作用,对integrin β1和integrin β3表达具有负调控作用。     

nm23-H1基因逆转人高转移大细胞肺癌细胞L9981转移表型的分子机制

背景与目的:nm23-H1基因已被证明是转移抑制基因,转染野生型nm23-H1基因可以逆转肿瘤的恶性转移表型,但是nm23-H1基因抑制或逆转肺癌转移的分子机制却知之甚少,我们在建立转nm23-H1基因的人高转移大细胞肺癌细胞株L9981-nm23-H1的基础上,进一步探讨nm23-H1基因抑制肺癌转移的分子机制。方法:应用MTT法和改良的Boyden小室法分析转基因前后细胞的体外增殖能力及体外侵袭力的变化,体内实验分析转基因前后细胞在裸鼠体内的成瘤性及肺转移能力的改变,同时应用RT-PCR和Westernblot分别检测各组细胞中转移相关基因β-catenin、E-Cadherin、CD44S、CD44V6、MMP-2、TIMP-1、VEGF、基因mRNA及蛋白表达水平。结果:(1)转基因细胞株L9981-nm23-H1的体外增殖能力[(0%vs.(19.5±2.9)%]、克隆形成能力(10.3±0.7vs.21.7±1.3)及侵袭力显著低于L9981细胞(31.0±3.0vs.151.0±6.3)(P<0.01);(2)nm23-H1基因在裸鼠体内的抑瘤率显著增高(82.6%vs.0%),且转染nm23-H1基因的L9981细胞裸鼠体内移植瘤肺转移显著降低(0%vs.100%)(P<0.01);(3)nm23-H1基因能够上调β-catenin、E-Cadherin、TIMP-1基因mRNA及蛋白表达,下调VEGF、CD44V6和MMP-2基因mRNA及蛋白表达(P<0.01);(4)nm23-H1表达上调CD44S基因mRNA表达(P<0.01),而对其蛋白表达     

nm23-H1基因转染对人高转移大细胞肺癌细胞株生物学行为的影响及作用机理

背景与目的nm23-H1基因已被证明是一个肿瘤转移抑制基因,但其相关作用机理仍不明确。本研究通过比较nm23-H1基因转染前后人高转移大细胞肺癌细胞株L9981生物学行为的变化,探讨nm23-H1基因影响人高转移大细胞肺癌细胞株生物学行为的可能机理。方法应用细胞体外增殖活性检测(MTT法)和体外侵袭力检测(改良Boyden小室法)技术分别检测nm23-H1基因转染前后人高转移大细胞肺癌细胞株L9981、L9981-pLXSN和L9981-nm23-H1肺癌细胞株体外增殖活性和侵袭力的变化;同时加入PKC特异抑制剂Calphostin C作用后,再次观察三株细胞株抑制剂作用前后细胞侵袭力、增殖力的变化。结果nm23-H1基因缺失的人高转移大细胞肺癌细胞株L9981和L9981-pLXSN体外侵袭力和增殖活性明显高于转染nm23-H1基因的L9981-nm23-H1肺癌细胞株(P<0.001);L9981和L9981-pLXSN细胞间体外侵袭力和增殖活性则无统计学差异(P>0.05)。用PKC抑制剂Calphostin C处理L9981、L9981-pLXSN和L9981-nm23-H1肺癌细胞株后,细胞体外侵袭力和增殖活性下降(P<0.001),而转染nm23-H1基因的L9981-nm23-H1细胞体外侵袭力和增殖活性仍低于L9981和L9981-pLXSN(P<0.001),L9981和L9981-pLXSN细胞间则无统计学差异(P>0.05)。结论nm23-H1基因可明显抑制L9981肺癌细胞株的细胞增殖力和侵袭力。nm23-H1基因对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981的生物学行为的影响可能与其抑制PKC信号传导有关。     

nm23-H1基因转染逆转人高转移大细胞肺癌恶性表型分子机制的实验研究

背景与目的nm23-H1是公认的肿瘤转移抑制基因。我们的前期研究结果发现nm23-H1基因可明显抑制人高转移大细胞肺癌细胞株L9981中细胞外信号调节激酶ERK1／2的活性。本研究旨在探讨肿瘤转移抑制基因nm23-H1及外源性ERK1／2通路抑制剂U0126对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981中ERK1／2及其细胞恶性生物学行为的影响，为阐明nm23-H1基因调控肺癌转移相关信号传导通路的分子机制提供实验依据。方法将稳定转染nm23-H1基因的人高转移大细胞肺癌细胞株L9981-nm23-H1、原代细胞株L9981（nm23-H1基因杂合性缺失）和转染空载体细胞株L9981-PLXSN培养传代，应用蛋白印迹法（Western blot）和免疫沉淀法，检测应用U0126（40μmol／L，处理细胞20min）处理后三个肺癌细胞株中总ERK1／2和双磷酸化ERK1／2表达水平的变化；应用MTT法及改良Boyden小室法分别检测三个肺癌细胞株应用U0126处理后细胞体外增殖活性及侵袭能力的变化。结果L9981-nm23-H1细胞株磷酸化ERK1／2表达水平、ERK1／2相对活性经U0126处理后均显著低于L9981和L9981-PLXSN细胞株（P〈0．01），而L9981和L9981-PLXSN细胞株间磷酸化ERK1／2表达水平、ERK1／2相对活性比较均无显著性差异（P〉0．05）；三个肺癌细胞株总ERK1／2水平处理后比较均无明显变化，差异均无显著性（P〉0．05）；L9981-nm23-H1细胞株体外增殖能力及侵袭力均显著低于L9981细胞株和L9981-PLXSN细胞株（P％0．01）；U0126能显著下调L9981细胞株体外增殖活性及侵袭能力（P〈0．01）。结论阻断L9981细胞株中ERK1／2的激活后可发生与转染nm23-H1基因相似的细胞生物学行为的变化，即细胞的体外增殖能力及侵袭力均显著降低，提示nm23-H1基因转染逆转人高转移大细胞肺癌恶性表型的分子机制可能与其下调ERK1／2信号转导通路中关键激酶ERK1／2的活性有关。     

人高、低转移大细胞肺癌细胞株中黏附分子存在状态的鉴定

目的:鉴定人高、低转移大细胞肺癌细胞株L9981和NL9980中黏附分子的存在状态。方法:利用半定量RT-PCR技术检测人高、低转移大细胞肺癌细胞株L9981和NL9980中E-cadherin、integrinβ1、integrinβ3基因的mRNA表达;利用流式细胞仪技术检测人高、低转移大细胞肺癌细胞株L9981和NL9980中E-cadherin、integrinβ1、integrinβ3基因的蛋白表达。结果:人高转移大细胞肺癌细胞株L9981中E-cadherin mRNA与蛋白表达水平显著低于低转移大细胞肺癌细胞株NL9980,而integrinβ1和integrinβ3的mRNA与蛋白表达水平高转移L9981细胞株显著高于低转移NL9980细胞株。结论:E-cadherin高表达与肺癌低转移有关,而integrinβ1、integrinβ3高表达与肺癌高转移有关。     

nm23-H1基因转染前后人高转移大细胞肺癌细胞株的比较蛋白质组学研究

背景与目的肿瘤转移抑制基因nm23-H1基因调控肺癌细胞转移潜能的确切机理尚未明了,本研究旨在探讨人高转移大细胞肺癌细胞株(L9981)和转染nm23-H1基因的人高转移大细胞肺癌细胞株(L9981-nm23-H1)的差异表达蛋白,为阐明肺癌转移的分子机制、发现早期诊断肺癌转移的分子标志和新的治疗靶点提供实验依据。方法应用固相pH梯度双向凝胶电泳分离L9981和L9981-nm23-H1细胞株的总蛋白,对25个差异明显的蛋白质点进行质谱鉴定和生物信息学分析。结果研究观察到nm23-H1基因转染使人L9981细胞株蛋白质组的表达谱发生了明显变化:5个蛋白质表达缺失,9个新的蛋白表达,16个蛋白质表达下调,12个蛋白质表达上调。这些蛋白质主要涉及细胞骨架蛋白、信号转导蛋白、细胞代谢相关蛋白、发育增殖相关蛋白及肿瘤侵袭相关蛋白。结论 nm23-H1基因转染L9981后,蛋白质表达谱发生了显著的变化,这些差异蛋白质可能是逆转肺癌侵袭转移的生化基础,本研究结果可能为阐明肺癌转移的分子机制提供线索。     

nm23-H1基因转染前后人高转移大细胞肺癌细胞株L9981 PKA活性变化的实验研究

目的探讨nm23-H1基因转染和forskolin对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981 PKA活性的影响.方法应用PKA通路特异激动剂forskolin对人高转移大细胞肺癌原代细胞株L9981、转基因细胞株L9981-nm23-H1-pLXSN和空载体转染细胞株L9981-pLXSN共同培养,应用放免法检测forskolin处理后不同时间点三个细胞株PKA的活性变化.结果 (1)forskolin处理前L9981、L9981-pLXSN和L9981-nm23-H1-pLXSN的PKA活性经F检验有显著性差异(P<0.01);两两比较L9981-nm23-H1-pLXSN的PKA活性显著高于L9981和L9981-pLXSN(P<0.01),而L9981与L9981-pLXSN之间比较无显著性差异(P>0.05).(2)在同一作用时间(30 min)下,三个细胞株经不同浓度forskolin处理后PKA活性均显著升高(P<0.01),在forskolin浓度为100 μmol/L时PKA活性最高,呈剂量依赖关系.(3)三个细胞株在同一浓度forskolin(100 μmol/L)处理下,PKA活性随作用时间升高,在forskolin作用时间为30 min时PKA的活性最高,呈时间依赖关系.结论 (1)nm23-H1基因转染能显著上调人高转移大细胞肺癌细胞株L9981的PKA活性,nm23-H1作为一种肿瘤转移抑制基因的作用机理与PKA信号通路可能有一定联系;(2)forskolin能显著上调L9981细胞株中的PKA活性,PKA活性升高呈时间和剂量依赖关系.     

APE1表达变化对人非小细胞肺癌细胞A549增殖的影响

目的:探讨脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶1(apurinic/apyrimidinic endonuclease 1,APE1)对人非小细胞肺癌细胞A549增殖能力的影响,为肺癌的个性化靶向治疗提供理论依据。方法:使用脂质体转染法将重组表达质粒pSIREN-RetroQ-APE1-shRNA和pOZN-HA-APE1导入A549细胞,免疫印迹检测APE1表达情况。MTT、平板克隆实验、免疫印迹检测APE1对非小细胞肺癌细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞周期的变化。结果:重组载体pSIREN-RetroQ-APE1-shRNA转染细胞后,显著抑制A549细胞中APE1蛋白的表达,与对照组相比,增殖速率明显下降(P＜0.05),平板克隆形成显著减少(P＜0.05),并阻止细胞周期G0/G1期向S期转化,降低CDK2表达。而过表达APE1可增加A549细胞活力,促进细胞增殖,促进细胞周期G0/G1期向S期转化。结论:APE1表达下调对非小细胞肺癌细胞A549生长具有抑制作用,为临床抑制肿瘤生长提供了新的作用靶点。     

Landscape of immune cell infiltration in clear cell renal cell carcinoma to aid immunotherapy

The tumor microenvironment, comprised of tumor cells and tumor-infiltrating immune cells, is closely associated with the clinical outcome of clear cell renal cell carcinoma (ccRCC) patients. However, the landscape of immune infiltration in ccRCC has not been fully elucidated. Herein, we applied multiple computational methods and various datasets to reveal the immune infiltrative landscape of ccRCC patients. The tumor immune infiltration (TII) levels of 525 ccRCC patients using a single-sample gene were examined and further categorized into immune infiltration subgroups. The TII score was characterized by distinct clinical traits and showed a significant divergence based on gender, grade, and stage. A high TII score was associated with the ERBB signaling pathway, the TGF-β signaling pathway, and the MTOR signaling pathway, as well as a better prognosis. Furthermore, patients with high TII scores exhibited greater sensitivity to pazopanib. The low TII score was characterized by a high immune infiltration level of CD8⁺ T cells, T follicular helper cells, and regulatory T cells (Tregs). Moreover, the immune check point genes, including CTLA-4, LAG3, PD-1, and IDO1, presented a high expression level in the low TII score group. Patients in the high TII score group demonstrated significant therapeutic advantages and clinical benefits. The findings in this study have the potential to assist in the strategic design of immunotherapeutic treatments for ccRCC.     

阿霉素诱导粘液表皮样癌细胞凋亡时细胞周期的变化

 在证明10ug／ml阿霉素诱导粘液表皮样癌MEC—1细胞凋亡的基础上，研究细胞凋亡过程中细胞周期变化，以利于临床用药。方法：通过显微镜观察细胞的形态变化和DNA电泳来观察图形，并依靠流式细胞术准确了解用药后细胞周期的变化。结果：光镜下见癌细胞凋亡改变，DNA电泳是典型梯状条图；流式细胞仪测得阿霉素作用5h时，细胞阻于G₂期，24h时细胞阻于G₁期。结论：阿霉素诱导MEC—1细胞凋亡初期，细胞阻于G₂期，后期细胞阻于G₁期。     

Pygopus2的表达下调抑制肺癌细胞的增殖能力

目的:探讨肺癌细胞中Pygopus2（Pygo2）的表达及意义。方法:Western Blot明确肺癌细胞系中Pygo 2的表达后,应用 siRNA、MTT、流式细胞术等方法检测及其表达对肺癌细胞增殖凋亡能力的影响。结果:肺癌细胞系中存在Pygo2的过表达,其表达下调能够通过阻滞细胞周期及促进细胞凋亡,进而抑制肺癌细胞的增殖能力。结论:Pygo2的异常表达是导致肺癌发生发展的重要因素。     

RhoB在肾透明细胞癌中的表达及临床意义

目的:探讨RhoB在肾透明细胞癌中的表达及临床意义.方法:采用实时定量PCR、Western blot和免疫组化方法检测RhoB在肾透明细胞癌组织中的表达情况.选取60例肾透明细胞癌组织标本,详细收集病人临床病理资料,通过免疫组化方法检测RhoB在肾透明细胞癌组织中的蛋白表达水平,并分析RhoB的蛋白水平与临床病理资料的关系.结果:与对应瘤旁肾组织相比,RhoB的mRNA及蛋白表达水平在肾透明细胞癌组织标本中明显降低;RhoB的蛋白表达水平在不同年龄、性别组间差异无统计学意义(P>0.05),而在肿瘤直径大小、T分期、临床分期和组织分级间差异有显著统计学差异(P<0.05).结论:RhoB的表达降低可能在肾透明细胞癌的肿瘤发生中发挥作用,且其表达下降可能与肾透明细胞癌的恶性进展有关.     

VEGF-C在宫颈癌细胞中的表达及与细胞增殖的关系

目的:研究VEGF-C在宫颈癌细胞中的表达及其对宫颈癌细胞增殖的影响。方法:采用反义技术,脂质体介导VEGF-C反义寡核苷酸转染人宫颈癌Hela细胞。应用荧光定量RT-PCR法、间接免疫荧光标记法,检测转染后细胞内VEGF-C在mRNA、蛋白水平的变化。MTT比色法检测细胞生长的变化。结果:脂质体介导VEGF-C反义寡核苷酸,转染宫颈癌Hela细胞的转染效率大于90％。转染了反义寡核苷酸的反义组VEGF-C在mRNA和蛋白水平上,较未转染组和正义组均明显下降（P<0.05）。MTT法检测转染了VEGF-C反义寡核苷酸的细胞,明显看到反义组细胞的生长受到明显抑制。结论:VEGF-C可影响人宫颈癌Hela细胞增殖,本实验通过抑制VEGF-C,进而可阻断宫颈癌的淋巴转移,为实现靶向性基因治疗的可行性,提供了实验依据。     

Radiation sensitivity of merkel cell carcinoma cell lines

: Merkel cell carcinoma (MCC), being a small cell carcinoma, would be expected to be sensitive to radiation. Clinical analysis of patients at our center, especially those with macroscopic disease, would suggest the response is quite variable. We have recently established a number of MCC cell lines from patients prior to radiotherapy, and for the first time are in a position to determine their sensitivity under controlled conditions.     

Control of the cell cycle

Cell biology has made major progress in identifying the molecules that drive the cell cycle. The evidence accumulating from these studies indicates that derangements in the cell cycle machinery contribute to the uncontrolled cell growth of tumours. The cell cycle machinery has been found to be substantially altered in tumour cells and also may be crucial for carcinogenesis. In this context, various aspects of tumour cell growth have been studied in an effort to understand 1) why tumour cells display uncontrolled growth, 2) why radiation selectively affects growing cells, and 3) whether aspects of the cell cycle and tumour cell growth may be used in tumour diagnosis and prognosis.     

非小细胞肺癌细胞分泌蛋白谱的鉴定

目的筛选非小细胞肺癌潜在的早期诊断标志物，对非小细胞肺癌细胞系A549的分泌蛋白进行鉴定。方法收集A549细胞培养上清中的蛋白进行蛋白双向电泳，应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI—TOF—MS）及生物信息学鉴定A549凝胶上特有的蛋白质点。结果鉴定出人属的蛋白质点17个，包括α肌动蛋白，γ肌动蛋白，α烯醇酶（ENO1），锰-超氧化物歧化酶（MnSOD），谷胱甘肽S转移酶P（GSTP1—1），Dihydrodiol dehydrogenase 2（DDH），磷酸甘油酸变位酶1（PGAM1），葡萄糖依赖性胰岛素释放肽受体（GIPR），肽基脯氨基顺反异构酶（PPIA），磷脂酰乙醇胺结合蛋白（PEBP），蛋白基因产物9．5（PGP9．5），Peroxiredoxin1（PDX1），Galectin-1及专利蛋白WO0222660等。结论该研究为非小细胞肺癌早期诊断标志物的筛选提供了新的方法和候选分子。     

Adenoendocrine cell carcinoma of the gallbladder clinically mimicking squamous cell carcinoma

We present the case of a 62-year-old Japanese man whose histological diagnosis was adenoendocrine cell carcinoma of the gallbladder at autopsy, but whose antemortem diagnosis was squamous cell carcinoma. The patient was admitted to hospital with complaints of occasional vomiting and abdominal pain. Abdominal computed tomography revealed a large tumor on the gallbladder involving the adjacent liver, colon, and duodenum, with multiple metastases in the greater omentum and paraportal lymph nodes. The serum level of squamous cell carcinoma antigen (SCCA) was high, whereas that of carbohydrate antigen (CA) 19-9, as well as that of carcinoembryonic antigen (CEA) was within the normal range. Due to these clinical features, we first suspected advanced squamous cell carcinoma of the gallbladder. After two cycles of gemcitabine monotherapy, the tumor had become enlarged and the regimen was changed to a combination of docetaxel and cisplatin. Though tumor regression was achieved and his serum SCCA level normalized after 3 months, the patient rejected additional chemotherapy and died 8 months after the diagnosis. The histopathological findings made by autopsy demonstrated the tumor to be an adenoendocrine cell carcinoma without squamous carcinoma cells. The case is interesting in that the clinical features were similar to those of squamous cell carcinoma of the gallbladder.