钙敏感受体在缺氧-复氧诱导的大鼠心肌细胞凋亡中的作用

目的： 观察大鼠心肌钙敏感受体(CaSR) 在心肌缺氧/再灌注损伤时的表达情况及其介导的细胞内钙变化，以及其参与细胞凋亡的相关信号转导途径。方法： Lagendorff离体灌流方法复制心脏缺氧-复氧（anoxia-reoxygenation，A/R）模型；观察缺氧/再灌注及加入CaSR激动剂时CaSR的表达；应用激光扫描共聚焦显微镜（LSCM）观察大鼠心肌细胞正常、缺氧、缺氧/再灌注时［Ca2+］i变化；HE染色观察细胞形态学改变；TUNEL染色观察细胞凋亡； Western blotting检测心肌组织胞浆中caspase 3、caspase 9 的表达。结果： 心肌A/R组及加入CaSR激动剂时CaSR的表达明显增高，细胞内钙明显升高。HE染色发现A/R组和激动剂组损伤明显，TUNEL显示2组凋亡细胞大量存在。同时，A/R组和激动剂组胞浆中caspase 3和caspase 9的表达增加。结论： CaSR参与大鼠心肌A/R损伤时细胞内钙超载的形成，并促进A/R损伤时心肌细胞凋亡。     

钙敏感受体在大鼠心肌缺血/再灌注损伤的表达变化及与心肌损伤关系

目的： 观察钙敏感受体（CaSR）在大鼠心肌缺血/再灌注时的表达变化，揭示其与心肌缺血/再灌注损伤的关系。方法： Wistar大鼠随机分为5组：假手术组（sham组）、缺血再灌注1、2、4和6 h组（I/R 1 h、2 h、4 h、6 h组）。采用冠状动脉结扎和松结的方法，复制大鼠在体心肌缺血/再灌注损伤模型，记录左室收缩压（LVSP）和左室内压最大变化速率（±dp/dtmax），测定血清LDH、SOD活性和MDA含量，透射电镜观察心肌超微结构变化， RT-PCR法检测心肌组织中CaSR mRNA的表达变化。结果：LVSP、左室内压±dp/dtmax及SOD活性随再灌注时间延长而减低，LDH活性和MDA含量在再灌注2 h时最高；心肌超微结构损伤在再灌注1 h、2 h较重，随再灌注时间延长而减轻；大鼠心肌缺血/再灌注1 h、2 h心肌组织CaSR的mRNA表达升高，再灌注4 h、6 h后降低。结论： CaSR mRNA表达多时心肌损伤较重，CaSR可能参与了心肌缺血/再灌注损伤。     

大鼠心肌多巴胺受体在缺氧-复氧时的表达变化及其意义

目的： 观察大鼠心肌多巴胺受体在缺氧-复氧时的表达，初步探讨其与心肌缺氧-复氧损伤的关系。方法: 采用Langendorff离体灌流装置复制大鼠心肌缺氧-复氧模型。用RT-PCR和Western blotting结合图像分析系统，分别检测缺氧-复氧心肌多巴胺受体DR1、DR2 mRNA和蛋白质的表达变化；用紫外分光光度计测定大鼠冠脉流出液中LDH活性；透射电镜观察心肌超微结构的变化。结果: 大鼠心肌组织在缺氧40 min时的DR1、DR2 mRNA和蛋白表达高于正常对照组(P<0.05)，缺氧40 min后复氧1h显著高于正常对照组(P<0.01)，2 h达高峰，3 h、4 h后降低，但仍高于正常组(P<0.01)；同时随复氧时间延长，冠脉流出液中LDH活性增加，心肌超微结构损伤加重。结论: 大鼠心肌多巴胺受体DR1、DR2表达在缺氧-复氧过程中呈先升高后降低的特点，可能参与心肌缺氧-复氧损伤的发生。     

钙敏感受体表达增加诱发内质网应激在缺氧复氧性心肌损伤中的作用

目的：观察钙敏感受体表达增加诱发内质网应激在缺氧复氧性心肌损伤中的作用。方法:乳鼠原代心肌细胞培养4-5 d后，随机分为5组:正常对照组（N组）、缺氧/复氧组（H/Re组）、阻断剂（NiCl2,CdCl2）组、激动剂（GdCl3,NiCl2,CdCl2）组和caffeine组。采用饱和氮气pH6.8的D-Hands液培养细胞3 h，再用含20%新生牛血清的DMEM液培养细胞9 h，复制心肌缺氧/复氧模型。检测血清LDH活力，MTT检测细胞存活率，心肌细胞caspase-12和CaSR 蛋白表达水平Western blotting检测, 激光扫描共聚焦显微镜（LSCM）测定心肌细胞内游离钙的变化。结果:缺氧/复氧组和激动剂组LDH活力、细胞内游离钙浓度均高于对照组;同时，caspase-12和CaSR的表达也明显高于对照组。反之，细胞存活率低于对照组。结论:心肌缺氧/复氧过程中，钙敏感受体表达增多,从而破坏了细胞内钙稳态诱发过度的内质网应激,通过caspase-12等凋亡蛋白表达的增多等途径引起心肌细胞凋亡。     

缝隙连接脱耦联剂庚醇对大鼠缺血-再灌注损伤心肌的保护作用

目的：在整体大鼠心脏缺血-再灌注损伤模型上研究庚醇的心肌保护作用，并在离体缺氧心脏模型上观察庚醇对电耦联参数的影响。方法：在体大鼠实验模型，结扎冠状动脉左前降支30 min和复灌2 h，观察不同剂量的庚醇（0.03、0.06、0.30和0.60 mg/kg）的作用；离体大鼠实验模型，全心停灌70 min，应用四电极法观察不同浓度的庚醇（0.05、0.10、0.50和1.00 mmol/L）对缺氧期间心肌整体阻抗和电脱耦联参数的影响。结果：庚醇对在体大鼠缺血-再灌注损伤心肌具有减少心律失常发生和缩小心肌梗死面积的作用；各浓度庚醇（0.05-1.00 mmol/L）均明显延迟心肌缺氧期间电脱耦联时间和平台时间，降低电脱耦联最大速率。结论：适度剂量的庚醇对在体缺血-再灌注损伤心肌有保护作用，其作用可能与其引起的电脱耦联延迟有关。     

异丙肾性心肌梗死大鼠钙敏感受体的表达和凋亡通路的变化

目的：观察钙敏感受体（CaSR）在异丙肾性心肌梗死大鼠的表达和凋亡通路的变化。方法: 采用连续2 d大剂量异丙肾上腺素（200 mg/kg）皮下注射制备大鼠心肌梗死模型。Wistar大鼠随机分为3组：正常对照组（control）;异丙肾上腺素1 d组(ISO/1d);异丙肾上腺素2 d组（ISO/2d）。采用RT-PCR和Western blotting分别观察CaSR、bax、〖STBX〗bcl-2〖STBZ〗、caspase-3 mRNA和蛋白表达;TUNEL染色观察心肌细胞凋亡情况;光镜和电镜分别观察心肌形态学和超微结构变化;紫外分光法检测乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶（CK）、超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛(MDA)含量,电化学免疫发光法检测肌钙蛋白（cTnT）水平。结果: 与正常组比较,ISO/1d组：LDH 和CK活性、cTnT水平和MDA含量、细胞凋亡指数以及CaSR、Bax和caspase-3的表达均达高峰,同时SOD活性降低,Bcl-2表达减少,心肌细胞超微结构损伤严重;ISO/2d的心肌损伤指标较ISO/1d组有所减轻。结论: CaSR表达增多可能参与了异丙肾性大鼠心肌梗死的发生,其机制与氧化应激和细胞凋亡有关。     

钙网蛋白在心肌组织细胞氧化应激与缺血损伤构建中的表达与应用

背景：生物体内钙网蛋白具有调节细胞凋亡、应激、心血管炎症反应等多种生理和病理生理过程的功能。 目的：分析钙网蛋白在缺血再灌注损伤中的表达与应用。 方法：由作者检索1996/2010 PubMed数据库与中国知网数据库有关钙网蛋白结构、功能及在自身免疫、心脏发育中的作用、在缺血缺氧过程中表达的变化等方面的文献后,对钙网蛋白在氧化应激与缺血损伤中的表达变化进行了实验观察。 结果与结论：钙网蛋白通过协助蛋白质正确折叠和维持细胞内Ca2+稳态而参与调节细胞凋亡、黏附、类固醇敏感基因表达等,在心脏发生、发育和病理变化中发挥着重要作用。作者应用大鼠心肌缺血再灌注损伤模型,通过酶联免疫吸附试验、免疫组织化学及RT-PCR 3种不同的检测方法,观察了钙网蛋白在心肌缺血再灌注损伤中的表达,结果显示缺血再灌注损伤诱导钙网蛋白高表达,进而激活内质网凋亡信号途径,诱导细胞损伤,加重心肌损伤。     

Apelin-13对离体缺血/再灌注大鼠心脏损伤的影响

目的观察apelin-13对离体大鼠缺血/再灌注心脏损伤的影响,并初步探讨其对apelin受体APJ(putative re-ceptor protein related to the angiotensin receptorAT1)及细胞信号Akt1/2的影响。方法Langendorff装置恒流灌注大鼠离体心脏,采用停灌/复灌方式复制缺血/再灌注模型;观察缺血/再灌注期间心脏收缩期左心室内压上升的最大变化速率( LVdp/dtmax)及舒张期左心室内压下降的最大变化速率(-LVdp/dtmax);RT-PCR和Western blot测定组织中APJ受体mRNA和Akt1/2蛋白的表达情况。结果Apelin-13可以增加缺血/再灌注损伤心脏的±dp/dtmax(P<0·01);可以明显增强心肌组织中Akt1/2的表达;缺血/再灌注可以引起心肌组织中APJ受体表达上调。结论Apelin-13拮抗缺血/再灌注引起的心脏收缩及舒张功能障碍;可能与组织中APJ受体表达上调引起Akt1/2表达增强有关。     

酸性成纤维细胞生长因子促进大鼠肠缺血-再灌注损伤的修复

背景：细胞外调节蛋白激酶和酸性成纤维细胞生长因子受体2在肠缺血-再灌注损伤修复中的作用尚无研究报道。 目的：观察大鼠肠缺血-再灌注损伤后外源性酸性成纤维细胞生长因子对细胞外调节蛋白激酶和酸性成纤维细胞生长因子受体2表达的影响,探讨细胞外调节蛋白激酶和酸性成纤维细胞生长因子受体2与酸性成纤维细胞生长因子促进创伤修复的关系。 方法：以大鼠肠系膜上动脉夹闭45 min造成肠缺血-再灌注损伤模型,于再灌注即刻应用酸性成纤维细胞生长因子行干预。分别于再灌注2,6,12,24 h取大鼠小肠组织标本,利用免疫组化和RT-PCR检测酸性成纤维细胞生长因子受体的表达及免疫组化检测细胞外调节蛋白激酶表达的规律。 结果与结论：在正常大鼠,酸性成纤维细胞生长因子受体2主要分布在小肠绒毛上皮细胞的肠腔侧、侧壁和小肠隐窝朝向隐窝腔的一侧细胞膜上。缺血-再灌注初期,酸性成纤维细胞生长因子受体2及细胞外调节蛋白激酶的表达未发生明显变化,但随着再灌注时间的延长表达水平逐渐提高,并于再灌注后6-12 h达高峰。经酸性成纤维细胞生长因子治疗后,大鼠小肠组织小肠黏膜损伤程度减轻,酸性成纤维细胞生长因子受体2及细胞外调节蛋白激酶的表达量高于未治疗大鼠。结果表明缺血-再灌注损伤后,酸性成纤维细胞生长因子干预可上调酸性成纤维细胞生长因子受体2及细胞外调节蛋白激酶的表达,提示外源性酸性成纤维细胞生长因子通过促进内源性酸性成纤维细胞生长因子受体2和细胞外调节蛋白激酶的生成可能是其参与内脏损伤修复的机制之一。     

外源性酸性成纤维细胞生长因子干预肠缺血-再灌注损伤中p38MAPK和成纤维细胞生长因子受体2的表达

背景：酸性成纤维细胞生长因子可以促进多种创面愈合,在内脏损伤修复中起重要促进作用。 目的：观察外源性酸性成纤维细胞生长因子干预肠缺血-再灌注损伤大鼠后p38MAPK和成纤维细胞生长因子受体2的表达。 方法：以大鼠肠系膜上动脉夹闭45 min造成肠缺血-再灌注损伤模型,于再灌注即刻应用改构体酸性成纤维细胞生长因子进行干预。分别于再灌注2,6,12,24 h取大鼠小肠组织标本,用于实验。 结果与结论：在正常大鼠,成纤维细胞生长因子受体2主要分布在小肠绒毛上皮细胞的肠腔侧、侧壁和小肠隐窝朝向隐窝腔的一侧细胞膜上。缺血-再灌注初期,p38MAPK蛋白及成纤维细胞生长因子受体2蛋白和mRNA的表达未发生明显变化,随着再灌注时间的延长其逐渐增强,并于再灌注后6~12 h达高峰。经酸性成纤维细胞生长因子治疗后,大鼠小肠组织p38MAPK蛋白及成纤维细胞生长因子受体2蛋白和mRNA的表达进一步增强,小肠黏膜损伤程度减轻。说明酸性成纤维细胞生长因子可通过上调成纤维细胞生长因子受体2和p38MAPK的表达促进肠缺血-再灌注损伤的修复。     

红花注射液对兔肺缺血/再灌注损伤时环氧酶基因表达的影响

目的：探讨红花注射液(SI)对肺缺血/再灌注损伤（PIRI）时环氧酶(COX)基因表达的影响。方法: 复制在体兔肺缺血/再灌注损伤模型。30只日本大耳兔，随机均分为3组：假手术组（S组）、缺血/再灌注组(I/R组)和缺血-再灌注+红花注射液组 (SI组)。实验结束时，取肺组织测湿干重比（W/D），计算肺泡损伤率(IAR)，电镜观察细胞超微结构改变。免疫组化法检测肺组织COX-1、COX-2蛋白表达；原位杂交法检测肺组织COX-1mRNA、COX-2mRNA表达的变化。结果：在肺小动脉内（外）膜、肺小静脉内膜、肺泡上皮及细支气管上皮，I/R组COX-2蛋白和COX-2mRNA表达皆显著高于SI组(均P<0.01)，COX-1蛋白和COX-1mRNA表达3组间无明显变化；I/R组和SI组的W/D与IAR均高于S组（P<0.05或P<0.01），但SI组显著低于I/R组（P<0.01）；I/R组肺组织的超微结构损伤严重，SI组损伤程度明显较轻。结论：肺缺血/再灌注可诱导肺组织COX-2的表达，SI可能通过下调肺组织COX-2蛋白及其基因的表达而减轻PIRI。     

缺血后处理通过抑制线粒体途径减轻缺血/再灌注诱导的肠黏膜细胞凋亡

目的：探讨缺血后处理减轻缺血/再灌注损伤肠黏膜细胞凋亡的机制。方法:SD大鼠随机分为4组（n=8）：假手术（sham）组、缺血/再灌注（I/R）组、缺血预处理（IPreC）组、缺血后处理（IPostC）组;应用透射电子显微镜和激光共聚焦扫描显微镜分别观测各组大鼠肠黏膜细胞线粒体形态结构改变和线粒体跨膜电位的变化。应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法（TUNEL）、逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法和免疫组织化学方法分别检测各组大鼠肠黏膜细胞凋亡发生情况以及肠黏膜细胞bcl-2、bax mRNA及Bcl-2、Bax蛋白表达的变化。结果:与I/R组相比,IPostC组和IPreC组大鼠肠黏膜细胞线粒体形态结构改变明显减轻,线粒体跨膜电位显著升高（均P<0.05）,肠黏膜细胞凋亡率明显降低（均P<0.05）,肠黏膜细胞bcl-2 mRNA和Bcl-2蛋白表达水平显著上升,bax mRNA和Bax蛋白表达水平明显下降（均P<0.05）,IPostC组和IPreC组相比各项指标差异无显著差异（均P>0.05）。结论:缺血后处理可能通过抑制线粒体途径减轻缺血/再灌注诱导肠黏膜细胞的凋亡。     

L-精氨酸对肺缺血/再灌注损伤时bcl-2、bax基因表达的影响

目的： 探讨L-精氨酸对肺缺血-再灌注损伤（PIRI）时bcl-2、bax基因表达的影响。方法： 采用在体兔单肺原位缺血-再灌注模型。实验兔36只，随机分为假手术对照组（sham，12只）、肺缺血-再灌注组（I/R，12只）和肺缺血-再灌注加L-精氨酸组（L-Arg，12只）。分别于再灌注5 h取左肺组织，观察bcl-2、bax mRNA定位表达、凋亡指数（AI）、肺组织湿干重比（W/D）、肺损伤组织学定量评价指标（IQA）及光镜、电镜下的组织形态学改变。结果： 在肺小动脉内（外）膜、肺小静脉内膜、肺泡上皮及细支气管上皮，L-Arg组bcl-2 mRNA的表达及bcl-2/bax mRNA的比值显著高于I/R组（均P<0.01），bax mRNA的表达明显低于I/R组（P<0.01）；AI、W/D和IQA值显著低于I/R组（P<0.01和P<0.05）；肺组织形态学异常改变不同程度减轻。结论： L-精氨酸可上调肺组织bcl-2 mRNA的表达、下调肺组织bax mRNA的表达、调控bcl-2/bax mRNA 之间的平衡而减轻细胞凋亡，对PIRI发挥积极的防治作用。     

Nerve growth factor and brain-derived neurotrophic factor mRNAs are regulated in distinct cell populations of rat heart after ischaemia and reperfusion

Neurotrophins play a crucial role in the development of the peripheral nervous system and their mRNAs are often regulated after several types of tissue injury. This study has investigated the regulation of nerve growth factor (NGF), brain-derived neurotrophic factor (BDNF), and neurotrophin-3 (NT-3) mRNAs 30 min after myocardial ischaemia followed by reperfusion, by northern blotting, and in situ hybridization in a rat model. Between 2 and 120 h of reperfusion, Ngf mRNA levels showed two- to four-fold up-regulation compared with sham-operated hearts. Scattered Ngf-expressing cells, probably pericytes, were detected in the viable border zone of the myocardium in close association with capillaries, venules, and arterioles. In addition, diffuse Ngf expression was seen in the infarct area after 120 h of reperfusion. Bdnf mRNA showed transient up-regulation after 2 and 5 h of reperfusion and remained at control levels thereafter. Bdnf was expressed in the myocytes of the viable border zone. Nt-3 expression showed no significant changes compared with sham-operated hearts. These results suggest a role for NGF and/or BDNF in the pathogenesis of reperfusion injury or in the alterations of cardiac sensory and sympathetic neuronal function after myocardial ischaemia and reperfusion.     

缺血再灌注诱导大鼠骨骼肌组织蛋白质组变化的初步研究

目的：研究缺血再灌注(ischemia/reperfusion, I/R)对大鼠骨骼肌组织蛋白质表达谱的影响。方法：健康雄性Wistar大鼠12只随机分为2组(n=6)：假手术组和I/R组，无创动脉夹夹闭右侧股动脉4 h，松夹再灌注24 h建立I/R模型；实验结束时提取骨骼肌组织蛋白质，双向电泳技术分离骨骼肌组织蛋白质，分析差异显示的蛋白质并选取7个差异显著的蛋白点进行质谱分析。结果：双向电泳可分离(354±13)个蛋白质，点匹配率为(78.7±1.4)%，I/R诱导骨骼肌组织10种蛋白质出现明显差异表达，其中6种表达上调，3种表达下调，1种在I/R组为2个点。质谱鉴定出5个蛋白质为：线粒体醛脱氢酶(mitochondrial aldehyde dehydrogenase，ALDH)前体、热休克蛋白27(heat shock 27 kD protein，HSP27) 和一未命名蛋白（I/R组表达升高）、α-肌动蛋白(α- actin，I/R组表达下降）、核转移因子2 (nuclear transport factor 2，NTF - 2) 在I/R组发生突变。结论：I/R损伤引起大鼠骨骼肌蛋白质表达发生改变，其中α-肌动蛋白、ALDH和HSP27表达及NTF-2突变可能与I/R损伤有关。     

复圣散对高脂大鼠脑缺血再灌后脑内NPY含量及其mRNA表达的影响

目的:探讨脑缺血后内源性缩血管活性肽神经肽Y(NPY)的变化规律以及中药复圣散对其影响。方法:通过高脂饮食喂养复制食饵性高脂血症大鼠,在此基础上采用反复脑缺血再灌流手术造成大鼠脑损伤模型,以放免法测定高脂大鼠脑缺血再灌注后脑内NPY含量的动态变化,并运用原位杂交技术观察模型组大鼠脑组织NPYmRNA表达模式。结果:脑缺血再灌后1d模型组大鼠脑内NPY含量比正常对照组高51.86%(P＜0.05),并持续至术后7d,且NPYmRNA表达上调,而复圣散预防和治疗性给药组大鼠脑内NPY含量明显少于同期模型组(P＜0.05);同时,复圣散预防和治疗组大鼠脑内NPYmRNA表达下调。结论:提示脑缺血性损伤与脑内NPY释放失衡密切相关,而中药复圣散对脑内神经肽Y含量有一定的调节作用,推测这可能是该方防治脑血管病的主要作用机制之一。     

肢体缺血再灌注后肺损伤小鼠肺组织AT1R和Mas受体蛋白表达变化

目的:通过观察小鼠肢体缺血再灌注(LIR)后不同时点肺组织血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)和Mas受体蛋白表达与肺损伤的变化,探讨局部组织AT1R和Mas受体蛋白表达失衡在LIR急性肺损伤(ALI)中的作用。方法:42只8周龄雄性ICR小鼠随机分为7组,每组6只,其中1组作为对照组,其余6组为再灌注0.5 h、1h、2 h、4 h、6 h和12 h模型组。模型组小鼠用橡皮圈结扎双后肢根部,缺血2 h后剪断橡皮圈,分别于再灌注后不同时点眼球取血处死小鼠。取肺组织计算脏器系数和湿/干重比;肺泡灌洗液细胞计数和蛋白浓度检测;肺组织病理切片常规HE染色观察肺组织形态变化并进行病理损伤评分;Western blot检测肺组织AT1R和Mas受体蛋白的表达。结果:模型组小鼠肺脏器系数、湿/干重比、肺泡灌洗液细胞计数和蛋白浓度在LIR后显著升高。病理学结果显示,LIR后不同时点小鼠肺组织出现肺泡壁毛细血管扩张和充血、间质和肺泡水肿、血管壁和支气管壁炎症细胞浸润、肺泡间隔增厚、炎症细胞浸润及肺气肿等不同程度的损伤变化,且随着再灌注时间的延长,肺损伤评分逐渐升高。Western blot结果显示,AT1R蛋白在再灌注0.5 h时开始升高,1 h达到最高,之后随再灌注时间的延长,AT1R表达逐渐降低;Mas受体蛋白随再灌注时间延长逐渐升高。结论:LIR引起急性肺损伤,并随再灌注时间的延长损伤逐渐加重;AT1R和Mas受体蛋白表达的变化可能与小鼠LIR后急性肺损伤有关。