糖尿病大鼠阴茎海绵体组织nNOS神经变化的实验研究

目的 :研究糖尿病对大鼠阴茎海绵体组织nNOS神经纤维的影响。　方法 :34只SD雄性大鼠分为 6周组(17只 )和 8周组 (17只 ) ,其中每组各 11只腹腔注射链脲佐菌素制备糖尿病模型 ,其余各 6只注射柠檬酸缓冲液作为空白对照 ,分别在注射 6周和 8周后 ,观察大鼠阴茎勃起功能 ,并采用免疫组化SP法检测糖尿病大鼠阴茎组织nNOS神经纤维的数量。　结果 :2组糖尿病大鼠的阴茎勃起率分别为 37.5 %和 14 .3% ,差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ,均明显低于对照组 (P <0 .0 1)。 2组糖尿病大鼠nNOS神经纤维的表达明显低于对照组 (P <0 .0 1)。 8周组中糖尿病大鼠阴茎的勃起功能和nNOS神经纤维的数量明显低于 6周组 ,分别为 (37.6 0± 6 .76 )条和 (2 8.0 0±5 .2 9)条 ,即随着病程的延长 ,勃起功能和nNOS神经纤维的表达下降 (P <0 .0 5 ) ,而对照组大鼠nNOS神经纤维的数量差异无显著性 [(83.0 0± 3.2 2 )vs(81.0 0± 3.6 1) ]。　结论 :糖尿病严重影响勃起功能和nNOS神经纤维的表达。糖尿病大鼠阴茎海绵体组织中nNOS神经纤维的数量明显减少 ,且与病程正相关 ,这可能是糖尿病性勃起功能障碍的发病机理之一。     

杜仲对糖尿病大鼠阴茎组织SOD活性和α-actin表达的影响

目的:研究杜仲水提物对培养糖尿病(DM)模型大鼠阴茎组织超氧化物歧化酶(SOD)和α平滑肌肌动蛋白(αactin)的作用。方法:采用四氧嘧啶两次给药法建立DM模型;随机选取10只DM大鼠和10只正常大鼠,每只大鼠的阴茎组织块均分为4等份,分配到杜仲共培养组(A组:1μg/ml组、10μg/ml组、100μg/ml组)和空白对照组(B组)进行培养。7d后,用比色法测定培养液中SOD活性,用免疫组化技术检测αactin的表达。结果:10、100μg/ml组的正常大鼠和DM大鼠阴茎组织培养液中SOD活性与B组比较显著升高(P<0.01),培养阴茎组织中αactin免疫反应阳性细胞数与B组比较显著增多(P<0.01)。结论:杜仲可增强DM大鼠阴茎组织中SOD活性和αactin表达。     

负压吸引对糖尿病性ED大鼠阴茎海绵体组织一氧化氮合酶表达的影响

目的研究负压吸引对糖尿病性勃起功能障碍（ED）大鼠阴茎组织一氧化氮合酶（NOS）表达水平的影响。方法25只实验鼠中随机选取5只为正常对照组（A组）,其余火鼠用链脲左菌素和阿朴吗啡诱导建立Ⅰ型糖尿病性ED大鼠模型。之后把造模成功的糖尿病性ED大鼠随机分成糖尿病ED吸引组（B组）和糖尿病ED非吸引组（C组）。在B组大鼠负压吸引治疗结束后将A、B、C3组大鼠处死并取阴茎组织进行石蜡包埋。采用免疫组织化学方法检测各组大鼠阴茎组织中三种一氧化氮合酶亚型（nNOS、eNOS、iNOS）的表达情况。结果A组大鼠阴茎组织中nNOS蛋白表达水平高于B组和C组（均P〈0.001）;A组和B组大鼠阴茎组织中eNOS蛋白表达水平高于C组（均P〈0.01）;A组iNOS蛋白表达水平低于B组和C组（P〈0.01,P〈0.001）,同时B组iNOS蛋白表达水平低于C组（P〈0.01）;剩余其他各组间的比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论负压吸引可以通过升高阴茎组织中的eNOS和降低iNOS的表达来改善勃起功能。     

糖尿病性勃起功能障碍大鼠阴茎海绵体组织中神经生长因子的表达及其治疗作用的研究

目的:本研究通过检测糖尿病性勃起功能障碍(ED)大鼠阴茎组织中神经生长因子(NGF)表达,并使用hNGF进行治疗,以探讨糖尿病性ED发病机制及NGF治疗作用的机制。方法:成年雄性SD大鼠60只,随机取50只大鼠用于制作糖尿病模型,饲养8周后,取正常组和糖尿病组大鼠阴茎海绵体组织,采用RT-PCR和W estern印迹法检测NGF的mRNA及蛋白水平。从造模成功的糖尿病大鼠中筛选出有ED大鼠,把所有大鼠分为5组:正常组、糖尿病性ED组、糖尿病性ED单用NGF组(NGF组)、糖尿病性ED单用胰岛素组(R I组)、糖尿病性ED联合应用NGF和胰岛素组(NGF+R I组,胰岛素通过颈部皮下注射给药,NGF通过腹腔内注射给药),8周后测海绵体内压(ICP),并取所有大鼠阴茎海绵体组织用免疫组化法观察nNOS神经纤维的变化。结果:与正常组相比,糖尿病性ED组大鼠阴茎海绵体组织中NGF的mRNA表达增加,蛋白含量增加。与糖尿病性ED组相比,NGF组、R I组、NGF+R I组ICP水平显著升高(P<0.05);NGF组、R I组、NGF+R I组阴茎组织中nNOS神经纤维水平显著升高(P<0.05)。结论:糖尿病晚期勃起神经出现损伤并发生ED,推测可能与NGF分泌增加的幅度小于高血糖状态对勃起神经的损伤程度有关,也可能与NGF与其相应受体结合转运能力损害有关,给予外源性NGF可能有助于糖尿病性ED局部神经病变减轻和勃起功能改善。提示NGF的异常在糖尿病性ED的发病及治疗中可能具有重要作用。     

大鼠阴茎背神经中NOS阳性纤维源于自主神经系统的研究

目的　探讨阴茎背神经 (PDN)中一氧化氮合酶 (NOS)阳性神经纤维的来源及其与阴茎自主神经系统的联系。方法　在外科显微镜下对雄性成年SD大鼠行无菌手术 ,建立单侧和双侧海绵体神经 (CN )切断模型 ,以假手术组作为对照 ;2周后取阴茎中段标本冰冻切片 ,并行NADPH黄递酶染色 ,在镜下着重观察PDN中的阳性纤维 ,并在高倍镜下计数每只大鼠每侧PDN中阳性纤维的数目。结果　 6只对照大鼠双侧PDN中皆有丰富的NOS阳性神经 ,平均每侧(70 .3± 14 .8)根 (n =12 ) ,而 7只双侧切断组大鼠平均每侧只有 (2 .7± 2 .9)根 (n =14 ) ,两组比较 ,差异有非常显著性 (P <0 .0 0 1) ;6只单侧切断组大鼠CN切断侧和未切断侧PDN中阳性纤维平均分别为 (1.2± 1.6)根和 (63 .8± 13 .8)根 (n =6) ,两侧比较 ,差异有非常显著性 (P <0 .0 0 1)。结论　CN切除会使同侧PDN中的NOS阳性神经纤维几乎消失 ,大鼠PDN中的NOS阳性纤维实际上来源于自主神经系统     

胰岛素对糖尿病大鼠阴茎内nNOS神经纤维的影响

目的探讨糖尿病性阴茎勃起功能障碍（ED）的发病机制及胰岛素的治疗作用。方法注射链脲佐菌素建立糖尿病（DM）大鼠模型，胰岛素治疗组于成模后注射胰岛素。7周和12周后注射阿扑吗啡（APO）进行大鼠阴茎勃起功能实验，取大鼠阴茎和血浆，用ABC免疫组织化学法观察nNOS神经纤维的变化。测定血浆NOS活性。结果（1）与对照组相比，DM组大鼠阴茎勃起次数明显减少;胰岛素治疗后症状缓解;（2）与对照组相比，DM组血浆NOS活性明显增高;DM组血浆NOS活性与病程延长呈负相关;与DM组比较，胰岛素治疗组血浆NOS活性明显降低;（3）与对照组相比，DM组阴茎内nNOS阳性神经纤维明显减少;与DM组比较，胰岛素治疗组nNOS阳性神经纤维表达增加。结论糖尿病性ED阴茎内nNOS阳性纤维的数量及光密度随DM病程的延长而下降;早期给予胰岛素治疗可预防糖尿病大鼠ED的出现及阴茎内nNOS含量的下降。     

利拉鲁肽对糖尿病大鼠阴茎海绵体eNOS表达的影响

目的:研究胰高血糖素样肽-1(GLP-1)类似物利拉鲁肽对糖尿病(DM)大鼠阴茎海绵体内皮型一氧化氮合酶(e NOS)表达的影响,探讨利拉鲁肽对DM勃起功能障碍(DED)大鼠勃起功能的作用。方法:取6周龄雄性SD大鼠,分为正常对照组(NC,n=10)与实验组(n=20),实验组构建DM大鼠模型,随机将实验组分为DM组(n=8)与GLP-1组(n=8)。干预12周后,检测各组空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、睾酮、白介素-6,计算胰岛素敏感指标Homa-IR与Homa-β,比较各组大鼠勃起功能;Western印迹检测各组大鼠阴茎海绵体组织Akt/p-Akt、e NOS/p-e NOS的表达。结果:DM组大鼠勃起次数(0.90±1.14)及勃起率(37.5%)较GLP-1组(2.90±1.53,25.0%)、NC组(4.20±1.05,100%)均明显减少(P0.05);GLP-1组大鼠勃起率及勃起次数亦少于NC组大鼠(P0.05)。免疫荧光染色提示e NOS主要表达在海绵体血管、血窦内皮细胞的细胞质中,DM组、GLP-1组e NOS蛋白表达水平显著低于正常对照组(P0.05),且GLP-1组明显高于DM组(P0.05)。DM、GLP-1组大鼠阴茎组织e NOS/p-e NOS表达水平较NC组明显下降(P0.01或0.05)。与DM组相比,GLP-1组大鼠阴茎组织p-e NOS表达水平明显升高(P0.05)。3组大鼠阴茎组织Akt比较无显著差异(P0.05)。DM、GLP-1组大鼠阴茎组织p-Akt表达水平较NC组明显下降(P0.01或0.05)。与DM组相比,GLP-1组大鼠阴茎组织p-e NOS表达水平明显升高(P0.05)。结论:GLP-1可能通过调节Akt/e NOS信号通路,保护阴茎海绵体组织内皮细胞功能,改善DED大鼠的勃起功能,提示GLP-1的使用可能是将来治疗和预防DED的重要方法之一。     

髂内动脉结扎对大鼠阴茎海绵体组织nNOS神经纤维及eNOS表达的影响

目的 研究髂内动脉结扎对大鼠阴茎海绵体组织神经型一氧化氮合酶(nNOS)神经纤维及内皮型一氧化氮合酶(eNOS)表达的影响。方法 45只Wistar雄性成年大鼠随机分为假手术组(21只)和手术组(24只)。其中手术组采用双侧髂内动脉结扎的方法制备动脉性勃起功能障碍(ED)大鼠模型,假手术组作为对照组只切开腹腔不结扎髂内动脉。于术后1周、3周、6周末分别取各组1/3大鼠,观察其勃起功能,并采用免疫组化SP法检测大鼠阴茎组织中nNOS神经纤维的数量及eNOS的表达。结果 手术组与假手术组相比,1周末、3周末和6周末在阴茎勃起次数和阴茎组织nNOS神经纤维数量及eNOS表达上均有显著差异(P<0.01)。手术组大鼠阴茎勃起次数3周末高于1周末,6周末高于3周末;eNOS的表达3周末明显低于1周末,而6周末高于3周末,差异均有显著性意义(P<0.001),并呈增加趋势。手术组大鼠阴茎组织nNOS神经纤维数量三者之间差异均有显著性(P<0.001),呈进行性下降。结论 髂内动脉结扎影响阴茎勃起功能和nNOS、eNOS的表达。阴茎组织中nNOS阳性神经纤维数量的减少,可能是髂内动脉结扎术后阴茎勃起功能障碍发生的原因之一。     

自发性高血压大鼠阴茎海绵体组织nNOS变化的实验研究

目的：研究高血压对大鼠阴茎海绵体组织nNOS神经纤维的影响。方法：自发性高血压大鼠(SHR)和同系WKY鼠各12只，都随机分为4周观察组(6只)和12周观察组(6只)。第4周和第12周末时，观察阴茎勃起功能，并检测阴茎组织nNOS神经纤维数目。结果：4周组和12周组中，SHR和WKY鼠在阴茎勃起次数和阴茎组织nNOS神经纤维数目上，都有显著差异(P＜0．01)。SHR4周组和SHR12周组，在阴茎组织nNOS神经纤维数目上，差异也有显著性(P＜0．05)，阴茎勃起次数和勃起率差异无显著性(P＞0．05)，但有减少的趋势。结论：高血压使阴茎组织中nNOS神经纤维数目减少，这可能是高血压引起勃起功能障碍的发病机理之一。     

抗高血压药物对自发性高血压大鼠勃起功能和nNOS神经纤维的影响

目的 :研究抗高血压药物对自发性高血压大鼠 (SHR)勃起功能和神经元型一氧化氮合酶 (nNOS)神经纤维的影响。　方法 :18只 6周龄雄性SHR随机均分为 3组 :缬沙坦 [30mg (kg·d) ]干预组、螺内酯 [2 0mg (kg·d) ]干预组和对照组。 12周后 ,观察大鼠阴茎勃起功能 ,并用免疫组化SP法检测阴茎组织中nNOS神经纤维的数目。　结果 :缬沙坦干预组勃起次数与另外两组相比差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ,后两组之间差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ,勃起率 3组之间差异不明显 (P >0 .0 5 ) ,阴茎组织中nNOS神经纤维数目 ,两干预组与对照组之间差异有显著性 (P <0 .0 1) ,而两干预组之间差异无显著性 (P >0 .0 5 )。　结论 :缬沙坦能改善SHR的勃起功能 ,而螺内酯无改善作用 ,这种差异与nNOS神经纤维数目无关 ,可能与血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)受体阻滞剂引起血管重构等其他作用有关     

糖尿病性勃起功能障碍大鼠阴茎组织内Cx43和eNOS表达的研究

目的:探讨糖尿病(DM)性勃起功能障碍(DMED)与阴茎组织中连接蛋白(Cx43)和eNOS水平变化的相关性。方法:25只SD大鼠腹腔内注射四氧嘧啶建立DM模型,8周后注射阿朴吗啡观察大鼠阴茎勃起情况,筛选出DMED大鼠,应用RT-PCR和免疫组化法分别检测阴茎组织中Cx43和eNOSmRNA表达水平。结果:DMED大鼠阴茎海绵体组织eNOSmRNA表达(0.155±0.157)与DM组(0.508±0.242)比较,显著降低(P<0.01),而Cx43mRNA则显著升高(0.993±0.157vs0.545±0.138,P<0.01),二者存在负相关性(r=-0.987)。免疫组化检测也显示DMED组大鼠阴茎组织平滑肌细胞中eNOS蛋白表达减少,而Cx43蛋白水平增多。结论:阴茎组织内eNOS水平下降可能是DM患者发生ED的主要机制之一;同时,Cx43的表达呈代偿性增加,其功能有待进一步探讨。     

生长激素对髂内动脉结扎大鼠勃起功能和nNOS神经纤维的影响

目的 :研究生长激素 (GH)对髂内动脉结扎大鼠勃起功能和神经型一氧化氮合酶 (nNOS)神经纤维的影响。方法 :36只成年雄性Wistar大鼠随机均分为 3组 :假手术组、髂内动脉结扎组和GH干预组。于术后 4周末、8周末 ,分别取各组 1/ 2大鼠 ,观察大鼠勃起功能 ,并用免疫组化SP法检测阴茎组织中nNOS神经纤维的数目。　结果 :4周末 ,GH干预组和髂内动脉结扎组在勃起次数和nNOS神经纤维数目上与假手术组相比差异有显著性 (P<0 .0 5 ) ,前两组之间差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ,而勃起率 3组之间差异不明显 (P >0 .0 5 )。 8周末 ,3组在勃起次数和勃起率上差异均不明显 ;而阴茎组织中nNOS神经纤维数目 ,GH干预组高于髂内动脉结扎组 (P <0 .0 0 1) ,而与假手术组比较差异无显著性 (P >0 .0 5 )。　结论 :GH可以改善髂内动脉结扎大鼠勃起功能 ,这种作用可能与其增加大鼠阴茎海绵体nNOS神经纤维数目有关     

糖尿病大鼠阴茎海绵体组织中一氧化氮合酶亚型表达的研究

目的:通过观察糖尿病性雄性大鼠阴茎海绵体组织中一氧化氮合酶亚型(nNOS、iNOS、eNOS)表达和勃起功能的变化,以及应用胰岛素、α-硫辛酸(LA)干预对其的影响,进一步探讨糖尿病性ED发病机制,并为临床治疗提供新的思路。方法:将50只成年雄性SD大鼠分为4组:A组为正常对照组(10只),B组为糖尿病无干预组(13只),C组为糖尿病胰岛素干预组(12只),D组为糖尿病胰岛素+LA干预组(15只),采用腹腔注射链脲佐菌素法制作糖尿病模型。8周后各组大鼠通过注射阿朴吗啡后评价勃起功能并取阴茎海绵体组织用免疫组化EnV i-sion法观察海绵体组织中nNOS、iNOS、eNOS表达的变化。结果:A组大鼠勃起功能正常,勃起率100%;与A组相比,B组、C组、D组勃起功能水平显著降低(P<0.05),勃起率:B组28.6%,C组62.5%,D组80.9%,其海绵体组织中nNOS、eNOS表达显著降低,A组大鼠海绵体组织每视野nNOS、eNOS阳性神经纤维数为86.7、9.6,B组为36.5、3.3,C组为52.7、5.7,D组为71.4、7.4,而iNOS表达显著增加(P<0.05),A组为6.9,B组为43.6,C组为36.2,D组为19.3;与B、C组相比,D组勃起功能显著上升,海绵体组织中nNOS、eNOS表达均显著上升,iNOS显著下降(P<0.05)。结论:糖尿病严重影响阴茎勃起功能和nNOS、iNOS、eNOS的表达,高血糖是其发病基础之一,而LA对其有显著疗效,推测可能与其抗氧化作用机制有关。     

生长激素促进老年大鼠阴茎组织中nNOS神经纤维的再生

目的:研究生长激素(GH)对老年大鼠勃起功能及阴茎组织中神经型一氧化氮合酶(nNOS)神经纤维的影 响。　方法:24只老年(18月龄)雄性SD大鼠随机均分为对照组和GH处理组。GH处理组大鼠每天后肢皮下注 射重组人GH(rhGH)200μg,对照组注射生理盐水0.2ml,共3周。于第4、8周末分别取各组1/2大鼠,颈部皮下 注射阿朴吗啡(APO)评价其勃起功能,免疫组化SP法检测大鼠阴茎组织中nNOS神经纤维的数量。　结果:4周 末,GH处理组大鼠的勃起功能和nNOS神经纤维数量与对照组相比,差异均无显著性(P>0.05)。8周末,GH处 理组大鼠仅勃起次数有上升,与对照组相比差异有显著性(P<0.05),勃起率无明显改变;而阴茎组织中nNOS神 经纤维数量,GH处理组大鼠有明显的上升,对照组大鼠无明显改变,两组相比,差异有极显著性(P<0.01)。　结 论:GH促进了老年大鼠阴茎组织中nNOS神经纤维的再生,并在一定程度上改善了老年大鼠的勃起功能。     

当归对大鼠海绵体神经损伤后阴茎NOS活性的影响

目的 :探讨海绵体神经 (CN)钳夹损伤后阴茎组织一氧化氮合酶 (NOS)活性的变化及局部使用当归注射液对其活性的影响。　方法 :30只SD大鼠随机平均分成当归组、对照组和正常组 ,对前两组大鼠通过手术建立双侧CN钳夹损伤模型 ,经耻骨上在CN周围每天分别注射 2 5 %当归注射液或相当剂量生理盐水 (10ml/kg) ,正常组只注射生理盐水而不行手术 ;两周后用分光光度法检测阴茎组织NOS活性。　结果 :NOS活性均值当归组为 (1.36 0±0 .139)U/mg·prot,达正常组的 77.4% ,而对照组为 (0 .945± 0 .0 98)U/mg·prot,只有正常组的 5 3.8% ,二者比较有极显著性差异 (P <0 .0 1)。　结论 :CN损伤可致阴茎组织NOS活性降低 ,局部使用当归能够一定程度地避免其活性下降。     

生长激素补充对老龄大鼠勃起功能及阴茎海绵体nNOS表达的影响

目的探讨生长激素(GH)补充对老龄大鼠勃起功能及阴茎海绵体神经型一氧化氮合酶(nNOS)表达的影响。方法20只18月龄SD大鼠随机均分成A、B两组,10只2月龄SD大鼠为C组。A组给予GH1U/(kg·d),B、C组给予相同剂量的生理盐水,均皮下注射8周。于8周末观察阿朴吗啡(APO)皮下注射与大鼠海绵体内注射罂粟碱诱导的阴茎勃起情况,并用免疫组化SP法检测阴茎海绵体组织中nNOS神经纤维的数目。结果8周末时,A、C组大鼠APO诱导的勃起次数、海绵体内注射罂粟碱诱导的最大海绵体内压以及阴茎海绵体组织中nNOS神经纤维数目均显著高于B组(P<0.05或P<0.01)。结论老龄大鼠勃起功能及阴茎海绵体nNOS表达较成年大鼠明显下降,GH补充可以部分改善老龄大鼠的勃起功能,其机制之一可能与GH补充增加了老龄大鼠阴茎海绵体组织中nNOS神经纤维数目有关。