人参水提液对TAMs与肿瘤细胞共培养体系肺癌A549细胞生物学行为的影响

目的探讨人参水提液(water extract of ginseng,WEG)对肿瘤相关巨噬细胞(tumor associated macrophages,TAMs)与肺癌A549细胞共培养体系肺癌A549细胞增殖、迁移及骨架蛋白F-actin表达等生物学行为影响。方法采用佛波酯(PMA)联合IL-4及IL-13诱导人急性白血病单核细胞株(THP-1)成为TAMs。以TAMs细胞上清与肺癌A549细胞共培养,模拟肿瘤微环境构建共培养模型。将细胞分为空白组(A549)、共培养组(TAMs+A549)、WEG高、中、低剂量组(TAMs+A549+WEG)。分别采用MTT法、实时细胞分析技术及高内涵细胞成像系统检测分析不同条件下A549细胞增殖、迁移和骨架蛋白F-actin表达情况。结果与空白组比较,共培养组A549细胞增殖明显增加,细胞迁移能力和细胞骨架面积均明显升高,差异有统计学意义(P0.05);与共培养组比较,WEG高、中、低剂量组A549细胞增殖和迁移能力受抑制,细胞骨架面积和微丝条数减少,且呈剂量依赖性(P0.05)。结论人参水提液在共培养体系中能有效抑制A549细胞增殖迁移能力,可能通过调节TAMs免疫活性而影响肿瘤细胞的生物学行为。     

小檗碱对A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的研究小檗碱对肺癌细胞A549增殖、迁移和侵袭的影响。方法培养THP-1细胞并加入小檗碱后,MTT法检测细胞增殖。100 ng/mL PMA和20 ng/mL IL-4将THP-1细胞诱导成M2型肿瘤相关巨噬细胞,小檗碱预给药后,随机分为对照组、模型组、小檗碱组,细胞培养上清与A549细胞共培养。RT-PCR、Western blot、ELISA检测CD206、IL-10、TGF-β表达,Transwell检测细胞迁移和侵袭。结果小檗碱最佳刺激浓度为20μmol/L。与模型组比较,小檗碱组可显著抑制CD206、IL-10、TGF-β表达(P0.05)。小檗碱可抑制THP-1细胞转化为M2型肿瘤相关巨噬细胞。结论小檗碱可调节A549细胞的增殖、侵袭和迁移,其机制可能与抑制肿瘤相关巨噬细胞向M2型巨噬细胞的转化有关。     

回药爱康方含药血清对肺癌A549细胞凋亡的影响

目的:探讨回药爱康方(HAKF)含药血清对人肺腺癌A549细胞凋亡的影响。方法:SD大鼠随机分为对照组、爱康方低、中、高剂量组、环磷酰胺(CTX)组、回药爱康方低、中、高剂量分别联合环磷酰胺化疗组,药物低、中、高剂量15.0,30.0,45.0 g·kg-1,连续灌胃15 d,麻醉后心脏取血,制备含药血清。培养细胞,将细胞分为实验组和对照组,实验组分别给予含5%,10%,20%3个体积分数的相应各组含药血清,对照组给予等体积分数的对照组大鼠血清,培养24,48,72 h后采用Annexin-VFITC/PI双染法测定各组含药血清对A549细胞凋亡的影响。结果:与对照组比较,各时段5%,10%,20%浓度含药血清可提高A549的凋亡率(P<0.05),72 h时,各浓度回药爱康方低、中、高剂量含药血清对细胞的凋亡率的提高程度小于CTX(P<0.05);72 h 10%体积分数回药爱康方低剂量联合环磷酰胺血清提高细胞的凋亡率大于单纯CTX(P<0.05);各浓度爱康方中剂量和高剂量血清组,72 h与24 h比较,两组A549细胞的凋亡率均升高(P<0.05);随着血清体积分数的提高,各组细胞的凋亡率和坏死率呈增大趋势。结论:回药爱康方可诱导人肺腺癌A549细胞的凋亡,且有一定的剂量和时间依赖性。     

人参水提液通过免疫调节TAMs影响A549增殖

目的探讨人参水提液(1 g/m L人参水提液中Rg1、Re、Rb1的量分别为1.4、1.17、1.42 mg/m L)对肿瘤相关巨噬细胞(tumor associated macrophages,TAMs)的表型调节进而间接抑制肺癌细胞A549的增殖。方法采用佛波酯、IL-4、IL-13联合处理人急性单核细胞白血病细胞THP-1来建立TAMs的体外模型;RT-PCR技术、流式细胞技术、ELISA用于分析2.5、5、10、20、40 mg/m L人参水提液及药物处理6、12、24、48 h对TAMs的表型调节;用Transwell上下室共培养体系和上清共培养体系观察TAMs对A549增殖的抑制。结果人参水提液能显著上调TAMs中M1型标志物IL-12及i NOS的表达水平;人参水提液双向调控M2型标志物(下调甘露糖受体CD206和上调IL-10)的表达水平。经人参水提液调节的TAMs能够显著抑制A549增殖且呈剂量依赖性。结论人参水提液能调节肿瘤微环境中TAMs的表型进而抑制A549的增殖,这可能与人参水提液提高了TAMs中M1型巨噬细胞的比例有关。     

肺瘤平膏含药血清对巨噬细胞共培养条件下A549细胞EMT相关mRNA及蛋白表达的影响

目的观察肺瘤平膏含药血清对A549细胞与巨噬细胞共培养条件下上皮间质转化(epithelialmesenchymal transition,EMT)相关mRNA及蛋白表达的影响。方法制备肺瘤平膏含药血清,建立A549细胞与巨噬细胞的共培养体系,将细胞分为A549加空白血清组(A549+NRS组)、共培养加空白血清组(共培养+NRS组)及共培养加肺瘤平膏含药血清组(共培养+FLP组)。采用荧光定量PCR、免疫荧光法比较各组A549细胞EMT相关基因(SNAIL1、SNAIL2、ZEB1、CDH1、CDH2、VIM、TJP1、CLDN1、CTNNB1、FLRT1)及E-cadherin、N-cadherin、ZO-1、Vimentin蛋白表达水平的影响。结果共培养条件下,A549细胞变为间充质细胞样。加入肺瘤平膏含药血清后,部分A549细胞形态恢复为上皮细胞样。与A549+NRS组比较,共培养+NRS组A549细胞SNAIL1、ZEB1、CTNNB1、FLRT1、CDH2、VIM mRNA表达上调,TJP1 mRNA表达下调(均P0.05);与共培养+NRS组比较,共培养+FLP组SNAIL2、TJP1、CLDN1、CDH1、VIM mRNA表达上调,CTNNB1、FLRT1及CDH2 mRNA表达下调(均P0.05)。免疫荧光结果显示,E-cadherin表达于细胞膜和胞浆内,以细胞膜为主;N-cadherin表达于细胞膜和胞浆内,以细胞浆为主;Vimentin表达于胞浆内;ZO-1表达于细胞连接处为主,部分细胞膜染色亦呈阳性。与A549+NRS组比较,共培养+NRS组A549细胞E-cadherin蛋白表达下调,N-cadherin及Vimentin蛋白表达上调(P0.05);肺瘤平膏含药血清可上调E-cadherin表达,下调N-cadherin及Vimentin蛋白表达(均P0.05)。结论肺瘤平膏可抑制共培养条件下A549细胞EMT的形成。     

扶正解毒方含药血清对人肺癌细胞(A549)增殖和凋亡的影响

目的:研究扶正解毒方含药血清对体外培养的人肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响。方法:在体外培养的肺癌A549细胞株中加入不同浓度的扶正解毒方含药血清,计算细胞抑制率、观察细胞形态学变化、检测细胞凋亡率。结果:MTT提示扶正解毒方含药血清对肺腺癌A549细胞具有特异性抑制效应并存在效应-剂量依赖关系;肺腺癌A549细胞随药物浓度增加及处理时间的延长细胞凋亡特征越明显;细胞凋亡率随着药物剂量的增加和作用时间的延长而增加,存在效应-剂量、效应-时间依赖关系。结论:扶正解毒方含药血清可抑制肺腺癌A549细胞生长、诱导细胞凋亡。     

肉苁蓉多糖对肺癌细胞A549生物学行为的影响

目的 探讨肉苁蓉多糖对肺癌细胞A549生物学行为的影响。方法 将肺癌细胞A549分为对照组,肉苁蓉多糖100、200、400 ng/mL组,si-NC组,si-LINC01410组,肉苁蓉多糖400 ng/mL+pcDNA组,肉苁蓉多糖400 ng/mL+pcDNA-LINC01410组。MTT法检测A549细胞增殖率,克隆形成实验检测A549细胞克隆能力,流式细胞术检测A549细胞凋亡率,Transwell法检测A549细胞迁移及侵袭能力,RT-qPCR法检测A549细胞中LINC01410 mRNA表达。结果 肉苁蓉多糖可以抑制A549细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力、LINC01410 mRNA表达(P<0.05),促进细胞凋亡,并呈剂量依赖性。抑制LINC01410表达后,A549细胞生长、迁移和侵袭能力受到抑制(P<0.05)。过表达LINC01410可以逆转肉苁蓉肉多糖对A549细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。结论 肉苁蓉多糖可能通过降低LINC01410表达从而抑制肺癌细胞活性、克隆形成、迁移和侵袭能力,并促进细胞凋亡。     

地鳖纤溶活性蛋白含药血清对人肺癌A549细胞凋亡及凋亡相关表达的影响

目的 研究地鳖纤溶活性蛋白(EFP)含药血清对人肺癌A549细胞凋亡的影响及凋亡相关基因的表达.方法 制备不同浓度EFP小鼠含药血清;采用MTT法检测EFP对A549细胞的增殖抑制效果;采用Annexin V-FITC/PI双荧光染色观察细胞凋亡情况;应用流式细胞术检测EFP对A549细胞周期的影响;采用免疫组化法检测凋亡相关基因Bax表达水平的改变.结果 EFP含药血清各组对A549细胞有明显抑制作用;EFP使A549细胞发生细胞凋亡,细胞周期发生改变;随着药物浓度的增加,Bax表达逐渐增强,Bcl-2表达逐渐减弱.结论 EFP有较强的体外抗肿瘤活性;EFP可能通过调控Bcl-2,Bax基因表达而诱导凋亡.     

肺岩宁方介导Atg5对肺癌A549细胞自噬调控抗肺癌侵袭转移的实验研究

目的 探讨肺岩宁方（Feiyan Ning Decoction,FYN）通过介导Atg5（自噬相关靶向基因5,Autophagy-related gene 5）自噬相关基因调控人肺腺癌A549细胞自噬,及其对A549肺癌细胞增殖、迁移、侵袭等作用的影响。方法 肺岩宁方干预培养肺癌A549细胞,通过运用CCK-8(Cell Counting kit-8)细胞增殖实验检测肺岩宁方对细胞增殖抑制率的影响,显微镜下观察肺岩宁方作用后的细胞形态学改变;采用划痕实验检测肺岩宁方及自噬抑制剂氯喹（Chloroquine diphosphate salt,CQ）对肺癌A549细胞迁移能力;运用Transwell细胞侵袭实验检测肺岩宁方及氯喹对肺癌A549细胞侵袭能力;运用Western Blot检测自噬相关蛋白Atg5、LC3表达情况;运用透射电子显微镜观察肺癌A549细胞在肺岩宁方干预下的自噬结构形态改变情况。结果 CCK8检测试验结果：肺岩宁方能有效抑制A549细胞增值活力（P <0.01）,其优化浓度为200μg mL-1;划痕实验结果：与对照组比,肺岩宁方干预A549细胞迁移能力减弱（P...     

芪连扶正胶囊含药血清对肺癌A549细胞生物学行为的影响

目的:观察芪连扶正胶囊含药血清对肺癌A549细胞增殖、迁移及侵袭的影响。方法:体外培养肺癌A549细胞,按实验分组干预,采用MTT法检测细胞增殖、划痕试验观察细胞迁移,Transwell实验观察细胞侵袭情况。结果:芪连扶正胶囊含药血清对肺癌A549细胞的增殖抑制且呈时间、浓度依赖性,且与化疗联合有协同作用;各药组细胞迁移值均小于对照组,与之比较除芪连扶正胶囊低剂量组外均有显著性差异(P0.05);与顺铂组相比,芪连扶正胶囊各组迁移值均大于顺铂组(P0.01),而联合组迁移值小于顺铂组(P0.01);芪连扶正胶囊低、中、高剂量组、顺铂组及联合组的侵袭抑制率分别为8.87%、19.11%、24.57%、37.88%、47.10%。结论:芪连扶正胶囊含药血清可抑制肺癌A549细胞增殖、迁移、侵袭,具有抗肿瘤转移作用。     

益肾骨康方对肺癌A549细胞形态及转录组基因表达的影响

目的:通过益肾骨康方作用后肺癌A549细胞基因的差异表达情况及进行功能分析,探讨益肾骨康方作用于肺癌的分子作用机制奠定实验基础。方法:实验分为对照组和益肾骨康方组,中药作用于A549细胞24 h后,利用扫描电镜观察A549细胞表面形态的变化;利用转录组基因测序,筛选差异表达基因,并通过基因本体(GO)富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析对差异表达基因进行功能富集分析。利用Cytoscape 360软件构建差异表达基因蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络。结果:扫描电镜结果显示对照组细胞形态正常,饱满,表面有膜皱,丝状伪足。益肾骨康方组可见细胞表面膜皱显著减少,丝状伪足断裂,凋亡小体形成。差异基因筛选|log2FoldChange|>1的差异表达基因有440个,其中下调基因有136个,上调基因有304个。其中与癌症密切相关的基因为SOX2,在给药组中表达下调。在GO功能富集过程中共得到307条结果,主要涉及生物过程(237项)、细胞组分(56项)和分子功能(14项)。KEGG通路分析,结果显示与益肾骨康方抑制肺癌A549细胞的作用相关机制主要涉及到细胞凋亡方面。通过构建PPI网络,找到与中药干预肺癌增殖和转移相关的2个节点度较高的基因:MMP9和CCL2。与对照组比较益肾骨康方下调了MMP9和CCL2基因的表达。结论:益肾骨康方的抗肿瘤作用机制可能是通过下调SOX2、MMP9和CCL2基因的表达,从而抑制了肺癌A549细胞的增殖和转移能力。     

低浓度人参水提液对肺A549细胞癌性的影响及其机制研究

目的：探讨低浓度人参水提液(LWEG)对肺癌A549细胞癌性包括细胞增殖、迁移、侵袭等生物学行为的影响,以更加全面地了解人参对肺癌A549细胞的影响。方法：将细胞分为对照组、WEG组(1.25,2.5,5,10,20,40,80,160 mg/mL)。通过MTT法检测不同浓度WEG对A549细胞增殖的影响,进而筛选出LWEG的浓度范围,再通过划痕实验与Transwell小室侵袭实验分别检测LWEG(2.5,5,10 mg/mL)对A549细胞迁移、侵袭能力的影响。并运用网络药理学研究策略对其潜在的作用机制进行预测分析。结果：与对照组相比,LWEG组A549细胞增殖显著增加,细胞的迁移和侵袭能力均明显增强,差异有统计学意义(P<0.05)。网络药理学预测分析表明这一作用可能与ErbB信号通路及代谢和应激反应有较大关联。结论：LWEG直接作用于A549细胞,能够提高A549细胞的增殖、迁移和侵袭能力。     

西红花苷对成纤维细胞共培养的结直肠癌细胞生物学行为的影响及机制初步研究＊

目的 探究西红花苷对与成纤维细胞共培养的结直肠癌细胞生物学行为的影响，并初步探究作用机制。方法 将人结直肠癌细胞HCT116和人表皮成纤维细胞ESF-1共培养，再用低、中、高（50、100、200 μmol·L^-1）剂量西红花苷处理共培养后的HCT116细胞，实验分组包括对照组、ESF-1/HCT116组、ESF-1/HCT116 + Cro-L组、ESF-1/HCT116 + Cro-M组、ESF-1/HCT116 + Cro-H组；MTT法检测细胞增殖，PI染液法检测细胞周期分布情况，Transwell实验检测细胞侵袭与迁移能力，化学比色法检测超氧化物歧化酶（SOD）活性，硫代巴比妥酸比色法检测丙二醛（MDA）含量；荧光探针DCFH-DA测定活性氧（ROS）水平，Western blot检测转化生长因子-β（TGF-β1）、上皮性钙粘附分子（E-cadherin）、神经性钙黏附蛋白（N-cadherin）与波形蛋白（Vimentin）蛋白表达水平。结果 与共培养体系下的HCT116细胞比较，共培养后再经各浓度西红花苷处理后的HCT116细胞存活率下降，G1期细胞比例减少，G2期细胞比例增加，细胞的侵袭数目和迁移数目均减少，TGF-β1、N-cadherin与Vimentin蛋白表达水平均下调，E-cadherin蛋白表达水平上调，此外，SOD活性下降而MDA含量升高，ROS水平也明显提高，差异均具有统计学意义（P < 0.05）。结论 西红花苷可抑制与成纤维细胞共培养的结直肠癌细胞的增殖、侵袭与迁移能力，其机制可能与诱导细胞发生氧化应激损伤有关。     

益气扶正方通过调控肿瘤相关巨噬细胞极化抗肺癌转移的实验研究

目的 阐释益气扶正方调控肿瘤相关巨噬细胞表型转化的作用及机制.方法 ①建立体外诱导的M2型肿瘤相关巨噬细胞模型,采用CCK-8实验确定益气扶正方的给药浓度,流式技术鉴定给药后各组M1和M2型肿瘤相关巨噬细胞的表达情况,利用RT-PCR技术检测给药后各组肿瘤相关巨噬细胞中CCL2、AMPK、mTOR mRNA表达水平,W...     

灵巴菌质油对A549细胞成瘤能力及伪足形成的影响

目的：探讨灵巴菌质油对人肺癌细胞A549成瘤能力及伪足形成的效应。方法：灵巴菌质油25,50,100 mg·L^-1分别作用A549细胞20 d和24 h,通过软琼脂克隆形成法和PI单染法观察灵巴菌质油对A549细胞的成瘤能力和生长周期的影响;灵巴菌质油100 mg·L^-1作用A549细胞24 h,通过免疫荧光染色法观察细胞骨架的影响。结果：灵巴菌质油能够抑制细胞克隆的形成,低、中、高剂量组作用A549细胞20 d后的平均细胞克隆形成数与空白对照组比较均有极显著差异（P<0.01）,抑制率与药物浓度呈正相关,并将细胞的生长阻滞在G₂期,中、高剂量组G₂期细胞比例分别为21.92%和29.94%,与空白对照组12.44%相比均有显著性差异（P<0.05）;但灵巴菌质油能改变A549细胞中微丝结构的分布,使其产生伪足。结论：灵巴菌质油具有降低A549细胞克隆形成能力及损伤其细胞骨架的作用,但它亦可能导致瘤细胞的迁移。     

周氏克金岩方抗A549肺癌细胞多糖组分的研究

目的研究周氏克金岩方治疗肺癌的物质基础。方法用醇沉法提取周氏克金岩方多糖,采用Sevag法纯化,DEAE纤维素阴离子交换树脂制备多糖组分,紫外光谱检测蛋白存留情况,红外光谱分析组方药的归属,采用蒽酮-硫酸比色法测定多糖组分含量。结果该有效多糖组分在240nm和260nm处无吸收,其红外光谱图与组方药玉竹、猫爪草和仙鹤草的红外光谱图有很大的相似性,周氏克金岩方中该多糖组分含量为1．41％。结论抗A549肺癌细胞多糖组分不合蛋白和核酸,来源于组方药玉竹、猫爪草和仙鹤草,周氏克金岩方中含有一定量的多糖组分。     

参芪扶正注射液通过肿瘤相关巨噬细胞提高人乳腺癌MDA-MB-231细胞对顺铂的敏感性

目的:观察参芪扶正注射液通过免疫调节提高顺铂化疗的敏感性,并探讨其作用机制。方法:采用噻唑蓝(MTT)比色法测定参芪扶正注射液1,10,100 m L·L^-1对细胞的敏感性,流式细胞法检测细胞凋亡率,酶联免疫印迹法(Western blot)检测凋亡相关蛋白的表达,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测细胞因子表达水平。结果:参芪扶正注射液能显著抑制人乳腺癌细胞MDA-MB-231与THP-1共培养细胞生长,参芪扶正注射液10,100 m L·L^-1时,其细胞存活率分别为71.8%,59.9%;参芪扶正注射液10 m L·L^-1与顺铂联合运用,提高了共培养细胞对顺铂的敏感性,顺铂的半数抑制浓度(IC50)由30μmol·L^-1降低至15μmol·L^-1;联合运用参芪扶正注射液10 m L·L^-1和顺铂,比15μmol·L^-1顺铂诱导的细胞凋亡率增加了15.5%(P<0.05);联合用药均能明显抑制B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2),B细胞淋巴瘤-w(Bcl-w)和细胞外大淋巴瘤(Bcl-xl)的表达,增加Bcl-2相关X蛋白(Bax)和人BH3结构域凋亡诱导蛋白(Bid)的表达(P<0.05);参芪扶正注射液降低顺铂诱导的白细胞介素-10(IL^-10)和前列腺素E2(PGE2)的释放(P<0.05)。结论:参芪扶正注射液通过调节免疫细胞改善了乳腺癌细胞MDA-MB-231对顺铂的敏感性,起到协同抑制肿瘤细胞增殖的作用。该研究为益气扶正防治肿瘤提供实验依据,为中医药缓解肿瘤耐药研究提供实验参考。     

姜黄素对肺腺癌A549细胞增殖与凋亡的影响

目的：研究姜黄素对肺腺癌A549细胞增殖与凋亡的影响。方法：采用MTT法检测姜黄素对A549细胞存活率的影响。运用吖啶橙染色方法,观察细胞形态变化。利用TUNEL染色,检测DNA断裂情况。采用Western blot技术,检测P53蛋白表达变化。结果：姜黄素显著抑制A549细胞增殖。吖啶橙和TUNEL染色显示姜黄素可以诱导A549细胞凋亡。Western blot结果显示姜黄素提高了A549细胞中P53蛋白的表达。结论：姜黄素通过激活P53蛋白,抑制A549细胞增殖和诱导A549细胞凋亡。