吗啡和哌替啶对小鼠脑微血管内皮细胞P-糖蛋白表达的影响

目的 观察临床浓度的吗啡和哌替啶对小鼠脑微血管内皮细胞P-糖蛋白(P-gP)表达的影响,以及NF-κB信号通路在吗啡诱导P-gp表达中的作用.方法 采用小鼠脑微血管内皮细胞,以1μg/ml吗啡或哌替啶刺激24h,5μmol/L NF-κB抑制剂PDTC预先孵育1 h,然后收集细胞,行Western blotting分析P-gp表达.结果 1μg/ml吗啡处理24 h,可引起小鼠脑微血管内皮细胞P-gP表达上调,上调幅度约300%;但是同样剂量和作用时间的哌替啶不影响小鼠脑微血管内皮细胞P-gp表达.PDTC可抑制吗啡诱导小鼠脑微血管内皮细胞P-gp表达上调.结论 吗啡可诱导小鼠脑微血管内皮细胞内源性P-gp表达上调,NF-κB信号通路参与了吗啡诱导P-gp表达的调控过程.     

P-糖蛋白在大鼠脑缺血再灌注后的表达变化

目的 观察大鼠局灶性脑缺血90 min再灌注后p-糖蛋白(P-gp)在脑组织中的表达及其变化规律.方法 采用线栓法建立大鼠脑缺血再灌注模型,选取26只成年健康SD雄性大鼠,其中1只用于2,3,5--三苯基氯化四氮唑(TTC)染色,其余25只随机分为对照组(n=5)、假手术组(n=5)、脑缺血再灌注1、3、7d组(n=5).用免疫组织化学DAB单标,观察P-gp在正常脑组织和缺血脑组织中的分布变化;用Mdr-1抗体分别和神经元标记物(Neun)、星形胶质细胞标记物(GFAP)、微血管内皮细胞标记物(CD31)进行免疫荧光双标,观察P-gp在缺血再灌注后脑组织的表达;用实时定量PCR技术检测脑缺血再灌注后大脑皮质及纹状体微血管P-gp mRNA的表达变化.结果 对照组仅在脑组织微血管内皮细胞表达P-gp,缺血再灌注组除微血管内皮细胞表达P-gp外,在部分神经元及星形胶质细胞的突起也有表达.脑缺血再灌注后1d皮质P-gp mRNA表达降低,但3d表达明显增高,7d又下降,其升高和降低水平与对照组及假手术组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).脑缺血再灌注后1、3、7d纹状体P-gp mRNA表达均增多,其中以1、3d增多明显,与对照组和假手术组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 脑缺血再灌注后P-gp在大脑皮层及纹状体微血管P-gp的表达呈现不同的趋势,这可能是脑组织的自我保护机制之一.     

高迁移率族蛋白1对小鼠脑微血管内皮细胞P-糖蛋白表达的影响

目的癫痫脑内可大量释放高迁移率族蛋白1(high mobility group box protein 1,HMGB1),但针对HMGB1与癫痫脑内血管内皮细胞过表达的耐药蛋白P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)关系的研究甚少。文中探讨HMGB1对体外培养的小鼠脑微血管内皮细胞P-gp表达的影响。方法体外培养永生化小鼠脑微血管内皮细胞株b End.3,分为不同浓度HMGB1组(10、100、500、1000 ng/m L HMGB1处理b End.3细胞8 h);不同时间HMGB1处理组(以100 ng/m L HMGB1处理b End.3细胞4、8、16、24、32 h);对照组(给予等量正常培养基)。采用实时定量PCR检测b End.3细胞中P-gp编码基因多药耐药基因1a(mdr1a)mRNA表达水平,免疫印迹法、免疫细胞化学法检测P-gp蛋白表达水平。结果 q PCR结果显示:10、100、500、1000ng/m L HMGB1组mdr1a mRNA表达量分别为1.646±0.176、1.777±0.135、1.617±0.043和1.398±0.182,较对照组(1.030±0.284)明显升高(P<0.05)。HMGB1处理4、8、16、24、32 h组mdr1a mRNA表达量分别为2.655±0.112、2.168±0.212、1.823±0.232、1.418±0.376和1.445±0.123,较对照组(1.010±0.164)明显升高(P<0.05)。免疫印迹法结果显示:与对照组比较,各浓度组P-gp蛋白表达水平均增高(P<0.05),HMGB1处理8、16 h组P-gp蛋白表达增高(P<0.05)。免疫细胞化学染色结果显示:100 ng/m L HMGB1处理16 h后P-gp蛋白表达灰度值(110.843±4.036)较对照组(160.303±2.193)明显减少(P<0.01)。结论 HMGB1能够上调小鼠脑微血管内皮细胞耐药蛋白P-gp和其编码基因mdr1a表达,可能与中枢神经系统疾病尤其是癫痫的耐药相关。     

阿尔兹海默病（AD）小鼠脑内P-糖蛋白(P-gp)的表达与功能分析

 目的  研究P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)在APP/PS1双转基因阿尔兹海默病(Alzheimer′s disease,AD)模型小鼠脑中的表达与功能情况。方法   采用RT-PCR、real-time PCR和Western blot方法分析不同月龄的AD小鼠和野生型(wild type,WT)小鼠脑中P-gp表达的差异;采用尾静脉注射罗丹明123 (Rhodamine 123,Rh123),HPLC检测脑及血清中Rh123的含量,计算脑血分配系数,分析不同月龄的AD小鼠和WT小鼠脑中P-gp功能的差异。结果   3月龄时,AD小鼠脑内P-gp的表达与功能均明显低于WT小鼠;6月龄时,AD小鼠与WT小鼠无明显差异;9月龄时,AD小鼠脑内P-gp的表达与功能均明显高于WT小鼠;12月龄时,AD小鼠脑内P-gp的表达高于WT小鼠,功能却低于WT小鼠。结论  AD小鼠脑内P-gp的表达与功能与WT小鼠明显不同,并随月龄而变化。     

TNF-α影响P-糖蛋白和利培酮吸收的相关信号通路研究

[目的]探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对脑毛细血管内皮细胞P-糖蛋白(P-gp)和利培酮吸收的影响机制.[方法]以小鼠脑毛细血管内皮细胞株bEnd.3作为研究对象,细胞孵育重组TNF-α,然后进行western blot检测c-jun氨基端激酶(JNK)磷酸化水平.另外,bEnd.3细胞以SP600125预处理1 h,并设DMSO对照组,两组孵育TNF-α,以western blot检测P-gp表达水平.bEnd.3细胞孵育TNF-α 24 h,并设对照组,然后加入利培酮(2 μg/L)再孵育24 h,最后吸取细胞培养基上清,以高效液相色谱-质谱联用法(HPLC-MS)测定利培酮浓度.[结果]TNF-α能激活bEnd.3细胞JNK磷酸化.TNF-α能上调P-gp的表达,但SP600125降低TNF-α这一效应,差异具有统计学意义.TNF-α能增加利培酮在bEnd.3细胞培养基上清的浓度(μg/L,1.17±0.18 vs 0.86±0.17,P=0.010).[结论]JNK信号通路参与TNF-α上调P-gp的表达过程,TNF-α能抑制脑毛细血管内皮细胞吸收利培酮.     

双氢青蒿素对白血病多药耐药K562/ADM细胞的逆转作用

目的:探讨双氢青蒿素(Dihydroartemisinin,DHA)在白血病多药耐药中的应用。方法:采用MTT检测DHA联合阿霉素(adriamycin,ADM)对白血病多药耐药细胞(K562/ADM)生长增殖的影响;应用流式细胞技术分析细胞内罗丹明123(Rhodamine 123)浓度,以检测DHA对白血病细胞膜P糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)泵功能的影响;免疫组化方法检测DHA对白血病细胞P-gp表达水平的影响。结果:10、20、40μmol/L DHA实验组的细胞耐药逆转倍数分别为1.46、2.16和3.52倍。DHA使用前、后K562/ADM细胞膜P-gp表达水平无明显差异;Rh123蓄积试验中DHA应用后使K562/ADM细胞内Rh123浓度由用前的22.16%升至89.18%,Rh123外排试验中DHA应用后使K562/ADM细胞内Rh123浓度由用前的27.15%升至60.51%。结论:DHA:能有效逆转白血病细胞的MDR机制为通过抑制肿瘤细胞膜上P-gp的药泵功能,增加耐药细胞内化疗药物浓度逆转耐药性,而不是抑制和P-gp表达。     

功劳木组分F_6逆转白血病MDR的作用和机制

目的:背景与目的从中药功劳木中提取、分离出来的异喹啉类生物碱组分(Fraction 6,F6),具有抗病毒、抗炎、降血压等生理活性。近年有文献报道异喹啉类生物碱具有一定的逆转肿瘤细胞耐药的作用。本文以白血病多药耐药细胞(K562/ADM)为对象来研究F6逆转肿瘤多药耐药性(Mu ltidrug resistance,MDR)的效果及作用机制,以寻找具有多药耐药逆转活性的新型中药。方法:采用MTT法检测F6及阿霉素(Adriamyc in,ADM)对K562/S和K562/ADM细胞增殖的抑制作用;RT-PCR法检测F6对耐药肿瘤细胞MDR1基因mRNA表达的影响;流式细胞仪分析细胞内罗丹明123(Rhodam ine123,Rh123)浓度,以检测F6对肿瘤细胞膜P糖蛋白(P-glycoprote in,P-gp)泵功能的影响;免疫组化方法检测F6对肿瘤细胞膜P-gp表达水平的影响;流式细胞仪检测F6对肿瘤细胞凋亡的作用。结果:10 mg/L为F6的无毒剂量;ADM对K562/S和K562/ADM细胞的IC50分别为(1.68±0.08)mg/L和(80.25±1.06)mg/L;无毒剂量F6与ADM联合应用后对K562/S和K562/ADM细胞的IC50分别为(1.09±0.07)mg/L和(16.68±0.72)mg/L,此剂量F6使K562/ADM细胞的IC50下降4.81倍;无毒剂量的F6应用前后,K562/ADM细胞MDR1基因表达水平和细胞膜P-gp表达水平无明显差异;Rh123蓄积试验中无毒剂量的F6应用后使K562/ADM细胞内Rh123浓度由F6应用前的29.21%升高到85.35%,Rh123外排试验中无毒剂量的F6应用后使K562/ADM细胞内Rh123浓度由F6应用前的27.19%升高到59.22%;凋亡检测结果显示无毒剂量的F6使K562/ADM细胞凋亡率升高3.82倍。结论:F6能有效逆转白血病细胞的MDR;F6逆转白血病MDR的机制为通过抑制肿瘤细胞膜上P-gp的药泵功能,增加耐药细胞内化疗药物浓度逆转耐药性,而不是抑制MDR1基因和P-gp表达。     

石菖蒲及其有效成分α-细辛醚对癫痫幼鼠海马区神经元N-甲基-D-天冬氨酸受体表达的影响

目的探讨在戊四氮(PTZ)诱发的癫痫动物模型中,石菖蒲及其主要成分α-细辛醚对海马区神经元N-甲基-D-天冬氨酸受体1(NMDAR1) mRNA表达水平的影响。方法3周龄Wistar幼鼠ipPTZ60mg/kg建立癫痫模型。动物模型随机分为模型对照组、石菖蒲组、α-细辛醚组,另设正常对照组。各组均ig给药。正常对照组给予生理盐水1.0mL/d,其余各组分别给予石菖蒲2350mg/(kg·d),α-细辛醚29mg/(kg·d),连续7d。次日ipPTZ60mg/kg,观察动物行为变化,1d后处死动物,取左侧大脑固定用于原位杂交;取右侧海马组织用于半定量RT-PCR,检测海马CA1、CA3区神经元NMDRA1 mRNA的表达情况。结果原位杂交结果显示,阳性染色颗粒定位于海马神经元胞质内。石菖蒲和α-细辛醚治疗组海马区神经元阳性细胞数和平均吸光度均明显少于模型对照组(P<0.05)。半定量RT-PCR结果显示,石菖蒲和α-细辛醚治疗组海马组织中NMDAR1 mRNA的相对表达量均较显著低于模型对照组(P<0.05)。结论石菖蒲和α-细辛醚可能通过抑制海马区神经元谷氨酸NMDAR1表达而发挥抑制PTZ诱发的幼鼠癫痫发作。     

中药尿酸利仙含药血清对TNF-a诱导的人血管内皮细胞VCAM-1mRNA表达的影响

目的:观察中药尿酸利仙(含药血清)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的人血管内皮细胞(ECV)血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)mRNA表达的影响。方法:①体外培养人血管内皮细胞,分别用不同浓度(12.5、25、50μg/ml)的TNF-α刺激;②体外培养人血管内皮细胞,培养液中加入TNF-α至终浓度为25μg/ml,分别孵育细胞8、16、24、48小时。③用25μg/ml的TNF-α孵育细胞16小时,同时用含不同浓度(2.5%、5%、10%)中药尿酸利仙含药血清的培养液进行干预,用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术测定血管内皮细胞VCAM-1mRNA表达。结果:低、中、高浓度TNF-α刺激均可显著上调血管内皮细胞VCAM-1mRNA表达(P0.01),各刺激组间差异无统计学意义(P0.05)。25μg/ml的TNF-α在16、24和48小时均可显著上调血管内皮细胞VCAM-1mRNA表达(P0.01),各干预组间差异无统计学意义(P0.05)。低、中、高浓度的中药尿酸利仙含药血清干预均可显著降低VCAM-1mRNA表达(P0.05,P0.01)。结论:中药尿酸利仙含药血清可抑制VCAM-1mRNA过度表达,可能是减轻TNF-α诱导的人血管内皮细胞炎症损伤及抑制炎症反应的机制之一。     

TNF-a影响P-糖蛋白和利培酮吸收的相关信号通路研究

探讨肿瘤坏死因子a琢(TNF-a)对脑毛细血管内皮细胞P-糖蛋白(P-gp)和利培酮吸收的影响机制;【方法】 以小鼠脑毛细血管内皮细胞株bEnd.3作为研究对象,细胞孵育重组TNF-a,然后进行western blot检测c-jun氨基端激酶(JNK)磷酸化水平;另外,bEnd.3细胞以SP600125预处理1 h,并设DMSO对照组,两组孵育TNF-a,以western blot检测P-gp表达水平;bEnd.3细胞孵育TNF-a24 h,并设对照组,然后加入利培酮(2 μg/L)再孵育24 h,最后吸取细胞培养基上清,以高效液相色谱-质谱联用法(HPLC-MS)测定利培酮浓度;【结果】 TNF-a能激活 bEnd.3细胞JNK磷酸化;TNF-a能上调P-gp的表达,但SP600125降低TNF-a这一效应,差异具有统计学意义;TNF-a能增加利培酮在bEnd.3细胞培养基上清的浓度(μg/L,1.17 ± 0.18 vs 0.86 ± 0.17, P = 0.010)&#65377;【结论】 JNK信号通路参与TNF-a上调P-gp的表达过程,TNF-a能抑制脑毛细血管内皮细胞吸收利培酮;     

IL-10对TNF-α诱导的泡沫细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1表达的抑制作用

目的:观察白介素-10(IL-10)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)表达的干预作用.方法:THP-1单核细胞经诱导转化为巨噬细胞源性泡沫细胞后随机分为4组:对照组,培养液中不加任何其他物质;TNF-α组,培养液中加10μg/L TNF-α;IL-10组,培养液中加10μg/L IL-10;IL-10 TNF-α组,培养液中加10μg/L IL-10预先孵育2 h后,再加10μg/L TNF-α.采用RT-PCR和Western-Blot检测各组0 h、6 h、12 h、24 h、48 h ABCA1 mRNA和蛋白表达.结果:TNF-α组ABCA1 mRNA和蛋白表达呈时间依赖性降低(F=782.94,F=768.12,P均＜0.05).IL-10组ABCA1 mRNA表达在24 h和48 h有轻微增加(P＜0.05),但ABCA1蛋白表达在各时间点无明显变化.IL-10 TNF-α组ABCA1 mRNA和蛋白表达也呈时间依赖性降低(F=697.23,F=749.64,P均＜0.05),但同TNF-α组相比,其下降程度有所减轻(P＜0.05).结论:IL-10可部分抑制TNF-α所引起THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1表达的下调.     

靶向mdr1b/mdr1a基因siRNA逆转T24/ADM多药耐药性研究

目的:研究mdr1b/a基因siRNA(small interfering RNA)逆转膀胱癌的多药耐药性。方法:设计mdr1b/a基因的siRNA,转染膀胱癌T24/ADM细胞,用RT-PCR分析mRNA的表达,Rh123分析P-gp活性,流式细胞仪检测细胞内阿霉素积累量。结果:siRNA能明显地逆转T24/ADM细胞的多药耐药,使mdr1b/a基因的mRNA表达水平下调,细胞内阿霉素积累量显著增加(P<0.05)。结论:mdr1b/a基因siRNA能够逆转膀胱癌的多药耐药性。     

高效液相色谱法测定通塞益脑口服液中α-细辛醚和β-细辛醚的含量

目的：建立通塞益脑口服液中α-细辛醚和β-细辛醚的含量测定方法,为生产质量提供保障。方法采用高效液相色谱法测定,色谱柱为Lichrospher-C18柱（250 mm×4.6 mm,5μm）,流动相为甲醇-0.05%磷酸溶液（54：46）,流速为1.0 mL/min,柱温为30℃,检测波长为257 nm。结果α-细辛醚在1.248~6.240μg/mL范围内有良好的线性关系,Y =85526X-1.0581（r=0.9999）,β-细辛醚在2.632~13.159 mg/mL范围内有良好的线性关系,Y =41727X-0.0433（r=0.9999）,平均回收率分别为99.07%、101.94%,RSD分别为2.15%、2.83%（n=6）。结论该方法准确易行,便于通塞盖脑口服液的质量控制。     

罗格列酮对Hep-2细胞核因子-κB和血管内皮生长因子mRNA表达的影响

目的:通过检测罗格列酮(ROS)作用前后人喉癌Hep-2细胞核因子(NF-κB)和血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达的变化情况,探讨其抑制Hep-2增殖的机制.方法:采用MTT法检测12.5、25.0、50.0和100.0μmol/L ROS处理12、24、36、48、60和72h后Hep-2细胞的增殖抑制率.RT-PCR方法检测50 μmol/L的ROS处理0、24、48和72h后Hep-2细胞NF-κB和VEGF mRNA表达的变化.结果:ROS对Hep-2细胞的生长具有增殖抑制作用,其作用表现为剂量依赖性(12、24、36、48、60和72h各浓度组相比,F为117.584、98.241、92.352、117.228、148.458和124.900,P均<0.001)和时间依赖性(12.5、25.0、50.0和100.0 μmol/L各时间组相比,F为140.949、123.335、148.325和176.590,P均<0.001).RT-PCR检测结果显示50 μmoL/L的ROS处理Hep-2细胞0、24、48和72 h后,NF-κB相对表达量分别为(0.854 ±0.066)、(0.653 ±0.059)、(0.489 ±0.027)和(0.336 ±0.031),差异有统计学意义(F=111.357,P<0.001);VEGF相对表达量分别为(0.756 ±0.057)、(0.628 ±0.039)、(0.482 ±0.044)和(0.318 ±0.035).差异有统计学意义(F=89.796,P<0.001).结论:ROS具有抑制Hep-2细胞增殖的作用,其机制与下调NF-κB和VEGF mRNA表达有关.     

黄芪多糖对Caco-2细胞P-gp功能、表达的影响

目的观察黄芪多糖(APS)对Caco-2细胞P糖蛋白(P-gp)功能、表达的影响。方法采用MTT法考察药物对细胞的毒性,确定药物最大无毒浓度;流式细胞仪测定Caco-2细胞P-gp底物罗丹明-123(Rh-123)和抗体的荧光强度,评价APS对P-gp功能和表达的影响;建立Caco-2细胞单层模型,观察APS对Rh-123跨膜转运的影响。结果细胞毒性实验结果显示,APS在0.1~100μg/m L浓度范围内对Caco-2细胞无明显毒性,细胞存活率90%;不同浓度的APS作用后,增加细胞内Rh-123的蓄积,对P-gp功能表现为抑制作用;中、高浓度50、100μg/m L的APS对P-gp表达有抑制作用[(26.72±2.43)、(23.97±2.08)比(30.10±1.28),P0.05],其表达量分别降低11.23%和16.41%;高浓度APS 100μg/m L明显抑制Rh-123的双向跨膜转运,对P-gp有抑制作用。结论黄芪多糖(APS)对P-gp的功能和表达有一定的抑制作用,且在高浓度尤为明显,能显著增加Rh-123在Caco-2细胞内的蓄积,并抑制其双向跨膜转运。     

人脑胶质瘤组织P-糖蛋白的表达及其与长春新碱的药物敏感性的关系

目的 探讨细胞膜P-糖蛋白(P-gp)在人脑胶质瘤组织中的表达及原代胶质瘤细胞P-gp蛋白阳性表达与长春新碱(VCR)的敏感性的相关性.方法 采用免疫组化方法检测37例人脑胶质瘤P-gp蛋白的表达;人脑胶质瘤细胞原代培养,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测VCR药物的敏感性.结果 37例脑胶质瘤P-gp阳性表达率为54.1%(20/37),P-gp在Ⅱ～Ⅳ级脑胶质瘤的阳性表达率分别为39.4%、66.7%和87.5%.不同病理级别的胶质瘤患者P-gp阳性表达率间差异有统计学意义(χ2=8.529,P＜0.05),病理级别与P-gp的表达强度呈正相关(r=0.479,P＜0.05).P-gp阳性表达与胶质瘤细胞对VCR的耐药有相关性(r=0.429,P＜0.05).结论 P-gp的表达与脑胶质瘤恶性程度及其对VCR的耐药性相关,检测P-gp的表达及其对VCR的敏感有助于指导脑胶质瘤的个体化治疗.     

HIF-1αsiRNA重组腺病毒对缺氧肺微血管内皮细胞HIF-1α和ET-1表达的影响

目的研究缺氧诱导因子-1αsiRNA重组腺病毒(Ad/siHIF-1α)对缺氧肺微血管内皮细胞(RPMVECs)HIF-1α及其下游基因ET-1表达的影响。方法原代培养肺微血管内皮细胞(RPMVECs);应用HEK293细胞大量扩增Ad/siHIF-1α。将RPMVECs分6组:A组(正常对照:常氧下5%CO2、95%空气、37℃培养);B组(含100μmol/L COCl2培养基培养4h);C组(Ad/siHIF-1α感染24h后,加入COCl2培养4h);D组(Ad/siHIF-1α感染48h后,加入COCl2培养4h);E组(Ad/siHIF-1α感染72h后,加入COCl2继续培养4h);F组(单纯腺病毒感染72h后,加入COCl2培养4h)。采用荧光定量PCR法检测HIF-1α和ET-1mRNA表达;Western blotting法检测HIF-1α蛋白表达;ELISA法检测ET-1蛋白表达。结果与B组比较,C、D及E组HIF-1αmRNA、HIF-1α蛋白表达显著下调,差异有显著性(均P<0.05);与B组比较,C、D及E组ET-1mRNA、ET-1蛋白也相应下调,差异有显著性(均P<0.05)。...     

Src酪氨酸激酶抑制剂逆转人胃癌顺铂耐药细胞SGC7901/DDP的作用及机制

目的探讨Src酪氨酸激酶抑制剂逆转人胃癌顺铂耐药细胞SGC7901/DDP的作用及机制。方法以Src酪氨酸激酶抑制剂逆转前后的人胃癌顺铂耐药细胞SGC7901/DDP为研究对象,应用Western blot观察细胞内p-Src表达的变化,MTS法检测细胞的药物敏感性,流式细胞仪检测细胞Rh123外排及P-gp表达的水平。结果 Src酪氨酸激酶抑制剂可下调SGC7901/DDP细胞中p-Src表达,在5μmol/L及10μmol/L Src酪氨酸激酶抑制剂作用下,SGC7901/DDP细胞对顺铂的药物敏感性分别提高了1.52倍和3.96倍,细胞中Rh123含量分别提高了1.24倍和2.64倍,P-gp表达水平分别降低了65.8%和47.4%。结论 Src酪氨酸激酶抑制剂可逆转SGC7901/DDP细胞多药耐药性,其耐药表型的逆转可能与降低细胞Rh123外排及P-gp表达水平有关。     

石菖蒲有效部位中α-细辛醚、β-细辛醚的含量测定

目的建立石菖蒲有效部位中α-细辛醚、β-细辛醚的含量测定方法。方法HPLC法:采用翡纳米科技kromasil ODS C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μL),流动相为甲醇-水(56:44),流速: 1.0 mL／min,检测波长:257 nm。结果β-细辛醚平均回收率为98.57％,RSD=0.35％;α-细辛醚平均回收率为99.75％,RSD=1.30％。结论所建立的方法简便、准确,可作为石菖蒲有效部位的质量控制方法。     

PTEN反义寡核苷酸对EC9706细胞增殖、凋亡和PTEN、mTOR表达的影响

目的:探讨PTEN反义寡核苷酸(ASODN)对食管癌EC9706细胞增殖、凋亡和PTEN、mTOR表达的影响.方法:利用阳离子脂质体介导PTEN的ASODN和无义寡核苷酸(N-ODN)转染食管癌EC9706细胞,终浓度为3、6和12μmol/L的ASODN为实验组,终浓度12 μmol/L的N-ODN为N-ODN对照组,不进行转染的为空白对照组.运用MTT法、TUNEL检测空白对照组、N-ODN对照组及3种浓度的ASODN作用24、48及72 h后食管癌EC9706细胞增殖和凋亡情况;采用免疫细胞化学技术及原位杂交方法检测各组EC9706细胞中PTEN蛋白、mTOR蛋白和mRNA的表达.结果:①随PTEN ASODN转染浓度(F3μmol/L=784.774,F6μmol/L=242.884,F12μmol/L=412.105,P均＜0.001)和时间(F24 h=60.676,F48 b=57.703,F72 h=51.841,P＜0.001)的增加,食管癌EC9706细胞的增殖增强.②随PTEN ASODN转染浓度(F3μmol/L=36.655,F6μ=mol/L47.594,F12μmol/L=85.264,P均＜0.001)和时间(F24h=4.860,F48 h=4.901,F72 h=8.153,P＜0.001)的增加,食管癌EC9706细胞的凋亡下降.③随PTENASODN转染浓度(F3μmol/L=45.634,F6μmol/L=66.399,F12μmol/L=72.763,P均＜0.001)和时间(F24h=4.065,F48 h=3.985,F72 h=5.446,P＜0.001)的增加,PTEN的蛋白表达降低;mRNA的表达也降低(F3μmol/L=23.357,F6μmol/L=43.272,F12μmol/L=51.402,P均＜0.001;F24h=3.933,F48 h=4.084,F72 h:4.528,P＜0.001).④mTOR蛋白(F3μmol/L=19.422,F6 μmol/L=30.000,F12 μmol/L=62.168,P＜0.001;F24 h=5.340,F48 h=9.150,F72 h=21.056,P＜0.001)和mRNA(F3μmol/L=19.414,F6 μmol/L=46.571,F12μmol/L=68.634,P＜0.001;F24 h=4.815,F48 h=12.165,F72 h=7.858,P＜0.001)的表达随PTEN ASODN转染浓度和时问的增加而增强.⑤上述各指标中均以12 μmol/LASODN作用72 h的效应最强(P均＜0.05).结论:PTEN ASODN促进食管癌EC9706细胞增殖、抑制凋亡,下调PTEN蛋白和mRNA的表达,上调mTOR蛋白和mRNA的表达.