动脉粥样硬化血管平滑肌细胞凋亡相关因素研究进展

<正>细胞凋亡是不同于细胞坏死的一种死亡形式,是受基因控制的细胞主动性“自杀”过程.它的主要特征是,内源性核酸内切酶被激活,导致DNA在核小体间断裂,同时发生了基因的转录和蛋白质合成.射线、化学药物等刺激因素都可激发细胞凋亡.细胞凋亡在胚胎发育、造血、免疫系统成熟以及维持正常组织和器官的细胞数目恒定与生长平衡,乃至机体衰老诸方面均起着重要作用.而动脉粥样硬化(Atherosclerosis,As)中也发现了细胞凋亡,且以血管平滑肌细胞(Vascular SmoothMuscle Cell.VSMC)和巨噬细胞为主,血管壁中膜层的平滑肌细胞(Smooth Muscle Cell.SMC)向内膜迁移及过度增殖是AS和再狭窄共同的病理特征.增殖了的VSMC,有些摄取脂质,转变为泡沫细胞,有些合成胶原等细胞外间质,参与AS损伤向脂质损伤、纤维斑块的转变.阻止或减弱平滑肌细胞过度增殖一直是人们设法解决的难题.近年来,随着有关细胞凋亡的研究在基础和临床领域的广泛展开,也促进了As中细胞凋亡的研究.同时,使得对As病理发展有了新认识.As     

CD73对动脉粥样硬化中血管平滑肌细胞的作用

 目的  探讨CD73对血管平滑肌细胞单核细胞趋化蛋白-1(moncyte chemoattractant protein-1,MCP-1)、IL-8和基质金属蛋白酶-1(matrix metalloproteinase-1,MMP-1)表达及迁移能力的影响,并分析其与动脉粥样硬化发生发展的关系。方法  原代培养人脐带动脉平滑肌细胞 (human umbilical artery smooth muscle cells,HUASMC),利用RNA干扰技术抑制细胞中CD73的表达,以未转染组和阴性转染组为对照。实时荧光定量PCR和ELISA方法检测细胞表达及分泌MCP-1和IL-8 的水平。实时荧光定量PCR和Western blot方法检测细胞表达MMP-1的情况。利用划痕实验观察CD73干扰对细胞迁移能力的影响。结果  成功培养原代HUASMC,并且CD73 siRNA转染可显著降低细胞内CD73表达水平。干扰HUASMC的CD73表达后,细胞表达和分泌MCP-1及IL-8的能力升高,细胞内MMP-1的表达升高,而细胞的迁移能力下降。结论  干扰CD73表达可以使HUASMC的MCP-1、IL-8及MMP-1表达升高;干扰CD73表达可降低HUASMC的迁移,提示CD73在动脉粥样硬化的发生发展过程中发挥重要的生物学作用。     

血管平滑肌细胞凋亡对动脉粥样硬化作用的研究进展

血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)是血管壁中的主要细胞类型,其凋亡参与了动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的发生和发展.在早期AS中,VSMCs凋亡可作为新生内膜增生和管腔狭窄的代偿机制,然而这一过程又会加速AS斑块破裂,造成严重的心血管疾病并发症....     

维生素E对内皮细胞诱发血管平滑肌细胞凋亡的抑制作用

目的：研究维生素E对脂质过氧化损伤的内皮细胞（EC）诱发的血管平滑肌细胞（VSMC）凋亡是否具有抑制作用。方法：以氢过氧化枯烯为诱发剂引发培养的血管EC的脂质过氧化反应,将制备的内皮细胞条件培养液（EC－CM）作为实验因素作用于培养的VSMC。彩和透射电子显微镜,免疫组织化学等方法观察维生素E对内皮细胞条件培养液诱发的血管平滑肌细胞凋亡的影响。结果：电镜可见VSMC凋亡小体。免疫组织化学结果显示,VSMC的P53蛋白表达增加,bcl-2蛋白表达下调。加维生素E组电镜改变轻微,p53,bcl-2异常表达减轻,结果：维生素E对脂质过氧化损伤的内皮细胞诱发的血管平滑肌细胞凋亡具有抑制作用。,     

核因子E2相关因子2在2型糖尿病及其并发症中的作用

高患病率及逐渐增加的发病率使糖尿病及其并发症已经成为全球性健康问题。慢性高血糖是其主要特点,是引起大血管及微血管并发症的根源。高血糖引起的活性氧和活性氮的过度生成导致的氧化应激,是糖尿病并发症的关键因素。在氧化应激相关疾病中核因子E2相关因子2是抗氧化反应的一个关键转录因子,通过表达抗氧化酶及Ⅱ相解毒酶可能会阻止糖尿病及其并发症的发生与发展。     

核因子E2相关因子2抗氧化反应元件通路在血管中的表达

核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)信号通路由转录因子Nrf2、调控蛋白Keap1以及抗氧化反应元件(antioxidant response element,ARE)组成,调节ARE下游包括氧化还原蛋白、二相解毒酶、转运蛋白等超过200种基因的表达,是介导抗氧化反应的关键信号途径。近年来,研究发现Nrf2通路有血管保护作用,文中就其在血管中的表达及意义进行综述。     

动脉粥样硬化与巨噬细胞和血管平滑肌细胞相关因素研究述评

在动脉粥样硬化（AS）的形成过程中，由内皮细胞、巨噬细胞、血管平滑肌细胞及其相关细胞因子构成的复杂的网络中，单核细胞摄入脂质形成泡沫细胞是AS的始动因素，而血管平滑肌细胞增生是动脉粥样硬化的关键。在此，就这两个系统与动脉粥样硬化的关系作一综述。     

核因子E2相关因子2通路在间质性膀胱炎中的研究进展

间质性膀胱炎是一种慢性非特异性膀胱炎症疾病,其典型的临床表现为顽固性尿频、尿急和盆腔疼痛,严重影响患者的生活质量,且临床上尚无长期有效的干预治疗措施.该病病因不明,机制不清,近年来大量研究提示,氧化应激反应和炎性介质在该疾病发生、发展过程中的重要性,其中核因子E2相关因子2通路发挥关键作用.现将该信号通路在间质性膀胱炎...     

核转录因子-κB在动脉粥样硬化大鼠动脉平滑肌细胞中的表达

目的探讨核转录因子-κB(NF-κB)在动脉粥样硬化(AS)大鼠动脉平滑肌细胞(SMC)中的表达及AS的发生机制。方法SD雄性大鼠20只随机分为对照组和高脂饮食组,每组10只。对照组用普通饲料喂养,高脂饮食组用高脂饲料喂养。2个月后心脏采血处死大鼠,取胸主动脉,常规固定,包埋,切片。采用免疫组织化学检测各组平滑肌细胞NF-κB p65的表达情况。结果对照组胸主动脉内膜光滑,内皮细胞排列整齐。高脂饮食组动脉内膜脂质浸润,粗糙,隆起,有泡沫细胞形成,细胞排列紊乱。NF-κB p65在对照组动脉SMC呈弱阳性表达,在高脂饮食组SMC胞浆和胞核中有棕褐色颗粒,呈强阳性表达。NF-κB p65在高脂饮食组表达的平均灰度值(86.30±17.29)显著低于对照组(152.36±28.12)(P<0.01)。结论NF-κB参与了AS的发生、发展,高脂血症可能通过诱导血管壁SMC中NF-κB的表达引起AS的发生。     

动脉粥样硬化过程中核因子 E2相关因子 2对血管平滑肌细胞的调控作用

动脉粥样硬化是心血管疾病中常见的病理改变。血管平滑肌细胞是斑块细胞和细胞外基质的主要来源，而核因子E2相关因子2（Nrf2）是调控血管平滑肌细胞功能的关键转录因子。在动脉粥样硬化过程中，Nrf2信号通路对血管平滑肌细胞具有以下调控作用：调控血管平滑肌细胞表型向有利于缓解疾病进程的方向转变，抑制血管平滑肌细胞增殖和迁移，降低血脂水平，以及缓解血管平滑肌细胞钙化、衰老和凋亡等过程。本文对现阶段Nrf2在动脉粥样硬化中调控血管平滑肌细胞表型转换、增殖和迁移、脂代谢、钙化、衰老和凋亡等过程的具体机制进行综述，以期为深入理解动脉粥样硬化发生发展的分子机制及寻找治疗靶点提供依据。     

流体切应力对大鼠血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的探讨流体切应力（SS）对体外培养的血管平滑肌细胞（VSMC）形态学影响。方法运用倒置相差显微镜和免疫组化ABC方法对VSMC进行鉴定，采用荧光显微镜和TuNEL—AP方法观察其变化。结果组织块贴壁法培养的VSMC呈典型的长梭形，α—actin染色显示95％以上VSMC呈阳性；SS强度分别为1．041、4．767和10．389dyne／cm^2冲击VSMC12h其凋亡百分率分别为（1．56±0．28）％、（1、95±0．23）％和（2、62±0．49）％，而对照组分别为（0、61±0．12）％、（0．55±0．16）％和（0、64±0．24）％，两组比较差异有统计学意义（P〈0.01），随着冲击时间的延长凋亡细胞有进一步增多的趋势。结论VSMC大量凋亡可由SS所诱导，颅内动脉瘤组织内VSMC过度凋亡可能与局部升高的SS密切相关。     

葛根素对凝血酶诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响

目的观察葛根素对凝血酶诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响,对原癌基因c-fos和bc l-2蛋白质以及凝血酶受体(TR)mRNA表达的作用。方法以细胞计数法,流式细胞仪测定DNA含量,细胞周期分析法观察凝血酶及葛根素对VSMC增殖和DNA合成的影响。在凝血酶及葛根素作用24 h后,用W estern印迹法检测c-fos和bc l-2蛋白表达,以半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测TR mRNA的表达。结果凝血酶对VSMC有明显促增殖作用,促增殖效应在24 h末达峰值(细胞计数凝血酶组8.64×104/m l±0.12×104/m l,对照组4.20×104/m l±0.11×104/m l,P<0.05),且凝血酶浓度在0.1~1.0 U/L之间呈剂量依赖关系;葛根素呈剂量依赖性地抑制凝血酶诱导的细胞增殖、DNA合成以及VSMC c-fos和bc l-2蛋白的表达(葛根素浓度为1.5×10-3mol/L时,抑制率分别为42.6%±5.2%、58.2%±7.9%、44.5%±7.5%和39.6%±6.4%,均P<0.05);高浓度(1.5×10-3mol/L)的葛根素可显著抑制凝血酶诱导的TR mRNA上调(抑制率为17.6%±1.7%,P<0.05)。结论葛根素能抑制凝血酶诱导的VSMC增殖,这可能与其抑制c-fos和bc l-2蛋白有关,并部分与其抑制TR mRNA表达有关。     

INK4基因座中反义非编码RNA调控细胞增殖与凋亡影响动脉粥样硬化的研究进展

动脉粥样硬化是冠心病的重要病理基础,INK4基因座中反义非编码RNA（ANRIL）位于与其相关性最强的遗传易感区段,即9号染色体短臂2区1带（Chr9p21）。ANRIL通过不同的转录剪接方式可产生线性、环状等多种转录本,可调控斑块内相关细胞的增殖和凋亡,与动脉粥样硬化斑块发生发展密切相关。线性ARNIL可通过调节染色质修饰过程调控斑块内血管平滑肌细胞增殖,也可从转录水平调控斑块内巨噬细胞增殖和凋亡;环状ANRIL可调控染色质修饰及干预核糖体RNA加工成熟,进而影响平滑肌细胞的增殖和凋亡。本文对ANRIL的进化特征、转录本的形成及结构、各转录本调节血管细胞增殖和凋亡进而参与动脉粥样硬化的机制进行了系统阐述,以期为深入理解动脉粥样硬化的发病机制,寻找动脉粥样硬化诊治靶点提供依据。     

葛根素对过氧化氢诱导平滑肌细胞凋亡的保护作用

目的探讨葛根素对过氧化氢(双氧水)H2O2诱导大鼠胸主动脉平滑肌细胞凋亡保护作用的机制。方法在过氧化氢(双氧水)H2O2诱导大鼠胸主动脉平滑肌细胞凋亡模型的基础上,以噻唑兰(MTT)法测定细胞存活率;用流式细胞术和Hoechst33258荧光染色法观察细胞受损和凋亡;用DNA琼脂糖凝胶电泳法观察细胞凋亡过程中DNA断裂程度;用免疫细胞组织化学染色法检测细胞内Caspase-3的表达。结果过氧化氢(双氧水)H2O2诱导无血清培养的平滑肌细胞凋亡,葛根素可显著降低平滑肌细胞的凋亡,减少凋亡细胞DNA断裂,平滑肌细胞坏死减少,对Caspase-3的表达有明显抑制作用。结论葛根素对过氧化氢(双氧水)H2O2诱导血管平滑肌细胞凋亡有保护作用,其机制可能与抑制Caspase-3有关。     

加味桃核承气汤对糖尿病VSMC细胞周期及细胞凋亡影响的实验研究

目的探讨不同配伍组方加味桃核承气汤大鼠含药血清对胰岛素（Regular nsulin,RI）诱导兔血管平滑肌细胞（Vascular mooth musclecell,VSMC）的细胞周期及细胞凋亡的影响,寻找本方抗糖尿病动脉粥样硬化的最佳配伍组方。方法应用血清药理学方法,采用兔主动脉平滑肌细胞株,以RI诱导VSMC增殖,随机分为空白组、模型组、罗格列酮组、美迪康组、加味桃核承气汤组、活血组、泻热通下组、益气养阴组及活血一泻热通下组共9组,每组6孔,制备上述9组合药血清,采用碘化丙啶（PropidiumIodide,PI）单染色法,以流式细胞仪检测VSMC的凋亡率及细胞周期。结果各组在各细胞周期的DNA含量比较,总体差异显著（P〈0．01）;模型组、美迪康组细胞凋亡最少;罗格列酮组、活血组、活血十泻热通下组细胞凋亡较多;罗格列酮组、活血组、活血十泻热通下组促进凋亡作用（Sub．GO期）较加味桃核承气汤全方组显著（P〈0．01）。结论促进糖尿病VSMC凋亡的药物有效成分,可能在加味桃核承气汤活血组、活血＋泻热通下组当中含量更高。在促进糖尿病VSCM凋亡的机制方面,罗格列酮组可能与G0／G1、G2M期阻滞有关;活血＋泻热通下组、活血组可能与G2M期阻滞有关。     

Induction of cyclooxygenase-2 by insulin in cultured rat vascular smoothmuscle cells

To evaluate cyclooxygenase-2 (COX-2) expression induced by insulin in cultured rat vascular muscle smooth cells (VSMCs). Methods: The rat VSMCs were isolated and cultured in 60 nma plates, pre-treated with insulin 10, 100, 500, 1 000 mU/L for 6 h, and 100 mU/L for 3, 6. 12, and 24 h, respectively. RT-PCR was performed to measure COX-2 mRNA induction, and Western-blot was used to measure protein expression. In regard to the COX-2 enzyme activity, after stimulation for a specified duration, the culture medium was collected ; Prostaglandin E2( PCE2 ) released by VSMCs was measured with an EIA kit. Results: Three hours after insulin ( 100mU/L) stimulation, the induction of COX-2 mRNA was detectable and increased with the time and dosage of insulin. Insulin induced COX-2 protein expression occurred in a time- and dose-dependent manner. In rat VSMCs, COX-2 induced by insulin resulted in PGE2 production, which was increased with insulin action. Conclusion: Insulin could induce COX-2 expression and PGF2, production in VSMCs in time and dose-dependent manners.     

抗体催化水的氧化对大鼠血管平滑肌细胞过氧化损伤作用

目的 通过观察抗体催化水的氧化作用对大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)的过氧化损伤,探讨其在动脉粥样硬化致病过程中的作用和机制。方法 体外分离培养大鼠VSMCs,随机分为4组：空白组、中性粒细胞(Neu)+IgG组、Neu+PMA组、Neu+PMA+IgG组。以佛波酯(PMA)激活大鼠中性粒细胞产生单线态氧(¹O₂),促进抗体发挥催化水的氧化作用;采用台盼蓝法检测VSMCs的死亡率,CCK-8法检测VSMCs的增殖能力,实时荧光定量PCR及免疫组化法检测细胞内增殖细胞核抗原(PCNA)的表达水平,丙二醛(MDA)法检测细胞内脂质过氧化产物。结果 VSMCs在培养过程中,当与中性粒细胞和PMA共同孵育时,细胞的死亡率、增殖能力、细胞内PCNA的表达水平及胞内脂质过氧化产物均显著增高,但增加大鼠IgG共同孵育后,其增高水平得到更进一步增强。结论 抗体催化水的氧化可能参与了血管平滑肌细胞的过氧化损伤作用。     

普罗布考对过氧化氢诱导平滑肌细胞增殖的影响

目的：探讨普罗布考（Ｐｒｏｂｕｃｏｌ）对Ｈ２Ｏ２诱导的平滑肌细胞（ＳＭＣＳ）增殖的抑制作用。方法：采用细胞计数法和＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法观察０．１～１００μｍｏｌ／Ｌ Ｐｒｏｂｕｃｏｌ对新生牛血清（ＮＣＳ）和过氧化氢（Ｈ２Ｏ２）促ＳＭＣＳ增殖的抑制作用。结果：１０μｍｏｌ／Ｌ及１００μｍｏｌ／Ｌ Ｐｒｏｂｕｃｏｌ作用９６ｈ,可抑制１０％ＮＣＳ刺激的ＳＭＣＳ增殖,而１,１０及１００μｍｏｏｌ／Ｌ Ｐｒ     

大鼠主动脉平滑肌细胞的体外培养和观察

目的 建立大鼠主动脉平滑肌细胞体外培养模型，为动脉粥样硬化等心血管疾病的发病机制的研究提供了重要手段。方法 将大鼠主动脉翻转，两端结扎，用0.1%胶原酶消化血管内皮细胞，剩余血管剪成小块均匀种植于培养瓶底，加入DMEM培养液培养，观察血管平滑肌细胞的生长，结果 平滑肌细胞48h后贴壁生长，早期呈多角形，以后呈梭形伸展，胰酶消化后平滑肌细胞可传6－7代。结论 此方法简单易行，是获得血管平滑肌细胞的一种可靠方法。