YEATS2在肝细胞癌中的表达及临床意义

目的 探讨YEATS2在肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）中的表达及其与预后的关系。方法 收集我院2010年1月至2014年1月112例手术切除的HCC癌组织和癌旁组织石蜡标本，采用Real-time PCR检测HCC癌组织及癌旁组织中YEATS2 mRNA的表达，Western blot和免疫组化染色检测YEATS2蛋白水平，免疫荧光染色检测YEATS2在HCC癌组织中的表达定位，并分析YEATS2与HCC患者临床病理特征和预后的关系，同时采用TCGA数据库数据验证。结果 Real-time PCR结果显示，YEATS2 mRNA在HCC癌组织中的表达较癌旁组织上调（P<0.001）；Western blot检测结果显示，YEATS2在约66.67%（12/18）的HCC癌组织表达升高；免疫组化染色分析发现，约71.43%（80/112）的HCC患者中YEATS2表达上调，其表达与TNM分期明显相关（P<0.001）；YEATS2主要在HCC癌组织细胞核中表达；多因素分析结果显示YEATS2高表达是患者不良预后的独立危险因素（HR=2.204，95%CI：1.388~3.500，P=0.001）。TCGA中HCC队列分析也表明YEATS2高表达的患者OS更差（HR=1.751，95%CI:1.107~2.770，P=0.017）。 结论 YEATS2在HCC组织中高表达，且与患者不良预后相关。     

PES1对肝细胞癌预后和肝癌BEL-7402细胞生长的影响

目的 探讨pescadillo核糖体生物发生因子1（pescadillo ribosomal biogenesis factor 1，PES1）在肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）组织中的表达及其对肝癌BEL-7402细胞生长的影响。方法 采用免疫组化法检测HCC癌组织和癌旁正常组织中PES1的表达。肝癌BEL-7402细胞转染PES1小干扰片段后，采用Western blot检测PES1、CDK4、CDC25A蛋白表达，MTS法检测细胞生长情况，流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡。结果 95例HCC癌组织中，PES1表达阳性率高于癌旁正常组织（90.5% vs 72.6%，χ²=10.122，P=0.001）；癌组织中PES1染色评分高于癌旁正常组织的［（6.30±3.56） 分 vs （2.10±1.64） 分，t=10.423，P<0.001］。PES1表达与HCC患者的肿瘤大小、门脉癌栓和TNM分期有关（均P<0.05）；PES1高表达患者总生存期较PES1低表达患者短（P<0.05）。转染PES1小干扰RNA组的细胞与对照组相比，细胞生长受抑制（P<0.01），G1期细胞比例增加，S期细胞比例减少（均P<0.01），CDK4、CDC25A蛋白表达下调，但细胞凋亡未见明显变化。结论 HCC组织中PES1表达上调，且与患者预后相关。PES1可通过上调CDK4、CDC25A蛋白表达，加快细胞G1/S期的转换，促进肝癌细胞生长。     

线粒体钙离子摄入蛋白1在肾透明细胞癌组织中的表达及其临床意义

目的 探讨线粒体钙离子摄入蛋白1（mitochondrial calcium uptake 1,MICU1）在肾透明细胞癌（renal clear cell carcinoma,RCCC）组织中的表达及其临床意义。方法 以2016年1月—2018年12月于延安大学附属医院行根治性肾切除术的30例RCCC患者为研究对象。采用免疫组织化学法检测RCCC组织及癌旁正常组织中MICU1蛋白的表达。采用瞬时转染法分别将MICU1干涉片段和MICU1过表达质粒转染到CAKI-1细胞中（siMICU1组和MICU1组）,分别设置相应的阴性对照（siCtrl组和EV组）。采用Western blot检测蛋白表达,MTS实验和EdU实验检测细胞的增殖能力。收集TCGA数据库中517例RCCC组织转录组数据,分析MICU1 mRNA表达与RCCC患者临床病理特征及预后的关系。结果 MICU1蛋白在RCCC组织中表达水平低于癌旁正常组织（P<0.001）。成功构建过表达MICU1细胞和干涉MICU1细胞,MTS实验和EdU实验显示,MICU1组的细胞增殖能力低于EV组（P<0.05）,siMICU1组的细胞增殖能力高于siCtrl组（P<0.05）。TCGA数据库分析结果显示,MICU1表达与性别、TNM分期有关（P<0.05）;MICU1低表达患者生存率低于高表达患者（χ²=19.290,P＜0.001）;多因素Cox回归显示,MICU1低表达是影响RCCC患者总生存期的独立危险因素（HR=1.641, 95%CI：1.191~2.261,P=0.002）。结论　MICU1在RCCC组织中呈低表达,且可促进RCCC细胞增殖。     

CK-20和LGALS4在甲状腺乳头状癌中的表达及临床意义

目的 探讨角蛋白-20（cytokeratin-20，CK-20）和半乳糖凝集素4（galectin-4，LGALS4）在甲状腺乳头状癌中的表达及其临床意义。方法 选取2010年1月—2014年6月在张家口市第一医院手术且经病理证实的甲状腺乳头状癌患者128例为研究对象，免疫组化检测癌组织及相应癌旁正常甲状腺组织CK-20、LGALS4的表达；ROC曲线分析CK-20、LGASL4对甲状腺乳头状癌的诊断价值；多因素Cox回归分析影响患者无病生存期（disease-free survival，DFS）的因素。结果 甲状腺乳头状癌组织中CK-20阳性表达率高于癌旁正常组织，而LGALS4阳性表达率低于癌旁正常组织（均P＜0.05）；CK-20高表达、LGALS4低表达均与肿瘤远处转移、TNM分期、淋巴结转移有关（均P＜0.05）；CK-20与LGALS4表达水平呈负相关（r=-0.531，P＜0.001）；CK-20、LGALS4联合诊断甲状腺乳头状癌的曲线下面积、敏感度均优于其单独诊断（均P＜0.05）；CK-20阳性表达患者5年DFS低于阴性表达患者，而LGALS4阳性表达患者5年DFS高于阴性表达患者（均P＜0.05）；CK-20高表达、远处转移、淋巴结转移是DFS的独立危险因素，而LGALS4高表达是DFS的保护因素（均P＜0.05）。结论 甲状腺乳头状癌组织中CK-20与LGALS4表达呈负相关，CK-20高表达预示预后不良，而LGALS4高表达预示预后良好，两者有望成为监测甲状腺乳头状癌预后的生物标志分子。     

ACCα在肝细胞癌中的表达及对细胞生长的影响

目的  探讨乙酰辅酶A羧化酶α（acetyl CoA carboxylase alpha，ACCα）在肝细胞癌（hepatocellular carcinoma ，HCC）中的表达及其在HCC细胞生长中的调控作用。 方法 采用qRT-PCR及Western blot法检测30例HCC患者癌组织及其相应癌旁正常组织中ACCα mRNA与蛋白的表达。采用siRNA下调HCC SNU-368细胞中ACCα的表达后，采用MTS法检测细胞增殖能力，流式细胞仪检测细胞周期分布及细胞凋亡情况。结果 qRT-PCR及Western blot结果显示，HCC组织中ACCα mRNA与蛋白表达水平均显著高于癌旁正常组织（3.26±0.81 vs 1.88±0.64，P=0.021；3.41±0.71 vs 1.74±0.54，P=0.019）。下调ACCα表达后，HCC SNU-368细胞的增殖能力降低（P<0.01），细胞周期进程被抑制（P<0.05），细胞凋亡比例增多（P<0.01）。 结论 HCC细胞SNU-368中ACCα表达显著上调，可能通过诱导细胞周期进程并抑制细胞凋亡促进HCC细胞增殖，ACCα可作为HCC治疗的潜在靶点。     

PRR11和SKA2在宫颈癌组织中的表达及其与预后的关系

目的 探讨PRR11（priline-rich 11）和SKA2 （spindle and kinetochore associated complex subunit 2）在宫颈癌组织中的表达及其与预后的关系。方法 收集2012年1月—2015年12月于青岛大学附属烟台毓璜顶医院诊治的289例宫颈癌患者癌组织及其癌旁正常组织,采用免疫组化检测PRR11和SKA2在宫颈癌组织中的表达,并分析其与患者临床病理特征的关系,采用Spearman法分析两者表达的相关性,Kaplan-Meier分析总生存率,Cox比例风险回归模型分析预后的影响因素。结果 PRR11和SKA2在宫颈癌组织中的阳性表达率均高于癌旁正常组织（60.21% vs 16.96%,χ²=114.081,P＜0.001; 69.55% vs 37.37%,χ²=60.143,P＜0.001）。Spearman相关分析结果显示,PRR11与SKA2蛋白表达呈正相关（r=0.725,P<0.001）。PRR11和SKA2蛋白表达均与FIGO分期、组织分化程度及淋巴结转移有关（P<0.05）。PRR11、SKA2阳性表达患者的3年总生存率均明显低于阴性表达患者（78.16% vs 94.78%,P=0.002; 82.09% vs 90.91%,P=0.036）。FIGO分期Ⅲ~Ⅳ期、PRR11阳性表达和SKA2阳性表达是影响宫颈癌患者预后的独立危险因素（HR=1.698,95%CI：1.369~2.876,P＜0.001;HR=2.392,95%CI：1.294~3.596,P＜0.001;HR=1.597,95%CI：1.024~2.302,P＜0.001）。结论 PRR11和SKA2在宫颈癌组织中高表达且呈正相关,是影响患者预后的独立危险因素,可能是宫颈癌预后评估的有效指标。     

胶质瘤中MicroRNA-184的表达及其预后价值

目的 研究人脑胶质瘤石蜡包埋组织（formalin-fixed paraffin-embedded, FFPE）中微小RNA-184（microRNA-184, miR-184）的表达及其与临床病理特征之间的关系,探讨其在预测胶质瘤患者预后中的价值。方法 采用微阵列芯片法和RT-PCR检测108例胶质瘤FFPE和32例正常脑组织中的miR-184表达,同时Kaplan-Meier法分析胶质瘤患者总生存期和无病生存期情况。结果 胶质瘤组织中miR-184的表达下调,并用RT-PCR进一步验证; miR-184低表达与WHO分级（P=0.007）、Karnofsky 评分（KPS）（P=0.029）、复发时间（P=0.037）和生存时间（P=0.019）显著相关;Kaplan-Meier 分析结果表明,miR-184低表达与高表达患者总生存期（OS）（P=0.001）和无病生存期（DFS）（P=0.006）差异有统计学意义,miR-184低表达患者预后较差。多因素分析显示胶质瘤中miR-184的差异表达是预测OS[风险比（HR）：7.52;95％CI：2.63~21.42;P=0.002]和DFS[HR：11.56;95％CI：5.17~25.93;P<0.001]的独立危险因素。结论 miR-184的表达与胶质瘤患者预后显著相关,表明miR-184可作为预测胶质瘤患者预后的独立标志物。     

长链非编码RNA RAB11B-AS1在膀胱癌组织中的表达及与预后的关系

 目的 探讨长链非编码RNA RAB11B-AS1（lncRNA RAB11B-AS1）在膀胱癌组织中的表达及其与临床病理参数和预后的关系。方法 收集2012年10月—2014年2月于云南省第二人民医院泌尿外科手术切除的83例膀胱癌组织及相应癌旁正常组织。采用qRT-PCR检测lncRNA RAB11B-AS1的表达并分析其与患者临床病理特征的关系,采用Cox回归分析lncRNA RAB11B-AS1表达水平与膀胱癌患者预后的关系。结果 lncRNA RAB11B-AS1在膀胱癌组织中的表达水平低于癌旁正常组织（1.17±0.32 vs 2.09±0.74,t=10.396,P<0.001）;膀胱癌癌组织中lncRNA RAB11B-AS1的表达水平与患者TNM分期、组织学分级和淋巴结是否转移有关（P<0.05）。lncRNA RAB11B-AS1高表达患者5年总生存率高于低表达患者（62.22% vs 26.32%,χ²=13.420,P<0.001）;多因素Cox回归分析显示,lncRNA RAB11B-AS1低表达是影响膀胱癌患者预后的独立危险因素（HR=1.126,95%CI：1.058~1.200,P<0.001）。结论 lncRNA RAB11B-AS1在膀胱癌组织中低表达,且低表达患者预后较差。     

基于数据挖掘分析GOLM1基因在前列腺癌中的表达及其临床意义

目的 探讨GOLM1基因在前列腺癌中的表达及临床意义。方法 利用Oncomine数据库分析GOLM1基因在前列腺癌与其癌旁正常组织组织中的表达情况，从TCGA数据库中下载相关的RNA-Seq数据和临床资料，分析GOLM1基因表达与患者临床病理学特征及预后的关系。结果 Oncomine及TCGA数据库分析结果显示，GOLM1基因在前列腺癌组织中的表达显著高于癌旁正常组织（P<0.001）。相关分析结果显示，TCGA数据库中547例前列腺癌患者GOLM1 mRNA表达水平与其年龄、临床T分期、病理学T分期及Gleason评分的相关性不大；低表达GOLM1基因的患者总生存期显著较高表达者长（HR=4.50，95%CI：3.77~5.37，P=0.038）；ROC曲线分析显示最佳截断点为8.889，灵敏度为80.5%，特异度为80.8%，ROC曲线下面积为0.862（95%CI：0.813~0.912）。结论 GOLM1基因在前列腺癌组织中高表达，且与患者不良预后相关，可作为前列腺癌较好的诊断标志物。     

基于基因组突变数据分析肝癌预后分子标志物

目的  探讨肿瘤突变负荷（tumor mutational burden，TMB）及关键信号通路的基因变异与肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）患者预后的相关性。 方法 从TCGA数据库及cBioPortal数据库schulze2015队列分别获取376例和243例HCC患者全外显子测序数据，从ICGC数据库获取JP队列 394例及FR 队列250例HCC患者全基因组测序数据。采用生存分析研究TMB、关键信号通路的基因变异与HCC患者预后的关系。结果 TCGA队列、JP队列、schulze2015队列和FR队列中，对数转换后的TMB与年龄均呈正相关（P<0.001）；在schulze2015队列中，对数转换后的TMB与肿瘤大小呈正相关（r=0.204，P=0.002）。在TCGA队列中，与低TMB组比较，高TMB 组HCC患者的OS（P<0.001）及DFS（P=0.088）均明显降低，高TMB组HCC患者的死亡风险是低TMB组的2.156倍（P<0.001）。JP队列和FR队列均未发现TMB与OS及DFS有统计学意义。TCGA队列、JP队列和FR队列中，细胞周期调控通路基因变异的HCC患者中位DFS和中位OS均低于无变异的患者（P<0.05），而复发风险和死亡风险均高于无变异患者（P<0.05）。结论 肿瘤突变负荷高和细胞周期调控通路的基因变异的HCC患者预后较差。     

NCLX介导的线粒体钙稳态对肝癌细胞生长的影响

目的 探讨线粒体钠钙交换体（mitochondrial Na+/Ca2+ exchanger，NCLX）介导的线粒体钙稳态对肝癌细胞生长的影响。方法 真核表达载体pSliencer3.0-shNCLX、pcDNA3.1（+）-NCLX分别转染肝癌细胞SNU-739和SNU-368，构建稳定干涉和过表达NCLX肝癌细胞。采用免疫印迹法检测转染后肝癌细胞中NCLX蛋白的表达，Rhod-2-AM染色检测肝癌细胞线粒体钙水平，MTS和EdU实验检测肝癌细胞增殖能力，流式细胞仪检测肝癌细胞凋亡情况。结果 免疫印迹法检测结果显示成功构建干涉和过表达NCLX的SNU-739和SNU-368肝癌细胞。与转染空载体肝癌细胞比较，干涉 NCLX后肝癌细胞SNU-739和SNU-368线粒体钙明显增多（P<0.01），细胞增殖率明显升高（P<0.05），细胞凋亡率明显下降（P<0.01）；而过表达NCLX 后肝癌细胞SNU-739和SNU-368线粒体钙明显减少（P＜0.05），细胞增殖率明显下降（P<0.05），细胞凋亡率明显上升（P<0.01）。结论 干涉NCLX诱导的线粒体钙水平升高可促进肝癌细胞增殖和抑制凋亡，而过表达NCLX诱导的线粒体钙水平下降抑制肝癌细胞增殖和促进凋亡，NCLX可能是肝癌的潜在治疗靶点。     

HOXC8在人肝门部胆管癌中的表达及临床意义

目的 探讨HOXC8在人肝门部胆管癌组织中的表达及其对预后的影响。方法 采用免疫组化法检测49例肝门部胆管癌及对应癌旁正常组织中HOXC8蛋白的表达水平,并分析其与肝门部胆管癌患者临床病理特征及预后的关系。 结果 肝门部胆管癌组织中HOXC8蛋白的阳性表达率明显高于癌旁正常组织（57.1% vs 42.9%,P<0.001）。HOXC8表达与肝门部胆管癌患者肿瘤浸润深度、淋巴结转移、TNM分期有关（P<0.05）。单因素生存分析显示HOXC8阳性表达的肝门部胆管癌患者总生存期明显较HOXC8阴性表达患者差（12个月 vs 46个月,P<0.001）,多因素回归分析显示HOXC8是肝门部胆管癌患者的独立预后因素（P=0.039）。 结论　HOXC8在肝门部胆管癌组织中高表达,且与不良预后有关,可能作为判断肝门部胆管癌患者预后的标志物及潜在治疗靶点。     

Linc00704对结直肠癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的 探讨Linc00704（long non-coding RNA 00704）对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法 RT-qPCR检测配对结直肠癌及癌旁正常组织、结直肠癌细胞和正常永生化人结肠上皮细胞系FHC中Linc00704 mRNA的表达。反义寡核苷酸（antisenseoligonucleotide,ASO）转染结直肠癌细胞构建Linc00704低表达细胞模型,慢病毒感染结直肠癌细胞构建Linc00704过表达细胞模型,RT-qPCR检测转染效率;CCK-8实验检测细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞迁移及侵袭能力。结果 相比癌旁组织,Linc00704在结直肠癌组织中表达降低（t=4.103,P<0.001）。8种结直肠癌细胞系中有6种细胞系（RKO、HCT15、NCI-H716、SW480、SW1463、SW48）Linc00704的表达较FHC细胞低（F=44.750,P<0.001）。沉默 Linc00704表达可促进Caco-2、DLD-1细胞迁移和侵袭能力（均P<0.01）,但对增殖无明显影响（均P>0.05）。过表达Linc00704可抑制RKO、HCT15细胞迁移和侵袭能力（均P＜0.001）,但对增殖无明显影响（均P>0.05）。结论 Linc00704在结直肠癌组织中呈低表达,过表达Linc00704可抑制结直肠癌细胞迁移和侵袭能力。