固相萃取-高效液相色谱串联质谱测定人体尿液中芳香化合物代谢物的方法研究

  目的  建立固相萃取-高效液相色谱串联质谱（high performance liquid chromatographic tandem mass spectrometric, HPLC-MS/MS）同时测定尿液中8种芳香化合物代谢物（苯巯基尿酸、甲基马尿酸、N-乙酰基-S-苯基-L-半胱氨酸、苯乙醛酸、苯乙醇酸、对氨基酚、对硝基酚和1-羟基芘）的方法。  方法  取1 mL尿液,加入20 μL β-葡萄糖醛酸酶和1 mL乙酸铵缓冲溶液,在37 ℃孵箱中酶解20 h。酶解后混匀,取适量酶解液注入PrimeHLB 固相萃取柱净化,4 mL乙腈洗脱,洗脱液氮吹至干,用0.20 mL甲醇复溶后进样HPLC-MS/MS系统分析。高效液相色谱分离采用反相C₁₈色谱柱（2.1 mm×150 mm,3.5 μm）,流动相A为含体积分数0.1%甲酸的水,流动相B为甲醇,采用梯度洗脱,流速为0.2 mL/min。质谱采用正、负离子交替扫描方式,多反应监测（multiple reaction monitoring, MRM）模式检测,内标标准曲线法定量。  结果  8种代谢物在 1~100 ng/mL范围内线性良好,相关系数均大于0.995,测定的精密度（relative standard deviation, RSD）在0.05%～9.95%之间,8种代谢物的检出限在0.041~0.12 ng/mL范围内。将所建立的方法用于尿样分析,加标回收率为80.1%～114.0%。  结论  所建立的方法灵敏、快速、准确,适用于普通人群和职业人群的芳香化合物生物监测评估。     

同位素稀释-亲水作用色谱串联质谱快速测定尿液中8-羟基脱氧鸟苷和可替宁的研究

  目的  建立尿液中8-羟基脱氧鸟苷和可替宁的同位素稀释-亲水作用色谱串联质谱的快速测定方法。  方法  离心后的尿样上清液加入15N₅-8-羟基脱氧鸟苷、D₃-可替宁两种内标,以3 mmol/L甲酸铵水溶液稀释5倍,经0.22 μm水系滤器过滤后,引入液相色谱-串联质谱法（ultra-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS）分析。以ACQUITY UPLC? BEH HILIC色谱柱（50 mm×3.0 mm, 1.7 μm）分离,3 mmol/L甲酸铵水溶液与乙腈为流动相(10∶90) 等度洗脱,柱温40 ℃,流速0.3 mL/min;质谱以电喷雾电离源（electrospray ionization, ESI）+扫描多反应监测模式检测,内标法定量。  结果  8-羟基脱氧鸟苷和可替宁在各自线性范围内线性良好,方法检出限分别为0.064 μg/L和0.035 μg/L;定量限分别为0.21 μg/L和0.12 μg/L;加标回收率分别为92.6%～102.0%和102.0%～106.0%。采用所建立的方法测定实际尿样,并通过40例样本统计分析发现,主、被动吸烟者的烟草烟气暴露量、烟草特有亚硝胺摄入量存在差异（P<0.05）,NNAL和可替宁含量在主动吸烟者尿样中含量更高;主、被动吸烟者的烟草烟气暴露与烟草特有亚硝胺暴露呈正相关（其相关系数r分别为0.487和0.786,P<0.05）。  结论  本研究成功建立同时测定尿液中8-羟基脱氧鸟苷和可替宁含量的同位素稀释-亲水作用色谱串联质谱法,该方法前处理简单、快速,通过同位素内标校正,定量灵敏准确,能够满足批量分析的需求。     

LC-MS/MS法检测血液和尿液中东莨菪碱和阿托品

  目的  建立曼陀罗中毒人体血液和尿液中东莨菪碱和阿托品的LC-MS/MS检测方法。  方法  采用Shim-pack GISR-HP C18色谱柱,以乙腈-甲酸（0.1%）水溶液为流动相进行梯度洗脱,电喷雾离子源正离子多反应监测模式质谱分析,采用2个特征离子对和外标标准曲线法对曼陀罗中毒人体血液和尿液中东莨菪碱和阿托品进行定性定量分析。  结果  东莨菪碱和阿托品的定量离子对分别为m/z 304.25 [M+H]+→138.15和m/z 290.2 [M+H]+→124.15。东莨菪碱和阿托品在质量浓度1～100 ng/mL范围内线性良好（R≥0.999）,检出限（LOD）分别为:血液0.45 ng/mL和0.19 ng/mL,尿液0.38 ng/mL和0.16 ng/mL;定量限（LOQ）分别为:血液1.01 ng/mL和0.63 ng/mL,尿液1.07 ng/mL和0.38 ng/mL;提取回收率分别为:血液94.38%和94.49%,尿液94.96%和96.52%;基质效应为-3.51%～0.84%。2种目标物的准确度为89.38%～102.86%,日内和日间精密度均小于6%。  结论  建立的LC-MS/MS检测方法能快速、准确的测定生物检材中东莨菪碱和阿托品的含量。     

分散液-液微萃取结合气相色谱质谱测定尿液中的尼古丁和可替尼

目的 探讨建立溶剂去乳化分散液-液微萃取（dispersive liquid-liquid microextraction,DLLME）结合气相色谱-质谱法（gas chromatography-mass,GC/MS）测定尿液中尼古丁和可替尼的方法。方法 考察GC/MS检测和DLLME条件。取5 mL尿样,用NaOH调节pH至9.0,加入氯化钠振荡溶解后,取100 μL三氯甲烷（含内标物喹啉）和1 000 μL甲醇分别作为萃取剂和分散剂并混合,注入样液中使乳化分散,4 000 r/min离心5 min,弃上清,取1 μL下层有机相进GC/MS分析。以DB-5毛细管色谱柱为分离柱,程序升温分离样液中的尼古丁和可替尼,离子监测(SIM)模式质谱检测和内标工作曲线法进行定量。结果 尼古丁和可替尼在0.2~100 ng/mL范围内线性良好,方法检出限分别为0.010 ng/mL和0.022 ng/mL,方法精密度(相对标准偏差)分别为8.2%和9.6%,加标回收率分别为92.0%~108.0%和83.0%~110.0%。结论 本方法简单快速、灵敏准确,适用于尿液中尼古丁和可替尼的测定,能满足人群烟草暴露评价的需要。     

UFLC-MS/MS测定大鼠皮下及血液微透析样品中鬼臼毒素浓度

目的 建立和验证一个测定大鼠皮肤下及血液微透析样品中鬼臼毒素浓度的超高速液相色谱-质谱联用(UFLC-MS/MS)方法.方法 微透析样品中加入依托泊苷为内标,经乙酸乙酯液,液提取后进行UFLC-MS/MS测定.采用Agilent ZORBAX XDB-C18色谱柱(2.1 mmx50mm,3.5μm),柱温为室温,以乙腈-10mmol/L乙酸铵(40:60,V/V)为流动相,流速0.3ml/min;质谱采用正离子模式和多反应离子监测方式进行检测.结果 用于定量分析的离子对分别为m/z432.7→397.3(鬼臼毒素)和589.5→229.5(依托泊苷,内标),鬼臼毒素标准曲线线性范嗣为2.0～1000ng/ml.最低定量下限及最低检测限分别为2.0nedml和0.7 ng/ml.日内和日问精密度及准确度均小于15%.结论 该方法灵敏度高、专属性强,可用于测定大鼠皮肤下及血液微透析样品中鬼臼毒素含量.     

液相色谱-质谱联用法测定孕妇尿液中三种残留的氯霉素类抗生素

目的：建立液相色谱-质谱联用法测定孕妇尿液中3种残留的氯霉素类抗生素,并进行方法学验证。方法：尿液利用Oasis HLB固相萃取小柱进行净化和富集,液相分离采用SHISEIDO MG-C18(100mm×3.0mm,3.0μm)色谱柱,流动相为乙腈-水（含0.1%甲酸）,梯度洗脱。质谱采用ESI源,选择离子监测模式检测[M-H]-：氯霉素m/z 320.8、氟苯尼考m/z 355.8、甲砜霉素m/z 353.8、甲苯磺丁脲(内标) m/z 268.9。结果：尿液中3种残留的氯霉素类抗生素在5～500ng/mL范围内呈良好的线性关系（r均＞0.999）;批内和批间的精密度和准确度良好（RSD＜8.9% ,∣RE∣＜9.3%） ;提取回收率为71.4%～108.5%,稳定性良好（∣RE∣＜11.8%）;几乎没有残留;稀释不影响测定的精密度和准确度;共检测了18份来源不同的(孕早期、孕中期和孕晚期)孕妇尿样,大部分样品能检测到氯霉素（但低于最低定量限5ng/mL）,其中少量样品能测出氟苯尼考,完全没有检测到甲砜霉素残留。结论：该方法操作简便、重现性好,适用于尿液中3种氯霉素类抗生素的测定,可为氯霉素类抗生素的残留与孕妇不良妊娠结局的相关性研究提供方法学基础。     

血清炎症因子和肺功能与OSAHS患者病情程度的相关性研究

  目的  探讨炎症因子和肺功能与阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(obstructive sleep apnea hypopnea syndrome, OSAHS)病情程度相关性,为临床治疗提供参考。  方法  选择浙江医院2018年3月—2020年3月收治的OSAHS患者179例;另选择同期健康体检者80例作为对照组。采用酶联免疫吸附法测定白介素(IL)-6、IL-18和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;采用肺功能仪测定潮气量(VT)、最大肺活量(VC_max)、用力肺活量(FVC)和第1秒用力呼气容积(FEV₁);采用匹兹堡睡眠质量指数(PSQI)评价睡眠质量。  结果  血清IL-6、IL-18和TNF-α水平比较,轻中度组[(28.21±5.12)pg/mL、(22.35±4.12)ng/L和(187.46±37.23)ng/L]和重度组[(45.17±6.71)pg/mL、(42.10±5.62)ng/L和(297.42±30.19)ng/L]高于对照组[(11.82±3.27)pg/mL、(9.65±2.19)ng/L和(108.91±25.26)ng/L],均P < 0.05。VT、VC_max、FVC和FEV₁比较,轻中度组和重度组低于对照组(均P < 0.05)。IL-6、IL-18和TNF-α与重度OSAHS呈线性正相关,而VT、VC_max、FVC和FEV₁与重度OSAHS呈线性负相关。  结论  OSAHS患者存在炎症反应、肺功能下降,且与病情程度呈正相关。      

HPLC-MS/MS法测定人血浆和尿液中二甲啡烷的浓度

目的 建立高效液相色谱串联质谱法 (HPLC-MS/MS) 测定人血浆及尿液中二甲啡烷的浓度。 方法 以重蒸乙醚为萃取剂,采用Ultimate C₁₈ (50 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱,流动相为甲醇-水-甲酸=75∶25∶0.05,流速为0.2 mL/min。采用正离子模式,ESI 离子源,MRM 模式检测,以利多卡因为内标定量,二甲啡烷和内标的检测离子对质荷比分别为 (m/z) 256.4→155.3和 (m/z) 235.4→86.1。 结果 二甲啡烷血药浓度在0.025~5.0 ng/mL范围内线性关系良好（ r=0.995 7),最低定量限为0.025 ng/mL;尿药浓度在0.1~20.0 ng/mL范围内线性关系良好（ r=0.998 3）,最低定量限为0.1 ng/mL。血浆方法回收率为103.38%～106.88%;尿液方法回收率为90.05%～101.40%。血药浓度日内、日间精密度相对标准偏差 (RSD)分别小于5.92%及5.70%,尿药浓度日内、日间精密度RSD分别小于10.35%及8.80%。 结论 本研究建立的方法准确、灵敏、可靠,可用于二甲啡烷的血药浓度和尿药浓度的测定及其药代动力学研究。     

液相色谱-质谱法测定孕妇尿液中3种残留的氯霉素类抗生素

目的 建立液相色谱-质谱法测定孕妇尿液中3种残留的氯霉素类抗生素,并进行方法学验证。方法 尿液利用Oasis HLB固相萃取小柱进行净化和富集,液相分离采用SHISEIDO MG-C18(100 mm×3.0 mm,3.0μm)色谱柱,流动相为乙腈-水（含0.1%甲酸）,梯度洗脱。质谱采用电喷雾离子源,选择离子监测模式检测[M-H]-：氯霉素m/z 320.8、氟苯尼考m/z 355.8、甲砜霉素m/z 353.8、甲苯磺丁脲（内标）m/z 268.9。结果 尿液中3种残留的氯霉素类抗生素在5～500 ng/mL范围内呈良好的线性关系（均r>0.999）;批内和批间的精密度及准确度良好（RSD<8.9%,∣相对误差（RE）∣<9.3%）;提取回收率为71.4%～108.5%,稳定性良好（∣RE∣<11.8%）;几乎没有残留;稀释不影响测定的精密度和准确度。共检测了18份不同孕期（孕早期、孕中期和孕晚期）孕妇的尿样,大部分样品能检测到氯霉素（但浓度低于最低定量限5 ng/mL）,其中少量样品能测出氟苯尼考,完全没有检测到甲砜霉素残留。结论 该方法操作简便、重现性好...     

依托咪酯在不同程度烧伤患者体内的药代动力学

  目的  研究依托咪酯在不同程度烧伤患者体内的药代动力学。  方法  选取行切痂植皮烧伤患者45例，按轻中重度烧伤分为A、B、C 3组，每组15例。45例患者开始以舒芬太尼TCI给药，TCI舒芬太尼15 min（T_t15）时开始静脉恒速泵注依托咪酯（0.4 mg/kg），2 min泵注结束，辅以罗库溴铵，右美托咪定，七氟烷麻醉维持，维持BIS值在40～60。在TCI开始后20、30、40、50、60、90 min及TCI停药时（停时）和TCI停药后1、3、5、8、10、20、30 min时间点采集动脉血2 mL，测定标本血浆中依托咪酯的Cm，计算药代动力学参数。  结果  C组的K₃₁、CL₁、CL₃小于A组和B组（P < 0.05）；C组的V₃、T_1/2r 大于A组和B 2组（P < 0.05）。A组和B组的K₃₁、CL₁、CL₃、V₃、T_1/2r组间，差异无统计学意义（P > 0.05）。  结论  重度烧伤患者依托咪酯药代动力学参数中，K₃₁变小、V₃增加、CL₁、CL₃降低，T_1/2r明显延长，可适当减少用药剂量。     

生物检材中34种常见毒品及代谢物的液相色谱轨道阱质谱筛查方法研究

目的 建立高效液相色谱轨道阱质谱对生物检材中34种常见毒品及代谢物的筛查方法.方法 尿样和血样经乙酸乙酯提取后,氮吹浓缩和复溶;毛发样品依次用水和丙酮振荡洗涤、晾干后剪成约1 mm,置冷冻研磨仪中粉碎,甲醇提取,过滤后,滤液供仪器分析.色谱分析采用Hypersil Gold PFP色谱柱(2.1 mm×100 mm,3...     

反相超高效液相色谱-高分辨质谱法测定自来水消毒副产物卤代乙酸

  目的  建立一种检测自来水中消毒副产物卤代乙酸的反相超高效液相色谱-四极杆-轨道阱质谱法。  方法  水样加入0.70 g/L抗坏血酸作脱氯剂,过滤后进样分析。采用1.0 mm内径的五氟苯基（PFP）色谱柱,以比窄径柱常规流速更高的线流速和更低的体积流速洗脱,电喷雾电离源负离子模式下电离,一级质谱全扫描和数据依赖的二级质谱全扫描采集数据。为校正基质效应,采用基质匹配校准曲线法对9种卤代乙酸（一氯乙酸、一溴乙酸、二氯乙酸、一溴一氯乙酸、二溴乙酸、三氯乙酸、一溴二氯乙酸、二溴一氯乙酸和三溴乙酸）进行定量分析。  结果  9种卤代乙酸在各自的线性范围内线性关系良好,方法检出限和定量限分别为0.020～1.0 μg/L和0.060～3.0 μg/L,回收率为69.8%～119%。  结论  所建方法分离快速、定性准确,无需复杂的前处理步骤,可满足自来水样的分析要求。     

2017年成都市PM2.5质量浓度与呼吸系统急救人次的关系

  目的  分析2017年成都市大气细颗粒物（particulate matter 2.5,PM_2.5）对呼吸系统急救人次的近期影响。  方法  收集成都市2017年1月1日～12月31日的PM_2.5每日24 h质量浓度均值、每日呼吸系统疾病急救人次数、日均气温和相对湿度,采用广义相加时间序列模型,在每日总急救人次数无明显长期趋势的基础上,控制气象因素（气温和气湿）、“星期效应”混杂因素后,分析PM_2.5与呼吸系统急救人次的关系。  结果  成都市2017年因呼吸系统疾病急救呼救共9 309人次,平均每天26人次。日均温度16.6 ℃,日均相对湿度81.2%,全年PM_2.5质量浓度均值为53.6 μg/m3。单污染物模型滞后时间效应分析发现,最强效应期为暴露当日,在最强效应期空气中PM_2.5质量浓度每升高10 μg/m3,居民因呼吸系统疾病急救风险增加1.26%（95%可信区间:0.56%～1.97%）,且PM_2.5质量浓度与居民因呼吸系统疾病急救风险几乎呈正向直线关系。双污染物模型分析发现,每日臭氧质量浓度8 h滑动平均值（O_3-8h）能够增强PM_2.5质量浓度对人群急救风险的效应。  结论  空气PM_2.5污染,可能增加居民因呼吸系统疾病急救的风险。     

基于液质联用技术的南北产地桔梗药材皂苷谱差异研究

  目的  通过鉴定9个省(市)的57批桔梗药材中皂苷类成分, 绘制并比较南北产地桔梗药材皂苷谱。  方法  以UPLC-LTQ-Orbitrap-MS和LC-MS/MS法测定桔梗药材中皂苷类成分, 采用主成分分析(PCA)及正交偏最小二乘法判别分析(OPLS-DA)处理样品数据。  结果  桔梗药材中共鉴定出48种皂苷, PCA及OPLS-DA均显示南北桔梗药材中皂苷有较好区分, 共发现23种差异皂苷。靶标定量结果显示南桔梗中桔梗皂苷D、去芹糖桔梗皂苷D、远志皂苷D及去芹糖桔梗皂苷D₂含量显著高于北桔梗。  结论  南北桔梗药材在皂苷成分上有着明显差异, 同时建立了快速、稳定的靶标定量方法, 可为桔梗药材质量控制提供参考。      

毛冬青三萜皂苷对动脉粥样硬化大鼠粪便和尿液代谢组学的影响

目的 探讨毛冬青三萜皂苷(IPTS)对动脉粥样硬化(AS)模型大鼠粪便和尿液代谢组学的影响.方法 采用高脂饮食联合腹腔注射维生素D3诱导大鼠AS模型,实验分为对照组、模型组、IPTS组.检测大鼠血清中血脂四项水平,应用核磁共振(NMR)技术对粪样和尿样进行代谢组学分析.结果 IPTS干预后,大鼠血清TG含量显著下降(P...     

芦荟大黄素金属配合物的抗氧化活性研究

  目的  合成3种芦荟大黄素金属配合物,并比较配体和配合物的抗氧化活性。  方法  在无水乙醇溶剂中,通过溶解、搅拌合成芦荟大黄素-铁（Ⅱ）、芦荟大黄素-铜（Ⅱ）、芦荟大黄素-镁（Ⅱ）3种配合物,并对其结构进行表征,采用Fe2+-H₂O₂-亚甲蓝法、二苯代苦味肼基自由基法（DPPH法）等检测配体和配合物对超氧自由基（O₂－?）、羟基自由基（?OH）、二苯代苦味肼基自由基（DPPH?）的清除作用。  结果  成功合成芦荟大黄素-铁（Ⅱ）、芦荟大黄素-铜（Ⅱ）、芦荟大黄素-镁（Ⅱ）3种配合物,根据结构表征结果,推测芦荟大黄素金属配合物可能结构为两分子芦荟大黄素通过9位羰基和8位羟基与一分子金属离子（Fe2+、Mg2+、Cu2+）形成配合物。配合物和配体对3种自由基均有清除作用,但配合物的清除作用强于其配体（P<0.05）。  结论  芦荟大黄素与Fe2+、Cu2+、Mg2+ 3种金属离子配位后,增强了其配体本身的抗氧化活性。