粪肠球菌群体感应系统luxS基因的研究

目的研究粪肠球菌群体感应系统luxS基因的功能并体外合成AI-2信号分子,为研究粪肠球菌LuxS/AI-2依赖的群体感应系统提供依据。方法以哈氏弧菌BB170作为报告菌株,检测3株粪肠球菌培养上清的AI-2活性,然后从粪肠球菌中扩增出luxS和pfs基因,测序和比对氨基酸序列,并将两基因插入到pGEX-4T-1表达载体中,转化至大肠杆菌BL21（DE3）中实现表达与纯化,进而以S-腺苷高半胱氨酸为底物、纯化的蛋白或构建的大肠杆菌菌体蛋白为反应酶,体外合成AI-2。结果 3株粪肠球菌均能够分泌有活性的AI-2信号分子;LuxS蛋白序列分析发现其与哈氏弧菌、沙门菌、大肠杆菌具有高度同源性;SAH均可以与纯化的蛋白或构建的大肠杆菌菌体蛋白合成出有活性的AI-2分子。结论粪肠球菌存在LuxS/AI-2依赖的群体感应系统,AI-2的产生依赖于luxS基因。     

对肠球菌的耐药性分析及用药建议

肠球菌是医院感染的重要病原菌 ,由于其耐药性强 ,耐药基因可传递至其它种细菌 ,不仅导致抗生素治疗失败 ,而且有引起医院感染暴发流行的可能性 ,因此愈来愈引起医学工作者的高度重视。本文总结了我院 2 0 0 0年 7月至 2 0 0 2年 6月从住院病人中分离出的肠球菌的种类及常用抗生素的药敏分析 ,并对临床在治疗由肠球菌引发的感染应用抗生素时提出了一些建议。1　材料与方法1 .1　菌种　 2 0 0 0年 7月至 2 0 0 2年 6月从住院病人中的分离得到的病原菌 ,并经 VITEK—AMS细菌自动鉴定与药敏分析仪鉴定至种的水平 ,手工鉴定参照《全国临床检…     

对高水平耐氨基糖苷类肠球菌的检测及药敏分析

肠球菌是引起医院感染的常见病原菌,由于其耐药性强,耐药基因可传递至其他种细菌,不仅导致抗生素治疗失败,而且有引起医院感染暴发流行的可能性。氨基糖苷类抗生素与青霉素或万古霉素联合应用可治疗肠球菌引起的严重感染,但上述联合应用对高水平耐氨基糖苷类肠球菌(Highlevelam     

氯己定液根管冲洗与二极管激光对离体牙粪肠球菌抑菌效果比较

目的比较氯己定液根管冲洗与二极管激光对离体牙中粪肠球菌的抑菌效果。方法选择新鲜拔除的100颗人单根管恒牙浸泡于粪肠球菌悬液中,建立粪肠球菌感染根管模型。将100颗感染粪肠球菌的离体牙根管随机分为A、B、C1、C2、D五组,每组各20例。A组采用二极管激光处理,B组采用2%氯己定液冲洗,C1组采用5.25%次氯酸钠(NaClO)+乙二胺四乙酸(EDTA)液冲洗,C2组采用二极管激光+5.25%NaClO+EDTA液处理,D组采用0.9%生理盐水冲洗。测定菌落计数,分析杀菌率。结果实验后,根管菌落计数排序为D组>B组>C1组>A组>C2组,各组两两比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。C2组杀菌率高于A组、B组、C1组及D组(P<0.05)。结论二极管激光治疗能抑制粪肠球菌的生长繁殖,与5.25%NaClO+EDTA联合应用于根管治疗效果良好,可降低菌落计数,杀菌率优于临床传统治疗。     

光动力疗法对侧支根管内粪肠球菌杀灭作用的实验研究

目的观察光动力疗法(Photodynamic therapy,PDT)对离体牙侧支根管内粪肠球菌的杀灭作用。方法选取人类单根管离体前牙60颗,随机分为3组。常规根管预备后,在牙的近远中面距离根尖孔3 mm处制备15#K锉直径(锉尖直径为150μm)的人工侧支根管,建立粪肠球菌感染模型。实验组为PDT组,以40μg/ml血卟啉单甲醚(Hemato-porphyrin monomethylether,HMME)为光敏剂,避光孵育5 min后用激光功率为80 mW的532 nm半导体激光在根管内上下提拉螺旋照射120 s;阳性对照组为5.25%次氯酸钠冲洗组;阴性对照组为生理盐水冲洗组。各组实验牙标本(每个离体牙近中面侧支根管作为实验前标本,远中面侧支根管作为对应的实验后标本)处理前与处理后即刻用20#K锉取侧支根管内碎屑,然后将碎屑转至含5 ml TPY液体培养基的试管中,10倍递增连续稀释后厌氧培养24 h,菌落计数并推算对应的菌液浓度。结果菌落计数统计结果显示:(1)与阴性对照组(生理盐水冲洗组)比较,HMME-PDT处理组和阳性对照组(5.25%次氯酸钠冲洗组)各侧支根管内细菌量均显著下降(P<0.01);(2)HMME-PDT对侧支根管内粪肠球菌的杀灭效果(92.56%)显著优于阳性对照组(76.93%),差异有显著意义(P<0.01)。结论 HMME-PDT对侧支根管内粪肠球菌有很好的杀灭作用,将为根管消毒提供一种新的有效途径。     

微重力对病原菌毒力和抗生素敏感性影响的研究进展

太空微重力环境不仅导致机体免疫功能下降,而且使某些病原菌的毒力、抗生素敏感性等方面发生改变。开展有关微重力条件下病原菌毒力及药物敏感性的研究对于航天环境下感染性疾病的预防和治疗有重要意义。     

三代头孢、碳青酶烯类抗生素对肠道内肠球菌影响的机制探讨

目的 探讨三代头孢、碳青酶烯类广谱抗生素对脓毒症大鼠肠道内肠球菌的影响.方法 91只健康SD大鼠随机分为正常对照组、烫伤未治疗组、烫伤头孢曲松3日组及9日组、烫伤亚胺培南3日组及9日组、脓毒症未治疗组、脓毒症头孢曲松3日组及9日组、脓毒症亚胺培南3日组及9日组.采用大鼠背部烫伤模型,烫伤后24h分两次给予内毒素(共20mg/kg)进行"二次打击"."二次打击"24h后分别给予头孢曲松、亚胺培南腹腔注射治疗,在相应时相点分别取大肠内容物行肠球菌定量培养、菌种鉴定.结果 经内毒素"二次打击"的脓毒症大鼠肠道肠球菌数量较正常对照组、烫伤未治疗组显著增多(P＜0.01),并以原优势菌--粪肠球菌增多为主;应用抗生素治疗后大鼠肠道肠球菌数量进一步增多,且屎肠球菌的增长超过了粪肠球菌而成为肠道优势菌群.结论 广谱抗生素使定植于肠道的正常益生菌被大量杀灭,屎肠球菌成为优势菌群,从而造成肠道微生态环境破坏.     

耐万古霉素肠球菌检测基因芯片方法的建立和验证

目的：基于基因芯片技术建立一种能快速甄别粪肠球菌、屎肠球菌及万古霉素耐药基因的检测方法。方法根据GenBank中查找的2种常见肠球菌特异性基因序列（ ddl）及万古霉素耐药基因（ vanA,vanB）序列,设计与合成用于检测肠球菌的特异性基因及耐药基因的引物和探针,制备耐万古霉素肠球菌（VRE）检测基因芯片。利用多重不对称PCR法扩增样品中的特异性基因与耐药基因片段,标记产物与基因芯片上的探针杂交,经清洗、化学发光法显色后进行结果分析。在优化的多重PCR体系、杂交反应和化学发光法检测条件下,评价芯片的特异性、灵敏性和重复性。结果共筛选出1对通用引物、4对特异性引物和1条细菌通用探针、4条特异性检测探针。该芯片具有良好的特异性和重复性,灵敏性可达103 CFU／ml。10例临床分离株样本的芯片检测结果与药敏实验基本一致（8／10）。结论初步建立了检测VRE的基因芯片方法,利用此方法可以甄别2种VRE种类并检测其耐药基因。     

头孢硫脒与三种氟喹诺酮类抗菌药物合用对革兰阳性球菌的抑制作用

目的　评价头孢硫脒分别与环丙沙星、左氧沙星和加替沙星 3种氟喹诺酮类抗菌药物联合用药 ,对于临床分离的 90株革兰阳性球菌的体外联合抗菌效应。方法　采用棋盘法设计 ,微量肉汤稀释法测定不同浓度组合的 3组抗菌药物对 90株临床分离的革兰阳性球菌 ,包括金黄色葡萄球菌 (Staphylococcusaureus,SA)、表皮葡萄球菌 (Staphylococcusepidermidis,SE)和粪肠球菌 (Enterococcusfaecalis,Ef)的抑菌浓度 ,并计算FIC指数。结果　头孢硫脒对金黄色葡萄球菌的MIC50 为 16mg·L-1,与环丙沙星、左氧沙星、加替沙星联合应用后 ,其MIC50 分别显著的降低至 2、0 .5和 1mg·L-1;头孢硫脒对表皮葡萄球菌的MIC50 为 1mg·L-1,与环丙沙星、左氧沙星、加替沙星等 3种抗菌药物联合应用后 ,其MIC50 降低至 0 .12 5、0 .2 5和 0 .12 5mg·L-1;头孢硫脒对粪肠球菌的MIC50 为 4mg·L-1,与环丙沙星、左氧沙星、加替沙星联合应用后 ,其MIC50 降低至 0 .2 5、0 .2 5和 0 .2 5mg·L-1。FIC指数分布 :FIC≤ 0 .5占 6 0 %～ 90 % ;0 .5 2为 0。结论　头孢硫脒与氟喹诺酮类 3种抗菌药物联合用药后 ,对革兰阳性球菌基本表现为协同作用和相加作用 ,并以协同作用为主 ,无关作用较     

光动力疗法对侧支根管内粪肠球菌杀灭作用的实验研究

目的:观察光动力疗法(Photodynamic therapy,PDT)对离体牙侧支根管内粪肠球菌的杀灭作用。方法:选取人类单根管离体前牙60颗,随机分为3组。常规根管预备后,在牙的近远中面距离根尖孔3mm处制备15#K锉直径(锉尖直径为150μm)的人工侧支根管,建立粪肠球菌感染模型。实验组为PDT组,以40μg/ml血卟啉单     

左氧氟沙星与头孢硫脒合用对金黄色葡萄球菌表皮葡萄球菌粪肠球菌体外抗菌活性研究

目的 评价左氧氟沙星与头孢硫脒联合应用对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和粪肠球菌的体外联合抗菌作用。方法采用棋盘法设计,微量肉汤稀释法测定其MIC值,计算FIC指数。结果左旋氧氟沙星与头孢硫脒联合应用后,左旋氧氟沙星对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、粪肠球菌、MRSA、MRSE的MIC50均有明显降低。同样,头孢硫脒对金色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、粪肠球菌、MRSA、MRSE的MIC50亦显著下降,FIC指数范围主要在0—1。结论左氧氟沙星与头孢硫脒药物联合应用,对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和粪肠球菌的体外联合抗菌作用以协同和相加为主。     

复方氢氧化钙糊剂在有窦型慢性根尖周炎根管消毒中的效果分析

目的观察复方氢氧化钙糊剂在有窦型慢性根尖周炎根管消毒中的疗效。方法将有窦型慢性根尖周炎患牙150颗随机分为A、B、C三组,A为复方氢氧化钙实验组,B为樟脑苯酚组,C为氢氧化钙盐水组,进行根管消毒暂封药7d后观察临床疗效。结果 A、B、C三组成功率分别为80%、48%、50%,AB组疗效比较(P<0.05);AC组疗效比较(P<0.05);BC组疗效比较(P>0.05)。结论复方氢氧化钙糊剂在有窦型慢性根尖周炎根管消毒中是较为理想的根管消毒方法。     

致病性耶尔森菌毒力因子YopM的研究进展

YopM蛋白是致病性耶尔森菌的毒力因子之一，本文介绍了其结构、定位及功能等方面的研究进展。YopM蛋白是一个亮氨酸丰富区(LRR)蛋白质家族的成员，其晶体结构提示它可作为蛋白质骨架与其他蛋白质相互作用。早期研究认为YopM可结合α-凝血酶，抑制凝血酶引起的血小板聚集。后来发现YopM—CyaA融合蛋白可通过Ⅲ型分泌系统定向进入真核细胞。免疫荧光定位显示YopM不但可进入宿主细胞质，而且通过小泡相关通路进入细胞核。在哺乳动物细胞内，YopM与2种靶物质PRK2和RSK1形成一种新的蛋白复合体，并激活PRK2和RSK1的激酶活性。YopM在耶尔森菌感染中的功能和致病机制有待进一步研究。     

The in vitro effect of antimicrobial photodynamic therapy with indocyanine green on Enterococcus faecalis: Influence of a washing vs non-washing procedure

IntroductionThe purpose of this study was to evaluate the in vitro effect of washing and non-washing of indocyanine green (ICG) as photosensitizer (PS) on bacterial count, biofilm formation, development and degradation of Enterococcus faecalis.MethodsThe anti-bacterial, anti-biofilm formation, anti-biofilm development and biofilm degradation of anti-microbial photodynamic therapy (aPDT) against E. faecalis was determined at concentrations of 3 to 2000 μg/mL of ICG, subject to 18 J/cm² dose of diode laser (808 nm) in washing and non-washing producers. Bacterial viability measurements and biofilm assays were evaluated by broth microdilution method and crystal violet assays, respectively.ResultsICG-mediated aPDT, using 25 to 2000 μg/mL and 50 to 2000 μg/mL showed significant reduction in E. faecalis growth when compared to the control in non-washing and washing producers, respectively (P < 0.05). Also, ICG-mediated aPDT showed a significantly inhibitory effect on biofilm formation of E. faecalis in concentration of 6 to 2000 μg/mL and 100 to 2000 μg/mL in non-washing and washing groups (P < 0.05). The biofilm development was inhibited by concentrations of 12 to 2000 μg/mL and 100 to 2000 μg/mL in non-washing and washing groups. The biofilm degradation increased from concentrations of 12 to 2000 μg/mL and 250 to 2000 μg/mL in non-washing and washing groups, respectively.ConclusionThis study shows that the application of ICG should be accompanied by laser irradiation without being washed out to achieve better result for bacterial count reduction and anti-biofilm effects.     

双歧杆菌三联活菌胶囊联合质子泵抑制药三联根除幽门螺旋杆菌的疗效观察

目的 探讨双歧杆菌三联活菌胶囊（培菲康）联合质子泵抑制药（proton pump inhibitors,PPI）三联疗法根除幽门螺旋杆菌（Helicobacter pylori,Hp）的疗效及安全性.方法 选取患糜烂性胃炎或消化性溃疡并伴有Hp感染的患者150例作为研究对象,随机分为3组：标准三联组（A组,n =50）,予以兰索拉唑（30 mg,2/d）＋阿莫西林（1.0g,2/d）＋克拉霉素（0.5g,2/d）;四联组（B组,n=50）,予以丽珠得乐（300 mg,3/d）＋标准三联;培菲康组（C组,n=50）,予以培菲康（630 mg,3/d）＋标准三联.A、B两组疗程均为7d,C组治疗7d后,继续服用培菲康14 d.结果 培菲康组对Hp根除率显著高于标准三联组（按PP分析91.5％ vs 64.4％,按ITT分析86.0％ vs 62.0％,P＜0.05）,与四联组比较无统计学差异（按PP分析91.5％ vs85.7％,按ITT分析86.0％vs 84.0％,P＞0.05）;培菲康组对患者临床症状改善明显高于标准三联组（96.0％ vs 74.0％,P＜0.05）.而与四联组相比较则无统计学差异（96.0％vs 94.0％,P＞0.05）;培菲康组不良反应发生率明显低于三联组（4.0％vs16.0％,P＜0.05）和四联组（4.0％ vs 22.0％,P＜0.05）.结论 双歧杆菌三联活菌胶囊联合标准三联疗法能明显提高Hp根除率,且能显著改善临床症状,不良反应更少.     

微重力对细菌生物学效应影响的研究进展

微重力是太空环境的重要特征之一。空间环境和地面模拟微重力均对细菌的生长、代谢、抵抗力、毒力和抗生素耐药性等造成不同程度的影响。本文就微重力对细菌上述生物学效应变化的研究和有关机制进行综述,以期为航天活动下感染性疾病的预防和治疗提供新的策略。