p16基因甲基化对非小细胞肺癌发病的影响

目的探讨p16基因甲基化对非小细胞肺癌发病的影响。方法原发性肺癌患者47例及同期无呼吸系统疾病又未患任何肿瘤同性别者94例作对照,采用甲基化特异性PCR等技术,检测p16基因甲基化。结果p16基因甲基化在肺癌组织和正常肺组织中检出率分别为44.7%(21/47)和17.0%(8/47),两者有显著差异(P<0.05)。37例非小细胞肺癌吸烟者中有21例肺癌组织发生p16基因甲基化,而10例非小细胞肺癌非吸烟者中无一例肺癌组织发生p16基因甲基化。p16基因甲基化与年龄、饮酒、肺癌病理分型及肺癌临床分期之间均无明显的相关性(P>0.05)。结论p16基因甲基化与非小细胞肺癌发生的关系非常密切,p16基因甲基化与吸烟有关。检测p16基因甲基化与否,可能有助于肺癌的诊断。     

非小细胞肺癌患者血浆DAPK基因甲基化检测及其临床意义

目的分析非小细胞肺癌(NSCLC)患者血浆中死亡相关蛋白激酶(DAPK)基因异常甲基化及其在NSCLC筛查和诊断方面的临床意义。方法用巢式甲基化特异性聚合酶链反应(nMSP)检测112例NSCLC患者癌组织、癌旁组织、外周血血浆和112例正常对照组血浆样品中DAPK基因的甲基化情况,并比较各组检测结果。结果癌组织DAPK基因甲基化率为59.8%,高于癌旁组织的8.0%(P<0.001),其中鳞癌、腺癌、腺鳞癌癌组织和癌旁组织间的甲基化检出率比较差异均有统计学意义(P<0.001);NSCLC患者血浆中DAPK基因甲基化检测率为21.4%,对照组血浆未检测到DAPK基因甲基化(P<0.001)。血浆中DAPK基因甲基化检出率与NSCLC临床分类、临床分期和病理类型无明显相关性。结论利用nMSP法对血浆样本DAPK基因甲基化检测可为非小细胞肺癌的筛查和诊断提供有价值的信息。     

非小细胞肺癌p16基因甲基化及缺失的研究

目的 研究p16基因在非小细胞肺癌组织中的甲基化和缺失情况，探讨其在肺癌诊断中的价值。方法 应用甲基化相关的PCR及双重PCR，检测50例肺癌组织和54例正常肺组织中p16基因第1外显子5′端启动子区域CpG岛甲基化及第2外显子缺失情况。结果 p16基因在非小细胞肺癌组织中甲基化率为32.0%(16/50)。缺失率为28.0%(14/50);54例正常肺组织甲基化率为3.7%(2/54)，缺失率为0，二组比较，甲基化率（Fisher's exact=0.000)及缺失率（Fisher's exact=0.000)均有显著性差异。结论 甲基化和缺失是非小细胞肺癌p16基因失活的主要形式，检测p16基因甲基化和缺失状态可能有助于肺癌的诊断。     

非小细胞肺癌中ASC基因启动子甲基化的意义

目的 :探讨非小细胞肺癌(NSCLC)中ASC基因启动子甲基化与患者临床特征之间的关系以及去甲基化试剂对肺癌细胞系中ASC基因甲基化状态的逆转。 方法 :应用甲基化特异性PCR(MSP)检测48例NSCLC患者肿瘤组织和3株肺癌细胞系中ASC基因的甲基化状态,RT-PCR检测去甲基化试剂诱导肺癌细胞系中甲基化ASC基因的重新表达。 结果 :NSCLC肿瘤组织和相对应的正常肺组中ASC基因启动子甲基化的发生率分别为49.7%和8.3%,二者之间有显著性差异(P<0.01)。重度吸烟患者的肿瘤组织中ASC基因启动子甲基化的发生率明显增高(P<0.05),早期的NSCLC(T1)中ASC基因启动子甲基化也有相对较高的发生率(P<0.05)。去甲基化试剂5-氮-2'-脱氧胞苷(5-aza-2'-deoxycytidine)可使甲基化的ASC基因启动子发生逆转而获得重新表达。 结论 :ASC基因启动子的甲基化可能与吸烟引起的非小细胞肺癌有关,并可能是非小细胞肺癌发展过程中的一个早期事件,甲基化的ASC基因可以成为NSCLC治疗的靶点。     

非小细胞肺癌DNA甲基化研究进展

基因组DNA甲基化是目前发现的最主要的一种表观遗传修饰形式,高甲基化(hypermethylation)的 DNA染色质构象发生改变,导致抑癌基因转录失活,在肿瘤发生发展中具有重要意义.近年来,DNA甲基化在肺 癌,主要是非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)的研究中取得较大进展,为NSCLC早期诊断、风险评 估、预后判断和干预治疗提供了新的靶点.     

非小细胞肺癌患者血浆RAR-β基因甲基化检测及其临床意义

检测非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer patients,NSCLC）患者组织和血浆中RAR-β基因甲基化状态,探讨RAR-β基因甲基化在NSCLC筛查和早期诊断中的临床意义。方法：选择120例NSCLC患者,用巢式甲基化特异性聚合酶链反应（nested methylation-specific PCR,nMSP）检测肺癌组织、癌旁组织和外周血血浆RAR-β基因的甲基化,并对120例正常对照组血浆样品进行RAR-β基因甲基化检测,各组检测结果进行比较。结果：肺癌组织RAR-β基因甲基化率59.2%,高于癌旁组织的17.5%（P<0.001）;NSCLC患者血浆样品中RAR-β基因甲基化检测率为27.5%,对照组血浆未检测到RAR-β基因甲基化（P<0.001）;肺癌患者血浆样品与癌组织RAR-β基因甲基化检出率有显著相关性（P<0.001）;血浆中RAR-β基因的甲基化检出率与NSCLC临床分类、临床分期和病理类型均无明显相关性。结论：利用nMSP法对血浆样本RAR-β基因甲基化的检测可为肺癌的早期筛查和诊断提供有价值的信息。     

非小细胞肺癌患者血清CDH13基因甲基化检测及意义

肺癌是全世界范围内首位肿瘤死因.由启动子异常甲基化造成的特定基因的沉默在肺癌发病机制中起重要作用.钙a附素(cadherin)是调整上皮表型和肿瘤侵袭力的细胞黏附分子.     

miR-124对非小细胞肺癌细胞增殖的影响及其机制

目的 探讨miR-124对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖的影响及其机制.方法 采用CCK8法和克隆形成实验评估miR-124对细胞增殖能力的影响.采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot检测miR-124转染后细胞内PIM3的表达水平.通过双荧光素酶报告系统检测miR-124对PIM3荧光素酶活性的影响,证实miR-124可靶向作用于PIM3的3'UTR区.采用qRT-PCR和Western blot检测si-PIM3转染后细胞内PIM3的表达情况,采用CCK8法和克隆形成实验检测沉默PIM3后对细胞增殖能力的影响.结果 ①miR-124模拟物组的细胞活性(OD值)低于其对照组,差异有统计学意义,且呈时间依赖性;miR-124模拟物组的克隆形成数明显少于其对照组.②miR-124模拟物组的miR-124过表达后,其PIM3表达低于其对照组,差异有统计学意义.③含野生型结合位点(PIM3 3'UTR区完整片段)的miR-124模拟物组的荧光素酶活性低于其对照组,差异有统计学意义;含突变型结合位点(PIM3 3'UTR区突变片段)的两组无明显差异.④si-PIM3组的PIM3被沉默后,其表达水平明显低于其对照组,差异有统计学意义;si-PIM3组的细胞活性(OD值)低于其对照组,差异有统计学意义,且呈时间依赖性;si-PIM3组的克隆形成数明显少于其对照组.结论 miR-124可通过靶向作用于PIM3的3'UTR区下调后者的表达而抑制NSCLC细胞的增殖.     

非小细胞肺癌ＳＦＲＰ１基因甲基化的研究

目的　检测ＳＦＲＰ１基因在非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）组织和血浆中的甲基化状态,分析其临床意义。方法　留取７８例ＮＳＣＬＣ患者术中癌组织、正常肺组织及术前血浆标本,２５例肺部良性病变组织及５０例肺部良性病变患者或健康志愿者血浆标本为对照,甲基化特异性聚合酶链反应（ＭＳＰ）检测ＳＦＲＰ１基因启动子区甲基化情况,并分析与临床病理特征之间的相关性。结果　７８例ＮＳＣＬＣ组织中,ＳＦＲＰ１基因启动子甲基化比例为３２.１％,高于正常组织的７.７％和２５例肺部良性病变组织的０（Ｐ＜０.０１）;ＳＦＲＰ１基因启动子甲基化与患者淋巴结转移相关（Ｐ＝０.０３９）。ＮＳＣＬＣ术前血浆ＤＮＡ中ＳＦＲＰ１甲基化比例为２８.２％,高于对照组的４.０％（Ｐ＜０.０１）,且血浆ＤＮＡ甲基化状况与组织中具有良好的一致性。结论　血浆ＤＮＡ中ＳＦＲＰ１甲基化检测可能对ＮＳＣＬＣ早期诊断有益。     

GATA4基因甲基化在早期结直肠癌诊断中的作用

[目的]检测早期结直肠癌(colorectalcancer,CRC)患者粪便中GATA4基因甲基化水平,探讨其临床价值,为CRC早期无创诊断探索新的途径.[方法]60例早期(Ⅰ+Ⅱ期)CRC患者、30例正常对照者粪便中提取DNA,采用巢式甲基化特异性PCR(nMSP)技术分析其GA TA4基因甲基化状态.同时检测60例早期(Ⅰ+Ⅱ期)CRC患者血清CEA和粪便潜血.[结果] CRC患者术前粪便标本中GATA4基因甲基化检测率显著高于正常对照组GA TA4基因甲基化检测率和CRC患者粪便潜血检测率以及CEA检测率(76.7％vs 6.7％,P=0.000;vs 48.3％,P=0.001;vs 35.0％,P=0.000),而GATA4基因甲基化检出率与患者性别、年龄和肿瘤部位无明显相关(P＞0.05).[结论] CRC早期患者粪便标本中GATA4基因甲基化检测率较高,优于粪便潜血实验和血清CEA,可作为早期无创筛查诊断结直肠癌的重要线索.     

Smad4蛋白与蛋白激酶在非小细胞肺癌信号传导通路中的作用

目的探讨Smad4在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达,研究其与有丝分裂激活的蛋白激酶（MAPK）各亚族的关系和临床意义。方法应用Western印迹分析和RT-PCR方法,检测42例手术切除的肺癌标本和正常肺组织中Smadd的表达;应用免疫组化法,检测71例肺癌蜡块标本中Smad4和MAPK的亚族p38、ERK1、JNK1的表达。对各因子进行生存分析,判断对NSCLC预后的影响。结果在肺癌组织中,Smad4蛋白和mRNA的表达均低于正常组织（P〈0．05）;p38、ERKI和Smad4的表达与病理分期有关（P=0．000;P=0．000;P=0．005）;JNK1的表达与肿瘤位置（P=0．028）和病理分期（P=0．000）有关;Smad4和p38（P=0．000）明显相关。单因素分析显示,Smad4（P=0．0001）、p38（P=0．0000）、JNK1（P=0．0208）、肿瘤分化（P=0．0059）和病理分期（P=0．oooo）与预后相关。多因素分析显示,Smad4（P=0．019）、p38（P=0．044）、肿瘤分化（P=0．003）和病理分瓤P=0．020）与预后明显相关。p38阴性而Smad4阳性的肺癌患者预后较好（P=0．000）。结论Smad4的表达在NSCLC的发生发展中可能起重要意义。在NSCLC中,ras—MAPK信号通路、转换生长因子p（TGF—p）／Smad4信号通路的主要蛋白密切相关,p38和ERK1抑制Smad4的表达。Smad4和p38可用于判断NSCLC的预后。     

EML4-ALK阳性表达非小细胞肺癌患者的临床特征及治疗现状

棘皮动物微管相关类蛋白4（EML4）与间变性淋巴瘤激酶（ALK）融合基因首次被发现存在于部分非小细胞肺癌中。该融合基因是由2号染色体上2区1带和2区3带易位形成,可以诱导肿瘤生成,而ALK 抑制剂能够拮抗其促肿瘤生成活性。本文旨在介绍EML4-ALK基因阳性表达肺癌患者的临床特征及该基因在肺癌诊断、治疗中的意义。     

人非小细胞肺癌细胞EGFR基因启动子甲基化与吉非替尼敏感性之间的相关性研究

目的 探讨EGFR基因启动子甲基化水平与人非小细胞肺癌（NSCLC）细胞株对吉非替尼敏感性之间的相关性。方法 用不同浓度吉非替尼分别作用于NSCLC细胞株HCC827、H1650、H1975、H358、H1299、A549后,CCK-8法检测细胞增殖抑制率,DNA直接测序法、实时荧光定量PCR法、免疫印迹法和甲基化特异性PCR法分别检测上述NSCLC细胞株EGFR基因突变、EGFR mRNA、EGFR蛋白表达和启动子区甲基化状态。结果 CCK-8法检测结果显示,19外显子缺失突变的HCC827细胞对吉非替尼最敏感,而同为19外显子缺失突变的H1650细胞对吉非替尼不敏感;野生型的H358细胞对吉非替尼中度敏感,其敏感性甚至超过19外显子突变的H1650细胞,而同为EGFR野生型的H1299、A549细胞对吉非替尼敏感性较差。吉非替尼处理72h后,HCC827细胞与H358细胞相比、HCC827细胞和H358细胞与其他4株细胞相比,IC50值均有显著性差异（P＜0.05）。HCC827细胞EGFR启动子为未甲基化状态,其EGFR蛋白和mRNA表达最高;H358细胞为部分甲基化,其EGFR蛋白和mRNA为中等表达;其他4个细胞株均为高甲基化状态,EGFR蛋白和mRNA呈低表达;HCC827细胞的EGFR表达水平较H358细胞高,HCC827和H358细胞的EGFR表达较其他4个细胞株高,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 EGFR基因启动子区高甲基化可能下调EGFR基因的表达水平,从而降低NSCLC对吉非替尼的敏感性;对该基因的甲基化检测可能对预测吉非替尼治疗NSCLC疗效有一定的临床指导意义。     

KIF5B-RET融合基因与非小细胞肺癌

肺癌是全世界范围死亡率最高的肿瘤。近年来,靶向治疗成为肺癌研究的热点。2012年研究发现肺癌中存在一种新的融合基因KIF5B-RET,其阳性患者多为不吸烟或很少吸烟的腺癌患者。其存在与其他已知的基因改变如EGFR、K-Ras、ALK等相互排斥,提示KIF5B-RET是一种新的致癌驱动突变,有可能成为非小细胞肺癌个体化诊断与治疗的一个分子靶点。     

Dickkopf家族蛋白在非小细胞肺癌中的作用机制和治疗应用的研究进展

非小细胞肺癌(Non-small cell lung cancer,NSCLC)占所有肺癌的80%~85%,是全世界发病率和致死率极高的恶性肿瘤。最初NSCLC对现有治疗的反应良好,但最终还是产生了耐药性。因此,有必要探索有效且新颖的治疗方法。随着对NSCLC研究的深入,发现Dickkopf家族蛋白(DKKs)的信号传导在NSCLC发展中扮演重要角色,DKKs是Wnt/β-catenin信号通路的重要调节因子,并与NSCLC细胞增殖、转移和侵袭密切相关。本文主要介绍了DKKs家族成员在NSCLC中的作用机制,讨论了DKKs在NSCLC治疗中的潜力,为进一步防治NSCLC提供了新思路。     

甘露糖对6个人非小细胞肺癌细胞系放射敏感性影响

目的 探讨甘露糖对6个人非小细胞肺癌细胞系放射敏感性的影响及其可能机制。方法 采用Western blot检测磷酸甘露糖异构酶在6个肺癌细胞系中的表达。利用MTT法观察甘露糖对肺癌细胞系的增殖抑制作用;分别给予对照组、甘露糖组0、2、4、6、8、10Gy照射,采用平板克隆形成实验检测甘露糖对6个肺癌细胞放射敏感性的影响;流式细胞术检测对照组、甘露糖组、照射组及联合组细胞的凋亡情况。结果 6个肺癌细胞系中磷酸甘露糖异构酶表达量各不相同,其中A549细胞表达量最高,H460细胞表达量最低。11.1mmol/L甘露糖对A549、H460细胞系抑制作用相同,随着甘露糖浓度增加,对H460细胞系抑制作用更显著。采用11.1mmol/L的甘露糖可明显增加H460细胞系放射敏感性及细胞凋亡率,而对A549细胞系放射敏感性和凋亡率影响不大。结论 在磷酸甘露糖异构酶高表达的6个肺癌细胞系中,甘露糖可增强部分肿瘤细胞的放射敏感性。     

Role of pemetrexed in non-small cell lung cancer

Pemetrexed was approved for the treatment of relapsed or chemotherapy refractory non-small cell lung cancer patients, as it produced similar response and survival outcomes and less toxicity as compared to taxotere. Pemetrexed in combination with platinum analogs or with gemcitabine or vinorelbine, produce equivalent responses and overall survival results compared to combinations of platinum analogs with other drugs. The role of bevacizumab and the inhibitors of epithelial growth factor receptor also should be evaluated in selected patients with NSCLC treated with pemetrexed combinations. Further increases in drug dose may be possible using transfer of drug resistance genes in hematopoietic stem cells.     

ＫＩＦ４Ａ在非小细胞肺癌中的表达及其与预后的相关性

目的　研究ＫＩＦ４Ａ蛋白在非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）组织中的表达及其与预后的相关性。方法　选取术后经病理证实的１１５例ＮＳＣＬＣ和１９例肺良性病变（５例肺结核、４例支气管扩张、６例肺大疱、４例炎性假瘤）的标本,运用免疫组化ＥｎＶｉｓｉｏｎ法检测ＫＩＦ４Ａ蛋白的表达,采用χ２检验分析ＫＩＦ４Ａ蛋白在ＮＳＣＬＣ组织和良性组织中的表达差异及ＮＳＣＬＣ中ＫＩＦ４Ａ蛋白表达与临床病理特征的相关性。采用Ｋａｐｌａｎ-Ｍｅｉｅｒ生存分析和Ｃｏｘ回归法分析ＫＩＦ４Ａ蛋白在ＮＳＣＬＣ组织中表达和预后的关系。结果　ＫＩＦ４Ａ在ＮＳＣＬＣ组织中阳性表达率为６０％,显著高于对照组的３１.６％,与Ｔ分期、淋巴结转移明显相关。生存分析提示,ＫＩＦ４Ａ阳性表达的ＮＳＣＬＣ患者预后较差（Ｐ＝０.００３）;Ｃｏｘ回归分析结果表明,ＫＩＦ４Ａ蛋白也是影响ＮＳＣＬＣ预后的独立危险因素（相对危险度１.９４４,Ｐ＝０.０３２）。结论　ＫＩＦ４Ａ蛋白在ＮＳＣＬＣ组织中的阳性表达率高于肺良性病变组织;ＫＩＦ４Ａ蛋白的高表达与ＮＳＣＬＣ患者预后相关,可以作为判断预后的参考指标。     

蛞蝓对人肺鳞癌、肺腺癌细胞抑癌作用初探

 在对肺鳞癌、乳腺癌、原发性肝癌、直肠癌手术切除标本和肺腺癌胸膜侵犯胸水中的癌细胞进行双层琼脂克隆培养和药敏试验的同时, 进行3H－胸腺嘧啶掺入试验(3H-TdR), 结果显示蛞蝓对肺鳞癌、肺腺癌细胞有明显的抑制作用:对肺鳞癌细胞的3H－TdR摄入抑制率93.08%, 与顺铂(93.33%相当；对肺腺癌克隆集落抑制率65.24%, 3H-TdR摄入抑制率46.21%, 比顺铂的34.77%和15.23%显著增高, 这一结果, 为今后进一步研究蛞蝓的抗癌作用提供了体外抑瘤的实验依据。