DMD基因和SRY基因单细胞三重及四重套式PCR技术的建立及其 …

种植前遗传学诊断（ｐｒｅｉｍｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ,ＰＧＤ）又称胚胎有遗传学诊断,是基于体外受精（ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｆｅｒｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ,ＩＶＦ）和早期胚胎活检（ｅａｒｌｙ ｅｍｂｒｙｏ ｂｉｏｐｓｙ）技术基础之上的一种新的遗传病产前诊断的方法。假肥大型肌营养不良症（ＤＭＤ／ＢＭＤ）作为,一种常见的Ｘ－连琐陷性致死性遗传病,是国标上ＰＧＤ界最早选择进入ＰＧＤ     

鼻咽癌单克隆抗体重链可变区基因的扩增

鼻咽癌单克隆抗体重链可变区基因的扩增张秋萍，林学颜（中山医科大学免疫学教研室，广州５１００８９）由于小鼠单克隆抗体ＭＣＡｂ对人体具有免疫原性，不适用于人体的常规治疗［１］，为克服这种困难，人们将杂交瘤技术和遗传工程技术结合起来制备人源化的嵌合抗体。其...     

用基因定点突变技术改建—免疫球蛋白重链可变区基因的通用表达载体

本文介绍了一种简便的、具有高突变率的基因定点突变方法。应用Bio-Rad Muta-Gene Phagemid Kit,在一装有表达载体上的抗NP(4-hydroxyl-3-nitrophenacetyl)免疫球蛋白重链可变区基因的J_a区引进BstE Ⅱ酶切位点,从而改建成一种能用于表达免疫球蛋白重链可变区基因的通用表达载体。应用该Kit,基因定点突变率达43％。     

用PCR扩增的人抗体重链Fd基因构建抗体重链基因库

用ＰＣＲ扩增的人抗体重链Ｆｄ基因构建抗体重链基因库万泽生，姜绍谆，马文煜（第四军医大学微生物学教研室，酉安７１００３２）王海涛（军事医学科学院微生物流行病研究所，北京１０００７１）我们以往报道了以人外周血Ｂ淋巴细胞的ＣＤＮＡ为模板，扩增出抗体重链可变...     

两株人单抗重链可变区基因特征分析

对采用PCR方法克隆获得的两株抗出血热病毒人单抗重链可变区基因(V_H87—2,V_HC8)进行了基因特征分析。同源性比较显示:两基因来源于不同的人抗体重链可变区家族。V_H87-2与人免疫球蛋白重链可变区第三亚组同源性最高,达87％,而V_HC8与人免疫球蛋白重链可变区第一亚组同源性最高,达71％。空间结构分析表明两个可变区具有不同空间构象:V_H87—2属人抗体重链可变区1—1类空间结构,V_HC8属人抗体重链可变区1—2类空间结构。上述分析证明,此两株人单抗重链可变区存在着基因特征及蛋白空间构象的差异。通过基因分析掌握人单抗分子特征,对指导人源性基因工程抗体的研究具有重要意义。     

新生儿免疫球蛋白重链可变区基因多样性分析

目的　构建不同胎龄新生儿IgH基因指纹图谱 ,探讨新生儿成熟度对IgH基因谱型多样性的影响 .方法提取 2 7～ 42周新生儿RNA、进行RT -PCR反应、6%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染显色 ,获得不同胎龄新生儿IgH基因指纹图谱 ,用Tiger凝胶图像分析仪进行曲线转化和分析 .结果　各家族指纹图谱转化后的曲线下面积积分值 ,在 2 8～ 3 2周、3 3～ 3 6周和 3 7～ 42周新生儿之间无差异 ;但胎龄 2 7周新生儿曲线下面积小于胎龄 2 8～ 42周新生儿 .结论　 2 8周可能是人类IgH基因谱型发育由不完善到趋于完善的一个转折点 ,2 8周到足月的新生儿IgH基因谱型发育趋于稳定     

新生儿免疫球蛋白重链可变区基因多样性分析

目的构建不同胎龄新生儿IgH基因指纹图谱,探讨新生儿成熟度对IgH基因谱型多样性的影响.方法提取27～42周新生儿RNA、进行RT-PCR反应、6%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染显色,获得不同胎龄新生儿IgH基因指纹图谱,用Tiger凝胶图像分析仪进行曲线转化和分析.结果各家族指纹图谱转化后的曲线下面积积分值,在28～32周、33～36周和37～42周新生儿之间无差异;但胎龄27周新生儿曲线下面积小于胎龄28～42周新生儿.结论 28周可能是人类IgH基因谱型发育由不完善到趋于完善的一个转折点,28周到足月的新生儿IgH基因谱型发育趋于稳定.     

早产儿与足月儿免疫球蛋白重链可变区基因异型性

目的：分析和比较早产儿和足月儿免疫球蛋白重链可变区基因中的可变区基因片段、多样化基因片段（Ｄ）和连接区基因片段的使用,ＶＨ上的体突变,在ＶＨ－Ｄ和Ｄ－ＪＨ连接点插入的ＮＭＤＮ长度以及开放性阅读框（ＯＲＦ）等特征及其差异性。方法：７例胎龄为２５－３０周的足月儿脐带单核细胞ＤＮＡ被抽提,使用套式ＰＣＲ扩增ＩｇＨ基因,扩增产物被克隆筛选和测序。结果：在早产儿,共有２０个不同的ＶＨ被使用,其中ＤＰ７３（Ｖ     

抗癌胚抗原鼠人嵌合抗体重、轻链基因在昆虫细胞中的表达

本文采用杆状病毒表达系统在昆虫细胞(Sf_9,秋粘虫细胞)中表达了抗癌胚抗原(CEA)鼠-人嵌合抗体重、轻链基因.将鼠源性单抗杂交瘤细胞中已克隆到的重、轻链可变区(V_H、Vk)基因分别与人免疫球蛋白恒定区基因Cr_3、Ck相拼接,构建鼠人嵌合抗体基因.含嵌合抗体基因的转移载体与线性化病毒DNA共转染Sf_9细胞,并通过点杂交、PCR扩增和Southern blot分析获得重组病毒.Western blot分析表明以重组病毒感染的Sf_9细胞分别表达了嵌合重链和轻链,放射免疫分析法(RIA)和间接ELISA测定的结果表明嵌合重、轻链基因表达产物具有与CEA结合的能力.     

骨髓瘤细胞免疫球蛋白重链基因可变区的研究

为分析多发性骨髓瘤 (multiplemyeloma,MM )细胞对免疫球蛋白重链基因可变区 (VH)基因家族的取用 ;根据VH 基因突变特点 ,揭示MM细胞的起源。以重链基因可变区 (VH1 VH6 )基因家族特异性引物 ,用PCR法扩增骨髓瘤细胞系CZ 1细胞和 98例MM患者外周血单个核细胞VH 基因片段 ,纯化后的PCR产物和pMD18 T载体连接并转化JM10 9细菌 ,经克隆鉴定后 ,目的DNA片段用末端双脱氧法测定DNA序列 ,和其对应的胚系基因序列比较。结果表明MM细胞对各VH 基因家族的取用顺序为VH3>VH1>VH4 >VH2 >VH5 >VH6 ;MM细胞VH 基因互补决定区 (CDR )氨基酸替换性突变 (R突变 ) /氨基酸静寂性突变 (S突变 )等于 9 6 7,而骨架区 (FR )R/S等于 0 87,而且随着疾病的进展 ,IgVH 基因并不发生进一步的突变。结论是MM前体细胞在进行VDJ基因重排时 ,对VH 基因家族的取用和基因家族相对大小有关 ;MM细胞可能起源于已经发生抗原选择和体细胞突变的B记忆细胞或前浆细胞。     

MALToma Ig重链蛋白、IgH基因重排/断裂检测的临床意义

目的探讨Ig重链蛋白、IgH基因重排/断裂在黏膜相关淋巴组织淋巴瘤(mucosa-associated lymphoid tissue lymphoma,MALToma)诊断中的应用价值。方法选取40例MALToma作为实验组,15例反应性淋巴组织增生(reactive lymphoid hyperplasia,RLH)作为对照组,应用免疫组化、PCR、FISH技术分别检测两组中Ig重链蛋白、IgH基因重排、IgH基因断裂情况。结果(1) Ig重链蛋白表达根据免疫组化结果可分为三种模式:单种Ig重链蛋白表达(模式Ⅰ)、Ig重链蛋白全阴性(模式Ⅱ)、多种Ig重链蛋白表达(模式Ⅲ)。实验组模式Ⅰ/Ⅱ的阳性率(87. 5%)显著高于对照组(0)(P 0. 01)。(2)实验组IgH基因重排、IgH基因断裂的阳性率分别为72. 5%(29/40)、32. 5%(13/40),而对照组未检出IgH基因重排、IgH基因断裂(P 0. 01,P 0. 05)。(3) Ig重链蛋白模式Ⅰ/Ⅱ和IgH基因重排联合检测以及Ig重链蛋白模式Ⅰ/Ⅱ、IgH基因重排和IgH基因断裂联合检测的阳性率均高达97. 5%。(4)在Ig重链蛋白模式Ⅱ中,有9例检出IgH基因断裂(90%);在模式Ⅰ/Ⅲ中,仅有4例检出IgH基因断裂(13. 3%),两组相比差异有统计学意义(P 0. 01)。Ig重链蛋白表达和IgH基因断裂呈正相关(rs=0. 323,P0. 05)。结论联合检测Ig重链蛋白表达模式和IgH基因重排可有效辅助鉴别MALToma和RLH; IgH基因断裂可能与Ig重链蛋白表达缺失高度相关。     

梅毒螺旋体Tpp17基因的扩增,克隆重及表达

梅毒螺旋体 (Ｔｒｅｐｏｎｅｍａｐａｌｌｉｄｕｍｓｕｂｓｐ .ｐａｌｌｉｄｕｍ ,Ｔｐ)脂蛋白 [相对分子质量 (Ｍｒ)为 17× 10 3]是一种很强的免疫原 ,感染后 1周内即可产生Ｍｒ 为 17× 10 3的抗体〔1〕。因此 ,我们用ＰＣＲ扩增Ｔｐ 17× 10 3脂蛋白基因 (Ｔｐｐ17) ,进行克隆 ,并对重组体ｐＭＡＬ Ｔｐｐ17进行了表达。材料和方法主要试剂 :ＰＣＲｍａｒｋｅｒ、蛋白质相对分子质量标准、λＤＮＡ/ＨｉｎｄⅢ ＥｃｏＲⅠ ,购自华美生物工程公司 ;溴化乙锭 (ＥＢ)、溴酚蓝、十六烷基 三甲基溴化胺(ＣＡＴＢ)、氨苄青霉素 ,购自Ｓｉｇ…     

单克隆抗体3D3重链可变区基因结构分析

单克隆抗体（ＭｃＡｂ）在科研及影像诊断等领域应用十分广泛，鼠源性单克隆抗体，由于其抗原性，在人体疾病治疗应用受到限制，利用ＤＮＡ重组技术，构建各种重组抗体基因，表达制备重组抗体，可降低其抗原性，前提是必须获得其可变区基因，我们利用设计合成的一对鼠抗体...     

基因免疫接种技术与基因免疫苗

基因免疫接种和基因免疫苗是近几年来迅速发展的研究领域，在病毒性疾病和肿瘤防治中有着广阔的应用前景。本文阐述基因免疫接种诱发宿主免疫应答的机理，概述基因免疫接种方法及做为疫苗的可行性。     

基因的定位克隆

基因的定位克隆谢久永，罗会元基因是生物性状与邀传病的决定因素，若将其从庞大的基因组（在人基因组中约有５００００～１０００００个基因）中分离出来，必有助于研究它编码的蛋白质的功能，８０年代初，主要是在基因的蛋白质产物已知的情况下，依蛋白质→ｍＲＮＡ→Ｄ...     

小儿急性白血病的免疫球蛋白重链基因VDJ区重组及其部分序列分析

在Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹法分析的基础上用ＰＣＲ方法分析了２７例小儿急性白血病细胞的免疫球蛋白重链基因ＶＤＪ区的变化。６例未分化型白血病中５例有Ｖ＿Ｈ－Ｄ＿Ｈ－Ｊ＿Ｈ基因扩增带，提示已定向Ｂ系。１３例Ｂ系来源的白血病细胞中９例发生ＶＤＪ完全重排，４例Ｂ系来源和１例未分化型白血病ＰＣＲ无阳性扩增带而Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹法有重排带。１例普通型白血病ＰＣＲ有阳性扩增带而Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹法呈胚系。在１４例阳性病例中有１例出现二条扩增带呈双克隆性。１例Ｔ细胞性白血病和７例非淋系白血病均为阴性与ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹法结果一致，对２例未分化型，２例普遍型白血病进行顺序分析，发现它们的重排格局各不相同。     

肥胖基因及其产物

肥胖基因及其产物Ｌｅｐｔｉｎ在肥胖的发生中起重要作用，人们已定位克隆了ｏｂ基因并对ｏｂ基因及其调控序列，ｏｂ基因的产物及其功能，各种因素对ｏｂ基因及其产物表达的影响等方面作了深入研究，并提出了机体调节体重的可能途径。本就以上几个方面作一综述。