新鲜和深低温保存人羊膜重建兔眼结膜的研究

目的对比新鲜与深低温保存人类羊膜重建兔眼结膜后的组织改变,分析新鲜羊膜在重建结膜中的应用价值.方法 24只新西兰白兔等分成两组.剪去双眼上方球结膜形成结膜缺损,一组右眼行深低温保存人羊膜移植,另一组右眼行新鲜人羊膜移植,两组的左眼行自体球结膜移植.于术后1、3、5、12周处死动物,每组3只,连带巩膜切除术区,进行组织学(HE和PAS)检查,12周标本行透射电镜检查.光镜下对术区炎症细胞计数,数据统计学处理.结果新鲜羊膜植片在术后早期(最少1周)自身羊膜上皮细胞存活;3周后,新鲜或保存羊膜植片皆被有杯状细胞分化的结膜上皮覆盖;12周时羊膜被吸收,植片成为正常眼表的一部分;新鲜和保存羊膜移植在术后早期炎症反应高于球结膜移植眼(p＜0.05),又以新鲜羊膜移植者略强烈(p＜0.05),但无任何治疗的情况下,皆可自行平息.结论人羊膜作为一种异种异体移植材料,可成功重建兔眼结膜.新鲜羊膜在正确取材、清洗彻底的条件下,可以与深低温保存羊膜同样应用于结膜重建.     

“去上皮”羊膜对体外培养的结膜上皮细胞的作用

目的：探讨羊膜基底膜对结膜上皮细胞形态功能的影响。方法：把“去上皮”羊膜按照基底膜或实质面向上分为两组，接种结膜上皮细胞，同样条件下培养，取培养14天的两组标本进行组织学（HE和PAS染色），透射电镜，以及免疫组化检查（包括抗角蛋白和抗波形蛋白染色）。结果：细胞72小时内贴附在羊膜上，基底膜面接种的上皮细胞顶端见微绒毛，单层排列，细胞间有丰富桥粒，基底膜完整，可见半桥粒，抗角蛋白染色阳性，抗波形蛋白染色阴性；实质面接种的上皮细胞浆内有大量脂滴，表面未见微绒毛，细胞松散堆积，与羊膜连接不紧密，未见桥粒和半桥粒，抗角蛋白染色弱阳性，抗波形蛋白染色强阴性。结论：羊膜基底膜是结膜上皮细胞体外培养的良好载体，有利于上皮细胞生长，黏附，分化，并能减缓上皮细胞老化。     

"去上皮"羊膜对体外培养结膜上皮细胞的作用

目的 :探索羊膜基底膜对结膜上皮细胞形态功能的影响。方法 :把“去上皮”羊膜按照基底膜或实质面向上分为两组 ,接种结膜上皮细胞 ,同样条件下培养。取培养 14天的两组标本进行组织学 (HE和PAS染色 ) ,透射电镜 ,以及免疫组化检查 (包括抗角蛋白和抗波形蛋白染色 )。结果 :细胞 72小时内贴附在羊膜上。基底膜面接种的上皮细胞顶端见微绒毛 ,单层排列 ,细胞间有丰富桥粒 ,基底膜完整 ,可见半桥粒 ,抗角蛋白染色阳性 ,抗波形蛋白染色阴性 ;实质面接种的上皮细胞胞浆内有大量脂滴 ,表面未见微绒毛 ,细胞松散堆积 ,与羊膜连接不紧密 ,未见桥粒和半桥粒 ,抗角蛋白染色弱阳性 ,抗波形蛋白染色强阳性。结论 :羊膜基底膜是结膜上皮细胞体外培养的良好载体 ,有利于上皮细胞生长、粘附、分化 ,并能减缓上皮细胞老化。     

羊膜为基底的小片状同种异体结膜移植治疗碱烧伤

目的 将羊膜移植与片状同种异体结膜移植相结合重建眼表。方法 新西兰白兔42只，右眼(实验组)、左眼(对照组)上方球结膜碱烧伤后24h分别行以羊膜为基底的小片状同种异体结膜移植和单纯小片状同种异体结膜移植，术后各周行印迹细胞的PAS染色、扫描电镜检查。结果 实验组植片成活率明显高于对照组(P＜0．05)。实验组术后第4周，对照组术后第5周结膜外观、杯状细胞形态数目功能均恢复正常。结论 大面积结膜碱烧伤早期应用羊膜改善异体植片的基底，有利于降低排斥反应，提高植片成活率，达到结膜结构与功能重建之目的。     

联合片状同种异体结膜移植与羊膜移植治疗早期碱烧伤

目的：探讨联合羊膜的小片状同种异体结膜移植重建眼表的可行性。 方法：新西兰白兔双眼上方球结膜碱烧伤后24h,实验组行以羊膜为基底的小片状同种异体结膜移植,对照组行单纯小片状同种异体结膜移植,术后各周行印迹细胞的PAS染色、扫描电镜检查。 结果：实验组未见明显排斥反应,全部植片成活,对照组7眼植片排斥脱落,植片成活率81．6％,明显低干实验组（P〈0．05）。实验组术后4wk,对照组术后第5wk结膜外观、杯状细胞形态、数目、功能均恢复正常。 结论：羊膜与小片状同种异体结膜移植相结合可能成为修补早期大面积结膜碱烧伤的有效途径。     

羊膜移植修复碱烧伤后结膜缺损的实验研究

目的 对羊膜移植修复碱烧伤后结膜缺损的作用机制进行研究。方法 建立碱烧伤结膜缺损动物模型。对实验组进行羊膜移植，观察羊膜生长情况，并于术后3、5、7、14、21d取活体组织进行组织学检查，结果 术后1周羊膜植片颜色接近正常结膜，组织学检查证实羊膜与创伤处结缔组织紧密结合，结膜上皮沿缝合处爬行至羊膜表面，羊膜上仅有轻微的纤维增生，无瘢痕组织形成。结论 保存人羊膜移植能有效地促进碱烧伤后结膜上皮化的进行，减少瘢痕形成，最终减少并发症的产生。     

羊膜移植眼表重建术的临床观察

目的评价保存羊膜移植重建眼表治疗眼表疾患的疗效。方法2001年7月~2004年7月我院住院的眼表疾病16例(16眼)(化学烧伤引起的睑球粘连、瘢痕性结膜囊狭窄8例,顽固性角膜上皮缺损3例,复发性翼状胬肉切除后大面积结膜缺损5例)进行单层保存羊膜移植重建眼表,术后随访6~12月,行视力及裂隙灯显微镜等眼科常规检查,观察羊膜植片及角结膜上皮愈合情况。结果所有术眼均未见羊膜植片溃烂或溶解。术后早期(1周内)羊膜植片有轻度水肿,后逐渐透明。所有术眼眼表得以重建,随访期间未见复发。结论羊膜作为一个含基膜和基质成分的胶原支架,可以使受体的结膜或角膜上皮细胞扩展及移行于其上,达到真正的结膜及角膜眼表的重建,是眼表重建术的一大进展。     

四种方法保存羊膜的组织形态学研究

目的观察4种常用的保存羊膜在不同保存期组织形态和超微结构的改变,为临床应用提供依据。方法取健康剖宫产产妇胎盘羊膜,随机分成4组保存：DMEM/甘油深低温组、纯甘油4℃组、无水酒精组、真空干燥组。于保存后1个月、3个月、12个月（DMEM/甘油组和纯甘油组）,行HE染色光镜及透射电镜检查,观察其组织形态结构变化,以新鲜羊膜作为对照。结果（1）DMEM/甘油深低温保存组：光镜示保存1个月、3个月时羊膜组织结构基本完整,12个月时上皮细胞轻度破坏;透射电镜示在保存的各个时段羊膜上皮细胞完整,胞核局部溶解,线粒体肿胀,基底膜正常;（2）纯甘油4℃保存组：光镜观察保存1个月、3个月、12个月羊膜上皮细胞结构破坏,12个月基质层结构轻度破坏;透射电镜示保存各时段羊膜上皮细胞破坏明显,但基底膜基本正常;（3）无水酒精保存组：光镜示保存1个月、3个月时羊膜组织结构较完整;透射电镜示羊膜上皮细胞胞膜破坏,胞质、胞核溶解,基底膜变薄;（4）真空干燥保存组：光镜示保存1个月、3个月羊膜上皮细胞和部分基质层结构破坏明显;透射电镜示1个月、3个月时羊膜上皮细胞胞膜完整,核均质化与溶解并存,基底膜变薄。结论4种方法中,就组织形态和超微结构而言,以DMEM/甘油深低温保存法保存效果最好,纯甘油保存法次之,无水酒精和干燥保存法差。     

新鲜羊膜移植治疗早期重症眼部烧伤

目的 探讨新鲜羊膜移植联合结膜、角膜移植对早期重症眼部烧伤的治疗效果。方法 急性重症眼部烧伤患者21例22眼，分别行羊膜移植联合结膜移植12例12眼和羊膜、结膜移植联合板层或穿透性角膜移植9例10眼。术后观察羊膜、结膜及角膜植片情况，长后随访2～16个月，平均7个月。结果 19眼羊膜植片愈合良好；20眼穹隆部结膜植片全部存活；羊膜移植联合结膜移植中10眼术后未见角膜融解，角膜缘均未见新生血管长入。羊膜、结膜移植联合板层或穿透性角膜移植，1例2眼出现轻度排斥反应，另8眼角膜植片均恢复透明。结论 新鲜羊膜移植可有效地促进上皮细胞分化移行、抑制局部的炎症反应、阻止新生血管和瘢痕形成、阻止烧伤的病理发展减轻和推迟角膜植片的排斥反应。     

邮票式同种异体结膜移植的实验研究

目的：探讨邮票式同种异体结膜移植在眼表重建中的作用。方法：新西兰白兔双眼球结膜碱烧伤后24小时，分别行邮票式（实验组）及常规大片（对照组）同种异体结膜移植，术后行印迹细胞的PAS染色，扫描电镜检查，结果：实验组植片成活率明显高于对照组（P＜0．05），成活的植片于术后第5周结膜外观，杯状细胞形态，数目和功能均恢复正常，结论：早期大面积结膜碱烧伤治疗中邮票式同种异体的结膜移植可提高植片的成活率，使缺损的结膜达到结构与功能的重建。     

不同移植手术治疗角膜缘干细胞缺损的实验研究

目的探讨以人羊膜为载体培养的角膜缘干细胞，自体及异体移植治疗全角膜缘干细胞缺损。方法制作兔眼角膜缘干细胞完全缺损3个月的模型。实验动物随机分为自体移植组和异体移植组，前者取对侧眼角膜缘组织，后者取异体兔眼角膜缘组织，均以去除上皮细胞的羊膜基底膜为载体，培养12d后行角膜缘干细胞羊膜移植术。术后观察3个月，以角膜上皮染色、角膜浑浊和新生血管3项指标进行临床疗效评定，通过病理检查评估术后角膜上皮修复情况，印迹细胞学检查移植前后角膜上皮的细胞表型。结果体外培养的兔角膜缘干细胞可在羊膜上粘附生长并增生，体外培养12d可形成复层。自体移植组和部分异体移植组术后角膜上皮逐渐愈合，透明度提高，基质细胞浸润减轻，新生血管减退或消失。印迹细胞学检查显示：移植前角膜上皮细胞PAS阳性，而移植后转为阴性；组织病理学显示：移植前角膜上皮大部分缺损，移植后呈现角膜上皮结构。部分异体移植组术后出现了免疫排斥反应。结论兔自体角膜缘干细胞羊膜移植术可重建眼表；免疫排斥反应仍是异体角膜缘干细胞羊膜移植术失败的主要原因。     

羊膜移植重建急性期严重烧伤眼表的临床研究

目的探讨羊膜重建急性烧伤期眼表面的可行性,比较新鲜和保存羊膜的疗效差异,评价手术方法及其疗效.方法全角膜Ⅲ度以上烧伤且全周角膜缘坏死的临床连续病例分别接受羊膜移植(19例20只眼)或全板层角膜移植手术(22例24只眼).19例羊膜移植患者中8例8只眼接受新鲜羊膜移植,11例12只眼接受保存羊膜移植.患者术后随访12～26个月,平均(15±2)个月.结果羊膜移植后眼表迅速稳定.新鲜羊膜移植者眼表面迅即并维持上皮化.保存羊膜移植者第2或3周才完成上皮化,且12只眼中有3只眼不能完全上皮化,最后由于持续性上皮缺损而发生羊膜融解,其后接受了板层角膜移植.眼表上皮化的术眼随着时间的延长新生血管开始沿着羊膜从角膜周边长入,羊膜被逐渐吸收.新生血管多为表浅性.新鲜羊膜多数(7/8)在术后2～8(4.3±0.8)个月、保存羊膜多数(10/12)在术后1～3(2.0±0.3)个月基本被吸收或融解(t=4.22,P<0.01).羊膜移植重建的结膜眼表均获成功,仅1例发生影响眼球运动的中度睑球粘连.板层角膜移植组22例(24只眼)均保全眼球,但在术后大多发生角膜植片上皮反复脱落,最终植片新生血管化,其中4只眼由于角膜植片融解而接受植片更换,7只眼因植片上皮持续性缺损而行睑缘缝合术,5只眼发生轻中度睑球粘连.在无合并青光眼和白内障的患者中,羊膜移植术后的视力基本保留了眼前手动,而板层角膜移植者则多见眼前指数.结论羊膜尤其新鲜羊膜的移植可以减轻角膜急性烧伤期的炎症反应,阻止眼表的进行性溃烂和融解,加速眼表的稳定;同时减少角膜新生血管的形成,并在相当长的时间内将其局限在角膜周边部,从而为后续的角膜复明手术打下良好的基础.     

羊膜移植在翼状胬肉术中的应用

目的观察保存人胎盘羊膜移植在翼状胬肉切除术后结膜重建及防止翼状胬肉复发中的疗效。方法对117例（143眼）翼状胬肉行广泛切除后，用保存人羊膜移植修补。结果术后2～3天角膜上皮修复，2～3周结膜血管化完成，与正常结膜不易区分。随访观察2～24月，治愈率91％。结论翼状胬肉切除联合羊膜移植术可有效地降低复发率。     

羊膜移植联合丝裂霉素C在复发性翼状胬肉手术中的应用

目的探讨复发性翼状胬肉手术中采用羊膜移植联合丝裂霉素C的临床疗效。方法复发性翼状胬肉21例（21眼）,彻底切除胬肉和粘连组织后,巩膜创面上应用丝裂霉素C,并分别将羊膜覆盖固定在巩膜及角膜创面。结果角膜创面覆盖的羊膜组织1周内松解脱落,角膜上皮愈合。巩膜创面羊膜植片到术后14~20 d才结膜化。术后随访1~2 a无复发者。结论复发性翼状胬肉采用羊膜移植联合丝裂霉素C是一种有效的手术方法。     

Reconstruction of ocular surface with heterologous limbal epithelium and amniotic membrane in a rabbit model

PURPOSE: To report in vivo reconstruction of the ocular surface using amniotic membrane and heterologous transplants of epithelial limbal cells in rabbits with chemical burns. METHODS: After severe damage to the ocular surface with n-heptanol and keratectomy, 15 rabbits developed total limbal deficiency with conjunctival epithelialization, vascularization, and chronic inflammation. One month later, a complete keratectomy was performed in all eyes: 12 received additional transplantation of human amniotic membrane and heterologous limbal epithelial cells in a double amniotic membrane layer, 2 received amniotic membrane only, and 1 control eye received no procedure. RESULTS: After 1 month of follow-up, corneas in eight of the operated eyes presented minimal vascularization, without signs of rejection. Corneal surface reconstruction was demonstrated with the growth of new corneal-like epithelial phenotype and integration of amniotic membrane to the basal corneal surface. A superficial amniotic membrane (with the amnion side up as a dressing) peeled off after 7 to 10 days. The epithelialization with heterologous limbal epithelial cells was evident underneath. The other four operated eyes were followed for 6 months; the ocular surface was also stable with a corneal-like epithelial phenotype. CONCLUSION: Simultaneous transplantation of amniotic membrane and heterologous limbal epithelial cells in severe ocular surface disorders could restore ocular surface and may be useful in patients with severe bilateral limbal epithelial loss, giving new perspectives for the treatment of severe ocular surface disorders.     

新鲜和保存羊膜移植重建结膜眼表的临床对比研究

目的：比较新鲜羊膜和保存羊膜治疗睑球粘连的疗效差异，分析影响疗效的因素。方法：共51例55只眼因陈旧性化学伤、热烧伤或Stevens—Johnson综合征而发生睑球粘连的临床连续病例接受睑球粘连分离联合新鲜羊膜移植（22只眼）或保存羊膜移植（33只眼）。其中男30例32只眼．女21例23只眼。年龄4～51岁．平均（34．2±4.3）岁。其中11只眼在烧伤后5～11个月，平均（7．4±1．6）个月时接受手术，40只眼在烧伤后1～8年，平均（2．0±0．7）年进行手术。结果：术后随访12-32个月，平均（19．3±4．1）个月。所有移植存结膜眼表面的羊膜（包括新鲜羊膜）植片在术后早期均未见溃烂和溶解，周边对合良好。31／55（56．4％）只眼形成了足够深的穹窿部且恢复了眼球运动功能。9／55（16．4％）只眼发生部分睑球粘连，眼球运动轻度受限，但其面积远较术前为小。15／55（27.3％）眼术后发生中度以上的睑球粘连。新鲜羊膜和保存羊膜重建眼结膜表面的效果相似（X2=0．466，P=0．797）；不同程度睑球粘连的患者其羊膜移植术后的效果不同（新鲜羊膜．X2=27．995，P=0．000；保存羊膜，X2=33．610，P=0．000）；在眼表烧伤后1年内手术比1年以上进行羊膜移植的效果也不同（X2=4、243，P=0．039）。结论：新鲜羊膜和保存羊膜一样可以有效地用于重建睑球粘连解除后的结膜眼表。患眼术前睑球粘连程度以及烧伤后其眼表炎症是否处于安静状态等因素都会直接影响羊膜移植重建眼结膜表面的远期疗效。     

甘油长期冷冻保存巩膜及羊膜治疗义眼座暴露

目的:了解甘油长期冷冻保存的巩膜及羊膜在治疗羟基磷灰石义眼座暴露中的效果。方法:羟基磷灰石义眼座植入术后暴露的患者13例13眼,对暴露区清创后以甘油长期冷冻保存的巩膜及羊膜进行修补,术后随访6～12mo,观察巩膜血管化及羊膜上皮化时间。结果:羊膜植片在术后1wk内上皮化13例13眼,巩膜植片在术后10d左右出现血管化,无结膜囊狭窄及义眼座再暴露。结论:甘油长期冷冻保存的巩膜及羊膜用于修补羟基磷灰石义眼座暴露成功率高,修复快,效果较好。     

羊膜移植治疗复发性翼状胬肉临床观察

目的：观察羊膜移植治疗复发性翼状胬肉的疗效。方法：共治疗复发性翼状胬肉60只眼。按常规方法切除胬肉组织,巩膜裸露区采用保存的人着膜移植。结果：随访1年,56只眼角膜透明,无新生血管及结膜样组织增生,巩膜区结膜覆盖良好,充血消失。手术成功率93%,4只眼翼状胬肉复发（7%）。结论：羊膜移植治疗复发性翼状胬肉有独特疗效,治疗愈率高,复发率低,是目前较为理想的手术方法。     

人羊膜作为载体体外培养兔角膜上皮细胞移植治疗碱烧伤动物的实验研究

目的观察培养生长于人羊膜的兔角膜上皮细胞使其扩增并移植治疗角膜碱烧伤的效果。为培养角膜上皮细胞移植技术及应用于临床实践提供最佳的理论和实验依据。方法新西兰白兔30只（30眼）,随机分为3组（n=10）,右眼制成碱烧伤模型。A组：角膜上皮细胞羊膜移植组;B组单纯羊膜移植组;C组为对照组（碱烧伤后不作任何移植）。术后观察角膜透明度、角膜新生血管及上皮修复情况,裂隙灯显微镜照相记录。3组均于术后1周、2周、1个月及3个月时各取1眼角膜标本行病理组织检查。结果A组除1眼移植片在第7天脱落外,所有移植片在术后3d水肿消退,角膜逐渐透明。B组移植片持续水肿,眼前段炎性反应稍重,但较碱烧伤对照组轻。C组角结膜高度水肿浑浊,烧伤后观察3个月未发现角膜恢复透明现象。病理组织检查显示：A组角膜及周边上皮细胞为多层结构,角膜新生血管消失,基质的炎性细胞浸润减退;B组覆盖上皮细胞表现为完整上皮细胞型,C组角膜浑浊,新生血管及肉芽组织形成。结论人羊膜作载体体外培养兔角膜上皮细胞移植重建角膜基底膜和角膜上皮结构治疗兔碱烧伤后的角结膜损伤是一种合理有效的方法。