榄香烯体外和体内抑制人胃癌SGC―7901细胞株的增殖作用及机制

目的观察榄香烯对人胃癌SGC-7901细胞株体外和体内增殖、抑制及凋亡的作用,并探讨其可能的作用机制。方法采用不同药物对培养后的人胃癌SGC-7901细胞株进行处理并分为4组：对照组、榄香烯组、细胞外信号调控的蛋白激酶1/2（ERK1/2）信号通路抑制剂PD98059组和榄香烯+PD98059联合组;再将20只雄性裸鼠随机分为4组：甲组（腹腔注射0.9%氯化钠注射液）、乙组（腹腔注射榄香烯最大耐受剂量200mg/kg）、丙组（腹腔注射PD98059最大耐受剂量1mg/kg）、丁组（腹腔注射最大耐受剂量榄香烯+PD98059）,均制作胃癌移植瘤模型,并腹腔注射不同药物进行治疗。观察榄香烯和PD98059对细胞株相关蛋白的表达情况及裸鼠胃癌移植瘤的大小及对裸鼠生长的影响。采用MTT法检测细胞增殖情况,Western-blot法检测ERK1/2、磷酸化细胞外信号调控的蛋白激酶1/2（p-ERK1/2）、p38丝裂原活化蛋白激酶（p38）、磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶（p-p38）的表达,real-timeRT-PCR检测Bcl-2mRNA及BaxmRNA的表达,TUNEL法检测胃癌细胞凋亡并计算凋亡指数。结果与对照组相比,榄香烯组随药物浓度的增加,p-ERK1/2表达增加（P＜0.05或0.01）,BaxmRNA的表达增加（均P＜0.01）,Bcl-2mRNA的表达降低[除榄香烯0.02mg/ml外,其他浓度均具有统计学差异（均P＜0.01）],而总ERK1/2的表达无明显变化（均P＞0.05）;榄香烯、PD98059及榄香烯+PD98059对胃癌细胞增殖均具有抑制作用（均P＜0.05）,且两药联合的抑制作用最好;榄香烯、PD98059及榄香烯+PD98059组细胞凋亡率均高于对照组（P＜0.05或0.01）,并具有浓度依赖性,且两药联合组的凋亡率明显高于单一用药组（均P＜0.05）;乙、丁两组移植瘤的瘤重均较甲组明显减小（P＜0.05或0.01）,且两药联合时抑瘤率达75.59%。结论榄香烯对肿瘤细胞具有抑制作用,且可能是通过上调p-ERK1/2和p-p38蛋白的表达促进胃癌细胞和移植瘤的凋亡,另榄香烯与PD98059联合使用时对肿瘤细胞及组织具有协同抑制效应。     

三氧化二砷对人子宫内膜癌移植瘤的影响

目的：探讨三氧化二砷（aresenic trioxide,AS2 O3）对裸鼠荷人子宫内膜癌皮下移植瘤的生长抑制作用及作用机制。方法建立裸鼠荷人子宫内膜癌 HEC-1-A 细胞移植瘤动物模型,随机分为5组,A 组（AS2 O34mg· kg-1·d-1）、B 组（AS2 O36mg·kg-1·d-1）、C 组（AS2 O38mg·kg-1·d-1）、D 组（顺铂3mg·kg-1·d-1）、阴性对照 E 组（生理盐水组）,腹腔连续给药14d,计算瘤体积和瘤质量抑制率,观察用药前后裸鼠体质量改变。结果A、B、C、D 组肿瘤体积抑制率分别为50．97％、75．58％、56．92％、52．23％,肿瘤质量抑制率分别为10．15％、29．33％、16．67％、14．69％,与 E 组比较差异均有统计学意义（P ＜0．05）。用药前后 AS2 O3各组体质量变化不明显,而 D 组裸鼠体质量变化差异有统计学意义。结论 AS2 O3对鼠荷人子宫内膜癌移植瘤的生长有抑制作用,且治疗剂量的AS2 O3对子宫内膜癌异种移植瘤的抑制作用强于顺铂,而不良反应弱,因此 AS2 O3有希望成为一种新型的子宫内膜癌治疗药物。     

塞来昔布对人结肠癌裸鼠移植瘤的抑制作用及其机制

目的 研究不同剂量环氧化酶-2(COX-2)抑制剂塞来昔布对人结肠癌裸鼠移植瘤生长的影响及机制.方法 将人结肠癌HT-29细胞注射于裸鼠背部皮下建立移植瘤模型,16 d后,将裸鼠以随机数字表法分为5组:对照组、塞来昔布1组(25 mg·kg-1·d-1)、塞来昔布2组(50 mg·kg-1·d-1)、塞来昔布3组(75 mg·kg-1·d-1)、塞来昔布4组(100 mg·kg-1·d-1),并给予相应剂量的塞来昔布.每周测量肿瘤体积,给药35 d后,处死裸鼠,切取移植瘤组织检测COX-2,survivin表达, VEGF mRNA表达和微血管密度(MVD).结果 塞来昔布1、2、3、4组的抑瘤率分别为34.94%、39.20%、53.50%、59.20%,与对照组比较移植瘤体积明显缩小(P<0.05).与对照组比较,塞来昔布各组COX-2、survivin的表达水平均明显降低(P<0.05),并且抑制程度呈药物剂量依赖性.低剂量(25 mg·kg-1·d-1)塞来昔布可明显抑制VEGF mRNA表达和结肠癌移植瘤微血管生成(P<0.05,vs对照组),其抑制作用并未随用药剂量的增加而增强.结论 不同剂量的塞来昔布均能明显抑制结肠癌移植瘤的生长,其抑制作用呈用药剂量依赖性,这种作用可能是通过抑制survivin的表达实现的.低剂量塞来昔布可抑制人结肠癌裸鼠移植瘤微血管生成,可能对防止肿瘤转移起到重要作用.     

PD98059联合顺铂对卵巢癌细胞增殖的影响

目的   观察MEK1/2特异性抑制剂PD98059联合顺铂对卵巢癌SKOV3细胞增殖的影响。 方法   按不同处理因素对卵巢癌SKOV3细胞分组：空白对照组、单纯PD98059组、单纯顺铂组、联合用药组。CCK-8法检测各组细胞的增殖抑制率。实时定量PCR检测各组细胞含有WW结构域的氧化还原酶(WWOX)和细胞外调节蛋白激酶(ERK)在基因水平的表达。Western-blot检测各组细胞磷酸化ERK1/2（p-ERK1/2）蛋白的表达。光镜下观察各组细胞的生长状态及形态学改变。流式细胞术检测各组细胞的凋亡情况。结果   联合用药组细胞增殖抑制率明显高于其他各组（P＜0.05）;单纯顺铂组及联合用药组WWOX mRNA表达量较空白对照组明显增加（P＜0.05）,单纯PD98059组WWOX表达量无明显改变（P＞0.05）;ERK mRNA在各组间的表达无明显变化（P＞0.05）;与空白对照组相比,p-ERK1/2表达量在单纯PD98059组及联合用药组中明显降低(P＜0.05),在单纯顺铂组的表达无明显变化。光镜下可观察到空白对照组及单纯PD98059组细胞生长状态好,细胞密集,无明显形态学改变;单纯顺铂组及联合用药组贴壁细胞少,细胞稀疏,联合用药组部分细胞出现胞浆溶解样改变。结论   PD98059联合顺铂可能通过调控WWOX基因表达及ERK通路,对卵巢癌细胞增殖产生较强的抑制作用。     

卡铂对子宫内膜癌裸鼠皮下移植瘤生长及Tie2基因表达的影响

目的:研究卡铂对子宫内膜癌裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用及对肿瘤组织中酪氨酸激酶受体(Tie2)的影响.方法:应用扩增培养的Ishikawa细胞株建立子宫内膜癌裸鼠皮下移植瘤模型.随机将10只成瘤裸鼠分为卡铂化疗组(化疗组)和空白对照组(对照组),分别应用伯尔定注射液(25.0 mg·kg-1)和5%葡萄糖(0.2 ml·只-1)瘤体内注射治疗,观察移植瘤体积及瘤体质量变化,计算抑瘤率;实时定量PCR和蛋白质印迹法检测移植瘤组织中Tie2 mRNA和蛋白表达.结果:化疗组移植瘤体积为(175.99±29.57)mm3,对照组为(521.05±76.36)mm3,两组比较差异有统计学意义(P＜0.05);化疗组肿瘤质量较对照组减轻(P＜0.001);化疗组抑瘤率为66.22%±6.15%.化疗组Tie2 mRNA及蛋白表达水平均低于对照组(分别为P＜0.05、P＜0.001).结论:卡铂具有抑制子宫内膜癌裸鼠皮下移植瘤生长的作用,肿瘤组织中Tie2的表达受到抑制,提示其在抗肿瘤过程中可能具有抗血管生成的作用.     

重组人生长激素对裸鼠胃癌移植瘤生长及血清VEGF浓度的影响

目的:研究重组人生长激素(rhGH)对裸鼠人胃癌移植瘤生长及血清VEGF水平的影响。方法:取60只雄性裸鼠进行实验,通过免疫细胞化学染色法检测胃癌细胞株SGC-7901及MKN-45生长激素受体(GHR)的表达状况,将GHR阳性表达的胃癌细胞株SGC-7901及GHR阴性表达的胃癌细胞株MKN-45分别接种于4只裸鼠皮下,制作裸鼠胃癌皮下移植瘤模型,3周后取出移植瘤制成组织匀浆,接种于剩余52只裸鼠。依据接种细胞种类不同分为移植瘤GHR阳性表达和GHR阴性表达裸鼠,不同GHR表达的裸鼠进一步分为对照组(C组:予0.9%NaCl,0.2 ml.d-1)、rhGH低剂量组(L组:予rhGH0.5 U.kg-1.d-1)、rhGH高剂量组(H组:予rhGH2.5 U.kg-1.d-1),连续给药14 d,观察并记录各组裸鼠体重和肿瘤体积变化,酶联免疫吸附法测定血清VEGF含量。结果:SGC-7901为GHR阳性表达的人胃癌细胞株,MKN-45为GHR阴性表达的人胃癌细胞株。对于接种GHR阳性表达的人胃癌细胞株的裸鼠,rhGH给药组皮下移植瘤体积较对照组增大(P<0.05),且H组促增长效应显著(P<0.05),3组...     

熊果酸体内抗肺癌作用机制探讨

目的：探讨熊果酸对人肺癌裸鼠移植瘤的抑制作用及其机制。方法:采用人肺腺癌A549细胞株进行裸鼠移植瘤实验。通过移植瘤生长曲线、终末瘤重计算抑制率观察熊果酸对人肺癌裸鼠移植瘤的抑制作用，采用免疫组化法检测VEGF蛋白表达、微血管密度，TUNEL检测凋亡指数，探讨其作用机制。结果:实验组用药后移植瘤生长缓慢，实验结束时，实验组瘤重及瘤体积明显低于对照组（P＜0.05），抑瘤率为51.35％。实验组移植瘤组织微血管密度及VEGF蛋白表达明显低于对照组（P均＜0.01），实验组癌细胞凋亡指数高于对照组(P＜0.01)。结论:熊果酸对裸鼠肺腺癌移植瘤生长有抑制作用，其机制可能与降低移植瘤促血管生成因子VEGF的表达、抑制新生血管的形成和促进肿瘤细胞凋亡有关。     

水通道蛋白抑制剂乙酰唑胺抑制人结肠癌裸鼠移植瘤生长的实验性研究

目的 研究水通道蛋白抑制剂乙酰唑胺抑制人结肠癌裸鼠移植瘤的生长及其作用机制.方法 建立人结肠癌裸鼠移植瘤模型,分为实验组和对照组,实验组给予乙酰唑胺40mg/(kg·d)灌胃给药,对照组灌胃给予同体积灭菌蒸馏水,定期测量肿瘤结节的长、短径.给药21 d后,观察治疗效果.同时,采用Western blot、RT-PCR技术分析两组肿瘤组织中水通道蛋白-1蛋白和mRNA的表达变化.结果 乙酰唑胺40 mg/(kg·d)灌胃给药治疗人结肠癌裸鼠移植瘤,明显抑制了肿瘤的生长,肿瘤抑制率为88.28%.实验组与对照组相比,水通道蛋白-1蛋白和mRNA的表达明显减少(P＜0.01).结论 水通道蛋白抑制剂乙酰唑胺通过抑制水通道蛋白-1抑制人结肠癌裸鼠移植瘤的生长.     

恶性肿瘤

051083沙立度胺对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤血管生成的影响李文…∥中华妇产科杂志.—2005,40(3).—186～189探讨沙立度胺对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤生长及血管生成的影响。方法:建立15只人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型,随机分成3组:(1)Thd组:腹腔内注射Thd(200mg·kg-1·d-1,浓度为62.5mg/L);(2)Thd+环磷酰胺(CTX)组:按上述Thd剂量,加入浓度为100mg/L的CTX(100mg·kg-1·d-1),腹腔内注射;(3)生理盐水组:腹腔内注射0.2ml生理盐水。观察各组裸鼠皮下移植瘤生长情况、裸鼠体重的变化,并采用RT-PCR、酶联免疫吸附法、及Picture二步免疫组化…     

水杨酸钠对小鼠下丘核NGB mRNA和蛋白表达的影响

目的 观察水杨酸钠对小鼠下丘核NGB mRNA和蛋白表达的影响.方法 将48只成年健康昆明小鼠平均分成4组,A组:对照组;B组:水杨酸钠组(200 mg·kg-1·d-1);C组:水杨酸钠组(300mg·kg-1·d-1);D组:水杨酸钠组(450 mg·kg-1·d-1).给药15d后处死动物,采用RT-PCR检测小鼠下丘核区NGBmRNA的表达;Western-Blot分析NGB蛋白表达.结果 ①对照组小鼠下丘核区NGB mRNA表达明显高于3个水杨酸钠组(P＜0.01);3个水杨酸钠组NGB mRNA表达比较以D组表达最低,B组表达最高,C组与D组比较有显著性差异(P＜0.05).②Western-Blot检测结果 显示实验各组均表达相对分子量约为17KDa的NGB蛋白.A组NGB蛋白表达明显高于其它各组;3个水杨酸钠组以B组表达最高,D组表达最低.结论 水杨酸钠可显著降低下丘核神经元NGB mRNA和蛋白表达,其影响与给药剂量有关.     

柴胡疏肝散及其拆方对慢性应激抑郁大鼠模型海马组织ERK1/2 mRNA表达的影响

目的:探讨柴胡疏肝散及其拆方的抗抑郁作用及机制.方法:将SD大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、全方干预组、拆方干预I组和II组、氟西汀对照组.采用慢性轻度不可预见性应激配合孤养复制抑郁模型;运用敞箱试验和蔗糖水消耗实验观察大鼠行为改变;荧光实时定量PCR(FQ-PCR)检测各组大鼠海马组织细胞外调节蛋白激酶(extr...     

降钙素基因相关肽对血管平滑肌细胞脂质代谢及AMPK的影响

目的观察降钙素基因相关肽（CGRP）对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导血管平滑肌细胞（VSMC）增殖过程中细胞脂代谢的影响,探索影响脂代谢的腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）信号蛋白在该作用中的变化。方法贴块法体外培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞（VSMC）,取第3-10代用于实验。分别用CGRP或／和AngⅡ处理细胞。细胞计数法观察CGRP对AngⅡ诱导大鼠VSMC增殖的影响;油红O染色检测细胞内脂质含量;Western blot检测细胞p-AMPK、p-ERK1／2的表达。结果CGRP预处理能减少AngⅡ诱导的大鼠VSMC数目（P〈0．05）和细胞内脂质聚集的作用,在此过程中伴随细胞内p-AMPK、p-ERK1／2表达下调（P〈0．05）;CGRP8—37（CGRP受体拮抗剂）能拮抗CGRP对AngⅡ促增殖和脂代谢作用（P〈0．05）;PD98059（ERK1／2抑制剂）能部分拮抗CGRP对p—AMPK的抑制作用（P〈0．05）。结论CGRP能显著降低AngⅡ诱导大鼠VSMC增殖过程中的脂质代谢,其细胞内信号通路可能涉及到p—ERK1／2和p—AMPK信号蛋白。     

氟伐他汀对高糖诱导的大鼠系膜细胞ERK1/2和CTGF表达的调控

目的：观察氟伐他汀对高糖刺激下的大鼠系膜细胞ERK1/2活性及CTGF表达的影响,阐明糖尿病肾病(DN)的发生机制和早期防治。方法：实验分两部分,第一部分为重复已有的高糖对系膜细胞刺激作用的实验,验证高糖可通过激活ERK通路使系膜细胞结缔组织生长因子(CTGF)蛋白表达增加,且这种变化与高渗状态无关,分组如下：①正常对照组(NG);②高糖组(HG);③高渗组(MN);④NG+ERK抑制剂PD98059组(NG+PD);⑤HG+ERK抑制剂PD98059组(HG+PD)。第二部分观察氟伐他汀干预前、后ERK1/2活性和CTGF蛋白表达的变化,分组如下：①正常对照组(NG);②高糖组(HG);③正常糖+氟伐他汀组(NG+F);④高糖+氟伐他汀组(HG+F);⑤高糖+氟伐他汀及甲羟戊酸组(HG+F+M)。采用Western blotting、RT-PCR方法检测肾小球系膜细胞ERK1/2、CTGF蛋白及mRNA表达量,ELISA方法检测肾小球系膜细胞培养上清纤维连接蛋白（FN）含量,用考马斯亮兰法测定肾小球系膜细胞内总蛋白变化。结果：第一部分实验HG的ERK1/2活性、CTGF蛋白表达较NG明显增加(P<0.01),HG+PD的ERK1/2活性、CTGF蛋白表达较HG明显减少(P<0.01),而MN、NG+PD与NG比较差异无显著性。第二部分实验观察到HG的大鼠系膜细胞ERK1/2活性、CTGF蛋白及mRNA表达量较NG明显增高(P<0.01),且系膜细胞内总蛋白量和FN量明显增高(P<0.01);HG+F的ERK1/2 活性和CTGF mRNA及蛋白的表达较HG明显减少(P<0.01),同时系膜细胞内总蛋白量和FN量减少(P<0.01);HG+F+M的上述指标与HG+F比较差异无显著性。结论：氟伐他汀可能通过抑制ERK1/2活性降低肾小球内CTGF表达及FN含量,减轻肾小球肥大,起到抑制和延缓DN进展的作用。     

钒化钠对人食管癌细胞系EC109 ERK1／2胞内信号转导的影响

目的：探讨钒化钠对人食管癌细胞系EC109 MAPK信号通路中ERK1／2表达的影响。方法：用半定量Western--blot方法检测ERK1／2蛋白的表达水平。结果：一定浓度的钒化钠对食管癌细胞系EC109 MAPK信号通路中ERK1／2表达有抑制作用。结论：一定浓度的钒化钠能明显抑制食管癌细胞系EC109细胞株的生长，钒化钠的抗肿瘤机制可能与ERK1／2蛋白表达水平降低有关。     

香菇多糖的体外抗肿瘤活性研究

目的:研究香菇多糖体外抗肿瘤活性.方法:MTY法观察香菇多糖对胃癌细胞株SGC-7901增殖的影响,流式细胞术分析其对SGC-7901细胞周期的影响,Western blot法检测其对ERK1/2蛋白激酶磷酸化的作用.结果:香菇多糖能够显著抑制SGC-7901胃癌细胞的生长.香菇多糖作用于SGC-7901胃癌细胞后能够...     

ERK1/2抑制剂对高糖高胰岛素诱导的肥大心肌细胞的影响作用

目的：探讨体外培养中ERK1/2抑制剂对高糖高胰岛素诱导的心肌细胞的肥大是否具有抑制作用。方法：新生Wistar大鼠心肌细胞在含有10%小牛血清的DMEM中培养72h后，换用无血清培养基并分别加入高糖高胰岛素、高糖高胰岛素+ERK1/2抑制剂培养48h，未加入任何药物的心肌细胞在无血清培养基中继续培养48h作为对照。检测心肌细胞肥大指标：心肌细胞表面积、总蛋白含量的变化；并检测心肌营养素1（CT-1）mRNA的表达。结果：高糖高胰岛素可增加心肌细胞表面积、总蛋白含量以及CT-1 mRNA表达。ERK1/2抑制剂可部分抑制心肌细胞的肥大，降低心肌细胞表面积和总蛋白含量，但对CT-1 mRNA表达的影响不明显。结论：ERK1/2抑制剂对高糖高胰岛素诱导的心肌细胞肥大具有一定的抑制作用，其作用机制可能是ERK1/2抑制剂通过作用于CT-1下游或独立于CT-1之外的信号分子而参与了高糖高胰岛素诱导心肌细胞肥大的过程。     

ERK1/2信号通路在OX-LDL诱导的血管平滑肌细胞TLR4 mRNA表达中的作用

目的探讨ERK1/2信号通路在氧化性低密度脂蛋白（OX-LDL）诱导的血管平滑肌细胞（VSMCs）Toll样受体-4（TLR4）mRNA表达中的作用。方法采用贴块法培养大鼠VSMCs,在氧化低密度脂蛋白（OX-LDL）及PD98059（ERK1/2特异性抑制剂）作用下采用RT-PCR检测VSMCs TLR4 mRNA的表达,用Westernblotting检测ERK1/2磷酸化水平的变化。结果OX-LDL使VSMCs ERK1/2磷酸化水平升高;PD98059抑制ERK1/2的磷酸化;OX-LDL刺激VSMCs上调TLR4 mRNA的表达（P〈0.05）;PD98059预孵育后TLR4 mRNA的表达较单独OX-LDL刺激情况下降低（P〈0.05）。结论OX-LDL通过或部分通过ERK1/2信号通路介导VSMCs TLR4 mRNA的表达。     

玻璃体内注射谷氨酸导致大鼠视网膜Müller细胞内ERK1/2磷酸化水平增高

目的: 观察大鼠玻璃体内注射谷氨酸后视网膜Müller细胞内ERK1/2分子的磷酸化水平,为探讨ERK1/2通路的激活在谷氨酸毒性损伤视网膜时的保护作用提供形态学证据.方法: SD大鼠18只,随机分为生理盐水对照组、谷氨酸注射后3 d组和7 d组,每组6只.随机选取大鼠的一只眼进行玻璃体内注射,实验组注射谷氨酸(375 nmol) 2μL, 对照组注射等量生理盐水,注射后3或7 d后,取出眼球作冰冻切片,采用免疫组化法显示视网膜中的含磷酸化ERK1/2的阳性结构,用图像分析比较对照组和不同实验组的平均灰度值.结果: 注射谷氨酸7 d组的视网膜Müller细胞内ERK1/2表达上调,其灰度值(97.00±2.21)比对照组灰度值(128.00±3.23)和注射谷氨酸3 d组的灰度值(126.00±4.12)均低(P<0.05),与这两组的灰度值之间差异有显著性.结论: 玻璃体内注射谷氨酸导致大鼠视网膜Müller细胞激活,ERK1/2磷酸化水平增高,ERK1/2通路的激活可能在视网膜节细胞受到兴奋性毒性损伤时起到重要的保护作用.     

抑郁症中腺苷对ERK1/2影响的研究进展

抑郁症的病因和发病机制至今不明。单胺假说是目前大多数人所接受的抑郁症的发病理论,但其又无法解释抗抑郁药的延迟效应。所以,近年来更多的研究指向受体的细胞内信号转导机制。由于单胺类神经递质的受体多是G蛋白耦联受体,所以早期更多的研究集中在cAMP信号转导通路。随着神经生物学和遗传学的发展,对细胞内信号转导通路已经扩展到PI、MAPK/ERK等多种信号转导通路。本文就腺苷及其受体、ERK1/2在抑郁症中的研究进展做一综述。