去甲二氢愈创木酸抑制宫颈癌SiHa细胞的生长与上调p21基因组蛋白乙酰化相关性的研究

目的:研究去甲二氢愈创木酸(nordihydroguaiaretic acid, NDGA)对宫颈癌SiHa细胞增殖的影响及作用机制.方法:MTT法检测NDGA对SiHa细胞生长的影响,FCM法检测NDGA对SiHa细胞周期及凋亡的影响,RT-PCR检测NDGA对p21基因转录的影响,Western印迹法检测NDGA对组蛋白H3总乙酰化水平的影响,染色质免疫沉淀(chromatin immunoprecipitation,ChIP)-PCR法检测NDGA对p21基因近启动子区域组蛋白H3乙酰化的影响.结果:NDGA能明显抑制SiHa细胞的生长,且呈时间和剂量依赖性;可使SiHa细胞的细胞周期阻滞于G1期,而凋亡率却下降;能明显提高p21基因的转录水平和组蛋白H3的总乙酰化水平,ChIP-PCR检测结果表明NDGA可明显促进p21基因近启动子区域组蛋白H3的乙酰化水平.结论:NDGA促进p21基因近启动子区域及细胞内总体组蛋白H3的乙酰化可能是其抑制宫颈癌SiHa细胞生长的潜在机制.     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275对人骨髓瘤U266细胞生长的影响及其可能机制

目的 探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACi)MS-275对人骨髓瘤细胞U266的凋亡抑制基因生存素(survivin)和核因子-κB(NF-κB)表达的影响.方法 台盼蓝拒染法观察MS-275对细胞活力的影响;瑞氏-姬姆萨染色观察细胞形态学变化;流式细胞仪分析细胞周期;Western blot检测survivin、p21、细胞周期依赖激酶4(CDK4)和NF-κB的抑制蛋白(IKB-α)等的表达,以及凋亡信号通路中caspase-3活化及蛋白聚ADP核糖聚合酶(PARP)裂解情况.结果 MS-275抑制U266细胞增殖,阻断细胞周期于G0/G1期,呈时间-剂量依赖性.MS-275作用U266细胞48 h的IC50为1.39μmol/L.2 μmol/L MS-275作用U266细胞24 h后,G0/G1期细胞所占比例为(64.57±4.09)%;作用36 h后,G0/G1期细胞所占比例为(87.20±2.83)%;瑞氏-姬姆萨染色显示,U266细胞形态发生明显变化.Western blot检测表明,MS-275作用U266细胞后,survivin和CDK4表达下降,p21表达增加,IκB-α磷酸化水平受到明显抑制,caspase-3被裂解活化,其底物蛋白PARP发生剪切,细胞发生凋亡.结论 MS-275可诱导人骨髓瘤细胞系U266凋亡,NF-κB信号通路阻断是凋亡发生的机制之一.     

组蛋白去乙酰化转移酶抑制剂MS-275对胃癌细胞增殖的影响

目的：探讨组蛋白去乙酰化转移酶抑制剂MS-275对胃癌细胞（MKN-45）和人正常胃黏膜细胞（GES-1）及张氏肝细胞（changliver）生长及凋亡的影响。方法：用不同浓度的MS-275分别处理体外培养的胃癌细胞和人正常胃黏膜细胞及张氏肝细胞,用水溶性四唑盐（WST-1）法检测对细胞的增殖抑制作用;流式细胞仪和TUNEL法检测细胞凋亡情况。结果：MS-275可明显抑制胃癌细胞的生长且呈时间和浓度依赖性,细胞凋亡率明显增加,但对正常细胞没有促凋亡作用。低浓度的MS-275能诱导MKN-45细胞发生G0/G1期阻滞,随着药物处理时间的延长,可以明显检测到G0/G1期比例增大。结论：去乙酰化转移酶抑制剂MS-275对胃癌细胞MKN-45具有选择性细胞毒作用,为其临床应用提供了有价值的实验依据,有望成为新的抗胃癌药物。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275诱导骨髓瘤细胞株U266凋亡过程中Survivin的表达

背景与目的：组蛋白去乙酰化酶抑制剂（histone deacetylase inhibitors,HDACi）是-类具有抗肿瘤活性的新型药物,主要通过诱导细胞凋亡发挥作用。本实验研究HDACi（MS-275）对人骨髓瘤细胞系U266细胞增殖和凋亡的影响及其与Survivin表达的关系。方法：将不同浓度的MS-275作用于U266细胞不同时间后,用台盼蓝拒染法观察药物对细胞活力的影响：通过瑞氏-姬姆萨染色观察药物作用后细胞形态学的变化;用流式细胞仪分析细胞周期;用Westernblot检测Survivin、P21和Cdk4等的蛋白表达,以及凋亡信号通路中Caspase-3活化及蛋白聚ADP核糖聚合酶[poly（ADP—ribose）polymerase,PARP]的裂解情况。结果：MS-275呈时间和剂量依赖性抑制U266细胞增殖,阻断细胞周期于G0／G1期。MS-275作用U266细胞48h时的Ic50为1．39μmol／L：2μmol／L的MS-275作用U266细胞24h后,G／G,期细胞占66．39％．36h后G0／G1期细胞占89．80％。瑞氏-姬姆萨染色显示细胞形态发生明显变化。Western blot检测结果显示。MS-275作用U266细胞后,Survivin和Cdk4表达下降,P21表达增加,Caspase3被裂解活化,其底物蛋白PARP发生剪切。结论：MS-275抑制人多发性骨髓瘤细胞系U266增殖并诱导细胞凋亡,可能与下调Survivin蛋白的表达有关。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA体外抑制人卵巢癌SKOV3细胞的实验研究

  目的   目的: 观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂辛二酰苯胺异羟肟酸(suberoylanilide hydroxamic acid, SAHA) 体外对人卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的作用, 并探讨其可能机制。   方法  体外应用SAHA作用于人卵巢癌SKOV3细胞, MTT法检测细胞增殖, 流式细胞术检测细胞凋亡率。Western blot法检测细胞内组蛋白H4乙酰化水平, 实时定量PCR方法检测p21、Bcl-2和Bax基因mRNA表达。   结果  经SAHA作用后的人卵巢癌SKOV3细胞生长受到抑制, 细胞凋亡增加(各实验组与对照组比较, 均P < 0.05), 呈剂量依赖性; 同时细胞内组蛋白H4乙酰化水平增加, p21基因和Bax基因mRNA表达增加(各实验组与对照组比较, 均P < 0.05), 呈剂量依赖性, Bcl-2基因表达无明显变化(各实验组与对照组比较, 均P > 0.05)。   结论  SAHA体外可抑制人卵巢癌SKOV3细胞增殖和诱导SKOV3细胞凋亡, 提高组蛋白乙酰化水平, 增加p21和Bax基因表达可能是其作用机制之一。      

重组 p53 腺病毒对人肺腺癌H1299细胞体内外的抑制作用

目的： 研究重组p53腺病毒（recombinant adenovirus-p53,rAd-p53）在体内、外对肺腺癌H1299细胞（野生型p53基因缺失）生长的抑制作用,观察rAd-p53尾静脉注射治疗肺腺癌的可行性。 方法： MTT法检测rAd-p53对H1299细胞增殖的抑制作用。rAd- p53 以感染复数（multiplicity of infection,MOI）=500感染H1299细胞,24 h 后RT-PCR检测H1299细胞中p53 mRNA表达,72 h后Western blotting 检测P53蛋白的表达、流式细胞术检测H1299细胞凋亡。H1299细胞皮下接种BALB/c 裸鼠,建立裸鼠肺腺癌模型,尾静脉注射rAd-p53,观察肿瘤生长情况,绘制肿瘤生长曲线。 结果： rAd-p53以MOI=500感染H1299细胞,24 h后有野生型p53 mRNA转录,72 h后有P53蛋白表达;且rAd-p53感染可明显抑制H1299细胞增殖,72 h时,rAd-p53组细胞增殖比显著低于对照组（2.8±0.4 vs 6.1±0.5, P<005）。感染rAd-p53后,随时间增加H1299细胞凋亡率呈上升趋势,48 h时rAd-p53组细胞凋亡率显著高于对照组,\[（27.6±0.05）% vs（4.9±0.09）%, P＜0.01\]。成功建立H1299细胞荷瘤裸鼠模型,尾静脉注射rAd-p53 2周后移植瘤体积显著小于对照组\[（0875±0.253） vs （0.479±0.215）cm3,P<005\]。 结论： rAd-p53感染可上调H1299细胞P53蛋白的表达,抑制H1299细胞增殖、促进其凋亡,并且尾静脉注射rAd-p53可明显抑制H1299细胞裸鼠移植瘤的生长。     

MS-275通过上调ROS释放选择性杀伤胃癌细胞

目的：研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275通过线粒体凋亡途径,选择性杀伤胃癌细胞的具体作用机制。方法：MS-275分别处理GES-1、MKN-45细胞,通过WST-1法检测细胞存活率,分析MS-275细胞毒性及选择性杀伤作用;通过流式细胞术检测线粒体膜电位变化,及ROS抑制剂对MS-275凋亡诱导作用的影响;Western blot、PCR分别检测处理后胃癌细胞中p21、p57、cyclin D1、cyclin E1、和TBP-2的mRNA及蛋白水平表达情况。结果：MS -275对正常胃黏膜上皮细胞GES -1存活率无显著性影响,但对胃癌细胞MKN-45影响显著（P＜0．05）。MS-275对胃癌细胞MKN-45线粒体膜电位影响不显著,但能够诱导ROS显著升高,ROS抑制剂显著降低由MS-275诱导的ROS释放。MS-275显著激活肿瘤抑制基因p21、p57、TBP-2以及细胞周期蛋白相关基因cyclin D1、cyclin E1的表达。结论：MS-275通过促进细胞周期阻滞因子、凋亡诱导基因、肿瘤抑制基因的表达,诱导ROS生成,选择性杀伤胃癌细胞。     

鸦胆子油乳对宫颈癌SiHa细胞的抑制

目的：探讨鸦胆子(Brucea javanica)油乳在体外对宫颈癌SiHa细胞的抑制作用及其作用机制。方法：以鸦胆子油乳（2.5、5.0、10、20、40、80 μg/ml）作用于SiHa细胞24、48、72 h,以MTT法检测鸦胆子油乳对SiHa细胞增殖的抑制作用;透射电镜观察细胞的超微结构;琼脂糖凝胶电泳观察SiHa细胞基因组DNA片段化改变;流式细胞术测定AnnexinV/PI双染色后SiHa细胞凋亡率。结果：MTT结果显示,鸦胆子油乳以剂量和时间依赖方式对SiHa细胞增殖有明显的抑制作用,其中80 μg/ml 药物作用72 h时的抑制率可达92.43%;20 μg/ml药物作用后,透射电镜下可观察到细胞出现凋亡小体,琼脂糖凝胶电泳显示细胞凋亡特征性的DNA片段化“梯状”条带;流式细胞仪检测显示,10、20、40 μg/ml药物组作用48 h后凋亡率分别为（8.02±241）%、（51.60±7.67）%、（77.22±5.80）%。结论：鸦胆子油乳能够抑制SiHa细胞增殖,其作用机制可能为诱导SiHa细胞发生凋亡。     

曲古抑菌素A通过p53转录激活途径诱导尤文肉瘤细胞凋亡

目的：探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A（trichostatin A,TSA）诱导尤文肉瘤细胞株WE-68和VH-64凋亡及作用机制.方法：四甲基偶氮唑蓝法（MTT法）测定细胞增殖抑制率.流式细胞计数法测量TSA给药后细胞周期中sub-G1含量的变化.免疫印迹法（Western-blot）检测细胞中活化型多聚ADP核糖多聚酶（cleaved-PARP）,p53-lys382残基乙酰化和p53蛋白总量的表达.实时定量PCR和siRNA转染技术测定p53多个下游基因的mRNA水平改变和p53表达下调对TSA诱导凋亡的影响.结果：TSA抑制了尤文肉瘤细胞的增殖,诱导细胞周期中sub-G1含量和凋亡终产物cleaved-PARP蛋白表达的增加.TSA给药后,p53-lys382残基乙酰化表达量呈浓度依存性增加,同时上调p53下游因子p21,mdm2,Bax和PUMA的mRNA水平.另一方面,p53蛋白表达的下调明显削弱了TSA介导的p21表达的上调和cleaved-PARP的产生.结论：组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA能够通过激活p53高乙酰化表达来恢复p53转录功能,从而诱导尤文肉瘤细胞株产生凋亡.     

辛二酰苯胺异羟肟酸对结肠癌HCT116和SW480细胞增殖、周期和凋亡的影响

目的:研究辛二酰苯胺异羟肟酸(suberoylanilide hydroxamic acid,SAHA)对结肠癌细胞系HCT116和SW480增殖、周期和凋亡的影响,并对其分子作用机制进行初步探讨.方法:将不同浓度SAHA分别处理结肠癌HCT116和SW480细胞后,MTT法检测SAHA对HCT116和SW480细胞增殖的影响,流式细胞仪检测HCT116和SW480细胞周期和细胞凋亡率,罗丹明(rhodamine) 123和二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)法检测HCT116和SW480细胞线粒体跨膜电位(Aψm)和活性氧(ROS)水平,Real-time PCR和Western blotting法检测乙酰化组蛋白3(Ac-H3)、p21、CyclinD1、Bax和Bcl-2的mRNA和蛋白的表达水平.结果:SAHA作用于HCT116和SW480细胞48 h后,细胞增殖被抑制、细胞周期G1期比率升高、凋亡率升高(均P＜0.05),线粒体跨膜电位显著下降、细胞内ROS产生增多(均P＜0.05).与对照组比较,SAHA处理组p21和Bax mRNA增多、Cyclin D1和Bcl-2 mRNA表达量减少(均P＜0.05),相关蛋白Ac-H3、p21和Bax增多,CyclinD1和Bcl-2减少(均P＜0.05).结论:SAHA抑制结肠癌HCT116和SW480细胞增殖、阻滞细胞周期并诱导细胞凋亡,其机可能与调节p21、CyclinD1和Bcl-2家族基因的表达、促进组蛋白乙酰化有关.