抑制miR-21表达对结肠癌HCT116细胞生物学行为的影响

目的：探讨抑制 miR-21 表达对结肠癌HCT116细胞增殖、周期、凋亡、侵袭和迁移等生物学行为的影响。方法：实验分为3组,以miR-21抑制剂转染HCT116细胞为转染抑制组（IN）,另设阴性对照组（NC）、空白对照组（MOCK）,以Real-time PCR检测转染后HCT116细胞中miR-21的表达,应用MTT法、流式细胞术、Transwell侵袭和迁移实验检测转染后HCT116细胞的增殖、周期、凋亡、侵袭、迁移;以Western blotting检测转染后HCT116细胞PTEN的表达,荧光素酶报告实验检测转染后HCT116细胞PTEN的活性。结果：miR-21抑制剂转染后,HCT116细胞中miR-21的表达较NC和MOCK组细胞明显降低。下调miR-21后,HCT116细胞的增殖能力明显降低\[72 h时：（1.05±0.45） vs （1.43±0.02）,（1.45±0.01）;t=13.83,P=0000 159;t=14.88,P=0.000 119\],细胞凋亡率显著增加\[（16.30±1.00）% vs（1.87±0.53）%,（1.86±0.12）%;t=25.01,P=0.000 015 2;t=24.985,P=0.000 015 2\],细胞周期阻滞于G0/G1期,细胞的侵袭\[（50±2.0） vs （115±3.0）,（111±3.0）个;t=29.09,P=0.000 008 31;t=31.23,P=0.000 006 27\]和迁移能力\[（22±2.0） vs （52.3±2.5）,（53.0±1.0）个;t=2401,P=0.000 017 8;t=16.34,P=0.000 082 0\]明显下降。miR-21抑制剂转染的HCT116细胞中PTEN的表达及其荧光素酶相对活性均显著增加。结论：miR-21可能通过抑制PTEN进而调控大肠癌细胞生物学行为,PTEN可能是miR-21的靶基因之一。     

慢病毒介导 EGFL7 沉默对肺癌A549细胞体外生物学行为的影响

目的：通过慢病毒介导沉默表皮生长因子样结构域7基因 (epidermal growth factor-like domain 7, EGFL7 )在肺癌A549细胞的表达,探讨 EGFL7对A549细胞的增殖、凋亡、侵袭和血管生成的影响。 方法： 利用慢病毒介导靶向 EGFL7的shRNA 转染A549细胞,实验分三组： LV-RNAi组（转染LV-RNAi）,LV-NC组（转染空病毒）和对照组（A549细胞）。Real-time PCR和Western blotting分别检测LV-RNAi感染对A549细胞 EGFL7 mRNA和蛋白水平表达的影响,MTT法和流式细胞术分别检测沉默〖STBX〗EGFL7〖STBZ〗对A549细胞增殖和凋亡的影响,Transwell侵袭实验和鸡胚绒毛尿囊膜（chick embryo chorioallantoic membrane,CAM）实验分别检测沉默 EGFL7 对A549细胞侵袭和血管生成能力的影响。 结果： 慢病毒稳定高效地转染A549细胞,LV-RNAi组细胞内 EGFL7 mRNA\[（0.18±0.03） vs （0.98±0.05）、（1.03±0.09）,P<0.05\]和蛋白表达较LV-NC组和对照组显著降低。与LV-NC组及对照组相比,沉默EGFL7 对LV-RNAi组A549细胞的增殖活力\[感染120 h 时：（073±0.22） vs （0.79±0.08） vs （0.81±0.11）,P>0.05\]与和凋亡率\[感染120 h 时：（1.92%±0.06） vs （2.11%±0.07） vs （1.85%±0.13）, P>0.05\]均无显著影响;同时,LV-RNAi组A549细胞侵袭入下室细胞数\[（61.7±14.5） vs （272.8±215）、（286.6±40.0）/mm2,P<0.05\]与血管生成指数\[（31.7±4.1） vs （96.3±4.4）、（103.3±6.5）,P<0.05\]均显著减少。 结论： 沉默 EGFL 基因能够抑制A549细胞侵袭和血管生成能力,但不影响其增殖与凋亡。     

miRNA-210对人乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的： 探讨miRNA-210（miR-210）在人乳腺癌组织中的表达及其对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、迁移和侵袭的影响。 方法： 收集2011年10月至2012年6月期间昆明医科大学第一附属医院20例乳腺癌患者组织标本,real-time PCR检测乳腺癌组织和癌旁组织以及乳腺癌细胞MDA-MB-231和正常乳腺细胞MCF-10a中miR-210的表达。采用LipofectamineTM 2000将miR-210 inhibitor转染至MDA-MB-231细胞中,通过荧光显微镜检测miR-210的转染效率,MTT和软琼脂克隆形成实验检测MDA-MB-231细胞的增殖,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,Transwell法检测细胞的迁移、侵袭能力。 结果： miR-210在乳腺癌组织和MDA-MB-231细胞中的表达水平均显著高于癌旁组织和正常乳腺细胞（P<0.01）。miR-210 inhibitor成功转染MDA-MB-231细胞,转染效率为（88.29±2.98）%,转染miR-210 inhibitor后MDA-MB-231细胞的增殖和克隆形成能力明显减弱（P<0.05）,被阻滞于G0/G1期的细胞数明显增多\[（64.23±3.12）% vs （55.53±0.96）%,P<0.01\],凋亡细胞比例也显著增加\[（31.90±3.05）% vs （15.98±0.63）%,P<0.01\],细胞的迁移\[（291.00±43.12） vs （1137.38±83.49）个,P<001\]、侵袭\[（131.63±32.01） vs （647.88±31.20）个,P<0.01\]均受到明显抑制。 结论： miR-210在乳腺癌组织和细胞中过表达,转染miR-210 inhibitor后乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖、迁移和侵袭能力明显减弱。     

BCSC-1 过表达抑制肝癌Bel-7402细胞的增殖、侵袭、黏附和迁移

目的：研究人乳腺癌候选抑癌蛋白1基因（breast cancer suppressor candidate 1,BCSC-1）过表达对肝癌Bel-7402细胞的增殖、侵袭、黏附和迁移的影响,并探讨其可能的机制。方法：将pcDNA3.1/v5-HisB-BCSC-1和空质粒pcDNA3.1/v5-HisB转染的Bel-7402细胞作为BCSC-1组和空载体组,Bel-7402细胞为野生型组。MTT法、Transwell实验、体外黏附实验和划痕实验分别检测BCSC-1过表达对Bel-7402细胞增殖、侵袭、黏附和迁移的影响,Real-time PCR检测BCSC-1过表达对Bel-7402细胞中与细胞增殖、黏附相关的 ICAM-1、PTTG、骨桥蛋白（osteopontin,OPN）mRNA表达的影响。结果：转染pcDNA3.1/v5-HisB-BCSC-1后Bel-7402细胞中 BCSC-1 mRNA的表达水平显著高于空载体组和野生组细胞\[（10.58±0.56）vs（1.10±022）、（1.00±0.01）,均P＜0.01\],成功制备 BCSC-1 稳定过表达的Bel-7402细胞株。与空载体组和野生型组相比, BCSC-1组Bel-7402细胞生长速度明显减慢\[72 h：（0.29±0.003） vs （0.34±0.014）、（0.35±0.013）,均P<0.05\];侵袭率\[（76.20±1.85）% vs（93.42±3.24）%、（100.00±1.05）%,均P<0.01）\]、黏附率\[（58.57±0.84）% vs（97.14±0.84）%、（100.00±130）%,均P<0.01\]显著降低,迁移距离显著降低\[（116.60±10.58） vs （231.33±10.26）、（237.96±11.58）μm,均P<001\];同时过表达 BCSC-1的Bel-7402细胞的OPN mRNA表达量明显降低\[（0.12±0.06) vs (0.95±0.14）、（1.00±0.08）,均P<001\], ICAM-1、PTTG mRNA表达无明显变化。结论： BCSC-1过表达能够抑制Bel-7402细胞的增殖、侵袭、黏附和迁移能力,其机制可能与OPN基因表达下降有关。     

下调GnTⅣa表达对肝癌Hca-F细胞增殖及侵袭的影响

目的：探讨慢病毒介导的N-乙酰氨基葡萄糖转移酶Ⅳa （N-acetylglucosaminyltransferase Ⅳa,GnTⅣa）表达下调对小鼠肝癌Hca-F细胞体外增殖及侵袭能力的影响。方法：针对GnTⅣa的编码基因Mgat4a,构建含shRNA干扰序列的慢病毒表达载体pll3.7/Mgat4a-shRNA并包装慢病毒颗粒,感染Hca-F细胞。RT-PCR 及流式细胞术分别检测Mgat4a-shRNA重组慢病毒感染对Hca-F细胞Mgat4a mRNA及GnTⅣa表达的影响,CCK-8法和Transwell侵袭实验分别检测Mgat4a-shRNA重组慢病毒感染在体外对Hca-F细胞增殖和侵袭能力的影响。结果：慢病毒能够高效感染小鼠肝癌细胞Hca-F,Mgat4a-shRNA组感染效率达72%。与Hca-F细胞和Mock-shRNA组相比,Mgat4a-shRNA组细胞内Mgat4amRNA\[（0.53±0.2） vs（2.97±02）、（2.90±0.1）;均P<0.05\]和GnTⅣa\[（47.80±2.25）vs（394.61±5.27）、（378.61±4.38）;均P<0.05\]表达显著降低;增殖能力\[细胞增殖抑制率：（46.9±0.02）%vs （0.82±0.03）%、 0,P<0.01\]和体外侵袭能力\[穿过滤膜的细胞数：（18±3）vs （42±4）、（38±3）个,均P<0.05\]显著下降。结论：慢病毒介导shRNA下调GnTⅣa的表达能够抑制小鼠肝癌细胞 Hca-F的增殖及体外侵袭。     

RNA干扰下调Slug表达对肺癌细胞A549的细胞周期、增殖和侵袭的影响

目的：应用RNA干扰技术下调肺癌A549细胞中Slug基因的表达,探讨其对A549细胞增殖、细胞周期和细胞侵袭能力的影响。方法：构建靶向Slug基因的shRNA真核表达质粒pGPU6-GFP-Neo-Slug,与阴性对照质粒pNeg-shRNA分别用脂质体法转染A549细胞。Real-time PCR和Western blotting验证转染后Slug mRNA和蛋白的表达。CCK-8法、流式细胞术和Transwell实验分别检测下调Slug表达对A549细胞增殖、细胞周期和侵袭能力的影响。结果：成功构建pGPU6-GFP-Neo-Slug载体并转染A549细胞,转染率达90%。与pNeg-shRNA组和空白对照组相比,pSlug-shRNA组A549细胞中Slug mRNA\[（0.23±0.01）vs（0.97±0.08）、（1.0±0.09）,P＜0.05\]和蛋白\[（0.20±0.09 ）vs（1.0±0.32）、（1.13±0.26）,P＜0.05\]表达量显著降低;细胞增殖抑制率明显上升\[（35.3±5.4）% vs（1.5±0.2）%、（3.3±0.7）%,均P< 0.01\];细胞增殖指数显著降低 \[（32.92±0.69）% vs（48.19±0.71）%、（42.88±0.75）%,均P<0.05\],并且处于G1期细胞数明显增多\[（67.08±092）% vs（52.81±0.78）%、（56.12±0.73）%,均P<0.05\];细胞侵袭能力显著降低\[穿透基底膜细胞数：（55±9）vs（169±12）、（173±15）,均P<0.01\]。结论: pGPU6-GFP-Neo-Slug转染肺癌A549细胞能有效下调Slug基因的表达,从而抑制A549的增殖侵袭能力、阻滞细胞周期于G1期。     

沉默 HerpUD1 基因表达提高人肝L-02细胞对放射处理的敏感性

目的： 利用RNA干扰技术沉默人肝L-02细胞内可诱导的同型半胱氨酸内质网应激泛素样结构域1（homocysteine-inducible, endoplasmic reticulum stress-inducible, ubiquitin-like domain member 1, HerpUD1 ）基因表达,探讨其对人肝L-02细胞的辐射增敏作用。 方法： 根据 HerpUD1 基因序列设计shRNA片段,构建靶向 HerpUD1 基因的shRNA表达载体,稳定转染L-02细胞,采用real-time PCR和Western blotting检测转染后细胞中 HerpUD1 mRNA及蛋白的表达。以8 Gy X射线照射转染后细胞,Hoechst荧光染色观察细胞的凋亡情况。 结果： 成功构建靶向 HerpUD1 的真核表达干扰载体,并建立稳定转染shHerpUD1的L-02细胞株。在稳定转染的L-02细胞中, shHerpUD1-1420干扰片段干扰效果最好,与pGPU6-NC组（阴性对照组）相比,shHerpUD1-1420组 HerpUD1 mRNA表达显著下降\[（0.15±0.05） vs （1.00±0.08）,P<0.05\],其蛋白水平的表达也显著降低\[（0.19±0.01） vs （1.62±0.08）,P<0.01\]。转染后细胞经8 Gy X射线照射后24 h,L-02-shHerpUD1-1420组细胞凋亡率显著高于L-02-NC组（阴性对照组）\[（10.23±3.37）%  vs （6.89±1.49）%,P<0.01\],而L-02-NC组与L-02-Neo组相比则无显著差异（P>005）。 结论： HerpUD1 基因表达沉默显著增加X射线辐射引起的L-02细胞凋亡,具有辐射增敏作用。     

miR-765靶向Ⅱ型多磷酸肌醇4-磷酸酶调控肝细胞癌细胞的增殖

目的：探讨微小RNA（miR）-765对Ⅱ型多磷酸肌醇4-磷酸酶（inositol polyphosphate 4-phosphatase type Ⅱ,INPP4B）调控及其对肝细胞癌（hepatocellular carcinoma, HCC）细胞增殖的影响。方法：采用实时定量PCR检测8例HCC组织和癌旁组织以及8组HCC细胞株中的miR-765的表达水平;MTT法检测过表达miR-765对HCC细胞增殖的影响;利用分子生物学技术构建INPP4B的3′-UTR报告基因,分析miR-765对INPP4B的调控作用,然后采用Western blotting法分别检测过表达和沉默miR-765对INPP4B蛋白表达的影响;应用Western blotting法和克隆形成实验探讨特异性抑制INPP4B对HCC细胞株增殖的影响。结果： 在HCC癌组织以及HCC细胞株中高表达miR-765（P<0.05）。转染miR-765促进HCC细胞的增殖\[（3.78±1.25） vs （2.06±0.47）,P<0.05\]。miR-765能够显著下调INPP4B的3′-UTR报告基因的荧光表达\[（0.42±001） vs （1.01±0.01）,P<0.05\],显著上调INPP4B蛋白的表达\[（0.92±0.04) vs (0.42±0.02)、(0.62±0.03),P<0.05\]。特异性抑制INPP4B后明显促进HCC细胞的增殖\[（238.0±1.73) vs (66.33±5.04),P<0.05\]。结论：miR-765通过调控INPP4B的表达来促进HCC细胞的增殖。     

沉默 AQP-5 对人结肠癌HT-29细胞的增殖、凋亡及其化疗敏感性的影响

目的： 探讨小干扰RNA（small interference RNA,siRNA）沉默水通道蛋白-5（aquaporin-5, AQP-5 ）的表达对人结肠癌HT-29细胞增殖、凋亡及化疗药敏感性的影响。 方法： 以合成的AQP-5-siRNA序列转染HT-29细胞,采用Western blotting检测AQP-5-siRNA的转染效率,磺酰罗丹明（sulphorhodamine B, SRB）染色法检测各组细胞的增殖抑制率,流式细胞术检测HT-29细胞的凋亡。分光光度法检测HT-29细胞caspase-3活性,real-time PCR和Western blotting检测AQP-5-siRNA转染后HT-29细胞中 PCNA和P53 在mRNA和蛋白水平的表达。选用5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil,5-FU）和顺铂（cisplatin,DDP）刺激AQP-5-siRNA转染细胞,SRB染色法检测细胞的增殖抑制率,以金正均法计算两药联合作用的Q值。 结果： 与NC-HT-29细胞相比,AQP-5-siRNA-HT-29细胞中AQP-5蛋白的表达显著下降（P<0.05）。SRB检测显示,AQP-5-siRNA-HT-29细胞的增殖抑制率显著增加\[（9.23±0.51)% vs 0,P<0.05\]。流式细胞术检测显示,AQP-5-siRNA-HT-29细胞的凋亡率显著升高\[（1081±1.32)% vs (0.99±0.18）%, P<0.05\];caspase-3活性显著升高\[（0.19±0.03） vs （009±0.01）, P<0.05\]。Real-time PCR和Western blotting结果显示,AQP-5-siRNA-HT-29细胞中PCNA mRNA和蛋白表达明显下降（P<0.05）,同时,P53 mRNA和蛋白表达明显上升（P<0.05）。AQP-5-siRNA+5-FU组细胞的增殖抑制率显著高于AQP-5-siRNA组和5-FU组\[（44.93±2.28)% vs (9.11±0.32）%、（25.68±1.71）%,均P<0.05\],AQP-5-siRNA+DDP组细胞的增殖抑制率显著高于AQP-5-siRNA组和DDP组\[（39.01±1.76)% vs (9.11±0.32）%、（18.47±1.25）%, P<0.05\],而且,AQP-5-siRNA与5-FU或DDP联用的Q值分别为1.38和1.51,均表现为协同作用。 结论： AQP-5-siRNA能抑制HT-29细胞增殖、促进其凋亡、并提高HT-29细胞对5-FU和DDP的化疗敏感性。     

LKB1 协同二甲双胍影响宫颈癌HeLa细胞的增殖与凋亡及其可能的机制

目的： 探索肝脏激酶B1 (liver kinase B1, LKB1 或serine-threonine kinase 11, S TK11 )基因协同二甲双胍对人宫颈癌HeLa细胞增殖与凋亡的影响及其可能的机制。 方法： 构建含有 LKB1 基因的重组质粒LKB1-pEGFP-n1并转染HeLa细胞,MTT检测 LKB1 基因对经二甲双胍处理的HeLa细胞增殖的影响,流式细胞术检测对细胞周期和凋亡的影响,Western blotting检测对LKB1-AMPK信号通路相关蛋白AMPK、ACC和Rb磷酸化水平的影响。 结果： LKB1-pEGFP-n1和空载体pEGFP-n1成功转染HeLa细胞,LKB1-pEGFP-n1转染细胞内稳定表达LKB1。二甲双胍处理LKB1-pEGFP-n1转染细胞的IC50显著低于pEGFP-n1转染细胞\[(2.9±0.4) vs (7.8±1.3) mmol/L;t=-6.9921,P=0.002 2\]及野生型HeLa细胞\[(2.9±0.4) vs (9.6±1.5) mmol/L;t=-7.527 1,P=0.001 7\]。经二甲双胍处理后,LKB1-pEGFP-n1转染细胞周期阻滞于G1期,而pEGFP-n1转染和野生型细胞周期无显著变化。二甲双胍作用剂量为15 mmol/L时,LKB1-pEGFP-n1转染细胞凋亡率较pEGFP-n1转染及野生型HeLa细胞显著增多\[（28.6±2.3）% vs （9.6±1.6）%、（17.8±1.9）%,均P＜0.05\]。LKB1-pEGFP-n1转染细胞内AMPKα和ACC的磷酸化水平较pEGFP-n1转染和野生型细胞升高,Rb磷酸化水平降低。 结论： LKB1 能够协同二甲双胍影响HeLa细胞的增殖与凋亡,其可能通过LKB1-AMPK信号通路发挥作用。     

Possibility of predicting the results of the surgical treatment of cancer of the thoracic portion of the esophagus

Within a 18-year period in the clinic 273 patients were subjected to radical surgery for cancer of the thoracic esophagus. 206 patients were discharged from the clinic. The survival rate for 5 years and longer was noted in 58 patients. The data and results of the treatment depending on a sum of clinical signs were treated mathematically. It is noted that the patients' survival is influenced by such factors as sex, the stage of the disease, the morphological structure of tumor, the character of course, tumor size and spread, the type of surgical intervention. An advanced course, changes in blood presence of metastases do not seem to be the reason for cancellation of the operation.     

Cardiac tolerance of the combination paclitaxel-anthracyclines in the context of the management of cancer of the breast

Within the past decades there has been major interest in associating the paclitaxel into the management of breast cancer patients with a strong improvement of clinical results. Moreover, doxorubicin is historically one of the major chemotherapeutic agents in breast cancer treatment. So, investigations of the combination of the paclitaxel with doxorubicin have logically taken place in the strategy of breast cancer management. Also, this association became a standard of care neoadjuvantly in locally advanced breast cancer. The aim of this review of literature consists to make a special focus on cardiac toxicity occurring after doxorubicin and paclitaxel association and to give adequate directions for the next future in this promising combination.     

Improvement of the efficiency of the treatment of gastric cancer by the standardization of the treatment plan

Standardized treatment plan for gastric cancer was established in our department by which surgeons and nurses understood the treatment schedules of each gastric cancer patient as the common knowledge, and the cooperation of surgeons and nurses could be improved. Furthermore, the modality decreased the length of hospital stay from 35 +/- 15 days to 24 +/- 8 days, which indicated that the number of patients per one bed for one year increased from 10 to 15, and the efficiency of the treatment of gastric cancer patients 50% by our system.