高山红景天的组织培养与快速繁殖

分别以高山红景天的幼茎和幼叶作为外植体,以MS为基本培养基,研究不同激素配比对高山红景天愈伤组织的诱导、继代、生根的影响,以建立其快速繁殖体系.结果表明,幼茎是最佳的外植体,愈伤组织诱导最佳的培养基为MS+6-BA3.0 mg/L+NAA0.5 mg/L,诱导率达83.3％;不定芽诱导和增殖的最佳培养基为MS +6-BA2.0 mg/L+NAA0.1 mg/L,诱导率和增殖率较高,达72％,且产生的不定芽数量较多,为3～4个;生根培养基以MS+IAA 0.5mg/L为最好,生根率100％,而且幼苗长势旺盛,能够满足高山红景天工厂化快速繁殖的要求.     

细辛组织培养技术研究

目的研究细辛组织培养技术,优化细辛组织培养体系。方法以野生细辛越冬芽为外植体,在不同激素浓度配比的培养基上进行初代培养、不定芽增殖及生根培养,并进行生根苗的移栽。结果细辛组织培养过程中适宜的培养基为：（1）初代培养基,MS＋6-BA1．0mg／L＋NAA0．1rag／L;（2）不定芽增殖培养基．MS＋6-BA1．5rag／L＋NAA0．2mg／L;（3）生根培养基,1／2MS＋IBA1．0mg／L。结论优化的培养体系适宜细辛的组织培养,可在短期内获得大量优质种苗。     

林荫银莲花不定芽增殖培养基的优化

为提高林荫银莲花(Anemone flaccida Fr.Schmidt)不定芽繁殖系数,对其组培快繁体系进行优化。以林荫银莲花无菌苗为外植体,研究了培养基中激素、碳源、添加物和矿质元素钙等组分对其不定芽增殖和生长状况的影响,得出最佳的不定芽增殖培养基配方。以1/2 Ca浓度MS为固体培养基,激素为1.0 mg/L 6-BA和1.0 mg/L NAA,蔗糖或食用白糖30 g/L,水解酪蛋白为添加物,浓度为750 mg/L,培养30 d后繁殖系数可达4.01,大幅提高了不定芽的增殖速度和质量,为工厂化生产林荫银莲花种苗奠定了基础。     

基于Box-Behnken法筛选与优化虎杖疏松愈伤组织培养条件

目的:研究虎杖疏松愈伤组织诱导的最佳条件.方法:本试验以MS为基本培养基,比较了不同外植体和激素配比对虎杖愈伤组织诱导的影响,采用单因素试验法研究了光培养和暗培养对愈伤组织诱导的影响,应用Box-Behnken 法考察不同激素浓度对虎杖愈伤组织增殖的影响.结果:虎杖愈伤组织诱导的最佳外植体是叶柄,愈伤组织最佳诱导培养基为MS+2,4-D 4.0 mg·L-1+NAA 1.0 mg· L-1,最佳的培养方式为暗培养,愈伤组织继代培养培养基为MS+6-BA 2.0 mg·L-1+KT 0.4 mg·L-1+2,4-D 0.5 mg·L-1.结论:实验研究过程中优化了虎杖疏松愈伤组织培养的条件,为建立虎杖悬浮细胞培养体系提供了基础依据.     

荆半夏组织培养及快速繁殖的研究

目的建立荆半夏快速繁殖体系,为抢救性开发荆半夏野生资源提供有力手段。方法用MS+6BA2.0mg·L-1+IBA0.5mg·L-1培养基诱导及分化培养;用MS+6BA0.2mg·L-1+IBA1.0mg·L-1培养基作生根培养。结果诱导培养2周后形成大量愈伤组织,继代培养3周后分化出大量丛生芽。生根培养2周后形成完整植株。结论通过组培快繁荆半夏的繁殖系数由自然栽培时的每年1~2倍提高到每月15倍左右。     

徐长卿组织培养技术的研究

对徐长卿组织培养快速繁殖技术的试验研究结果表明，NAA诱导愈伤组织效果优于IAA。而IAA较适于诱导丛生芽，BA浓度有较明显的协同作用。因此，在组织培养中激素和生长素的合理配合是达到最佳培养效果的关键。试验结果表明：诱导愈伤组织的最适培养为MS NA1.0g/L NAA1.0mg/L,诱导丛生芽的最适基为B5 BA2.0mg/L IAA0.5mg/L,而诱导生根的最适培养基为1/2MS NAA1.0mg/L。通过三阶段组织培养技术的优化，可以快速繁殖出大批种苗，有效地解决徐长卿药材繁殖速度慢的问题，这一技术可望应用于生产。     

尼泊尔菊三七的离体快繁技术研究

目的依据尼泊尔菊三七野生资源开发利用情况,以尼泊尔菊三七的茎段为外植体,建立其离体快繁体系。方法通过正交设计法,添加不同浓度激素[6-苄氨基嘌呤(6-BA)和萘乙酸(NAA)]、无机元素和活性炭,建立包括丛生芽诱导、生根、壮苗以及移栽的离体快繁体系。结果用75%乙醇和0.1%升汞对外植体消毒的时间分别为20 s,6 min;尼泊尔菊三七离体快繁的最佳增殖培养条件为MS+萘乙酸0.5 mg/L+6-苄氨基嘌呤1.0 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂5.0 g/L,pH=6.0;壮苗生根的最佳培养条件是1/2 MS+萘乙酸0.5 mg/L+6-苄氨基嘌呤1.0 mg/L+蔗糖30 g/L+活性炭2.0 g/L+琼脂5.0 g/L,pH=6.0;移栽期间的最佳基质是腐殖土∶木炭土=3∶2。结论成功建立尼泊尔菊三七离体快繁体系,为将来大规模生产奠定了基础。     

以叶片为外植体快速繁殖绿萝

本实验以绿萝的叶片为外植体在添加不同激素种类和浓度配比的培养基上诱导愈伤组织的形成,并进一步诱导不定芽的分化,建立绿萝的组织培养快繁体系。结果显示:在诱导培养基MS+TDZ 0.2mg/L+2,4-D 0.5mg/L的上愈伤组织形成率最高,且褐化率较低;上述诱导获得的愈伤组织和不定芽进一步继代培养于MS+6-BA 3.0mg/L+NAA 0.2mg/L和MS+TDZ 0.2mg/L两种培养基上,分别采用黑暗和光照处理,发现光照可以显著促进愈伤组织和不定芽的转绿、增殖和分化。     

粗毛牛膝带腋芽茎段的植株再生研究

目的:研究粗毛牛膝带腋芽茎段植株的再生。方法:以粗毛牛膝带腋芽茎段为外植体诱导腋芽生长,继代诱导生根成完整小植株,考察基本培养基、萘乙酸(NAA)和6-苄基嘌呤(6-BA)浓度3个因素对茎段和腋芽生长的影响。结果:基本培养基MS、6-BA浓度对腋芽的生长有显著影响,最佳的培养基组合为MS+0.1mg·L-1NAA+0.5mg·L-16-BA;而在1/2MS+0.5mg·L-1NAA培养基上100%生根。结论:该培养基组合可使粗毛牛膝腋芽诱导生根能力强,且幼根生长健壮,值得推广。     

黄芩无菌材料的建立及快繁技术的优化

建立和优化黄芩组织培养技术,为工厂化生产提供有效的技术手段。通过一系列筛选实验,确定建立黄芩无菌材料的最佳方法,黄芩快速繁殖的最佳培养基。结果表明,建立黄芩无菌材料的最佳方法是取试验田里的黄芩主芽或侧芽,用升汞杀菌5 min,无菌水冲洗4~5次,接种在MS+NAA 0.4(mg/L)+IAA 0.2(mg/L)的培养基上,成为无菌试管苗。黄芩试管苗在MS+6-BA 0.3(mg/L)+PP3330.5(mg/L)快繁培养基上,芽多,叶绿并且较壮。在1/2MS+NAA 0.2(mg/L)+IAA(0.1 mg/L)生根培养基中,生根率高,达到90%。     

地丁草组织培养及无性系建立的研究

目的:为满足人们栽培对种苗的需要,并保护野生资源.方法:以地丁革不同外植体为材料,进行了愈伤组织诱导与分化、不定芽生根和试管苗生根继代培养研究,建立起地丁革的无性系.结果:MS+ NH4H2PO420 mg·L-1+BA0.2 mg·L-1+IBA0.1mg·L-1+ NAA 0.8～1.0mg·L-1是愈伤组织继代扩...     

杜仲带腋芽茎段组织培养的研究

目的研究不同培养条件下杜仲带腋芽茎段愈伤组织的诱导和生长情况,以及腋芽的生长情况。方法以带腋芽的杜仲茎段为外植体,设计9种不同的培养基配方,为了防止褐化,在23.4℃下培养箱中暗培养,30 d后调查出愈率及腋芽的生长情况。结果 NAA浓度从0.05~0.5 mg.L-1,随着浓度增加,腋芽生长受抑制;6-BA浓度从0.3~1.0 mg.L-1,随着浓度增加,愈伤组织块增大,达到1.0 mg.L-1时愈伤组织的生长受到抑制;本实验中最佳的杜仲愈伤组织诱导和生长培养基配方为6号培养基:B5+0.5 mg.L-1NAA+0.3 mg.L-16-BA。腋芽生长最佳培养基配方为4号培养基:B5+0.05 mg.L-1NAA+0.5 mg.L-16-BA。结论本试验的结果对杜仲的生物技术利用有一定的参考价值。     

凹叶厚朴愈伤组织的诱导及其有效成分含量的比较

目的:研究凹叶厚朴愈伤组织的诱导、生长情况并比较愈伤组织内有效成分的含量。方法:采用单因素比较、正交设计试验,研究影响凹叶厚朴愈伤组织诱导和生长的各种因素;采用高效液相色谱法测定不同来源愈伤组织内有效成分的含量。结果:外植体脱分化形成愈伤组织的能力,以顶芽及茎段最好,雌蕊次之;愈伤组织诱导的最适培养基为B5+NAA0.1mg.L-1+6-BA1.0mg.L-1,而B5+NAA0.5mg.L-1+6-BA4.0mg.L-1对愈伤组织生长促进作用明显。以WPM为基本培养基诱导愈伤组织,继代后厚朴酚与和厚朴酚含量的总和可达0.1679%~0.2344%,但愈伤组织诱导率低,为33.08%~48.65%;培养条件为MS+NAA0.5mg.L-1+6-BA1.0mg.L-1时,愈伤组织诱导率为62.12%,继代后2酚总量为0.1686%。结论:本试验结果对凹叶厚朴愈伤组织的诱导及高产细胞系的筛选具有一定的参考价值。     

海南广藿香试管内芽分化与愈伤组织诱导研究

目的选择海南广藿香的最佳芽分化和愈伤组织诱导培养基。方法利用海南广藿香的叶柄、茎尖和带节茎段进行组织培养芽分化试验,并对上述材料进行愈伤组织诱导培养基选择试验。结果在芽分化培养基中,MS＋3-吲哚丁酸（IBA）1．0mg／L＋6-苄基腺嘌呤（6-BA）0．6mg／L培养基能够较好地诱导茎尖和带节茎端长出新芽,诱导率分别为94．3％和94．6％;在愈伤组织诱导培养基中,MS＋萘乙酸（NAA）0．1mg／L＋6-BA2．0mg／L培养基能较好地诱导海南广藿香叶柄和带节茎段产生愈伤组织,诱导率分别为80．0％和100％。结论海南广藿香的最佳芽分化和愈伤组织诱导培养基分别为Ms＋IBA1．0mg／L＋6-BA0．6mg／L和Ms＋NAA0．1mg／L＋6-BA2．0mg／L。     

LC-MS/MS法测定大鼠体内多西他赛血药浓度及其药动学研究

目的:建立测定大鼠血浆样品中多西他赛浓度的方法,并进行药动学研究。方法:以紫杉醇为内标,取8只大鼠尾静脉单剂量注射多西他赛5mg·kg-1,分别于给药前和给药后2、15、30、90、240、480、720、1440min眼眶后静脉丛采血,采用液相色谱-串联质谱法测定其血药浓度,并计算药动学参数。结果:多西他赛在大鼠体内的药-时曲线符合三室模型,主要药动学参数t12z为(236.44±53.47)min,c0为(3.84±0.97)mg·L-1,AUC(0～t)为(66.66±11.39)mg·min·L-1。结论:本方法专属性好、准确度好、灵敏度好,可为今后临床患者血药浓度监测和药动学研究提供方法学依据。     

老鹰茶组织培养初探

目的针对老鹰茶(豹皮樟)野生自然繁育难,资源更新周期长的情况。初步探讨豹皮樟的组织培养技术。方法以老鹰茶的叶、叶柄,茎段、芽孢、种子为外植体,在MS+BA2.0 mg·L-1+NAA0.2 mg·L-1的培养基培养,观察愈伤组织状况;在其组织培养工作中污染问题较严重,该实验中采用了3种消毒方法:(1)75%酒精消毒30 s→10%次氯酸钠浸泡10 min→无菌水洗3次;(2)0.1%升汞液灭8 min→10%次氯酸钠浸泡10 min→无菌水洗3次;(3)75%酒精消毒30 s→0.1%升汞液灭菌8 min→无菌水洗3次。结果早春和秋后芽孢为最优外植体,污染率相对较低,愈伤组织诱导率达36.4%,表面消毒以第3种方法效果最好。结论由早春、秋后的芽孢为外植体,初步得到了老鹰茶组织培养的无菌材料,为进一步的研究提供了基础。     

川麦冬脱病毒和组织培养技术的研究

采用茎尖分生组织培养技术，获得了川麦冬的脱病毒试管苗。通过川麦冬组织培养技术的正交试验及优化筛选，筛选出最佳的培养基组成，用于脱病毒苗的快速繁殖。建立了川麦冬根尖染色体鉴定的最佳条件。结果表明，川麦冬最适繁殖培养基MS＋BA（6-卞基腺嘌呤）2．0mg／L＋NAA（萘乙酸）0．5mg／L；川麦冬最佳诱导愈伤培养基：MS＋BA1．5mg／L＋IAA（吲哚乙酸）0．1mg／L＋2，4-D（2，4-二氯苯氧乙酸）1．0mg／L；通过在培养基中添加不同浓度生长素，得到适合川麦冬的生根培养基：1／2MS＋IAA0．5mg／L＋ABT0．5mg／L。染色体鉴定结果表明：川麦冬的染色体为2n=68。     

银杏酮酯及其HP-β-环糊精包合物在大鼠体内的药物动力学

目的建立测定大鼠血浆中槲皮素、山柰素浓度的反相高效液相色谱法,研究银杏酮酯颗粒及其HP-β-环糊精包合物大鼠灌胃后体内药物动力学行为。方法血浆标本水解后,经乙酸乙酯提取,以甲醇-水-磷酸为流动相;12只大鼠随机均分为2组,分别灌胃银杏铜酯颗粒及其包合物后,检测血浆药物浓度。药时曲线采用DAS药代计算程序处理。结果槲皮素在2.6~264.0μg.mL-1,山柰素在1.2~120μg.mL-1与峰面积线性关系良好。结果表明GBE50经包合后,槲皮素主要药动学参数Cmax,tmax,AUC0-t,AUC0-∞分别为(0.219 4±0.034 5)mg.L-1、(4±1)h、(0.872±0.243)h.mg.L-1、(0.843±0.431)h.mg.L-1;参比制剂中槲皮素主要药动学参数Cmax、tmax、AUC0-t、AUC0-∞分别为(0.164 6±0.004 1)mg.L-1、(8±3)h、(0.434±0.132)h.mg.L-1、(0.577±0.143)h.mg.L-1。GBE50经包合后山柰素主要药动学参数Cmax、tmax、AUC0-t、AUC0-∞分别为(0.016 3±0.003)mg.L-1、(1±0.2)h、(0.077±0.023)h.mg.L-1、(0.09±0.04)h.mg.L-1;参比制剂中山柰素主要药动学参数Cmax、tmax、AUC0-t、AUC0-∞分别为(0.015 5±0.002)mg.L-1、(8±3)h、(0.023±0.003 5)h.mg.L-1、(0.026±0.011 2)h.mg.L-1.以槲皮素计,包合物的相对生物利用度为146.10%;以山柰素计,包合物的相对生物利用度为346.15%。结论该法准确,适用于槲皮素和山柰素血浆浓度的测定;制备的银杏酮酯-羟丙基-β-环糊精包合物与银杏铜酯颗粒相比,吸收明显增加。     

2种多潘立酮片的人体生物等效性研究

目的:研究2种多潘立酮片在健康人体内的生物等效性。方法:健康志愿者22名,采用随机交叉试验设计,单剂量口服多潘立酮片受试制剂或参比制剂10mg,应用高效液相色谱串联质谱电喷雾(LC-MS/MS)法测定各受试者给药后不同时间点的血药浓度,计算药动学参数,应用BAPP2.0软件进行生物等效性评价。结果:受试制剂与参比制剂的药动学参数分别为:tma(x0.55±0.15)、(0.57±0.11)h,t1/(210.22±1.29)、(10.90±1.44)h,cma(x12.721±5.567)、(13.265±5.787)μg·L-1,AUC0～36(h42.550±11.724)、(44.259±8.813)mg·h·L-1,AUC0～∞(45.539±12.327)、(47.900±9.446)mg·h·L-1。多潘立酮片受试制剂相对于参比制剂的生物利用度为(96.5±19.2)%,主要药动学参数经统计学分析无显著性差异。结论:受试制剂与参比制剂具有生物等效性。