全硫代反义寡核苷酸对脑胶质瘤细胞端粒酶活性作用

目的本研究采用针对人端粒酶hTR基因的反义寡聚脱氧核苷酸,探讨端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸(antisense oligodeoxy nucleotides,ASODN)对脑胶质瘤HO-8910细胞端粒酶活性及细胞增殖的影响。方法本实验将互补于hTR模板区的全硫代修饰型反义寡核苷酸(PS-ASODN)经lipotap脂质体转染作用于脑胶质瘤细胞系C6,然后分别采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色实验、酶联免疫吸附试验(ELISA)法和流式细胞术检测C6脑胶质瘤细胞的体外增殖、端粒酶活性、细胞凋亡和细胞周期的改变。结果经MTT法检测,PS-ASODN对C6细胞生长具有明显的抑制作用和诱导细胞凋亡,1.0μMPS-ASODN处理后24h细胞生长抑制率为12.93%,且随着时间的延长,抑制作用逐渐增强;给药72h对细胞生长抑制率达到最高,为50.81%,有相应的浓度依赖关系。ELISA法检测结果 ,0.5～1.5μM的PS-ASODN对C6细胞作用72h后端粒酶皆为阴性,表明PS-ASODN能够抑制端粒酶活性,对照组端粒酶皆为阳性。结论端粒酶PS-ASODN对体外培养的脑胶质瘤C6细胞的增殖有明显的浓度、时间依赖性抑制作用;抑制脑胶质瘤C6的端粒酶活性和诱导C6脑胶质瘤细胞发生凋亡,可能是端粒酶PS-ASODN抑制C6细胞增殖的主要机制。     

槲皮素对脑胶质瘤C6细胞增殖的调控作用

目的观察槲皮素对胶质瘤C6细胞增殖的影响及其对脑胶质瘤大鼠脑组织DR5表达的影响,探讨槲皮素对脑胶质瘤C6细胞增殖的调控作用。方法将体外培养的脑胶质瘤C6细胞按照槲皮素浓度分成25、50、75及100μmo l/L 5个处理组和对照组(二甲亚砜),采用MTT比色法检测槲皮素对胶质瘤C6细胞增殖的影响,Western blotting法检测100μmo l/L处理24h后的细胞和对照组细胞死亡因子受体5(DR5)的蛋白表达。选取雌性Wistar大鼠30只,随机分为3组:假手术组、模型组和槲皮素治疗组,每组10只。建立大鼠C6胶质瘤模型,于接种后17d处死各组大鼠,采用免疫组织化学法和Western bloting法检测肿瘤组织DR5蛋白表达水平的变化。结果槲皮素药物浓度增加或作用时间的延长,均能显著增强对C6细胞的增殖抑制作用。100μmo l/L槲皮素处理24h后,C6细胞DR5表达显著升高,P0.01。在体研究时发现,槲皮素能够上调脑胶质瘤大鼠脑组织DR5蛋白表达的平均光密度值,P0.01。结论槲皮素对C6细胞增殖抑制作用具有浓度、时间依赖性,上调DR5表达可能是其作用机制之一。     

地塞米松对C6胶质瘤细胞细胞周期的影响

目的:研究地塞米松(Dex)对C6胶质瘤细胞细胞周期和增殖的影响。方法:在培养的C6胶质瘤细胞中加入不同浓度(0 mol/L、10-5mol/L、10-4mol/L和10-3mol/L)的Dex,作用不同的时间(6、12和24 h)后取材,运用细胞计数和流式细胞仪检测C6胶质瘤细胞的增殖情况、细胞周期及凋亡。结果:10-3mol/L的Dex诱发了C6胶质瘤细胞的凋亡。24 h时,4个组的C6胶质瘤细胞凋亡率依次为0.37、0.52、0.39和8.24;4个组的C6胶质瘤细胞个数依次为4.37×106、4.29×106、3.57×106和3.44×106,后3组与第1组有明显的差异;4个组的C6胶质瘤细胞增殖指数依次为17.58、6.79、6.29和22.48,前3组随浓度增加而增加,第4组例外。结论:Dex对C6胶质瘤细胞的细胞周期进程有明显的抑制作用。10-4mol/L以下的浓度抑制其由G1期向S期的转换,10-3mol/L剂量的Dex可能抑制C6胶质瘤细胞由G2期向M期的转换或阻滞细胞在S期。大剂量的Dex(10-3mol/L)可引起C6胶质瘤细胞凋亡。     

丹参酮ⅡA对C6胶质瘤细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用

目的：探讨丹参酮ⅡA对大鼠胶质瘤细胞株C6的增殖抑制作用及其作用机理。 方法： 应用MTT比色法检测不同浓度丹参酮ⅡA对C6细胞的增殖抑制，应用流式细胞仪观察丹参酮ⅡA对C6细胞周期的影响，应用琼脂糖凝胶电泳观察C6细胞DNA的变化，应用RT-PCR观察相关基因c-myc表达的变化。 结果： 丹参酮ⅡA对C6细胞增殖抑制作用呈剂量依赖性。细胞周期分析显示：用1.0 mg/L丹参酮ⅡA作用C6细胞，在作用72 h出现凋亡峰，凋亡细胞占细胞总数7.7%；用2.0 mg/L丹参酮ⅡA作用C6细胞，在作用72 h出现凋亡峰，凋亡细胞占细胞总数21.6%。琼脂糖凝胶电泳结果显示：一定剂量丹参酮ⅡA作用后，C6细胞具有明显的凋亡特征，细胞核DNA呈梯状降解。RT-PCR结果显示：随着丹参酮ⅡA作用剂量的增加，c-myc基因的表达被明显抑制。 结论： 丹参酮ⅡA对大鼠胶质瘤细胞系C6的增殖具有明显的抑制作用及诱导凋亡的作用，并对原癌基因c-myc的表达具有抑制作用。     

丙戊酸钠对人脑胶质瘤细胞系SHG-44增殖分化的影响

目的 研究丙戊酸钠对培养人脑胶质瘤细胞系SHG-44细胞的增殖抑制和分化诱导作用。方法 以0.25、0.5、1.0、2.0、4.0mmol/L丙戊酸钠处理SHG-44细胞,用MTT比色、流式细胞术、光镜观察、免疫组化染色等方法检测处理细胞。结果 SHG-44细胞经丙戊酸钠处理后：（1）细胞增殖受到明显抑制,并具有时间,剂量依赖性;（2）细胞周期受阻,S期细胞比例减少,G1期细胞比例增多;（3）胶质纤维酸性蛋白（glialfibrillaryacidicprotein,GFAP）表达增强。结论 丙戊酸钠能抑制人脑胶质瘤细胞系SHG-44细胞的增殖,1.0mmol/L丙戊酸钠能诱导SHG-44细胞发生明显分化。     

白藜芦醇对体外培养的神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞周期与凋亡的影响

目的:探讨白藜芦醇(resveratrol,Res)对体外培养的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞周期与凋亡的影响。方法:通过不同浓度0.5～150μmol/L Res作用于体外培养的SH-SY5Y,72 h后用流式细胞术检测细胞周期构成比和细胞凋亡率,用Hochest染色观察细胞凋亡情况。结果:0.5～5μmol/L各组,进入G2/M期细胞所占活细胞比率逐渐升高;5～150μmol/L各组,随浓度升高,凋亡率呈现逐渐上升的趋势,而且显著高于对照组(P<0.01),其中150μmol/L组凋亡率为51.80±1.72%,进入G0/G1期间细胞为78.54±0.60%,显著高于对照组(P<0.01),而进入G2/M期细胞为0.48±0.50%,即大多细胞停留于DNA复制前期。结论:Res在0.5～150μmol/L浓度范围内对SH-SY5Y具有双向浓度依赖性,即在0.5～5μmol/L浓度范围内,Res促进SH-SY5Y细胞增殖,而在15～150μmol/L浓度范围内Res抑制SH-SY5Y细胞增殖并促进其凋亡;其中Res抑制SH-SY5Y细胞增殖并促进凋亡主要表现为阻止G1期细胞进入S期。     

三氧化二砷联合顺铂抑制C6胶质瘤细胞增殖的实验研究

目的探讨三氧化二砷(As2O3)联合顺铂(CDDP)抑制C6神经胶质瘤细胞增殖情况及其分子机制。方法体外实验采用MTT法检测对C6神经胶质瘤细胞的抑制率,流式细胞法检测C6胶质瘤细胞的凋亡及周期,Western blot检测caspase-3、PTEN、PI3K、Akt蛋白表达水平;体内实验采用免疫组化法检测caspase-3、IκB-α调控因子的表达,并观察大鼠的生存情况。结果 As2O3、CDDP及联合应用分别作用于C6神经胶质瘤细胞24 h后的细胞增殖最大抑制率分别为34.37%、31.73%和76.40%,其相应药物浓度分别为12.5、10.0、(12.5+10.0)μmol/L;两者联用后对C6胶质瘤细胞作用24 h后的凋亡率分别为从单独用药时的(4.60±1.12)%、(14.59±0.79)%提高到(36.13±1.55)%;采用PI单染检测的细胞周期也进一步证明了联合用药增加了C6细胞的周期抑制作用。Caspase-3、PTEN蛋白在联合组C6胶质瘤细胞中表达显著上调,而PI3K、Akt蛋白在联合组C6胶质瘤细胞中表达下调;免疫组化法检测结果显示,caspase-3调控因子在联合组用药的C6胶质瘤细胞中的表达上调,而IκB-α调控因子表达下调;但体内实验表明,在18 d观察期内各组大鼠的生存期无明显差异(P=0.2531)。结论 As2O3联合CDDP通过上调caspase-3和PTEN,下调PI3K、Akt及IκB-α抑制胶质瘤细胞体内外的生长。     

单胺氧化酶抑制剂诱导胶质瘤细胞的体外分化

为研究单胺氧化酶抑制剂(TCP)对体外培养的人脑胶质瘤U251细胞的诱导分化作用,以不同浓度TCP单独或与100nmol/L组蛋白去乙酰化酶抑制剂(TSA)联合处理U251细胞。采用倒置显微镜观察细胞形态学变化;噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖变化;流式细胞仪检测细胞周期变化;Hoechst 33258染色显示细胞凋亡;Real-time PCR和Western印迹法检测分化相关基因mRNA和蛋白表达水平的改变。结果表明:TCP可诱导细胞突起增多且变细长,抑制细胞增殖,阻滞细胞周期于G1期,抑制全能性转录因子Oct4和Sox2的表达,上调分化标志基因胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达,TCP联合TSA也诱导了GFAP的高表达。这些结果提示:TCP可诱导胶质瘤U251细胞分化,TSA对TCP诱导细胞分化有协同作用。     

抑制Hedgehog信号通路对脑胶质瘤U87细胞增殖及凋亡的影响

目的研究Hedgehog(Hh)信号通路阻断剂环王巴明对脑胶质瘤U87细胞增殖及凋亡的影响。方法体外培养U87细胞,以10、50、100μmol/L的环王巴明作用24h,MTT法检测环王巴明对U87细胞增殖的影响,流式细胞技术检测环王巴明对U87细胞凋亡的影响,RT-PCR检测环王巴明对U87细胞Gli-1 mRNA表达的变化,Western blot检测环王巴明对U87细胞Gli-1蛋白表达的变化。结果 MTT检测结果表明10μmol/L环王巴明组(85.11±2.61)%、50μmol/L环王巴明组(76.81±3.13)%和100μmol/L环王巴明组(69.20±4.11)%细胞活性较空白对照组(99.87±0.21)%降低(P0.05);流氏细胞技术检测结果表明10μmol/L环王巴明组(15.22±0.21)%、50μmol/L环王巴明组(24.87±0.24)%和100μmol/L环王巴明组(31.36±0.26)%细胞总凋亡率较空白对照组(2.66±0.28)%升高(P0.05);RT-PCR检测结果表明10μmol/L环王巴明组(0.68±0.06)%、50μmol/L环王巴明组(0.48±0.06)%和100μmol/L环王巴明组(0.30±0.06)%Gli-1mRNA表达水平较空白对照组(0.92±0.11)%降低(P0.05);Western blot检测结果表明10μmol/L环王巴明组(0.78±0.06)%、50μmol/L环王巴明组(0.58±0.05)%和100μmol/L环王巴明组(0.40±0.04)%Gli-1蛋白表达水平较空白对照组(0.94±0.11)%降低(P0.05)。结论Hedgehog信号通路阻断剂环王巴明可以抑制脑胶质瘤U87细胞增殖、诱导U87细胞凋亡,其作用机制可能与下调GLi-1表达有关。     

土槿乙酸抑制体外人胃癌细胞的生长

目的探讨土槿乙酸(PLAB)对人胃癌细胞生长的影响及机制。方法RT-PCR法检测MGC803细胞中PPARγmRNA的表达;MTT法检测细胞的生长;Hoechst333342/PI双染色法和DNA凝胶电泳检测细胞凋亡;流式细胞术检测细胞周期。结果PLAB(0.1~10μmol/L)作用MGC803细胞72 h显著抑制细胞增殖。PLAB(10μmol/L)作用后,G2期细胞随着作用时间的延长而增加,呈明显的G2期阻滞。作用72 h后,细胞出现核染色质凝集,DNA片断化等凋亡特征。在MGC803细胞中过氧化物酶增殖物激活受体γ(PPARγ)表达较弱,经PLAB(10μmol/L)作用48 h表达水平显著增加(P<0.01)。结论PLAB能在体外明显诱导MGC803细胞G2期阻滞和凋亡,该作用可能与PPARγ激活有关。     

慢病毒介导的胶质瘤模型在教学中的应用

目的比较移植性肿瘤动物模型与慢病毒介导的胶质瘤模型在教学中的应用效果。方法选取50名临床8年制5年级学生,根据不同的实验操作,将学生随机分为移植性肿瘤动物模型组(n=25)以及慢病毒介导的胶质瘤模型组(n=25)。移植性肿瘤动物模型组以大鼠胶质瘤细胞系9L脑纹状体注射Wistar大鼠模型进行实验操作;而慢病毒介导的胶质瘤模型组则以慢病毒载体介导Ras的表达以及Akt的激活,注射胶质纤维酸性蛋白(GFAP)-Cre基因小鼠进行实验操作。教学结束后比较两组的教学反馈和教学成果。结果与移植性肿瘤动物模型组相比,慢病毒介导的胶质瘤模型组成员对该模型的教学反馈评价更高,该模型的重复性更好,使学生对肿瘤分子水平的认识更深入,差异具有统计学意义(P0.05)。结论慢病毒介导的胶质瘤模型在教学中应用具有可行性,不仅提供了一个较新的模型,也使得学生能够从分子水平认识肿瘤,对于肿瘤的理解更为深入。     

标准化G422胶质瘤动物模型的肿瘤生长特点

目的探讨标准化G422胶质瘤动物模型肿瘤细胞的生长特点。方法将接种G422胶质瘤细胞接种于国际标准化小鼠双侧上肢皮下,每侧分别注射0.1、0.2、0.3ml。接种后5、10、15、20d观察小鼠的生存状态及肿瘤的生长特性;用HE染色及胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和S-100蛋白免疫组化分析;AnnexinV-PI观察肿瘤细胞的凋亡情况。结果标准化G422胶质瘤动物模型生长稳定;GFAP及S-100蛋白免疫组化表达强阳性,符合胶质源性肿瘤的特点;肿瘤细胞DNA呈多倍体峰,且早期出现凋亡峰。结论标准化G422胶质瘤动物模型,生长特征及病理表现与人脑胶质母细胞瘤相似,是一种理想的动物模型,为进一步研究提供了重要的平台。     

人脑胶质瘤细胞的增殖抑制和内质网改变

采用ＭＢ进行人脑胶质瘤的术前染色，不仅使术野清楚，而且还会使瘤细胞的无限增殖受到某种程度的抑制，其机理尚不明了。作者使用特异的荧光染色和高锰酸钾固定生物膜技术，在光镜和电镜下详细观察了人脑胶质瘤细胞的整装培养细胞的内质网真实分布状况和在ＭＢ作用下内质网形成改变的特点，即内质网朝向细胞核聚集，内质网结构扩张，呈六角形膨胀，使整个内质网系统出现网筛状改变，影响内质网的功能，这可能是造成瘤细胞增殖抑制的生物学基础     

免疫治疗在脑胶质瘤中的研究进展

脑胶质瘤是神经系统最常见的恶性颅内肿瘤.传统的治疗方式虽然能有效的抑制脑胶质瘤的生长,但是由于其高恶性程度和高复发率,恶性胶质瘤患者的术后生存期没有显著改善.研究证实,免疫治疗不仅发挥肿瘤杀伤作用,还能提升宿主的抗肿瘤免疫反应应答,被认为是难治性肿瘤的重要的辅助治疗策略.     

12例桥脑胶质瘤的X—刀治疗

目的 探索X－刀治疗桥脑胶质瘤的疗效。方法 用X－刀治疗桥脑胶质瘤12例,随访1－3年。结果 X－刀治疗桥脑胶质瘤具有显效快、有效控制肿瘤生长、无严重并发症及痛苦,延长患者生命、对复发患者仍有效的特点。结论 X－刀对治疗胶质瘤有较好疗效。     

残瘤腔间质内化疗治疗脑胶质瘤的临床研究

目的 探讨术中残瘤腔安置Ommaya贮液囊对脑胶质瘤患者术后间质内化疗(interstitial chemotherapty)的疗效。方法 在脑胶质瘤手术中尽可能切除肿瘤，于残瘤腔安置Ommaya贮液囊，术后定期行经贮液囊内注射化疗药VM-26。结果 手术切除后间质内化疗能提高患者的生存率和生存质量。结论 瘤腔间质内化疗方法简捷、费用低、全身毒副作用小，能有效改善患者的生存质量，是一种值得推广的方法。     

Distribution and prognostic impact of microglia/macrophage subpopulations in gliomas

While the central nervous system is considered an immunoprivileged site and brain tumors display immunosuppressive features, both innate and adaptive immune responses affect glioblastoma (GBM) growth and treatment resistance. However, the impact of the major immune cell population in gliomas, represented by glioma‐associated microglia/macrophages (GAMs), on patients’ clinical course is still unclear. Thus, we aimed at assessing the immunohistochemical expression of selected microglia and macrophage markers in 344 gliomas (including gliomas from WHO grade I–IV). Furthermore, we analyzed a cohort of 241 IDH1R132H‐non‐mutant GBM patients for association of GAM subtypes and patient overall survival. Phenotypical properties of GAMs, isolated from high‐grade astrocytomas by CD11b‐based magnetic cell sorting, were analyzed by immunocytochemistry, mRNA microarray, qRT‐PCR and bioinformatic analyses. A higher amount of CD68‐, CD163‐ and CD206‐positive GAMs in the vital tumor core was associated with beneficial patient survival. The mRNA expression profile of GAMs displayed an upregulation of factors that are considered as pro‐inflammatory M1 (eg, CCL2, CCL3L3, CCL4, PTGS2) and anti‐inflammatory M2 polarization markers (eg, MRC1, LGMN, CD163, IL10, MSR1), the latter rather being associated with phagocytic functions in the GBM microenvironment. In summary, we present evidence that human GBMs contain mixed M1/M2‐like polarized GAMs and that the levels of different GAM subpopulations in the tumor core are positively associated with overall survival of patients with IDH1R132H‐non‐mutant GBMs.     

Podoplanin increases migration and angiogenesis in malignant glioma

Expression of podoplanin in glial brain tumors is grade dependent. While serving as a marker for tumor progression and modulating invasion in various neoplasms, little is known about podoplanin function in gliomas. Therefore we stably transfected two human glioma cell lines (U373MG and U87MG) with expression plasmids encoding podoplanin. The efficacy of transfection was confirmed by FACS analysis, PCR and immunocytochemistry. Cells were then sorted for highly podoplanin expressing cells (U373P^high/U87P^high). Transfection did not influence the production of pro-angiogenic factors including VEGF, VEGF-C and D. Also, expression of VEGF receptors (VEGFR) remained unchanged except for U87P^high, where a VEGFR3 expression was induced. U373P^high showed significantly reduced proliferation as compared to mock transfected group. By contrast, podoplanin significantly increased migration and invasion into collagen matrix. Furthermore, conditioned media from P^high glioma cells strongly induced tube formation on matrigel. In conclusion, podoplanin increased migration of tumor cells and enhanced tube formation activity in endothelial cells independent from VEGF. Thus, podoplanin expression may be an important step in tumor progression.     

Post-traumatic glioma: Report of one case and review of the literature

We report one case of brain glioma that developed in the scar of an old brain trauma. A 45-year-old man who presented with seizures; MRI showed a large mass in the right temporal region. Surgical biopsy showed a glioblastoma multiforme. The patient had suffered a cranial trauma in a road accident 10 years previously with an intracerebral hematoma in the right temporal region. This case fulfills the established criteria for a traumatic origin of brain tumors and adds further support to the relationship between cranial trauma and the onset of glioma. As stated by other authors, an association between head trauma and brain tumor risk cannot be ruled out and should be studied further.