男性抗精子抗体对体外受精一胚胎移植的影响

目的;评价男性抗精子抗体对体外受精-胚胎移植(IVF-ET)的影响。方法:以ELISA方法测定施行IVF-ET的150对不育夫妇中男方精浆抗精子抗体(AsAb)并分组:AsAb阳性组22例,AsAb阴性组128例。对比分析抗精子抗体及抗体类型对体外受精、卵裂和早期胚胎发育的影响,同时对移植后的妊娠率和流产率进行分析。结果:AsAb阳性组体外受精数明显低于AsAb阴性组(P<0.01),两组的卵裂数则无明显差异(P>0.05),而在阳性组中,不同抗体类型间体外受精、卵裂及胚胎质量无明显差异(P>0.05)。在移植日,AsAb阳性组的I级胚胎较阴性组低,而ⅢⅣ级胚胎和2原核受精细胞(2PN)明显增加(P<0.01)。两组移植后临床妊娠流产率无显著差异(P>0.05)。结论:AsAb能明显降低精子体外受精能力,对早期胚胎发育有损害。精子体处理不能完全清除AsAb对IVF影响。     

人精子IZUMO蛋白的制备与人抗精子抗体间接ELISA检测方法的建立

正不孕不育是指夫妻在婚后至少同居一年,有正常性生活,未采取任何避孕措施而不能生育的状态~([1])。世界卫生组织(WHO)的调查数据显示,全世界有6000万~8000万夫妇处于不育不孕的状态,并且由于环境、激素和相关疾病     

兔抗人硒蛋白P抗体的制备与鉴定

目的 :以原核表达的人硒蛋白P片段 (HSelP)制备其兔多克隆抗体并进行鉴定。方法 :在E .coli中诱导表达HSelP片段 ,经DEAEfastflow和Ni NTA Agarose柱层析纯化后 ,以其为免疫原制备兔抗HSelP抗体 ,并以Westernblot鉴定抗体的特异性。结果 :成功地表达并纯化了HSelP ,制备的兔抗HSelP抗体可有效地检测天然的SelP。结论 :以原核表达并纯化的HSelP为免疫原 ,成功地制备了兔抗该蛋白的抗体 ,Westernblot鉴定特异性良好。为进一步研究硒蛋白P的功能、分布及建立较简便的检测方法打下了基础     

兔抗人copine-8蛋白多克隆抗体的制备

目的制备人源copine-8(CPNE8)蛋白的多克隆抗体。方法反转录PCR扩增HBE人支气管上皮细胞的CPNE8基因(编码CPNE8蛋白)并克隆至p GEX-4T-1原核表达载体中,所得的重组载体转化大肠杆菌Rosetta(DE3),用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达目的蛋白。谷胱甘肽琼脂糖凝胶亲和层析纯化目的蛋白并基质辅助激光解析电离串联飞行时间质谱(MALDI-TOF)鉴定。以纯化的CPNE8蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体。用ELISA、Western blot法及免疫组织化学染色法检测抗体的效价和特异性。结果成功构建了p GEX-4T-1-CPNE8表达载体,重组CPNE8蛋白在大肠杆菌中高效表达。ELISA检测结果显示抗体的效价达1∶64 000;此多克隆抗体可经Western blot特异性识别原核表达的CPNE8蛋白,并可适合免疫组织化学技术检测该蛋白在人正常肺组织和肺癌组织中的分布。结论成功制备具有较好结合特异性的CPNE8蛋白多克隆抗体。     

兔抗人精子顶体精子溶菌酶样蛋白1结合蛋白(SAS1B)多克隆抗体的制备及鉴定

目的 制备兔抗人精子顶体精子溶菌酶样蛋白1结合蛋白(SAS1B)多克隆抗体.方法 构建pET-22b-SAS1 B-His质粒,转化E.coli.BL21(DE3)细胞,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导SAS1B重组蛋白表达.用层析纯化后的蛋白免疫日本大耳白兔制备SAS1B多克隆抗体.ELISA检测SAS...     

血清和卵泡液中抗精子抗体对体外受精——胚胎移植的影响

目的 评价女性抗精子抗体对体外受精－－胚胎移植（ＩＶＦ－ＥＴ）的影响。方法 采用ＥＬＩＳＡ法测定施行ＩＶＦ－ＥＴ的妇女的血清和卵泡液中抗精子抗体（ＡｓＡｂ）。Ａ组：血清ＡｓＡｂ阳性１３例;Ｂ组：血清及卵泡液ＡｓＡｂ均阳性２９例;Ｃ组：ＡｓＡｂ阴性１５８例。分析３组受精率、卵裂率、胚胎发育情况及临床妊娠率和流产率的关系。结果：Ａ、Ｂ组受精率、卵裂率明显低于Ｃ组（Ｐ〈０．０１）。移植日,Ａ、Ｂ组Ⅰ－Ⅱ级胚胎率较Ｃ组低,Ⅳ级胚胎及２原核受精细胞增加（Ｐ〈０．０５）。各组妊娠率及流产率无显著差异（Ｐ〉０．０５）。结论 ＡｓＡｂ对ＩＶＦ和早期胚胎发育有损害,体外培养不能完全清除ＡｓＡｂ对ＩＶＦ－ＥＴ的影响。     

兔抗人唾液酸转运蛋白抗体的制备及特性鉴定

目的：制备兔抗人唾液酸转运蛋白（sialin）的抗体，并进行特性鉴定。方法：应用RT—PCR从培养的人颌下腺细胞系HSG中扩增编码sialin N端1～38氨基酸的DNA序列，构建重组表达质粒pGEX-5X-1-sialin，测序鉴定后，转化大肠杆菌JM109，在0．1 mmol／L IPTG的诱导下表达GST—sialin融合蛋白。经SDS-PAGE鉴定后，利用GSTrap FF^TM柱纯化融合蛋白，并以其免疫家兔制备抗人sialin抗体。用ELISA法测定兔抗sialin血清的效价；用Western blot及免疫细胞化学等方法鉴定抗血清的特异性。结果：构建了重组表达质粒pGEX-5X-1-sialin；以其转化大肠杆菌在IPTG诱导下，获得以可溶性形式表达的GST-sialin融合蛋白；表达的GST—sialin经GSTrap FF^TM柱纯化后，免疫家兔制备出抗sialin抗血清，ELISA法测定抗血清的效价为1：32000。Western blot鉴定表明，制备的抗sialin抗体可特异地识别HSG细胞中相对分子质量（Mr）约55000的sialin蛋白。免疫细胞化学检测表明，sialin抗血清识别的抗原定位于HSG细胞的细胞质和胞核。结论：成功地制备出兔抗人sialin抗血清，为进一步研究sialin在涎腺组织的功能奠定了基础。     

抗人精子甘露糖受体抗血清对精子穿透实验的影响

目的 研究人精子甘露糖受体(MR)在精卵融合中的作用.方法 用亲合层析法分离纯化的人精子甘露糖受体来免疫Balb/c小鼠得到抗MR抗血清;用抗血清处理顶体反应后的人精子,并进行去透明带金黄地鼠卵的精子穿透实验(SPA),观察其体外受精情况.结果 抗MR抗血清可抑制人精子与去透明带金黄地鼠卵的结合与穿透,使卵子的受精率下降,具剂量依赖性.结论 人精子MR与精卵膜的识别与融合有关.     

兔抗重组人钙网蛋白抗体的制备及其特性鉴定

目的:制备兔抗人钙网蛋白抗体并进行特性鉴定。方法:用PCR法扩增人钙网蛋白(CRT)基因,并克隆至pET32a表达载体中。以重组质粒pET32a/hCRT转化大肠杆菌BL-21(DE3),用IPTG诱导重组蛋白的表达,通过Ni2+-NTA琼脂糖凝胶柱亲和层析纯化目的蛋白。以纯化的hCRT为免疫原免疫新西兰大白兔制备抗体,用ELISA法、Westernblot和免疫组化染色法检测抗体的效价和特异性。结果:成功地表达并纯化hCRT重组蛋白。以纯化的重组hCRT免疫新西兰大白兔制备的抗体,ELISA检测其效价为1∶51 200,Western blot分析显示,该抗体能与hCRT特异性结合。免疫组化染色法检测结果表明,该抗体能识别天然的hCRT。结论:以重组hCRT为免疫原,成功地制备效价高、特异性好的兔抗hCRT抗体,为进一步进行钙网蛋白的检测及其临床应用研究奠定了基础。     

兔抗人PIWIL4蛋白多克隆抗体的制备和鉴定

目的 制备兔抗人PIWIL4的多克隆抗体,并鉴定其特异性,应用组织芯片初步探讨其在人类正常及肿瘤组织中的分布.方法 合成特异性PIWIL 4多肽,以马来酰胺活化匙孔血蓝蛋白(KLH)作为载体构建多肽免疫原,通过致敏大白兔, 制备兔抗人PIWIL4多克隆抗体,然后用亲和层析法纯化抗体.用ELISA和western方法进行抗体验证,并应用人组织芯片进行PIWIL4的免疫组化研究.结果 通过构建P IWIL4多肽-KLH载体复合物致敏大白兔,我们制备了兔抗人PIWIL4蛋白多克隆抗体,经ELIS A 及Western blot证实兔抗人PIWIL4抗体可特异性识别PIWIL4多肽,在人组织芯片中通过免疫组化染色显示该抗体在BU部分正常组织和肿瘤组织中呈阳性染色.结论 本项研究成功制备兔抗人PIWIL4多克隆抗体,为进一步研究PIWIL4在人类疾病中的意义提供了有利工具.     

附睾分泌蛋白与精子成熟的研究进展

哺乳动物精子成熟是通过与附睾管腔微环境相互作用而实现的,精子通过在附睾内转运过程中与附睾蛋白相互作用获得运动和精卵识别结合能力.附睾蛋白通过直接或间接参与精子膜修饰或有助于保护精子的完整性参与精子成熟过程,与精子成熟相关的附睾蛋白的研究将有助于推动男性生殖医学的研究进展,同时有可能对附睾环节的男性避孕带来新的思路和突破.     

精浆抗精子抗体影响精子DNA完整率的临床观察

目的研究精浆抗精子抗体(AsAb)对精子DNA完整率的影响。方法实验前取配偶怀孕后半年内正常精液标本20例测定精子DNA完整率做预试验,其数值拟做疗效参考指标。选择2008年4月至2011年1月来我院生殖中心就诊的特发性弱精子症门诊患者432例。检验其精浆抗精子抗体和精子DNA完整率。结果在432例病人中抗精子抗体阳性患者有45例,占总数的10.42%。抗精子抗体阳性组与正常组比较,在液化时间、精子密度、精子存活率、DFI(%()精子DNA断裂指数)上存在差异,具有统计学意义(P<0.05)。抗精子抗体阳性组与阴性组比较,在液化时间、精子密度、和排精量上存在差异,具有统计学意义(P<0.05)。抗精子抗体阳性组与阴性组比较,在精液pH值、DFI上无明显差异,无统计学意义(P>0.05)。结论精浆抗精子抗体(AsAb)对精子DNA完整率的影响不明显。     

人抗精子抗体,补体及白细胞杀伤精子作用的研究

虽有一些报道认为白细胞在精液中异常增多，对精子活动力有一定的影响，但至今对白细胞精子症中白细胞及其产物抗生育机制的许多环节仍未完全了解，用人外周血白细胞，人抗精子抗体血清，人补体血清以正常人精子按析因试验设计，体外培养观察精子死亡率，实验结果，白细胞具有较强的直接杀伤精子作用，这种作用在抗精子抗体存在下有所加强，但补体存在，杀伤力并不表现增强，抗精子抗体和补体一起则可表现出一定程度细胞毒效应，而抗     

兔抗人ERA多克隆抗体的纯化

目的纯化兔抗人ERA的多克隆抗体。方法在大肠杆菌中,表达重组MBP-hEra融合蛋白。表达产物先继以直链淀粉树脂亲和柱和Superose12凝胶柱过滤纯化。将纯化的MBP-hEra偶联于NHS-activatedSepharoseTM上,制备亲和层析柱,纯化兔抗人ERA多克隆抗体。结果①表达、纯化的MBP-hEra,相对分子质量(Mr)为78×103,其纯度为95％。②从抗血清中纯化获得可与MBP-hEra特异性结合的兔抗hEra多克隆抗体。结论获得了特异性较好的纯化兔抗hEra多克隆抗体。     

兔抗人PDGF-A抗体的制备与鉴定

血小板衍生的生长因子(platelet—derived grovdh factor，PDGF)是由A、B链通过二硫键连接而形成的二聚体有研究表明，PDGF—A参与创伤愈合过程中的炎症反应、肉芽组织和瘢痕形成。另外，PDGF—A对雄性小鼠生殖系统的发育也起着决定性的作用，提示其对于生殖系统某些疾病的诊断和治疗可能具有重要意义。为此，我们制备了免抗人PDGF—A的抗体，为进一步研究PDGF—A的功能提供有用的试剂。     

人精子结合蛋白HBRP的抗体制备及定位

目的制备人类新的精子结合蛋白HBRP的单克隆抗体,确定其在精子的定位及其与精子功能相关的作用。方法分别利用PCR、Western blot、动物免疫、血清纯化等方法得到HBRP单克隆抗体,用ELISA方法检测抗体滴度;利用间接免疫荧光方法观察HBRP在精子的定位。结果经纯化鉴定获得HBRP融合表达蛋白;首次获得HBRP单克隆抗体;应用制备的单克隆抗体,确定HBRP主要结合在精子尾部的中段和主段。结论 HBRP结合在人成熟精子尾部的中段和主段,提示其参与精子运动功能的调控。     

抗精子抗体与生育

精子正常受血睾屏障所遮蔽,血睾屏障的破坏可导致精子凝集抗体和制动抗体产生。实验动物接种自身精子可发生上述情况;如果精子与弗氏佐剂一起接种,则引起细胞介导免疫应答伴有免疫性睾丸炎和变应性无精子发生。然而,有人对人类不育与上述实验产生的抗精子抗体的关联表示怀疑。如果已发表的著作都能清楚地区别男性的结果与女性的结果(两者可能反映不同的现象,无疑具有不同的临床意义),如果对生育的影响是与精液或宫颈粘液(而不是血