小梁细胞吞噬功能的研究

前房内碎屑的沉积,如白内障囊外摘除术后晶体碎片,色素性青光眼色素、剥脱性物质、色素膜炎渗出物,前房积血的血细胞及其产物等,其清除过程均有小梁吞噬细胞参与。吞噬功能对保持房水外流系统的正常具有重要作用。现将有关小梁细胞吞噬功能研究的文献综述如下: 一、小梁细胞的吞噬功能 Rohen等证实猕猴的小梁细胞具有吞噬功能,以后人眼,其它种属猴,家兔和鼠的小梁细胞也都被发现具有吞噬活动,小梁细胞可清除房水循环中的碎片,并预防碎片对房水流出通道的阻塞。Bill认为     

内皮素-1对人小梁细胞吞噬功能的影响

目的观察内皮素-1（ET-1）对人小梁细胞（TMCs）吞噬功能的影响及作用机制。方法取培养第3代人TMCs,与直径0．5μm荧光标记的乳胶微粒共孵育0、4、8、12、24、48、72h,荧光显微镜下动态定量观察人TMCs吞噬动力学。取6孔板培养3代人TMCs,随机分为4组,观察不同浓度ET-1对人TMCs吞噬功能的影响：对照组（0mol／LET-1）、低剂量组（10-mol／LET-1）、中剂量组（10-mol／LET-1）、高剂量组（10～mol／LET-1）,分别与乳胶颗粒共孵育后观察各组细胞吞噬乳胶颗粒数。取6孔板培养人TMCs随机分为4组,观察内皮素受体对吞噬功能的影响：对照组（0mol／LET-1）、ET-1组（10～mol／LET-1）、ETA受体拮抗剂组（10-mol／LET-1＋10μmol／LBQl23）、ETB受体拮抗剂组（10mol／LET-1＋10。mol／LBQ788）,并分别与乳胶颗粒共孵育,观察各组人TMCs吞噬乳胶颗粒数。结果人TMCs免疫组织化学鉴定纤维连接蛋白（FN）、层粘连蛋白（LN）、神经元特异性烯醇酶（NSE）染色均呈阳性;Ⅷ因子相关抗原（FⅧRAg）染色阴性;人TMCs吞噬动力学观察示,人TMCs与乳胶颗粒共孵育4h后可见明显的吞噬颗粒,随时间延长吞噬微粒数明显增多,24h吞噬微粒密度最佳,48h吞噬微粒达到饱和,细胞形态改变;加入ET-1干预后,细胞内吞噬乳胶微球数明显减少,其吞噬抑制效果呈ET-1浓度依赖性（F=28．91,P〈0．05）;ET-1组吞噬颗粒数较对照组减少（q=13．7228,P〈0．05）,而ETA受体拮抗剂组吞噬颗粒较ET-1组明显增多（q=9．4312,P〈0．05）,ETB受体拮抗剂组与ET—1组相比差异无统计学意义（q=1．1600,P〉0．05）。结论ET-1能抑制体外培养人TMCs的吞噬能力;ET-1主要通过ETA受体发挥抑制人TMCs吞噬功能的作用。     

地塞米松对小梁细胞生长周期的影响

目的：探讨地塞米松对小梁细胞生长周期的影响。方法：按常规方法培养人眼小梁细胞,然后分为二组：常规DMEM培养液及含10^-7M地塞米松的DMEM培养液组,培养3d、5d、7d后,应用流式细胞仪检测细胞周期各阶段G1、S、G2期情况。结果：在正常未用地塞米松处理组,G2期细胞为2．0％;地塞米松处理3、5、7d后,G2期细胞比例各为8．0％、16．3％、19．87％,其差异有显著性意义。结论：地塞米松可使小梁细胞生长周期中G2期的比例增加,提示这种作用可能与激素性青光眼的发病 有关。     

牛眼小梁网细胞体外培养及吞噬功能的研究

目的研究小梁细胞吞噬功能异常在青光眼发病中的作用。方法利用牛眼分离小梁网组织，进行小梁细胞体外培养；应用乳胶微球为标记物，定性及定量观察体外培养的牛小梁细胞吞噬功能及其影响因素。结果免疫组织化学染色证实牛小梁细胞能分泌纤维连接蛋白和层连蛋白。在体外，牛小梁细胞对乳胶微球有较强的吞噬能力。细胞吞噬乳胶微球的数目随培养时间的延长而增多，培养至２４小时，平均每个细胞含４０．５±６．７个微球，细胞在吞噬过程中出现明显的形态学改变，同时也伴有自身损伤，甚至死亡。肾上腺素及可的松抑制小梁细胞的吞噬功能（Ｐ＜０．０５），ＥＧＦ对细胞吞噬作用无影响。结论小梁细胞的吞噬功能对保持房水流出道通畅起重要作用，小梁细胞的吞噬功能异常可能参与原发性开角型青光眼的发病过程。     

白细胞介素-1α对培养的人眼小梁细胞吞噬功能的影响

目的观察白细胞介素-1α（IL-1α）对体外培养的人眼小梁细胞（HTM）吞噬功能的影响。方法取人眼小梁组织进行小梁细胞体外培养,取传3～5代的人眼小梁细胞,加入不同浓度的IL-1α的DMEM-F12培养液,用倒置相差显微镜、光镜、电镜观察细胞吞噬功能的变化。结果小梁细胞吞噬乳胶微球数与IL-1α浓度（F=3．603,P=0．046）和作用时间（F=15．846,P=0．005）均有相关性（F=18．069,P=0．000）。结论IL-1α可以直接损害体外培养的人眼小梁细胞吞噬功能,其吞噬程度与IL-1α作用时间和浓度相关。     

维拉帕米对牛眼小梁细胞增殖和吞噬功能的影响

目的　研究维拉帕米对牛眼小梁细胞 (BTMC)增殖和吞噬功能的影响。方法　采用MTT和3 H TDR实验检测 0 0 0 0 1、0 0 0 0 5、0 0 0 1、0 0 0 5、0 0 1、0 0 5、0 1mg/ml 7种质量浓度的维拉帕米对BTMC增殖功能的影响。以乳胶微粒为标记 ,定量检测等于和低于 0 0 1mg/ml维拉帕米对BTMC吞噬功能的影响。结果　低于 0 0 1mg/ml维拉帕米对BTMC增殖功能无抑制作用 (P >0 0 5 ) ,等于或高于 0 0 1mg/ml的维拉帕米可浓度依赖性地抑制BTMC增殖功能 (P <0 0 5 ) ,其IC50 分别为 0 0 3 2 3mg/ml(MTT)和 0 0 2 5 9mg/ml( 3 H TDR)。 0 0 0 1、0 0 0 5、0 0 1mg/ml维拉帕米可浓度依赖性地促进BTMC的吞噬功能 (P <0 0 5 )。结论　临床应用的 0 12 5 %维拉帕米滴眼剂在房水中的质量浓度为 ( 160 7± 2 72 )ng/ml ,该质量浓度范围不抑制BTMC增殖。选用等于和低于 0 0 1mg/ml作为后续实验的质量浓度。维拉帕米还可通过促进小梁细胞的吞噬功能 ,减少房水外流阻力 ,有望在发病学环节上治疗原发性开角型青光眼     

反义寡核苷酸封闭CD44基因表达对小梁细胞吞噬及聚集功能的影响

目的观察CD44反义寡核苷酸封闭CD44基因表达对人眼小梁细胞吞噬、聚集功能的影响,进一步探讨黏附分子CD44在原发性开角型青光眼(primary open angleglaucoma,POAG)发病过程中可能的作用。方法取意外死之后行角膜移植供体眼小梁细胞,实验分空白对照组,2.0μmol·L-1正义寡核苷酸,0.5μmol·L-1、1.0μmol·L-1、2.0μmol·L-1反义寡核苷酸共5组,采用硫代修饰的CD44反义寡核苷酸,通过脂质体介导转染体外培养的人眼小梁细胞。以乳胶微粒为标记定量观察CD44反义寡核苷酸封闭CD44基因表达对人眼小梁细胞吞噬功能的影响,计数法观察CD44反义寡核苷酸封闭CD44基因表达对人眼小梁细胞聚集功能的影响。结果3种浓度的CD44反义寡核苷酸处理的小梁细胞吞噬微粒数分别为58.2±18.8、47.5±16.9、34.9±16.3,明显低于对照组的75.9±13.4(P<0.05)及CD44正义寡核苷酸组的74.0±11.8(P<0.05),且呈浓度依赖性。而对照组与CD44正义寡核苷酸组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。3种浓度的CD44反义寡核苷酸处理各组出现细胞聚集阳性平均次数分别为(24.50±5.26)次、(16.30±3.77)次、(9.25±1.71)次,明显低于对照组的平均(32.00±3.37)次(P<0.05)和CD44正义寡核苷酸组的(33.25±5.32)次(P<0.05),且呈浓度依赖性,而CD44正义寡核苷酸组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论CD44反义寡核苷酸封闭CD44基因表达后人眼小梁细胞吞噬功能降低以及小梁细胞的聚集功能受到抑制,黏附分子CD44可能通过影响小梁细胞的吞噬以及聚集功能参与了POAG发病过程。     

体外培养人眼小梁细胞吞噬乳胶微粒的研究

原发性开角型青光眼及某些继发性开角型青光眼的病理改变与覆盖在小梁柱表面的小梁细胞功能改变有关［１］;小梁细胞具有增殖、移行、吞噬及合成分泌细胞外基质、激素或酶的功能。其中小梁细胞的吞噬功能在清除异物、保持房水滤道通畅方面具有重要作用［２,３］。我们采用体外培养的人眼小梁细胞,观察其吞噬乳胶微粒的过程。一、资料和方法１小梁细胞原代和传代培养：取各种原因死亡８ｈ的新生儿眼球,按王林等［４］报道的方法进行组织块培养。无菌显微镜下操作,取出小梁组织,剪成１ｍｍ×２ｍｍ组织块,置入培养瓶内,待贴壁后加入…     

小梁细胞在吞噬过程中自身受损伤的研究

利用体外培养方法,研究了牛小梁细胞对鸡红细胞的吞噬过程及所致的细胞损伤.结果发现小梁细胞在体外对鸡红细胞有较强的吞噬能力,完整的鸡红细胞被吞入细胞内需8小时,但随着吞噬过程的延长小梁细胞的形态和结构发生损伤性改变.因此,吞噬过程所致的小梁细胞损伤或细胞数减少,可能与某些继发性青光眼的发生或老年性青光眼时的小梁细胞减少有关.     

地塞米松及Lat—A对人眼小梁细胞蛋白质表达的影响

目的探讨地塞米松（Dex）及latrunculin—A（Lat-A）处理后人眼小梁细胞蛋白质表达的变化。方法正常供体人眼小梁细胞培养后用Dex及Lat—A处理,经二维凝胶电泳分离小梁细胞蛋白质,分析凝胶电泳图谱,选取部分差异凝胶斑点并采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI—TOFMS）鉴定蛋白质。结果采用24cm IPG胶条获得正常人眼小梁细胞对照组、Dex组、Dex＋Lat—A组以及Lat—A组的二维电泳凝胶图谱,得出不同培养条件下人眼小梁细胞蛋白质表达的差异。应用GDPi MALDI—TOFMS得出不同培养条件下差异表达的蛋白质斑点并成功鉴定出其中的24种蛋白质,主要包括细胞骨架相关的蛋白、热休克蛋白、氧化还原相关的蛋白和糖代谢相关的蛋白4类蛋白质。ADLH和Rab蛋白在Lat—A组的人小梁细胞中表达增加,但在Dex组表达减少,而热休克蛋白27（HSP27）和人CRMP2呈现相反的结果。结论成功建立Dex及Lat—A诱导人眼小梁细胞蛋白质表达图谱。Dex及Lat—A能诱导人眼小梁细胞的蛋白质表达变化,可能与青光眼致病的分子机制相关。     

Muscarinic Receptor Agonists Protect Cultured Bovine Trabecular Meshwork Cells against Apoptosis Induced by Dexamethasone

IntroductionDuringnormalaging,humantrabeculameshwork(TM)cellsreduce.Suchlosshasbeenreportedtoberemarkablyobviousinglaucompatientssinceindividualswithprimaryopenangleglaucoma(POAG)havefewerTMcellsthannon鄄glaucomatousage鄄matchedcontrols[1,2].Currently,theexactmechanismbywhichthecelpopulationisreducedinnormalandglaucoma鄄toushumanTMtissuesisnotknown.Severalpo鄄tentialmechanismshavebeensuggestedinclud鄄ingwear鄄and鄄tear,phagocytosis,cellmigrationandcelldeath[2].Apoptosisisaninvolutionalfor…     

The Effect of Dexamethasone on Integrin and Laminin Expression in Cultured Human Trabecular Meshwork Cells

Glucocorticoid treatment in vivo can produce a glaucoma similar in many ways to POAG. Treatment of trabecular meshwork cells in culture with dexamethasone allows the study of biochemical aspects of this disease process. The effects of dexamethasone on the expression of integrins and laminin in both normal and glaucomatous cultured human trabecular meshwork cells were evaluated. Human trabecular meshwork cell lines were cultured for 18 days in the presence or absence of 10⁻⁷mdexamethasone. Radioimmunoprecipitation was used to determine the relative expression of five αintegrin subunits. Laminin expression was evaluated with Western blots. Laminin was increased in all cell lines following dexamethasone treatment. α2, α5 and αV integrin chains showed consistent dexamethasone-induced changes in expression, while α3 and α4 subunits did not. There were no differences in the expression patterns for any of these integrin subunits between normal and glaucomatous cell lines. Increased laminin deposition as seen in this study with dexamethasone treatment may be partially responsible for the decreased outflow facility seen in both steroid-induced glaucoma and in POAG.     

地塞米松诱导人小梁细胞bcl—2基因的表达

目的:探讨地塞米松对小梁细胞bcl-2基因表达的影响。方法:应用组织块培养的方法建立人小梁细胞培养。取第三代小梁细胞培养于载玻片上,含10~(-7)mol/L地塞米松的培养液作用6小时、12小时、24小时后,应用LSAB观察bcl-2基因表达的情况。结果:地塞米松作用6小时后可见bcl-2蛋白阳性细胞,且随时间的延长,阳性细胞有所增多。结论:地塞米松可诱导小梁细胞bcl-2基因表达,可能在激素性青光眼发病中起着一定的作用。眼科学报1998;14:187～189。     

A Study of Toxic Effect of Mitomycin C on Cultured Bovine Trabecular Meshwork Cells

Purpose: To explore the toxicity of Mitomycin C (MMC) on trabecular meshwork cells. Methods: Bovine trabecular meshwork cells were cultured in vitro and exposed to MMC of different concentrations. The cellular morphology, ultrastructure, mortality and phagocytosis was studied with light microscopy, transmission electron microscopy and methods of Wright's stain, etc.Results: It was found that the toxic effect of MMC on the cells was in a dose-dependent mode. 1 × 10-2 and 1 × 10-3mg/ml of MMC caused a large part of cells dead, 1 × 10-4 and 1 × 10-5mg/ml of the drug had remarkable killing effect on the cells. 1 × 10-5mg/ ml of MMC had still a mild toxicity, while 1 × 10-7 mg/ml of MMC had not any influence on cellular morphology, mortality, and phagocytosis, etc. The safe concentration on bovine trabecular meshwork cells was 1 × 10-7mg/ml and the LD50 was between 1 × 10-3and 1 × 10-4mg/ml.Conclusions: Refering to previous data, we conclude that conventional clinical-application of MMC might do har     

N—甲基—D—天门冬氨酸和地塞米松对体外培养鼠视网膜神经节细胞凋亡作用观察

目的:研究N-甲基-D-天门冬氨酸(N-methyl-D-aspartate NMDA)及地塞米松对体外培养视网膜神经节细胞(RGCs)的作用。方法:出生1～3天Sprague-Dawley(SD)乳鼠做体外RGCs培养。NMDA按20～500μmol/L加入两组混合培养的RGCs中,24小时后一组用Hochest33258检测凋亡细胞。另一组加0.4%台盼蓝,计数拒染细胞,并算出细胞存活率。地塞米松按1×10~(-4)、1×10~(-5)及1×10~(-6)mol/L分别加入混合培养及纯化培养的RGCs中,对照组不加,24小时后用Hochest33258检测凋亡细胞。结果:混合培养RGCs经不同浓度NMDA处理均可见明显的凋亡细胞形态学改变。对照组则不明显。而且其中细胞的存活率与NMDA浓度呈反相关。不同浓度地塞米松处理混合培养RGCs,经Hochest33258检测均未发现有凋亡形态学改变。而纯化培养RGCs实验组及对照组均有明显凋亡细胞形态学改变。结论:NMDA对体外混合培养RGCs有诱导细胞凋亡的作用;地塞米松则对培养RGCs无诱导细胞凋亡作用。纯化的RGCs生长24小时,不加神经营养因子Neurotrophic Factors(NTFs)有细胞凋亡的形态学改变。眼科学报1999 15:65—69。     

人眼小梁细胞体外培养及生物学特性研究

目的:建立人眼小梁细胞培养方法并研究其生物学特性。方法:以体外组织块培养的方法获得培养的人小梁细胞,应用光镜、电镜观察细胞的形态学特征,并观察其免疫组化特性和细胞的生长曲线。结果:光镜下小梁细胞为扁平多角形、单层生长;电镜下细胞连接为点粘连和缝隙连接、细胞表面可见微绒毛、胞浆细胞器丰富;免疫组化染色对抗纤维连接蛋白(Anti—FN)、抗层粘连蛋白(Anti—LN)、抗神经元特异性烯醇化酶(Anti—NSE)单抗呈阳性,对抗第Ⅷ因子(Anti-ⅧFactor)单抗呈阴性;传代小梁细胞繁殖时间较长,10天后为平台期。结论:根据体外培养的小梁细胞的形态特点、生长特征、免疫组化特性可对其进行鉴定。人小梁细胞体外培养的成功,为在细胞和分子水平研究青光眼的发病机制提供了有利的条件。眼科学报 1996;12:64—69。     

In-Vitro Effects of Dexamethasone on Cellular Proliferation,Apoptosis, and Na+-K+-ATPase Activity of Bovine Corneal Endothelial Cells

Purpose: To assess the in-vitro effects of dexamethasone (DEX) on the proliferation, apoptosis, and Na+-K+-ATPase activity of bovine corneal endothelial cells. Methods: Bovine corneal endothelial cells were cultured with DEX ranging from 10^?10 to 10^?3 M. The effect of DEX on the proliferation was analyzed by 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxy-methoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium inner salt (MTS) assay. Apoptosis and necrosis were detected by staining with fluorescein-conjugated annexin V and propidium iodide, followed by flow cytometry. The effect of DEX on Na+-K+-ATPase activity was evaluated using non-isotopic methods. Results: DEX did not affect cellular proliferation or induce apoptosis/necrosis from 10^?10 to 10^?5 M. At 10^?4 and 10^?3 M, DEX significantly decreased proliferation and increased apoptosis and/or necrosis. DEX significantly increased the Na+-K+-ATPase activity from 10^?8 to 10^?6 M, with the maximal effect at 10^?6 M (p < 0.01); this effect was inhibited by RU38486, an antiglucocorticoid molecule. Conclusions: Bovine corneal endothelial cells express glucocorticoid receptor (GR) mRNA and protein. DEX decreases cell proliferation and induces cellular apoptosis and/or necrosis at high concentrations. DEX also increases the Na+-K+-ATPase activity at certain concentrations.