高效液相色谱柱后衍生法测定豚鼠鼻粘膜中组胺

通过比较各种分析柱的分离效果,建立用离子交换柱分离,邻苯二甲苯柱后衍生荧光检测并分析豚鼠鼻粘膜组织中组胺的液相色谱法。并对流动相的离子强度和ＰＨ进行了优化,确定以４０ｍｍｏｌ．Ｌ＾－１ＰＨ５．５０的柠檬酸钠缓冲液作为流动相为最侍者     

变应性鼻炎豚鼠鼻粘膜组胺含量对血流量的影响

目的：探讨变应性鼻炎豚鼠不同病程中鼻粘膜组胺含量对血流量的影响。方法：６０只豚鼠随机分成正常组和致敏组（ｎ＝３０），分别检测致敏后激发前和激发后即刻，２４，４８，７２ｈ豚鼠鼻粘膜中的组胺含量，每组动物处死前均用激光多谱勒探测仪测定其鼻粘膜血流量，用直线相关与回归分析比较不同时相点豚鼠鼻粘膜中的组胺含量与鼻粘膜血流量的关系。结果：致敏原激发前致敏组动物鼻粘膜中组胺含量和鼻粘膜血流量均明显高于正常对照     

高效液相色谱柱前衍生法测定丙戊酸血药浓度

目的　建立测定血清中丙戊酸血药浓度的高效液相色谱法。方法　血清在酸性条件下用正己烷提取 ,采用 2 ,4 二溴苯乙酮将丙戊酸转变为可紫外检测的酯 ,RP HPLC测定。结果　在 3.4 9～ 2 1 8.5 6 μg/ml范围内 ,丙戊酸衍生物和内标的峰面积比与浓度呈良好的线性关系 ,r=0 .9998,平均回收率大于 96 % ,日内和日间RSD <5 %。结论　本法准确、灵敏、选择性强、重现性好、快速、简便 ,适用于丙戊酸血药浓度的临床和科研测定     

高效液相色谱柱前衍生法测定牛磺酸含量

目的探讨高效液相色谱柱前衍生法测定血、房水、晶状体中牛磺酸含量的价值。方法采用２种流动相,流动相Ａ为０．０５ｍｏｌ／Ｌ醋酸钠缓冲液（ｐＨ＝６．５）甲醇四氢呋喃（８０∶２０∶０．８）,流动相Ｂ为０．０５ｍｏｌ／Ｌ柠檬酸缓冲液（ｐＨ＝６．５）甲醇（２０∶８０）;色谱柱为ｎｅｃｌｅｏｓＯＤＳΦ４．６ｎｍ×１５０ｎｍ。Ｗｉｓｔａｒ大鼠的血浆、房水、晶状体经处理和衍生后进样分析。结果该方法最低检出限为１０μｇ／ｍｌ,氨基酸浓度与相对响应值之间平均相关系数为０．９９８±０．００２,回收率为９１．０７％～９６．７９％,牛磺酸峰面积变异系数在进样量３μｌ时为１０．７５％,进样量５μｌ时为３．１２％。结论高效液相色谱柱前衍生法可使血、房水、晶状体中的牛磺酸与其它氨基酸很好地分离,是测定牛磺酸含量的好方法。     

大鼠鼻粘膜组胺激发试验

60只大鼠随机分成组胺组,苯海拉明组和对照组三组。用伊文氏蓝法检测血管通透性。经组胺鼻粘膜激发后,组胺组动物鼻粘膜水肿,下鼻道积满大量水祥液体,每 mg鼻粘膜中伊文氏蓝含量为169.1±20.9ng;经苯海拉明预处理后再行组胺滴鼻,组胺的上述作用便被阻断,伊文氏蓝含量为106.7±12.1ng,和组胺组比较有显著性差异(P<0.001),而和对照组比较无明显差异(P>0.05)。说明组胺经鼻粘膜给药可以引起鼻粘膜血管通透性增加,苯海拉明可以阻断这种作用,临床上可用来预防或缓解变应性鼻炎的临床症状。     

高效液相色谱柱前自动衍生法测定氨基酸含量

本文利用高效液相色谱柱前邻苯二甲酝酿自动衍生、自动进样程序测定脑组织中谷氨酸、天冬氨酸、甘氨酸、牛磺酸和ｒ－氨基丁酸含量，该法的最低检出限为１０ｎｍｏｌ／ｍｌ，５种氨基酸峰面积测定值的变异系数平均为２．０±１．３％，线性相关系数平均为０．９７±０．０３。     

高效液相色谱衍生化法测定脑脉康中冰片含量

目的：建立一种测定脑脉康中冰片含量的新方法。方法：柱前衍生化在乙腈中反应，以3，5－二硝苯苯甲酰氯为衍生化试剂（与冰片的摩尔比为20倍），4－二甲氨基吡啶为催化剂（与冰片的摩尔比为40倍），然后在ODS柱上，以甲醇：水（88：12）为流动相，检测波长225nm，高效液相色谱测定脑脉康中冰片含量。结果：冰片在1－10nmol范围内，色谱峰面程与进样量呈线性关系（R^2＝0．9996，P＜0．01），两批脑脉康中冰片的含量分别为7．9％和7．1％，RSD分别为1．0％和1．5％（n=5)，平均回收率为99．9％，RSD为1．8％（n=4).结论：高效液相色谱衍生化法用于测定脑脉康中的冰片含量方法简便，准确，可行。     

黄刺蛾幼虫刺毛中组胺高压液相色谱法测定

[1]目的 为了测定黄刺蛾幼虫刺毛中的组胺含量,建立了反相高压液相色谱测定组胺的方法.[2]方法采用邻苯二甲醛(OPA)与组胺的柱前衍生化反应,生成的荧光产物以高压液相色谱分离,荧光检测器测定组胺含量.色谱条件:色谱柱为ZorboxODS,流动相为甲醇—磷酸二氢钠缓冲液(v:v＝47:53,pH9.45),流速为0.7ml/min黄刺蛾幼虫-40℃低温保存,剪下刺毛,用高氯酸抽提,抽提液经衍生化反应后注入色谱柱测定,荧光检测的激发波长为360nm,测量波长为450nm.[3]结果 在0.01~10.00nmol范围内,组胺OPA衍生物的色谱峰高与组胺量之间的线性回归方程为W=6.1600H—0.0021,r＝0.9973;最低检出限为2.5pmol.回收率为93.1%,变异系数CV＝3.5%(n＝4),日内差为3.9%(n＝6).黄刺蛾幼虫刺毛的组胺含量在0.5%~0.8%之间.[4]结论 本方法灵敏、可靠,有一定实用价值.     

柱前衍生高效液相色谱法测定克拉霉素血药浓度

目的采用柱前衍生高效液相色谱法测定克拉霉素血药浓度。方法克拉霉素血浆样品以正己烷-正丁醇混合溶液萃取后,与2,4-二硝基苯肼衍生化后进样。色谱柱为KromasiC18(4.6mm×250mm,5μm),0.05mol/LNH4H2PO4缓冲液(pH=6.5)-乙腈(68:32)为流动相,柱温室温,流速1.0mL/min,检测波长340nm。结果克拉霉素血药浓度在50～3000μg/L范围内,浓度与峰面积比有良好的线性关系(r=0.9998),最低检测浓度为30μg/L。平均方法回收率为(99.2±3.5)%(n=15)。日内RSD≤4.9%,日间RSD≤7.7%。结论本方法简单快速、准确,可用于克拉霉素临床药动学研究。     

哮喘豚鼠脑内组胺含量的变化及中枢组胺H3受体的调节作用

目的　检测豚鼠哮喘急性发作时脑内组胺含量的变化 ,观察中枢组胺H3受体在哮喘未发作时对脑内组胺含量的影响。方法　哮喘急性发作组豚鼠给予腹腔注射卵蛋白致敏 ;阴性对照组豚鼠给予腹腔注射等量生理盐水 ;THIO组豚鼠在哮喘未发作期侧脑室内注射H3受体拮抗剂thioperamide (2 0 μg) ;生理盐水组豚鼠在哮喘未发作期侧脑室内注射等量生理盐水。断头处死动物后 ,在冰台上迅速分离出下丘脑、大脑皮质和海马 ,称重 ,匀浆 ,荧光法测定组胺含量。结果　哮喘急性发作组 ,下丘脑和大脑皮质中的组胺含量高于阴性对照组 ,差异有显著意义 (P <0 0 1) ;海马内组胺含量差异无显著意义 (P >0 0 5 )。哮喘未发作期侧脑室注射thioperamide后 ,下丘脑和大脑皮质中的组胺含量均升高 ,与生理盐水组比较差异有显著意义 (P <0 0 5 ) ,海马内组胺含量无显著变化 (P >0 .0 5 )。结论　中枢组胺含量与哮喘发作有关 ,脑内组胺H3受体可能通过调节组胺含量参与哮喘发病的病理生理过程     

鼻息肉及下鼻甲黏膜成纤维细胞中组胺受体的表达

[目的]了解鼻息肉成纤维细胞中组胺受体及其亚型的存在与否,比较鼻息肉与下鼻甲黏膜成纤维细胞中组胺受体的表达程度.[方法]选择5例鼻息肉组织,以同侧下鼻甲黏膜为对照.经鼻内窥镜手术切除鼻息肉及部分下鼻甲黏膜,培养成纤维细胞.采用RT-PCR方法观察鼻息肉成纤维细胞中的组胺受体及其亚型,用实时PCR方法分别比较鼻息肉与下鼻甲黏膜成纤维细胞中组胺受体mRNA的表达情况;用流式细胞仪测定鼻息肉及下鼻甲黏膜成纤维细胞中组胺受体蛋白的表达.[结果]鼻息肉成纤维细胞中可见1型及2型组胺受体存在,其表达程度低于下鼻甲黏膜成纤维细胞,鼻息肉中仅可见少量的组胺受体蛋白表达.[结论]鼻息肉成纤维细胞中只有少量的1型及2型组胺受体的表达.     

一种新的柱前衍生法测定血浆同型半胱氨酸

目的建立一种新的高效液相柱前衍生法,准确、快速测定血浆同型半胱氨酸(HCY)浓度.方法血中结合态的HCY经三丁基膦还原为游离HCY后,与衍生试剂7-氟苯唑-2-氧-1,3-二唑-4-磺酸胺(ABD-F)进行柱前衍生反应,衍生物经反相C18色谱柱,用0.15mol/L磷酸盐缓冲液(pH=4.2)与甲醇按85∶15配制的混合液洗脱.荧光检测激发λ=385nm,发射λ=515nm.结果在3.125～100.00μmol/L范围内,HCY浓度与荧光强度的线性关系良好,γ=0.9998,测定的批内、批间变异系数分别为3.13%和5.10%,高低2种浓度的回收率分别为98.5%和92.7%,健康人血浆HCY的参考值为8.12±2.72μmol/L.结论本法测定血浆HCY准确快速、特异性高、分离效果好,适用于临床血浆HCY测定的常规需要.     

盐酸氮斯汀对药物诱发豚鼠哮喘的影响

目的 :观察盐酸氮 艹卓 斯汀 (AzelastineHydrochloride ,AZ)对豚鼠实验性哮喘的作用、药效学及药动学特点及作用机制。方法 :采用组胺和乙酰胆碱诱发在体豚鼠实验性哮喘模型。结果 :盐酸氮 艹卓 斯汀能够剂量依赖性地拮抗组胺和乙酰胆碱的引喘作用 ,明显延长引喘潜伏期 ,显著减少抽搐动物发生率 ,其ED50 为 0 .2 1 6mg/kg ,95 %可信限为 0 .2 1 4～ 0 .2 1 9mg/kg。结论 :预先给予盐酸氮 艹卓 斯汀能显著拮抗组胺和乙酰胆碱所诱发的在体豚鼠实验性哮喘。     

高效液相色谱法测定板蓝根颗粒中表告依春的含量

[目的]采用高效液相色谱法测定板蓝根颗粒中表告依春的含量.[方法]采用C18柱,色谱柱为Hypersil ODS2柱(250mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.1％磷酸水(10∶90),流速为1.0 ml/min,柱温为30℃,检测波长为245 nm,进样量10μl.[结果]表告依春的线性范围为10.0～60.0 μg/ml(A=341.58 C-429.9,r=0.9997),平均回收率为99.7％,RSD为0.42％.[结论]该方法简便,灵敏度高,稳定可靠,可以用于板蓝根颗粒中表告依春的质量控制.     

生物样品中组织胺和去甲肾上腺素的同时测定

目的：建立生物样本中组织胺（Ｈｉｓｔ）和去甲肾上腺素（ＨＡ）的同时测定方法,探讨体内Ｈｉｓｔ和ＮＡ的代谢关系。方法：用高效液相色谱电化学检测器（ＨＰＬＣ／ＥＣＤ）、柱前衍生法定量分析生物样本中Ｈｉｓｔ和ＮＡ。结果：２０ｍｉｎ内可分离检测Ｈｉｓｔ和ＮＡ,线性范围为０．０１５～５０μｇ·Ｌ－１,最低检出限为１５ｎｇ·Ｌ－１,回收率为９５％,精密度为５．８０％～１１．１０％。结论：ＨＰＬＣ／ＥＣＤ法具有灵敏、稳定、特异性高等特点。两种指标在同一标准条件下检测结果显示,Ｈｉｓｔ和ＮＡ在体内的代谢变化关系具有相关性。     

高效液相色谱法检测局部用药后塞来昔布在舌组织中的吸收浓度

目的 建立高效液相色谱法(HPLC)检测口腔局部涂抹自制COX-2抑制剂塞来昔布糊剂后舌组织中的药物浓度及吸收率.方法 将塞来昔布用混合基质配成糊剂(6%)涂抹于金黄地鼠舌黏膜表面,分别于5、10、15、30、60、90、120min后将舌体组织取下并制成匀浆,采用HPLC检测舌体组织中药物的吸收浓度及吸收率.结果 塞来昔布的保留时间是4.4 min,塞来昔布的最低检测质量浓度为10μg/L(S/N=3).舌组织匀浆液中塞来昔布在25～800μg/L范围内线性关系良好,回归方程为Y=24306X+66747,R2=0.999 1(n=6);提取回收率为83.75%～90.01%,方法回收率为91.98%～99.07%:日内RSD分别为2.15%、3.16%和3.67%;日间RSD分别为3.40%、4.56%、4.42%,且稳定性良好.局部给药后120 min内塞来昔布在金黄地鼠舌组织中的浓度波动于(0.685±0.019)～(3.168±0.143)μg/g之间,在15 min时药物吸收达最高浓度.结论 舌黏膜局部应用塞来昔布后可迅速通过舌黏膜吸收,在舌组织内达到较高的药物浓度.采用HPLC检测舌组织中药物药物浓度及吸收率,具有方法简便灵敏、干扰小、重复性好等优点,为进一步探索口腔局部应用环氧化酶2抑制剂预防口腔癌及癌前病变提供了依据.     

豚鼠离体腹腔神经节细胞的电生理特性

目的应用计算机信号采集和处理技术系统地研究豚鼠离体腹腔神经节细胞电生理特性。方法离体神经节灌流,细胞内微电极记录技术。结果豚鼠CG细胞静息电位(RP)为(-62.26±11.27)mV(n=110),膜电阻(Rm)为(79.17±27.16)MΩ,膜电导(G)为(14.40±5.60)nS(n=63),膜电容(Cm)为(231.53±105.24)pF,膜时间常数(τ)为(2.01±1.07)ms(n=36);直接胞内刺激引起的锋电位幅度(APA)和时程(APD)分别为(63.41±12.18)mV和(2.12±0.46)ms,锋电位后超极化电位幅度(AHPA)和时程(AHPD)分别为(16.37±3.72)mV和(16.1±5.24)ms(n=75);刺激内脏大神经引起的快兴奋性突触后电位(fEPSP)幅度和时程分别为(13.26±6.74)mV和(45.20±10.6)ms(n=34),刺激内脏大神经引起的APA和APD分别为(69.71±15.38)mV和(2.13±0.55)ms(n=54),AHPA和AHPD分别为(8.58±2.77)mV和(12.8±0.85)ms(n=48)。结论计算机信号采集和处理技术在细胞电生理研究方面的应用,为全面地分析细胞生物电的变化及其形成机制,亦为深入研究递质、调质以及某些药物对细胞生物电的影响提供真实客观的数据。     

高效液相色谱-质谱联用测定全血中环孢霉素A含量

目的:建立高效液相色谱-质谱联用测定全血中环孢霉素A含量的方法.方法:色谱柱为Hypersil C8 (4.6 mm×150 mm,5 μm),流动相为乙腈-醋酸溶液(Ph 4.5)7030,流速为1.0 ml·min-1,柱后分流比82,柱温为65℃,进样量10 μl;质谱条件为电喷雾电离源(ESI),正离子选择离子监测,毛细管电压为4 000 V,干燥气流速为8.0 L·min-1,干燥气温度为350℃,雾化器压力为30 psi,裂解器电压为140 V.结果:环孢霉素A在26.68 ～1 067 μg·L-1范围内线性方程为y=0.001 1x-0.004 6(r=0.999 3),最低检测浓度为4.35 μg·L-1,低、中、高3种浓度的相对回收率分别为(89.81±4.91)%、(104.5±3.73)%、(95.17±2.33)%,绝对回收率分别为(77.64±4.38)%、(78.01±3.79)%、(83.02±1.59)%,日内、日间RSD均＜6%,150 d内稳定性试验结果,RSD均＜5%.结论:该法操作快速、简便、灵敏度高、专属性强,适用于环孢霉素A临床血药浓度监测.