内淋巴囊局部免疫致自身免疫性梅尼埃病及其治疗的实验研究

目的：制成自身免疫性梅尼埃病动物模型，并探讨免疫抑制剂环磷酰胺和强的松对其防治效果。方法：采用同种粗制内耳抗原（ＣＩＥＡｇ）在已致敏的豚鼠内淋巴囊（ＥＳ）局部免疫，并在免疫同时或免疫后使用环磷酰胺或强的松作试验性预防和治疗，观察其疗效。结果：ＥＳ局部免疫后的动物出现了针对ＣＩＥＡｇ的特异性免疫反应，并造成了与梅尼埃病极其相似的膜迷路水肿等内耳病理改变，以及明显的听觉和前庭功能障碍；而使用免疫抑制剂     

自身免疫性内耳病患者血清Ig、C_3与抗内耳组织抗体的关系

为了对自身免疫性内耳病（ＡＩＥＤ）进行深入的研究，按照Ｍｃｃａｂｅ诊断标准筛选出ＡＩＥＤ患者３２例，男１２例，女２０例，其中Ｍｅｎｉｅｒｅ病５例，突聋１２例，神经性聋（ＳＮＨＬ）６例，耳鸣９例，进行血清免疫学检查，同时采用豚鼠内耳组织切片，用免疫细胞化学方法（ＡＢＣ法）检测患者血清抗内耳组织相关抗体。结果显示：４种内耳病的部分患者血清Ｉｇ、Ｃ３有不同程度的升高或降低，３２例ＡＩＥＤ患者血清抗内耳组织相关抗体经ＡＢＣ染色显示２１例有明显的阳性反应，阳性率达７０％。ＡＢＣ呈色反应在耳蜗分布部位不同，…     

卵巢癌抗独特型单链抗体诱导特异性体液免疫应答的动物实验研究

目的：用卵巢癌抗独特型单链抗体６Ｂ１１ｓｃＦｖ代替肿瘤抗原免疫动物，观察是否诱导动物产生特异性体液免疫反应。方法：将６Ｂ１１ｓｃＦｖ交联钥孔虫戚虫血蓝素，辅以弗氏佐剂反复免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，制备抗血清。采用间接法ＥＬＩＳＡ，竞争抑制ＥＬＩＳＡ及免疫流式细胞法分析抗血清特性。结果：经ＥＬＩＳＡ检测显示，由６Ｂ１１ｓｃＦｖ刺激产生的抗抗独特型单链抗体（Ａｂ３）能与６Ｂ１１ｓｃＦｖ和卵巢癌组织抗原ＯＣ１６６９特异性结合。竞争抑制ＥＬＩＳＡ表明，Ａｂ３能有效抑制卵巢癌单抗ＣＯＣ１６６９（Ａｂ１）与ＯＣ１６６９的特异性结合。免疫流式分析结果可见，Ａｂ３能与表达卵巢癌抗原的人卵巢癌细胞系ＯＶ１细胞表面结合而不能与无卵巢癌抗原表达的人宫颈癌细胞系ＨｅＬａ细胞表面结合。从以上结果可以证明Ａｂ３与Ａｂ１的抗原结合特性相同。结论：６Ｂ１１ｓｃＦｖ能代替卵巢癌抗原诱导动物产生特异性体液免疫反应，具有模拟抗原的作用，为６Ｂ１１ｓｃＦｖ作为卵巢癌抗独特型单链抗体疫苗的实际应用提供依据     

血吸虫循环免疫复合物解离后抗原及抗体的免疫反应性研究

将血吸虫循环免疫复合物（ＣＩＣ）用新方法解离后，特异性测定其上的抗原（Ａｇ）及抗体（Ａｂ），并以可溶性血吸虫卵抗原（ＳＥＡ）、多克隆、单克隆抗体（Ｐｃａｂ、ＭｂＡｂ）用间接法对比测定感染者血清中循环抗原（ＣＡｇ）及循环抗体（ＣＡｂ）通过１０２例日本血吸虫病人及４５名健康人ＣＩＣ解离后和血清的特异性对比测定结果表明，ＣＩＣ解离后的Ａｇ及Ａｂ水平（ＯＤ均值）测定，显示满意的特异性和敏感性，与用抗ＳＥＡ－和抗ＣＣＡ－ＭｃＡｂ测定ＣＡｇ水平（ＯＤ均值）相比较，具有优于或相似的检测效果，采用抗ＳＥＡ－ＰｃＡｂ和ＳＥＡ测定血谱中的ＣＡｇ及ＣＡｂ水平（ＯＤ均值）时，均取得很好效果，且其ＣＡｇ水平均显著地高于用２种ＭｃＡｂ检测ＣＡｇ的水平。上述制剂测定ＣＩＣ解离后及血清中的Ａｇ、Ａｂ及ＣＡｇ、ＣＡｂ，可起着互补诊断的效果。本项研究结果可为今后选用适宜的血吸虫病血清学诊断的检测途径，提供重要的参考依据。     

胆固醇酯转运蛋白的提纯和鉴定

目的：分离纯化人血清胆固醇酯转运蛋白（ＣＥＴＰ），为制备ＣＥＴＰ单克隆抗体和ＣＥＴＰ浓度测定提供物质基础。方法：制备无脂血清，用Ｂｕｔｙｌ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４ＦＦ、ＣＭ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦＦ和ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－２００三步柱层析分离、纯化ＣＥＴＰ。结果：纯化的ＣＥＴＰ经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ与ＣＥＴＰ特异性单克隆抗体免疫反应和活性测定等鉴定证实为纯化ＣＥＴＰ。结论：经三步柱层析获得了纯化ＣＥＴＰ，得率约２５％，活性３０ｎｍｏｌ／（μｇ·ｈ）。     

口服髓鞘碱性蛋白与T细胞疫苗接种联合诱导免疫耐受防治？…

目的：口服髓鞘碱性蛋白（ｍｙｅｌｉｎ ｂａｓｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎ，ＭＢＰ）与Ｔ细胞疫苗接种（Ｔ ｃｅｌｌ ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ，ＴＣＶ）联合应用诱导免疫耐受，以提高特异性的免疫疗法对实验性自身免疫性脑脊髓膜炎（ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ，ＥＡＥ）的防治效果。方法：从ａｐＳＣＨ／ＣＦＡ诱发ＥＡＥ的ＤＡ大鼠体内取淋巴细胞，体外再以ＭＢＰ刺激，并     

PAOA与四种免疫抑制剂对小鼠体外脾细胞单相和双相混合培养影响初探

本文报道了中药ＰＡＯＡ水提取物对小鼠体外脾细胞单相和双相混合培养有显著的抑制作用。其中１０００μｇ／ｍｌ浓度抑制效应最明显（Ｐ＜０．０１）。并将ＰＡＯＡ与环孢素Ａ（ＣｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅＡ，ＣｓＡ）、硫唑嘌呤（Ａｚａｔｈｉｏｐｒｉｎｅ，Ａｚａ）、地塞米松（Ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ，ＤＸＭ）及环磷酰胺（Ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ，Ｃｙ）四种临床常用的免疫抑制剂作比较，其结果显示ＰＡＯＡ（１０μｇ／ｍｌ，１００μｇ／ｍｌ，１０００μｇ／ｍｌ）的免疫抑制作用明显强于Ａｚａ、ＤＸＭ和Ｃｙ，也不亚于ＣｓＡ的抑制作用。因此，作者认为，ＰＡＯＡ作为免疫抑制剂用于临床治疗将会有广阔前景。     

斑点免疫结合试验与间接血凝试验和对流免疫电泳试验在包虫病诊断中的比较

目的：为了进一步了解斑点免疫结合试验（ＤＩＢＡ）诊断包虫病的敏感性和特异性，进行血清特异抗体的检测，并与间接血凝试验（ＩＨＡ）和对流免疫电泳试验（ＣＩＥＰ）作比较。方法：用羊肝细粒棘球蚴液抗原对９４例包虫病患者、２２例非包虫病患者和４５例健康人血清进行了ＤＩＢＡ、ＩＨＡ和ＣＩＥＰ。结果：ＤＩＢＡ、ＩＨＡ、ＣＩＥＰ的阳性率分别为９２．６％、８６．２％和６３．８％，ＤＩＢＡ的阳性率明显高于ＣＩＥＰ（Ｐ＜０．０１），而与ＩＨＡ无统计学差别；假阳性率分别为５．８％、９．０％和０。结论：ＤＩＢＡ的敏感性高于ＩＨＡ和ＣＩＥＰ，且与ＣＩＥＰ有显著差异；ＤＩＢＡ的特异性高于ＩＨＡ，但低于ＣＩＥＰ。在诊断包虫病时，应同时使用两种以上免疫试验，提高其确诊率     

EFFECT AND ESTIMATE OF 951 CASES OF ENT DISEASES BY LASER THERAPY

ＥＦＦＥＣＴＡＮＤＥＳＴＩＭＡＴＥＯＦ９５１ＣＡＳＥＳＯＦＥＮＴＤＩＳＥＡＳＥＳＢＹＬＡＳＥＲＴＨＥＲＡＰＹ［ＧｅＲｏｎｇｍｉｎｇ．ＰｈｏｔｏｄｙｎａｍｉｃＴｈｅｒａｐｙａｎｄＬａｓｅｒＭｅｄｉｃｉｎｅ，１９９６；４０：３］ＥＮＴｄｉｓｅａｓｅｓｏｆ...     

癌胚抗原cDNA真核表达重组质粒的构建

目的：将人特异表达的癌胚抗原（ＣＥＡ）－ｃＤＮＡ克隆到逆转录病毒质粒载体ｐＬＸＳＮ中,构建成真核表达重组质粒ｐＬＸＳＮ－ＣＥＡ,为进一步表达表达人ＣＥＡ的动物肿瘤细胞模型作准备。方法：用内切酶ＥｃｏＲＩ酶切质粒ｐＬＸＳＮ及ｐ９１０２３Ｂ－ＣＥＡ－１７,得到线状载体ｐＬＸＳＮ及外源基因ＣＥＡ－ｃＤＮＡ,然后通过连接酶的连接反应将ＣＥＡ－ｃＤＮＡ插入到ｐＬＸＳＮ的ＥｃｏＲＩ位点,用ＥｃｏＲＩ和ＢａｍＨＩ鉴定。结果：成功地将ＣＥＡ－ｃＤＮＡ克隆到ｐＬＸＳＮ中,通过鉴定筛选获得有意义的正向重组质粒ｐＬＸＳＮ－ＣＥＡ。结论：利用基因克隆技术能将人ＣＥＡ－ｃＤＮＡ定向插入逆转录病毒质粒载体中,构建成真核表达重组质粒ｐＬＸＳＮ－ＣＥＡ,为进一步建立ＣＥＡ阳性动物肿瘤细胞模型及研究ＣＥＡ阳性肿瘤的免疫防治奠定了基础。     

自身免疫性梅尼埃病的体液与细胞转移免疫示踪研究

目的：探究能否经体液和（或）细胞转移造成被动免疫性自身免疫性梅尼埃病（AIMD）,并了解针对内耳组织的特异性抗体和淋巴细胞到达内耳的途径,部位及其对内耳组织和生理功能的影响。方法：对AIMD模型动物的免疫球蛋白（IgG)行荧光标记,脾细胞（主要为T淋巴细胞）行同位素标记,继而进行被动免疫（同时在内淋巴囊周围局部注射内耳抗原）。观察内耳听觉和前庭功能变化,不同部位组织中荧光聚集反应和同位素含量改变。结果：特异性抗体（IgG)首先到达血管纹和纳淋巴囊部位,特异性淋巴细胞则首先出现在内淋巴囊局部,内耳听觉和前庭功能障碍发生与内耳组织中抗体（即荧光反应强度）及淋巴细胞含量（即CPM值）呈明显相关性。结论：体液和细胞转移免疫均可诱发出被动免疫性AIMD;内耳组织抗原的特异性抗体和淋巴细胞可经过体循环到达内耳局部,抗体主要经血管纹和内淋巴囊部位造成内耳病变（包括膜迷路积水）,而特异性淋巴细胞则主要通过内淋巴囊局部造成内耳免疫炎性病理变化。     

自身免疫性感音神经性聋豚鼠的子代内耳生理功能研究

目的 :观察自身免疫性感音神经性聋 (ASHL)母豚鼠所产子代内耳生理功能的变化 ,探讨针对内耳的自身免疫因素对子代内耳生理功能的影响及其改变特点。方法 :同种内耳抗原 (CIEAg)持续免疫孕豚鼠 ,采用耳蜗电图 (记录cAP、CM )和眼震电图仪 (记录自发性眼震和冷热空气试验 )测试母鼠和子鼠的听觉和前庭功能 ,并检测血清特异性体液免疫反应。结果 :ASHL模型母豚鼠所产子鼠血清中发现有特异性抗体水平升高 ,部分 (3 /9)出现听觉损伤。非ASHL母鼠和对照组母鼠所产子代未见明显异常。结论 :ASHL雌鼠所产子代可出现感音神经性聋 ,其内耳损伤和功能障碍极可能与针对内耳组织的自身免疫反应 (尤其是体液免疫 )有关 ,从而提示内耳自身免疫因素可能为部分先天性非遗传性感音神经性聋的病因之一。     

Expression of Intercellular Adhesion Molecule-1 in Immune Response of Inner Ear

To understand the role of intercellular adhesion molecule-1 (ICAM-1) in immune response of the inner ear, inner ear immune response was induced in rats by inoculation of keyhole limpet hemocyanine (KLH) into the scala tympani of the animals who had been systemically sensitized. The expression of ICAM-1 in the inner ear was immunohistochemically examined. ICAM-1 was found in the epithelium of the spiral modiolar vein (SMV) with its collecting venules (CVs) as early as 6 h after challenge. Expression of ICAM-1 was observed on the epithelium of the endolymphatic sac (ES) and perisaccular region at 12 h. The intensity of ICAM-1 staining reached its peak within 24-48 h in these sites of the inner ear. By day 28, most specimens were devoid of appreciable staining for ICAM-1.Our study demonstrates that adhesion molecules play an important role in extravasation of inflammatory cells from the systemic circulation in the process of inner ear immune response. It also shows that cytokines that control expression of     

环磷酰胺预处理后再免疫豚鼠听功能的变化

目的建立高阳性率自身免疫性内耳病动物模型,以供圆窗给药治疗内耳病的研究.方法白色红目豚鼠97只,其中32只用于制备内耳抗原,其余分为试验组(n=47)和对照组(n=18).试验组环磷酰胺腹腔注射进行预处理,2 d后用粗制内耳抗原行皮下多点接种,接种后4、6、8、10、12、14、20 d,接受听性脑干诱发电位(ABR)检测.对照组I不行任何处理,组Ⅱ仅行环磷酰胺预处理,不行粗制内耳抗原接种.结果接种后4 d时,试验组ABR阈值提高10 dB以上的动物占67%;接种后8 d时为86%,14 d时仍为60%,至接种后20 d时,所有动物ABR阈值恢复正常.结论将豚鼠用环磷酰胺预处理后,粗制内耳抗原只需单次接种,即可建立听力损害高发生率的自身免疫性内耳病动物模型.     

大鼠内淋巴囊免疫活性细胞的观察

目的 研究正常大鼠内淋巴囊免疫活性细胞的定位分布。方法 用10只健康成年SD大鼠，取颞骨经固定、脱钙后作冰冻切片，以抗大鼠CD3、抗IgA、抗IgG和抗IgM特异性抗体，运用免疫组织化学技术，观察内淋巴囊的活性细胞。结果 发现CD3^ ,IgA^ ,IgM^ 细胞存在于内淋巴囊的所有组织学部位，以上皮层为多，同时散在分布于上皮以下囊周组织。结论 大鼠内淋巴囊存在着各类免疫活性细胞，提示内淋巴囊在内耳免疫应答中发挥重要作用。     

梅尼埃病的内淋巴显像

目的运用无创性的经咽鼓管鼓室内导入造影剂钆技术,进行内耳三维快速液体衰减反转恢复核磁共振(3D-FLAIRMRI)扫描,探讨梅尼埃病内淋巴显像的可行性。方法2例顽固性、活动性梅尼埃病患者经咽鼓管鼓室内导入钆喷酸葡胺稀释液24h后进行内耳3D-FLAIRMRI。患者行钆喷酸葡胺溶液导入前、后24h分别进行纯音测听和鼓室导抗检查。结果内耳3D-FLAIRMRI显示造影剂钆可以分布到内耳外淋巴,并且可以区分内、外淋巴间隙的边界,清晰显像内淋巴情况;2例患者造影前、后24h纯音测听平均听阈值和鼓室导抗无变化。结论运用内耳3D-FLAIRMRI加咽鼓管鼓室内导入造影剂钆,可以显像梅尼埃病内淋巴情况;经咽鼓管鼓室内导入造影剂是安全、有效的给药新途径。     

豚鼠自身免疫性梅尼埃病相关抗原相对分子质量68000蛋白的二维电泳和质谱分析

目的:探寻导致豚鼠自身免疫性梅尼埃病模型的内耳组织抗原成分中相对分子质量为68 000的蛋白质成分.方法:双向凝胶电泳方法分离豚鼠内耳组织抗原成分,用ImageMaster图像分析软件选择相对分子质量为68 000的蛋白质点,对这些蛋白质点进行质谱分析,通过Mascot软件查询Swiss-prot数据库,利用PathwayStudio软件对查询到的蛋白进行生物信息学分析并选取蛋白进行免疫印迹法验证.结果:获得重复性和分辨率都较好的双向电泳图谱,软件分析相对分子质量为68 000蛋白共获得22个蛋白质点;质谱分析后查询数据库鉴定得到13个蛋白质.这些蛋白分别与免疫、凋亡和分化等功能相关,其中波形蛋白从相对分子质量、Mascot评分和蛋白功能等方面综合评估可能为相对分子质量 68 000蛋白中引起豚鼠自身免疫性梅尼埃病的主要蛋白.结论:成功获得豚鼠自身免疫性梅尼埃病模型主要内耳抗原成分中相对分子质量 68 000 蛋白的双向凝胶电泳图谱,并应用质谱技术鉴定蛋白质点.波形蛋白可能为相对分子质量 68 000 蛋白中引起豚鼠自身免疫性梅尼埃病的主要蛋白.     

鼓室内应用甲基泼尼松龙和庆大霉素治疗自身免疫性膜迷路积水

目的:了解和证实自身免疫性膜迷路积水(AIEH)患者鼓室内注射甲基泼尼松龙(MP)或庆大霉素(GM)的治疗效果和不良反应。方法:诊断AIEH 62例,随机分为MP组29例和GM组33例。经鼓室内置入临时导管,隔日注射MP 2周或隔日注射GM 4次(出现听损者立即停止)。治疗前和治疗后1周分别进行听觉和前庭功能测定。结果:依据眩晕控制和听损改善评定标准,MP组和GM组有效率分别为69%和64%。52例膜迷路积水试验转变成阴性。两组优势偏向发生率明显减少,MP组管麻痹发生率亦明显减少。结论:鼓室内应用MP治疗AIEH具有与GM相似的效果。作为针对内耳自身免疫的病因学治疗药物,局部应用MP不仅能够较好地控制临床症状,而且有助于内耳生理功能的恢复。     

内淋巴囊的神经分布

目的:通过实验从形态学上直接验证内淋巴囊上存在神经纤维,为梅尼埃病的病因病理学研究提供新的思路。方法:使用成年SD大鼠15只,经活体心脏灌注,取双侧颞骨,常规石蜡包埋处理并切片。用免疫组织化学方法标记,确认抗体神经特异性烯醇化酶(neuronal specific enolase,NSE)、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)、神经微丝(neurofilament,NF)在内淋巴囊(Endolymphatic Sac,ES)上的表达。结果:在光学显微镜下,NSE、GFAP、NF一抗在内淋巴囊上皮及上皮下表达为棕黄色阳性着色颗粒。结论:内淋巴囊近侧端、中间段和远侧段均有神经纤维分布,以近侧段最为丰富。     

交感性迷路炎?——临床迟发性膜迷路积水的免疫因素研究

目的：探讨迟发性膜迷路积水（DEH）的临床特征及发病机制中内耳自身免疫性病理因素的作用。方法：对26例（同侧性19例,对侧性7例）DEH病人进行临床观察,听觉功能测试、非特异性和特异性免疫学试验及疗效分析。结果：导致先期耳聋的常见病因有突发性聋,脑膜炎,麻疹,乳突手术等;6例病人出现针对内耳抗原的特异性免疫反应,其中4例应用免疫抑制剂治疗有效。结论：DEH与原发性感音神经性聋的间隔期差异大,导致先期感音神经性聋的病因较多,内耳自身免疫性病理因素在DEH发病中可能起着重要作用,对侧性DEH病人特异性免疫反应阳性以及免疫抑制剂治疗有效的结果提示其可能为交感性迷路炎。