顺铂诱导食管癌EC9706耐药细胞中Bcl-2的表达

目的探讨凋亡抑制蛋白Bcl-2在顺铂(DDP)诱导食管癌EC9706耐药细胞中的表达。方法建立EC9706/DDP细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡率,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞存活率,Western印迹检测DDP处理后EC9706细胞及EC9706/DDP细胞Bcl-2蛋白表达,RTPCR、荧光定量PCR检测Bcl-2 mRNA水平。结果 EC9706/DDP细胞对DDP诱导的凋亡不敏感,Western印迹检测到EC9706/DDP细胞中Bcl-2表达上调,与EC9706细胞相比具有统计学意义(P0.05)。RT-PCR、荧光定量PCR检测到EC9706/DDP细胞中Bcl-2 mRNA水平上调,与EC9706细胞相比具有统计学意义(P0.05)。结论 Bcl-2表达上调可能为食管癌EC9706细胞对DDP耐药的重要机制。     

功能性消化不良患者肠嗜铬细胞数量及功能改变

目的探讨作为5-羟色胺(5-HT)重要来源的肠嗜铬细胞(EC细胞)在功能性消化不良(FD)患者胃黏膜中的改变。方法对15例健康志愿者和33例FD患者进行研究,免疫组化法染色并计数EC细胞。电镜观察EC细胞超微结构。结果FD患者近端胃黏膜EC细胞数显著高于对照组(12．5±2．1比8．3±1．4,t=2．353,P＜0．05)。FD患者EC细胞染色强度较对照组明显增强(3．72±0．42比2．61±0．57,t=2．078,P＜0．05)。随胃黏膜炎症程度的加重,EC细胞数量增加,染色强度增强。电子显微镜下EC细胞内高尔基体、线粒体及内质网较多,胞质内有特异性分泌颗粒。结论EC细胞可能参与FD发病,EC细胞数量与胃黏膜炎症程度有关。     

HPA反义寡核苷酸对人食管癌EC9706细胞中HPA蛋白表达的影响

目的　探讨乙酰肝素酶 (HPA)反义寡核苷酸 (ASODN)对人食管癌 EC970 6细胞中 HPA蛋白表达的影响。方法　将食管癌 EC970 6细胞体外分组贴壁培养 ,实验组分别用设计合成的 10、2 0、30 μm ol/ L 三种浓度的 4条封闭肝素酶不同基因位点的 ASODN(ASODN- t1 、ASODN- t2 、ASODN- t3、ASODN- t4 )。对照 组为 1条无关寡核苷酸 (N - ODN)转染 EC970 6细胞 ,对照 组为无转染。采用免疫组化 (SP)法检测各组 EC970 6细胞中HPA蛋白表达情况。结果　实验组中 3种浓度的 4条 HPA- t2 效应最强。不同浓度的 4条 HPA ASODN对EC970 6细胞中 HPA蛋白表达的影响无统计学意义 (P >0 .0 5 ) ,但均低于对照 组及对照 组 (无转染 )(P<0 .0 5 )。结论　HPA ASODN可抑制食管癌 EC970 6细胞中 HPA蛋白表达。     

肠易激综合征患者分泌5-羟色胺的肠嗜铬细胞形态及功能的改变

目的　研究肠易激综合征 (IBS)患者的肠嗜铬 (EC)细胞及其合成和储存 5 羟色胺 (5 HT)的功能变化。方法　按罗马Ⅱ标准诊断的 5 0例IBS患者 ,依其分型标准区分为腹泻型及便秘型。取IBS患者肠镜活检标本行Envision法免疫组化染色。部分活检标本电镜下观察EC细胞形态及功能。免疫组化染色及电镜观察均设正常对照组。结果　腹泻型、便秘型IBS与对照组比较 ,分泌 5 HT的EC细胞数量明显增多 ,分别为 15 .90± 5 .0 9,14 .73± 2 .73和 7.2 7± 2 .5 0 ,差异有显著性 (P <0 .0 1)。免疫组化染色显示IBS组EC细胞内合成的 5 HT增加 ,电镜显示肠道EC细胞功能活跃。结论　IBS患者肠黏膜EC细胞功能活跃 ,提示其大量合成并分泌的 5 HT可能在IBS的发病中起重要作用。     

微小RNA-126在食管癌组织中的表达及其对食管癌EC109细胞增殖和迁移的影响

目的探讨微小RNA(mi RNA)-126在食管癌组织中的表达及其对食管癌EC109细胞增殖和迁移的影响。方法收集该院胸外科手术切除且保存完整的食管癌及相应癌旁组织标本30例,通过实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测癌组织和癌旁组织中mi RNA-126 m RNA表达;mi RNA-126 mimi和control转染EC109细胞,设置阴性对照组(转染mi RNA mimic control)、转染组、空白对照组(仅转染试剂),PCR检测转染EC109细胞mi RNA-126表达,转染细胞培养1、3、5 d后MTT检测细胞增殖情况,Transwell小室法检测细胞迁移活力。结果癌组织中mi R-126 m RNA低于癌旁组织(P0.05);转染EC109细胞后mi RNA-126在阴性对照组和空白对照组表达量均低于转染组(P0.05);三组转染EC109细胞随着培养时间延长,细胞OD值均逐渐升高(P0.05),培养第3、5天细胞OD值组间差异显著(P0.05),其中转染组EC109细胞OD值均低于阴性对照组和空白对照组(P0.05);转染EC109细胞迁移活力检测结果显示,转染组OD值低于阴性对照组和空白对照组(P0.05)。结论食管癌组织中mi RNA-126低表达,并且对食管癌EC109细胞增殖和迁移具有一定抑制作用。     

体外研究腺苷酸活化蛋白激酶对食管鳞癌EC9706细胞增殖及凋亡的影响

目的通过体外研究观察腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)的激活剂AICAR对人食管癌EC9706细胞的增殖及凋亡影响。方法 AICAR以不同浓度作用于人食管癌EC9706细胞,通过光学显微镜观察不同时间后EC9706细胞的生长状态,并用MTT方法检测其吸光度值及细胞存活率的变化,流式细胞术检测其细胞凋亡率情况。结果随着AICAR浓度的增加,细胞的死亡数目明显增加。MTT法检测结果表明,AICAR能够抑制EC9706细胞增殖,并呈现出良好的浓度依赖性。流式细胞术检测结果显示,不同浓度的AICAR干预24 h后早期凋亡率、晚期凋亡率及总凋亡率均高于对照组,但仅有总凋亡率有统计学意义(P0.01)。结论 AMPK可以抑制人食管癌EC9706细胞的生长增殖,并可诱导EC9706细胞凋亡。     

孕烷X受体抗食管癌EC9706细胞凋亡的作用机制

目的 研究孕烷X受体(PXR)抗食管癌EC9706细胞凋亡的作用机制.方法 使用利福平活化食管鳞癌EC9706细胞中的PXR,阿霉素(ADM)诱导高表达PXR的EC9706细胞凋亡,采用流式细胞仪观察细胞的增殖周期,MTT法观察细胞凋亡率,Western印迹和免疫组化法检测Caspase-3,Bcl-2,Bax蛋白表达情况.结果 ADM处理可以明显抑制细胞生长;使细胞呈明显凋亡改变;利福平诱导PXR高表达的EC9706细胞凋亡减少,抑制Caspase-3的蛋白水平,上调蛋白Bcl-2的表达,表明PXR在抗食管鳞癌细胞凋亡中发挥重要的作用.结论 PXR可能是通过降低Caspase-3和升高Bcl-2蛋白的表达抑制食管癌细胞EC9706的凋亡.     

拓扑替康对食管癌EC9706细胞自噬和凋亡的影响

目的探讨拓扑替康(TPT)对食管鳞癌细胞株(EC9706)自噬和凋亡的影响。方法使用20 mg/L TPT和(或)5 mmol/L 3-甲基腺嘌呤(3-MA)处理人食管鳞癌细胞EC9706,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测TPT对食管癌EC9706细胞生长的抑制作用,单丹磺酰尸胺(MDC)法检测TPT对EC9706细胞自噬水平的影响,采用流式细胞仪技术检测TPT对EC9706细胞凋亡的影响,Western印迹测定TPT对EC9706细胞自噬相关蛋白Beclin1和凋亡相关蛋白Caspase-3表达的影响。结果流式细胞仪检测结果显示,TPT作用于EC9706细胞48 h后,TPT组、3-MA组及TPT+3-MA组细胞凋亡结率分别为(32.45±2.79)%、(7.58±1.12)%及(48.69±3.51)%。MDC染色结果显示TPT能够诱导细胞内自噬囊泡的出现,而3-MA能显著抑制这一现象。Western印迹结果显示对照组、TPT组、3-MA组及TPT+3-MA组Beclin1和Caspase-3蛋白的相对灰度值分别为0.62±0.06、0.91±0.12、0.47±0.04、1.04±0.08和0.54±0.05、0.84±0.11、0.42±0.03、0.71±0.07。结论 TPT康可以诱导食管鳞癌细胞自噬和凋亡的发生,而3-MA能够通过抑制自噬上调Caspase-3的表达增强对食管癌细胞的杀伤作用。     

己酮可可碱对人食管癌细胞EC9706的5-Fu化疗增敏作用

目的探讨己酮可可碱对人食管癌细胞EC9706的5-Fu化疗增敏作用。方法采用MTT法测定5-Fu及己酮可可碱联合5-Fu对EC9706细胞的抑制作用。结果不同浓度的己酮可可碱联合5-Fu作用于EC9706 12、24、48、72 h,同一时间各组抑制率差异有统计学意义(P均<0.01),同一5-Fu浓度,随着己酮可可碱药物浓度的增加,5-Fu对己酮可可碱细胞的抑制作用也增强(P均<0.01)。25μg/mL 5-Fu联合己酮可可碱(0.5 mg/mL、1.0mg/mL)与50μg/mL 5-Fu对EC9706细胞抑制作用,在24、48、72 h无统计学差异(P均>0.05)。结论己酮可可碱可以增加EC9706细胞对5-Fu的敏感性,减少5-Fu的剂量。     

子宫内膜癌组织微小RNA-373表达情况及其对子宫内膜癌细胞增殖、迁移的影响研究

背景微小RNA-373 (miRNA-373)在多种恶性肿瘤(如肝癌、肺癌)的发生发展过程中具有重要作用,但其在子宫内膜癌(EC)发生发展中的作用尚不完全清楚。目的探讨EC组织miRNA-373表达情况及其对EC细胞增殖、迁移的影响。方法选取2012年6月-2013年6月在邯郸市妇幼保健院行手术治疗的64例EC患者的EC组织作为试验组,另选取同期在邯郸市妇幼保健院行子宫切除术的30例良性子宫肌瘤患者的正常组织作为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测两组miRNA-373表达情况,绘制Kaplan-Meier生存曲线以分析不同miRNA-373表达情况EC患者术后5年预后;分别比较转染miRNA-373模拟物(miRNA-373 mimic)及其阴性对照物(mimic-NC)、miRNA-373抑制剂(miRNA-373 inhibitor)及其阴性对照物(inhibitor-NC)的HEC-1B细胞大型肿瘤抑制基因2 (LATS2)表达情况、转染96 h后吸光度值、迁移细胞数量;采用双荧光素酶报告基因系统验证miRNA-373与LATS2间的靶标关系。结果 (1)试验组miRNA-373相对表达量高于对照组(P<0.05)。根据miRNA-373相对表达量平均值将试验组患者分为低表达组(n=26)和高表达组(n=38),Kaplan-Meier生存曲线显示,高表达组患者术后5年累积生存率为52.6%,低于低表达组的84.6%(P<0.05)。(2)转染miRNA-373 mimic的HEC-1B细胞LATS2相对表达量低于转染mimic-NC的HEC-1B细胞(P<0.05);转染miRNA-373 inhibitor的HEC-1B细胞LATS2相对表达量高于转染inhibitor-NC的HEC-1B细胞(P<0.05)。转染96 h后,转染miRNA-373 mimic的HEC-1B细胞吸光度值高于转染mimic-NC的HEC-1B细胞(P<0.05);转染miRNA-373 inhibitor的HEC-1B细胞吸光度值低于转染inhibitor-NC的HEC-1B细胞(P<0.05)。转染miRNA-373 mimic的HEC-1B细胞中迁移细胞数量多于转染mimic-NC的HEC-1B细胞(P<0.05);转染miRNA-373 inhibitor的HEC-1B细胞中迁移细胞数量少于转染inhibitor-NC的HEC-1B细胞(P<0.05)。(3)双荧光素酶报告基因系统检测结果显示,LATS2含有miRNA-373的潜在结合位点。野生型LATS2中miRNA-373相对荧光强度低于空载对照(P<0.05);突变型LATS2中miRNA-373相对荧光强度与空载对照比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 EC组织miRNA-373呈高表达,其可通过直接靶向调节LATS2的表达而促进EC细胞增殖、迁移,进而影响EC患者预后。     

神经酰胺在血管紧张素Ⅱ诱导的内皮细胞凋亡中的作用

目的探讨神经酰胺(CE)是否介导血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的内皮细胞(EC)凋亡。方法体外培养脐静脉EC,分别用血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)拮抗剂氯沙坦、血管紧张素Ⅱ2型受体(AT2R)拮抗剂PD123319、CE合成酶抑制剂烟曲霉素B1(FB1)预处理细胞,再加入AngⅡ24h后与对照组比较观察细胞凋亡情况;用高效液相色谱(HPLC)检测上述各处理组细胞内CE浓度的变化。结果PD123319和FB1明显减少AngⅡ诱导的EC凋亡(P<0.05),氯沙坦反而增加AngⅡ诱导的EC凋亡(P<0.05);HPLC显示PD123319组和FB1组抑制了CE的合成。结论AngⅡ通过AT2诱导EC凋亡,AT2可以促发CE含量增加。     

siRNA靶向干扰ROBO1基因表达对食管癌细胞周期、增殖及相关蛋白的影响

目的研究siRNA靶向干扰轴突导向受体蛋白(ROBO)1基因表达对食管癌EC109细胞增殖、细胞周期的影响及可能作用机制。方法实验将食管癌EC109细胞随机分为空白组、对照组、siRNA-ROBO1组,采用脂质体将阴性siRNA和siRNAROBO1转染EC109细胞;Western印迹检测ROBO1、细胞核相关抗原Ki-67(Ki-67)、增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白(Cyclin)D1蛋白的表达;CCK-8实验检测细胞的增殖活力;流式细胞仪检测EC109细胞周期的变化。结果干扰ROBO1表达后,EC109细胞中ROBO1蛋白的表达量较空白组显著降低(P0.05),细胞增殖活性显著降低(P0.05),G0/G1期细胞显著增加(P0.05),G2/M期细胞显著降低(P0.05),且siRNA-ROBO1组细胞中Ki-67、PCNA、Cyclin D1表达量较空白组明显降低(P0.05)。结论ROBO1可能通过影响食管癌细胞增殖、周期相关蛋白水平使细胞周期阻滞在G0/G1期,从而抑制食管癌细胞增殖。     

EC细胞与胃肠疾病研究进展

肠嗜铬细胞(enterochromaffin cell,EC细胞)是一种数量最多、分布最广的胃肠道内分泌细胞,它散在分布于从胃至直肠的黏膜中,是APUD细胞系统的重要组成部分.一百多年前,由Heiden-hain首次予以描述,而后这种细胞也被发现于肠道,遂命名为EC细胞.近年来,随着分子生物学和免疫细胞化学技术的应用和发展,新的5-HT受体拮抗剂和激动剂的不断合成和发现,以及对EC细胞认识的不断提高,越来越多的研究表明EC细胞、5-HT及其受体参与了病理和生理状态下的胃肠道运动、感觉和分泌功能的调节,从而使EC细胞与5-HT成为了人们关注的新热点.     

同型半胱氨酸对大鼠主动脉内皮细胞分泌一氧化氮、血管紧张素Ⅱ、内皮素的影响

探讨同型半胱氨酸(HCY)对大鼠主动脉内皮细胞(EC)分泌一氧化氮(NO)、血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)和内皮素(ET)的影响.取体重150—200g健康雄性Wistar大鼠的胸主动脉,以组织贴块法进行EC培养,传代至第5代用于实验,各实验组及对照组均为6孔细胞,实验组加入不同浓度的HCY,对照组不加HCY,分别在2、4、6、8、12、24h观察细胞形态并取细胞培养液测定NO含量.一氧化氮合成酶(NOS)活性、AngⅡ和ET含量.HCY可引起EC形态发生变化HCY刺激EC分泌NO、Ang Ⅱ和ET呈时间和剂量依赖性.提示:HCY使EC分泌NO、Ang Ⅱ、ET平衡失调可能是导致动脉粥样硬化的重要原因之一.     

神经酰胺在血管紧张素Ⅱ诱导的内皮细胞凋亡中的作用

目的 探讨神经酰胺(CE)是否介导血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)诱导的内皮细胞(EC)凋亡.方法 体外培养脐静脉EC,分别用血管紧张素Ⅱ 1型受体(AT1R)拮抗剂氯沙坦、血管紧张素Ⅱ2型受体(AT2R)拮抗剂PD123319、CE合成酶抑制剂烟曲霉素B1(FB1)预处理细胞,再加入Ang Ⅱ24 h后与对照组比较观察细胞凋亡情况;用高效液相色谱(HPLC)检测上述各处理组细胞内CE浓度的变化.结果 PD123319和FB1明显减少Ang Ⅱ诱导的EC凋亡(P＜0.05),氯沙坦反而增加Ang Ⅱ诱导的EC凋亡(P＜0.05);HPLC显示PD123319组和FB1组抑制了CE的合成.结论 Ang Ⅱ通过AT2诱导EC凋亡,AT2可以促发CE含量增加.     

PD98059对食管癌细胞放射敏感性影响的研究

目的 探讨PD 98059通过抑制丝裂原活化蛋白激酶-细胞外信号调节激酶(MRPK-ERK)信号通路是否改变食管癌细胞的放射敏感性.方法 用食管癌细胞株EC 9706为实验对象,分别接受单纯放射、PD 98059和二者结合处理.通过Western印记法证实PD 98059可下调ERK活性.采用成克隆法定量分析细胞增殖性死亡.通过流式细胞仪检测细胞凋亡情况.结果 单纯PD 98059(10μmoL/L)可抑制ERK的磷酸化,而单纯放射对ERK的活性无明显影响,二者结合可提高对ERK活性的抑制作用.PD 98059(10 μmol/L)在放射前与细胞作用1 h及放射后作用10 d均可提高EC 9706细胞对放射的敏感性.PD 98059结合放射可增加EC 9706细胞增殖性死亡,D0值的放射增敏比为1.69.PD 98059可增加EC 9706细胞放射后诱导的细胞凋亡.结论 PD 98059通过抑制MAPK降低ERK活性,增加EC 9706细胞对放射的敏感性,为筛选放射敏感剂临床实验提供了依据.     

siRNA沉默TPX2基因对食管癌细胞EC9706的增殖和TPX2基因表达的影响

目的:研究TPX2基因特异性小干扰RNA(small RNA interference,siRNA)对食管鳞癌EC9706细胞基因表达的抑制作用及对食管癌细胞生长的影响.方法:以食管鳞癌EC9706细胞为研究对象,利用Lipofectamine2000介导TPX2 siRNA分组转染EC9706细胞24,48,72,96 h(实验组),并设立阴性对照组和空白对照组.RT-PCR检测siRNA转染前后TPX2 mRNA的表达水平的变化:Western blot检测转染前后EC9706细胞中TPX2蛋白表达水平的变化;MTT法检测瞬时转染TPX2 siRNA对EC9706细胞增殖的影响.结果:导入有效siRNA后,PT-PCR及Western blot结果显示.TPX2 siRNA可使EC9706细胞中TPX2 mRNA水平及蛋白表达水平下降,至72 h时表达量最低,与空白对照组相比分别为0.31±0.08和0.39±0.12,差异有统计学意义(P<0.05);MTT实验显示细胞的生长增殖受到明显抑制,与对照组相比抑制率可达35.4%(P<0.05).结论:siRNA可以有效抑制EC9706细胞中TPX2的表达,并降低EC9706细胞的增殖能力.     

表皮生长因子受体抑制剂吉非替尼对食管癌EC9706细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响

目的探讨表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂吉非替尼对食管癌EC9706细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法将EC9706细胞培养并加入不同浓度的吉非替尼处理不同时间后,采用MTT法检测细胞增殖抑制率;Annexin V-FITC/PI双染法、流式细胞仪检测细胞凋亡率。PI染色、流式细胞仪检测细胞周期。结果吉非替尼对食管癌EC9706细胞增殖具有明显的抑制作用,且表现为剂量和时间依赖性;吉非替尼组细胞凋亡率明显高于正常对照组,且随着吉非替尼剂量的增加,凋亡率逐渐增加(P0.05);与对照组相比,10μg/ml吉非替尼处理24 h后的EC9706细胞,处于G0/G1期细胞比例明显增加,处于S期细胞比例明显减少(P0.05)。结论吉非替尼对食管癌EC9706细胞具有明显的增殖抑制作用,其机制与诱导凋亡及阻滞细胞周期有关。     

嗜酸粒细胞激活在囊性纤维化形成上的作用

中性粒细胞(NC)对囊性纤维化(CF)的肺脏具强有力的破坏作用。嗜酸性细胞(EC)也有破坏的可能,故而作者对CF者EC的作用进行了调查研究。 方法测定42例CF者的血清和其中10例痰中EC、嗜酸细胞正性蛋白(ECP)含量,后者作为嗜酸性细胞活性标志物。也对NC的单胺氧化酶(MPO)活性程度进行测评。ECP和MPO是以双倍抗体的放射免疫法测定。设非CF的30名健康对照者进行检测对照。还采用Shwachman-Kulczycki评分法评估CF的临床严重程度,并判定其肺功能情况。 结果 患者的特征 Shwachman-Kulczycki评分     

嗜酸性细胞凋亡与哮喘气道炎症

凋亡指细胞的程序性死亡。哮喘气道炎症有关的嗜酸性细胞(EC)的凋亡受细胞因子依赖型与非细胞因子依赖型双重调节。巨噬细胞对凋亡细胞的吞噬有助于哮喘气道炎症的消退,多种药物可通过促进EC凋亡来治疗哮喘。本文就此作一概述。