从Th1、Th17细胞除极探讨丙戊酸干预实验性自身免疫性神经炎的机制

目的从Ⅰ型辅助T细胞(Th1)、17型辅助T细胞(Th17)细胞除极角度探讨丙戊酸(VPA)干预实验性自身免疫性神经炎(EAN)的机制。方法实验大鼠随机分为VPA治疗组、EAN组、正常组,应用周围神经髓鞘抗原(P257-81)多肽与完全弗氏佐剂的混合液免疫VPA治疗组和EAN组大鼠。VPA治疗组大鼠于免疫当天至第15天每天腹腔内注射300mg·kg-1丙戊酸钠。观察发病情况,坐骨神经电生理改变及组织病理学变化,检测腹股沟淋巴结中IFN-γ、IL-17 mRNA水平。结果 VPA治疗组的最初发病时间迟于EAN组(P<0.05),其高峰期临床评分显著低于EAN组(P<0.05),坐骨神经复合肌肉动作电位(CMAP)的波幅较EAN组明显升高,潜伏期和时限显著缩短(P<0.05)。髓鞘脱失和炎性细胞浸润较EAN组明显减少(P<0.05)。淋巴结中IFN-γ、IL-17mRNA表达明显下降(P<0.05)。结论 VPA通过影响Th1、Th17细胞除极,使IFN-γ、IL-17分泌下降,从而抑制EAN大鼠的自身免疫反应。     

IL-17、RORγt在实验性自身免疫性神经炎中的表达

目的 观察Th17型细胞因子IL-17和Th17细胞特异性转录因子维甲酸受体相关孤儿受体γ的胸腺异构体(RORγt) mRNA在实验性自身免疫性神经炎(EAN)模型中的表达,以探讨Th17细胞在EAN中的作用.方法 用P253-78aa肽段免疫Lewis大鼠,建立EAN模型,观察大鼠发病情况和组织病理改变,并检测淋巴细胞增殖反应,用RT-PCR技术检测IL-17和RORγt在大鼠发病高峰期脾脏、淋巴结和坐骨神经中的表达.结果 EAN组大鼠在第14-16天发病高峰期时平均临床评分为(7.5±1.2),病理学检查可见明显炎性细胞浸润,对P253-78aa的刺激产生强烈淋巴细胞增殖反应,与对照组相比,IL-17和RORγt mRNA在脾脏、淋巴结和坐骨神经中的表达均显著升高(P<0.001).结论 IL-17和RORγt表达上调与EAN的发病相关.     

抑郁症中糖皮质激素受体与CD4+CD25+调节性T细胞的关系及其所致免疫失衡机制的初步探讨

目的 研究抑郁症患者外周血细胞因子白介素-10(IL-10)、转化生长因子β(TG-β)的变化、CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)的数量及其特征性标志叉头样转录因子P3(Foxp3)的表达与糖皮质激素受体(GR)的表达之间的关系,探讨抑郁症患者免疫失衡的可能机制.方法 纳入36例抑郁症患者和36名正常对照,根据Hamilton抑郁量表总分将患者划分为轻、中和重不同抑郁程度组;利用ELISA方法测定受试者外周血血清细胞因子IL-10、TGF-β浓度;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测GR的α及β两种亚型(GRα、GRβ)、Foxp3 mRNA表达水平;免疫磁珠分离CD4+ CD25+ Treg,共聚焦显微镜观察Foxp3与GR在CD4+CD 25+ Treg上的共表达.结果 与正常对照组比较,患者组血清IL-10、TGF-β的水平降低(P＜0.05),外周血CD4+ CD25+ Treg数量及在CD4+T细胞中的比例明显少于对照组(P＜0.01),且重度抑郁组上述指标明显低于中度和轻度抑郁组(P＜0.01).抑郁各组单个核细胞GRamRNA和FoxP3 mRNA表达水平随抑郁程度而降低(P＜0.01),GRβmRNA却在重度抑郁组表达增加.共聚焦显微镜下可观察到重度抑郁患者CD4+CD25+Treg上GR与Foxp3表达显著减少.结论 糖皮质激素受体可能通过影响调节性T细胞的功能和数量在抑郁症患者免疫失衡的病理生理机制中发挥着重要的作用.     

从IFN-γ／IL-33表达变化探讨EAN中的Th1／Th2细胞极化

目的探讨IFN-γ／和IL-33在实验性自身免疫性神经炎（EAN）发病机制中的作用及EAN中的Th1／Th2细胞极化。方法用P253-78肽段免疫Lewis大鼠,建立EAN模型,观察其发病情况和组织病理改变,并检测淋巴细胞增值反应,用RT-PCR技术检测干扰素γ（IFN-γ）和白介素33（IL-33）在大鼠发病高峰期脾脏、淋巴结和坐骨神经中的表达。结果EAN组大鼠临床表现明显,病理检查可见大量炎性细胞浸润;坐骨神经组织、淋巴结,脾脏中IFN-γ mRNA表达显著升高,IL-33mRNA表达明显减少,其引流淋巴结淋巴细胞对P253-78aa的刺激发生强烈的淋巴细胞增殖反应。结论IFN-γ对EAN发病起促进作用,IL-33对EAN大鼠起保护作用;EAN中Th0细胞向Th1的转化明显增强而向Th2细胞的转化则受到抵制。     

帕金森病患者外周血Th17/Treg平衡及相关细胞因子水平测定及意义

目的探讨帕金森病(PD)患者外周血Th17/Treg平衡及相关细胞因子含量变化的意义。方法收集50例PD患者(PD组)及50例健康体检者(Control组),采集所有研究对象外周血。采用流式细胞仪检测外周血中Th17细胞及Treg细胞含量;采用ELISA检测血浆中细胞因子TGF-β、IL-6和IL-17水平。结果流式细胞计数结果显示,PD组的外周血Treg细胞和Th17细胞水平较Control组均显著增加(P均0.01),Treg细胞的增长程度明显大于大于Th17细胞,同时PD组Treg/Th17细胞比较Control组也明显增加(P均0.01)。ELISA检测结果显示,与Control组相比,PD组的血浆TGF-β1、IL-6及IL-17含量均有显著增加(P均0.01)。结论 PD患者的外周血Treg/Th17平衡存在失衡,提示PD病理过程可能与其外周血Treg/Th17失衡有关。     

Rho激酶抑制剂对OX40及其配体mRNA在实验性变态反应性神经炎中表达的影响

目的 研究Rho激酶(ROK)抑制剂对OX40及其配体(OX40L)mRNA在实验性变态反应性神经炎(experimental allegic neuritis,EAN)大鼠坐骨神经、脾脏、外周血和淋巴结中表达的影响.方法 54只Lewis大鼠随机分为EAN模型组、EAN+ROK抑制剂干预组和完全弗氏佐剂对照(CFA)组.分别在免疫后第9、17、26天处死动物,取其坐骨神经根、脾脏、外周血单个核细胞和淋巴结,采用逆转录PCR(RT-PCR)技术检测OX40和OX40L mRNA在各组织的表达水平.结果 EAN+ROK抑制剂组大鼠OX40 mRNA在坐骨神经中第9、17、26天的表达分别为0.266±0.031、0.298±0.024和0.113±0.018;在淋巴结中第9、17、26天的表达分别为0.453±0.030、0.496±0.100和0.220±0.016;OX40L mRNA在坐骨神经中第9、17、26天的表达分别为0.247±0.018、0.298±0.026和0.165±0.013;在淋巴结中第9、17、26天的表达分别为0.283±0.027、0.306±0.011和0.161±0.012.与EAN组比较,OX40和OX40L mRNA的表达明显降低(t=2.24～4.89,P＜0.05),坐骨神经炎性细胞浸润和脱髓鞘减轻.CFA组大鼠无症状.结论 ROK抑制剂可以减轻EAN发病程度,抑制OX40/OX40L的表达可能是其作用机制之一.     

左旋咪唑对实验性自身免疫性脑脊髓炎脊髓IFN-γ、TGF-β1 mRNA表达的影响

目的:探讨左旋咪唑(LMS)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)脊髓IFN--γ、TGF-β1mRNA表达的影响。方法:用GPSCH免疫Wistar大鼠制作EAE模型,分别在免疫前(LMS1组)、免疫同时(LMS2组)、免疫后(LMS3组)给LMS10mg·kg-1。比较各组行为学和组织学的变化,用RT-PCR测脊髓IFN-和TGF-β1mRNA的表达。结果:LMS1组和LMS2组的行为学表现和炎细胞浸润加重(P<0.01,P<0.05)。LMS3组出现EAE复发。与EAE组比,LMS1组和LMS2组脊髓IFN-mRNA表达升高,TGF-β1mRNA表达降低,但仅LMS2组有统计学意义(P<0.05)。结论:LMS可升高脊髓IFN-mRNA表达,降低TGF-β1mRNA表达,提示LMS对EAE的促发作用可能与Th1/Th2失衡有关。     

从Th1、Th17细胞极化探讨iMDC负载P258-73肽段干预EAN的机制

目的 观察未成熟髓源树突状细胞负载P258-73肽段干预实验性自身免疫性神经炎的效果,及干预对IL-17、IFN-γ mRNA表达的影响,从Th1、Th17细胞极化的角度探讨其干预机制.方法 P258-73aa负载于体外培养的iMDC,获得P258-73aa-iMDC,用P253-78aa和CFA免疫Lewis大鼠制成EAN动物模型,免疫前7d各组大鼠分别给予PBS、iMDC及P258-73aa-iMDC干预.观察发病情况并作临床评分及病理改变.收集引流淋巴结细胞检测淋巴细胞增殖反应,RT-PCR技术检测大鼠脾脏、淋巴结和坐骨神经中IL-17、IFN-γ mRNA的表达.结果 P258-73aa-iMDC干预组大鼠的平均临床评分、抗原特异性淋巴细胞增殖反应和坐骨神经炎性细胞浸润均降低;IFN-γ 及IL-17 mRNA在脾脏、淋巴结和坐骨神经中的表达也明显降低.结论 P258-73aa-iMDC通过影响IL-17、IFN-γ 的分泌,影响Th1、Th17细胞极化,抑制抗原特异性淋巴细胞增殖,从而减轻EAN的发病,这可能是其诱导免疫耐受的机制之一.

Abstract：

Objective To explore the improving potential of immature myeloid dendritic cell (Imdc) pulsed with P258-73aa peptide (P258-73aa-Imdc) in experimental autoimmune neuritis (EAN) ,and to explore the role of Th1/Th17 cells polarization in this tolerance therapy by detecting the expression of IL-17 and IFN-γ mRNA. Methods P258-73aa21 was pulsed with Imdc in vitro to get P258-73aa-iMDC. Rats of each group were immunized with P253-78aa and CFA. 7 days before immunization, each group was injected with PBS or iMDC or P258-73aa-iMDC respectively. Clinical scores of each group and histopathological changes were evaluated and the lymphocyte proliferation response was assayed; IL-17 and IFN-γ mRNA in spleen,lymph node and sciatic nerves were measured by RT-PCR. Results The P258-73aa-iMDC interferred group had lower average clinical score and suppressed antigen specific lymphocyte proliferation, as well as milder infiltration by the inflammatory cells in sciatic nerves. Meanwhile, the expression of IL-17/IFN-γ mRNA in spleen, lymph node and sciatic nerves were also decreased. Conclusion The protective effect of P258-73aa-iMDC could be associated with the inhibition of lymphocyte proliferation and IL-17, IFN-γ through the polarization of Th1/Th17 cells,which is probably one of the tolerance mechanism of P258-73aa-iMDC in EAN.     

干扰素-β对实验性自身免疫性神经炎治疗作用的组织病理学和免疫学研究

目的:探讨干扰素β-(interferonβ-,IFNβ-)对实验性自身免疫性神经炎(experimentalautoimmuneneuritis,EAN)的治疗作用。方法:从牛坐骨神经提取髓鞘碱性蛋白(myelinbasicprotein,MBP)制备免疫原注射入豚鼠双后足垫诱导EAN模型。将90只健康、成年、雄性豚鼠随机分为正常对照组、IFN-β治疗EAN组、磷酸盐缓冲生理盐水(phosphatebuffedsaline,PBS)治疗EAN组,每组30只。免疫后第12天给予IFN-β或PBS腹腔注射,分别在治疗后7和14d对各组大鼠进行组织病理学和免疫学指标的检测。结果:与PBS治疗组相比,接受IFN-β治疗的豚鼠临床评分较低,坐骨神经干脱髓鞘程度轻,炎细胞浸润减少;脾脏单个核细胞IFN-γ、TNF-α的分泌量减少,IL-4、TGF-β的分泌增多。结论:IFN-β能改善EAN临床症状,促进疾病恢复,具有一定的治疗作用。     

瞿麦治疗小鼠实验性自身免疫性神经炎的疗效及机制研究

目的观察瞿麦对实验性自身免疫性神经炎(EAN)小鼠临床症状、辅助性T淋巴细胞(Th)亚群、炎性细胞因子的影响,并探讨其改善EAN小鼠临床症状的可能机制。方法利用人工合成的P0180-199肽段混以完全福氏佐剂主动免疫C57BL/6小鼠建立EAN模型。将小鼠随机分为瞿麦治疗组和对照组,利用行为学评分进行疗效评估,流式细胞术检测外周血Th1、Th2、Th17、Treg细胞水平及Th1/Th2、Th17/Treg比值变化,采用ELISA法检测血清肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和γ干扰素(IFN-γ)水平变化。结果与对照组比较,瞿麦治疗组EAN达峰时间明显延迟,对照组小鼠行为学评分在免疫后第17天达高峰,瞿麦治疗组为免疫后第19天,瞿麦治疗组小鼠达峰时行为学评分低于对照组(3.75±0.88 vs.4.75±0.46,t=2.828,P=0.013)。免疫后第28天瞿麦治疗组小鼠行为学评分仍低于对照组(0.44±0.41 vs.1.06±0.68;t=2.220,P=0.043)。与对照组相比,瞿麦治疗组外周血单个核细胞Th1/Th2比值(1.50±0.62 vs.1.61±0.09)和Th17/Treg细胞比值(0.21±0.04 vs.1.20±0.13)降低(P0.01或P0.05),血清TNF-α[(211.00±10.77)pg/mL vs.(244.29±21.52)pg/mL]、IL-1β[(109.29±4.74)pg/mL vs.(120.29±11.90)pg/mL]和IFN-γ[(707.71±4.23)pg/mL vs.(723.00±15.00)pg/mL]水平明显下降(P0.01或P0.05)。结论瞿麦可显著改善EAN小鼠模型的临床症状,其机制可能与影响Th细胞亚群比例、炎性细胞因子的表达有关,有望成为临床治疗吉兰-巴雷综合征/EAN的新策略。     

Resistance and susceptibility to experimental autoimmune neuritis in Sprague-Dawley and Lewis rats correlate with different levels of autoreactive T and B cell responses to myelin antigens

Experimental autoimmune neuritis (EAN) is a CD4⁺ T cell-mediated, inflammatory demyelinating disease of the peripheral nervous system (PNS) that serves as a model for Guillain-Barré syndrome (GBS) in humans. Various mouse and rat strains show different susceptibilities to EAN that can be induced by immunization with bovine PNS myelin (BPM) + Freund's complete adjuvant (FCA). We examined PNS-induced T and B cell responses and cytokine protein production as well as mRNA expression to study the mechanisms behind susceptibility to EAN in Lewis rats and resistance in Sprague-Dawley (SD) rats. Lewis rats with EAN have elevated PNS myelin-reactive interferon-γ (IFN-γ) production, TNF-α mRNA expression, and increased B cell responses to PNS myelin antigens, but low PNS myelin-reactive transforming growth factor-β (TGF-β) and interleukin (IL)-10 mRNA expression in lymph node mononuclear cells (MNC). In contrast, resistance to EAN in SD rats is associated with reduced BPM and P2 peptide-reactive IFN-γ production, TNF-α mRNA expression, and suppressed B cell responses to PNS myelin antigens as well as up-regulation of TGF-β and IL-10 mRNA expression. Resistance to EAN is also associated with low-grade inflammation or absence of histological evidence of EAN. These results suggest that differential autoreactive T and B cells responses to PNS myelin antigens are strain specific, and the susceptibility to EAN is related to quantitative rather than qualitative differences in distribution between pro-inflammatory and anti-inflammatory cytokines. J. Neurosci. Res. 54:373–381, 1998. © 1998 Wiley-Liss, Inc.     

趋化因子mRNA在实验性变态反应性神经炎中表达的研究

目的:实验性变态反应性神经炎(EAN)是一类T细胞介导的周围神经系统的自身免疫病,可用牛坐骨神经加完全氟氏佐剂诱导而成。本文研究趋化因子mRNA在实验性变态反应性神经炎(EAN)中的表达并探索其可能的作用。方法:用兔坐骨神经匀浆免疫Wistar大鼠,诱导格林巴利综合症(GBS)的动物模型EAN;采用地高辛标记的寡核苷酸探针检测EAN病变神经组织浸润细胞上趋化因子单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)及巨噬细胞炎性蛋白-1β(MIP-1β)mRNA表达情况。结果:MCP-1mRNA在临床症状出现前1-2天(14天)水平最高,随后逐渐下降;MIP-1 βmRA在临床症状出现前1-2天水平开始升高,在临床症状达到高峰时(21天)最高,进入恢复期后降至基础水平。结论:趋化因子在EAN的炎性细胞迁移及浸润进入神经细胞过程中起到重要作用。     

后循环短暂脑缺血发作患者外周Treg、IL-17检测及意义

目的探讨后循环短暂缺血发作（TIA）患者外周血CD4。CD25’调节性T细胞（Treg）比例、白介素17（IL-17）的水平变化及意义。方法2012年9月至2013年2月纳入后循环TIA患者65例,根据ADCD2评分分为高危组（4～7分,34例）和低危组（0～3分,31例）,另取同期本院体检中心健康成人30例作为对照组。采用流式细胞分析法及酶联免疫吸附法检测各组外周血Treg占CD4＋T细胞比例及血清IL-17浓度值。结果高危组外周血Treg与CD4’细胞比值（11．38±3．58）％显著低于低危组[（14．83±4．10）％,P〈0．05]和对照组[（15．60±4．19）％,P〈0．05],低危组和对照组没有统计学差异（P〉0．05）。高危组血清IL-17浓度[（312．65~63．69）pg／m1]和低危组[（290．13＋63．65）pg／ml,P〈0．05]显著高于对照组[（207．26±63．00）pg／ml,P〈0．05],而高危组和低危组之间无统计学差异（P〉0．05）。结论高危后循环TIA患者外周血Treg减少、IL-17浓度升高,可能是导致其外周血自身免疫调节失去平衡,进而发生脑梗死的原因之一。     

咖啡因慢性干预对小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎影响的观察

目的：探讨不同剂量咖啡因慢性干预对小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）的影响及其分子免疫学机制。方法：C57BL／6小鼠随机分为CFA阴性对照组,EAE阳性对照组,咖啡因饮水干预组（1mg·k-1,10mg·kg-1,30mg·kg-1）。使用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55（MOG35-55）抗原诱导小鼠EAE模型,咖啡因干预至EAE造模后第20天与对照组小鼠同期处死为止。观察小鼠行为学变化、中枢炎症细胞浸润和损害程度、检测中枢细胞因子IL-17、IFN—γ、TGF—β的mRNA表达含量。结果：咖啡因干预组,特别是30mg·kg-1组的病情严重程度减轻,中枢炎症细胞浸润程度下降,促炎因子表达降低,抑炎因子表达上升。结论：慢性咖啡因干预,可通过降低促炎因子的表达,升高抑炎因子的表达,减轻小鼠EAE的炎症损伤。     

Transforming growth factor beta expression in reactive spinal cord microglia and meningeal inflammatory cells during experimental allergic neuritis

Experimental allergic neurities (EAN), an inflammatory demyelinating disorder of the peripheral nervous system, is preceded and accompanied by a massive microglial reaction in the spinal cord which occurs in the absence of inflammatory cells infiltrating the cord parenchyma. Since transforming growth factor beta (TGF-β) has been shown to play a beneficial role in experimental autoimmune disease and might be involved in the regulation of glial activity, we have investigated the expression of TGF-β in EAN spinal cord and nerve root tissue. Adoptive transfer EAN was induced by the injection of neurotogenic T-cells specific for the P₂ myelin protein. In normal spinal cord tissue, both TGF-β1 and TGF-β3 mRNA were constitutively expressed at low levels. Already 3 days following injection of P₂-specific T-cells, TGF-β1 mRNA levels began to increase, peaked at day 6 at levels about tenfold above normal, and thereafter declined. TGF-β3 was induced even earlier with a sharp rise at day 3 and a peak fourfold above normal at day 4. In situ hybridization for TGF-β1 performed on spinal cord sections 6 days after injection of cells localized TGF-β1 mRNA to many nonneuronal cells with the typical morphology of microglia. In addition, TGF-β1 mRNA was observed in the meninges, and massive accumulation of signal was seen over inflammatory cells infiltrating the nerve roots. Our data indicate that TGF-β1 and -β3 are involved in regulating the glial response in EAN and that activated microglial cells might control their own activity state by expressing TGF-β1. The expression of TGF-β1 by infiltrating inflammatory cells in the nerve roots might represent an important endogenous mechanism to limit the extent of inflammation. © 1993 Wiley-Liss, Inc.