胃肠病患者肝组织中经输血传播病毒的检出

检测非肝病(胃肠病)患者肝组织中经输血传播病毒(TTV)感染情况,探讨其致病性。采用免疫组织化学方法检测患者肝组织中TT病毒抗原(TTVAg)的表达与分布,观察肝组织学变化,部分病例经原位杂交予以证实。32例胃肠病患者肝组织中检出TTVAg阳性11例(34.4％)。阳性病例的切片经光镜组织学检查,8例有轻微的肝组织病理改变,包括肝细胞胞浆疏松化、嗜酸性变以及汇管区的扩大和淋巴细胞浸润等。而21例TTVAg阴性者中,仅4例有轻微的病理变化(x~2=8.999,P<0.01)。11例免疫组化阳性病例中7例原位杂交呈阳性。TTV感染在胃肠病患者中较为常见,感染者血清生化指标尽管无异常,但多数仍存在有轻微的病理改变。     

原位杂交法检测非病毒性肝炎人群肝组织输血传播病毒

检测非病毒性肝炎人群肝组织中经输血传播病毒 (TTV)感染情况 ,探讨其致病性。采用原位杂交方法检测非病毒性肝炎人群肝组织中TT病毒核酸 (TTVDNA)的表达与分布 ,观察肝组织学变化。 32例非病毒性肝炎人群肝组织中检出TTVDNA阳性 9例 (2 8 1% )。原位杂交阳性信号为蓝紫色 ,细颗粒状 ,主要定位于肝细胞核内 ,肝细胞胞浆内多呈弱表达。阳性细胞在肝小叶内散在分布。阳性病例的切片经HE染色后 ,6例 (6 6 7% )有轻微的肝组织病理改变 ,包括肝细胞胞浆疏松化、嗜酸性变以及汇管区的扩大和淋巴细胞浸润等。而 2 3例TTVDNA阴性者中 ,仅 6例 (2 6 1% )有轻微的病理变化 (x2 =4 4 8,P =0 0 4 8)。非病毒性肝炎人群肝组织TTV感染均较为常见 ,在非病毒性肝炎人群尽管没有血清生化指标的改变 ,但多数存在有轻微的病理改变     

输血传播病毒母婴传播的研究

目的：探讨深圳市孕产妇输血传播病毒（TTV）感染情况及其在母婴间的传播途径。方法：应用套式－聚合酶链反应（Nest－PCR）对400例正常孕产妇分娩前的血清及其新生儿的脐血血清标本、产妇的乳汁配对进行了TTV DNA检测，对阳性的母亲及其新生儿进行的6个月随访，并对其中13对TTV DNA阳性的母血、母乳及其婴儿的血，共做32株克隆，通过DNA序列测定比较分析母婴TTV感染株之间核苷酸的序列同源性。结果：在400对配对标本中，62例孕妇血清、4例新生儿脐血清、20例母乳检测出TTV DNA，孕母TTV感染率15．5％（62／400），出生时母婴TTV传播率6．5％（4／62），阳性母亲乳TTV DNA检出率32．2％（20／62），配对比较母婴间TTV感染株序列同源性为97．4％－99．8％，经6个月随访母血TTV DNA阳性的婴儿血TTV DNA由阴转阳率为38．1％（16／42）。 结论：TTV可通过围产期和哺乳期母婴传播的途径感染，对胎儿的危害及新生儿生长发育的影响值得重视。     

非甲－非庚型肝炎肝组织中经输血传播病毒DNA的原位检测

目的探讨非甲－非度型病毒性肝炎患者肝组织中经输血传播病毒（ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｄｖｉｒｕｓ,ＴＴＶ）ＤＮＡ的表达。方法采用地高辛素标记ＴＴＶＤＮＡ探针以原位杂交技术对１９例血清学甲、戊型肝炎病毒标志物、免疫组织化学检测肝组织中ＨＧＶＮＳＳ均用性的急、慢性病毒性肝炎患者肝组织进行检测。结果１９例肝组织中６例检出ＴＴＶ基因阳性（３１．５８％）,其中急性轻型肝炎４例（３０．８０％）,慢性肝炎２例（３３．３３％）。ＴＴＶＤＮＡ表达于肝细胞核或胞浆内。在急性肝炎,ＴＴＶ阳性细胞弥漫分布于肝小叶内,慢性肝炎于汇管区附近较为密集。６例中５例患者有转氨酶增高。结论非甲－非庚型病毒性肝炎肝组织中ＴＴＶＤＮＡ的检出表明ＴＴＶ为一种新型的嗜肝性病毒。     

经血传播病毒在肝脏及肝外组织的感染状况

目的探讨TTV在肝脏及肝外组织中的定位、分布及其意义。方法通过PCR方法扩增TTV基因组ORF2中123bp的DNA片段,构建TTVDNA质粒并克隆,序列分析表明与日本ABO11494序列具有高度同源性。采用地高辛标记TTVDNA探针并与组织进行原位杂交,检测了22例因肝病死亡患者的肝脏、脾脏、肾脏、胃、小肠等组织内TTVDNA感染状况。结果8例肝脏检出TTVDNA,5例肾脏、４例脾脏、２例小肠、２例胃检出TTVDNA。阳性信号在组织中分布呈局灶性或散在胞浆型。肝脏感染度较其它组织高。阳性细胞与组织炎症坏死无固定病理解剖学关系。结论支持TTV有嗜肝性的观点;TTV可以感染肝外多种组织并可能导致TTV持续感染。     

荧光定量聚合酶链反应检测输血传播病毒方法的建立及应用

[目的]建立输血传播病毒(transfusion transmitted virus,TTV)荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测方法,为快速、准确地定量检测TTV奠定基础.[方法]根据TTV ORF2区基因序列,设计并合成引物和荧光标记探针.将PCR扩增的TTV的ORF2区基因片段克隆入载体,重组质粒经筛选、鉴定后,作为阳性模板,用于标准曲线的制定和样品检测.[结果]应用重组质粒制作的定量曲线循环阈值与模板浓度具有良好的线性关系.与定量对照曲线比较计算,10例TTV标本中TTV拷贝数为3.8×105～8.9×1O8拷贝/μl.[结论]检测TTV的FQ-PCR方法较常规PCR技术更为简便、快速、准确,有很好的应用前景和研究价值.     

采用原位杂交法检测肝组织中的TT病毒

目的：检测肝组织中ＴＴ病毒。并探讨其致病性。方法：采用对称和不对称ＰＣＲ法,以地高辛素分别标记ＴＴＶ双链和单链探针,原位杂交法检测５６例肝组织。结果：５１例非甲￣非庚型肝炎肝组织中ＴＴＶ总检出率２７．５％（１４／５１）;５例非肝炎肝组织杂交阴性。ＴＴＶ ＤＮＡ主要见于肝细胞核内,在急性、慢性及重型肝炎组织中均有检出。双链探针杂交结果与单链探针检测病毒基因链的结果一致,２／６例组织ＴＴＶ基因链与互补链同时存在,结论：ＴＴＶ是导致肝炎的一种新病原,并且在肝脏内有复制。     

11株经输血传播病毒（TTV）基因型分析

目的 对11株经输血传播病毒（transfusion transmit virus,TTV）进行基因型分析。方法 用巢式PCR扩增不同地区不明病因的急、慢性肝炎、肝硬化、肝癌和自然健康人群TTV DNA片段,并对此巢式PCR产物进行克隆,测序分析和同源性比较。结果 11例标本的222bp9引物序列除外）的TTV DNA同源性结果为：武汉WH1、WH2、WH33个患者血清中TTV DNA序列与N22同源性分别为97.0％、97.0％和98.0%;广州GZ1、GZ2、GZ33患者血清中TTV DNA序列与N22同源性分别为98.0%、95.0%和95.0%;山东SD2、SD3TTV DNA序列与N22同源性分别为94.6%和95.5%;广州GZ4、山东SD1,新疆XJ1患者TTV DNA序列与TX011同源性分别为98.0%、98.0％和95.0%。结论 根据Okamoto的分类方法,这11株TTV可属于两个亚型,即基因1型的a和b亚型。     

新疆地区输血传播病毒的检测

随着检测技术的发展，对肝炎病毒的认识更加深刻。除甲～戊型肝炎和已知的其它致病因素外，仍有１０％～２０％的因输血或散发性肝炎不能用现有的检测方法检出其病毒标志。１９９７年Ｎｉｓｈｉｚａｗａ等报告了一种新发现的，与人类肝炎相关的ＤＮＡ病毒ＴＴＶ。为了解新疆地区ＴＴＶ感染情况，我们用日本学者报道的ＴＴＶ核苷酸序列设计了两对引物，检测了新疆地区的１２８例各种肝炎患者和４１例血液透析患者血清，证实新疆地区存在ＴＴＶ感染的流行，现将检测结果和部分ＴＴＶ阳性核苷酸测序结果总结报道如下。材料与方法一、病例来源本…     

丙型肝炎病毒在肝外组织复制状态和抗原表达

目的 探讨丙型肝炎肝外组织丙型肝炎病毒（ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｃ ｖｉｒｕｓ,ＨＣＶ）感染和复制状态及其意义。方法 分别采用免疫组织化学和逆转录多聚酶链反应（ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ,ＲＴＰＣＲ）方法检测９例丙型肝炎肾,心,胰腺和肠等肝外组织ＨＣＶ多种抗原和正链,负链ＨＣＶ ＲＮＡ。结果 ９例中６例（６６．７％）在肝外组织检出ＨＣ     

陕西地区输血传播病毒的感染状况及部分基因序列分析

目的分析陕西地区不同人群中TVV(Transfusion transmitted virus,TTV)的感染情况及基因型。方法根据TTV ORFl区设计引物,建立巢式聚合酶链反应,检测不同人群中TTV-DNA。并对PCR阳性产物进行克隆、测序分析和同源性比较。结果 30例健康人群中,50例肝炎病人,40例非甲～非庚肝炎TTV-DNA阳性率分别为6.0％,22.5％,52.5％。对其中三组人群各任取1例(TTVSJ1、TTVSG2、TTVSF3进行PCR产物直接测序,其序列与日本株N22同源性分别为97.5％、97.8％和97.8％。结论陕西地区不同人群中均可有TTV感染存在;非甲～非庚型肝炎TTV-DNA阳性率占有较大比例;陕西地区TTV与日本株N22属同一亚型。     

病原不明肝炎患者肝组织中TTV正链的检测及其与病变的关系

目的探讨 ＴＴＶ与病原不明肝炎的关系及 ＴＴＶ能否在肝组织中复制。方法用巢式 ＰＣＲ法对３１例某职校流行的病原不明肝炎患者的血清进行３．２ｋｂＴＴＶ ＤＮＡ扩增, ３０例同地区志愿献血员为对照组,结合肝炎患者的病理改变进行分析;同时用核酸酶保护法对其中７例肝炎患者的肝组织做ＴＴＶ正链的检测。结果在病原不明肝炎患者中,ＴＴＶ的检出率为９６．９％,在志愿献血员中检出率为６０％,两组间ＴＴＶ的检出率差异有显著性。在ＴＴＶ ＤＮＡ阳性的３０例肝炎患者中,尽管大多数肝脏损害轻微,但仍有６．６％有慢性肝炎改变。在７例病原不明肝炎患者的肝组织中用核酸酶保护法均检出ＴＴＶ ＤＮＡ的正链。结论 ＴＴＶ感染可能与该病原不明肝炎的流行有关,ＴＴＶ可以在人肝组织中复制,ＴＴＶ可能导致的肝脏损害轻微,但仍有少数有慢性肝炎发生。     

HepG2.2.15细胞内乙型肝炎病毒cccDNA的定量检测

目的　建立一种细胞内乙型肝炎病毒cccDNA的定量检测方法。方法　消化收集处于对数生长期的HepG2.2.15细胞,取1×106 个细胞用小量质粒抽提试剂盒抽提细胞内的cccDNA,抽提产物用绿豆核酸酶酶切纯化,所得酶切产物用特异的引物和探针进行选择性荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测。用对数生长期前的细胞培养上清液、4 份HBV DNA阳性和2 份HBV DNA阴性的慢性乙型肝炎(轻度)患者血清验证荧光定量PCR法的特异性,并用不同浓度的质粒标准品检测该方法的敏感性。结果　证实HepG2.2.15细胞内存在cccDNA,其含量约为每个细胞18 拷贝。对数生长期前培养上清液和慢性乙型肝炎(轻度)患者血清均未检测到荧光信号,本实验条件下用该方法可检测低至103 拷贝/ml的cccDNA分子。结论　该方法操作方便,特异性高,敏感性较好,可用于定量检测细胞内的cccDNA及抗病毒药物的筛选和评价等。     

聚合酶链反应评价原位杂交检测慢性HBV感染者肝内HBVDNA的结果

用地高辛素探针原位杂交检测慢性ＨＢＶ感染者肝内ＨＢＶＤＮＡ，聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测血清ＨＢＶＤＮＡ评价病毒复制状态。发现肝内ＨＢＶＤＮＡ阳性肝细胞，在１４例肝组织病变不活动的ＨＢｅＡｇ阳性慢性无症状ＨＢＶ携带者（ＡｓＣ）呈弥漫性分布；而在ＨＢｅＡｇ阳性或阴性活动性肝病病人均聚合分布于肝细胞坏死区。上述慢性感染者９８％血清ＨＢＶＤＮＡ阳性。说明ＨＢＶ复制与肝组织病变有关但非肝损伤直接原因。１６例ＨＢｅＡｇ阴性ＡｓＣ中，９例肝内仅见局灶性ＨＢＶＤＮＡ阳性肝细胞，其中４例血清ＨＢＶＤＮＡ阳性，说明部分ＨＢｅＡｇ阴性ＡｓＣ也存在极低水平病毒复制。