MTT比色法在微囊培养动物细胞计数中的应用

观察了3种已报道的脱色液在MTT比色法中的使用效果,实验证明它们均存在一定的局限性,不适于微囊细胞的脱色。改良的脱色液配方为N,N-二甲基甲酰胺-Triton-水(DTW),它不仅可迅速完成脱色,呈色稳定,不引起蛋白质沉淀,且无需破囊和洗涤细胞,从而较好地解决了微囊固定化细胞计数的难题。     

MTT比色法测定7株抗hIL-5mAb对TF-1细胞的增殖抑制活性

利用人红白血病细胞系（ＴＦ－１）细胞具有对ｈＩＬ－５依赖生长的特性，采用四甲基偶氮唑盐（ＭＴＴ）法〔１〕对所制备的抗ｈＩＬ－５ｍＡｂ进行活性测定。１材料与方法１．１细胞和试剂ＴＦ－１由中国科学院上海生物工程研究中心保存，ｈＩＬ－５标准品为英国Ｐｅｒｏ...     

两种检测细胞活性的改良MTT法

四甲基偶氮唑盐(MTT)测定法是依靠线粒体琥珀酸脱氢酶催化MTT形成蓝色甲(月替)的多少来检测活细胞数和功能状态的。对影响甲(月替)溶解的助溶剂配方和用量作了实验比较,提出两种配方和合适用量,使此法的敏感性提高了25%,与~3H-TdR掺入法接近,并且相关性好(P<0.001)。改良MTT法重复性好、操作简便、较安全、费用低,可替代~3H-TdR法用于细胞活性的测定。     

MTT法和CCK-8法检测悬浮细胞增殖的比较

在细胞学实验中,MTT比色法和1H-TDR掺入法常用于细胞毒性、细胞活性和细胞增殖的检测。因MTT法具有简便、经济、安全等特点,而被广泛使用,但其操作较繁琐,需加入DMSO溶解甲躜颗粒,且往往因溶解不全而对实验结果造成影响;而。H-TDR掺入法虽然灵敏度高、特异性强、稳定性好,但由于操作步骤多、存在放射性危害等限制了其使用。近年来,国外研发出了一种新型的检测方法CCK-8（cell counting kit-8）,其原理为活细胞线粒体脱氢酶转化的黄色结晶为高度水溶性,不需要裂解细胞,可直接进行比色。该法步骤简便,且准确性得到提高。     

一种新的蒽环类抗生素R5抗肿瘤活性的初步研究

为研究中国南海红树内生真菌No.1403的次级代谢物R5的体外抗瘤作用，以蒽环类抗生素表阿霉素（EPI）为阳性对照，采用MTT比色法检测R5对MCF－7细胞株的细胞毒性作用；Annexin V-FITC/PI双标法流式细胞术测定R5对MCF－7细胞株的诱导凋亡作用；透射电镜观察MCF－7细胞超微结构的改变。结果显示，R5对MCF－7细胞株有较好的体外抗瘤活性，且呈现时间、剂量依赖性，R5抑瘤作用与诱导肿瘤细胞凋亡相关，透射电镜可见典型凋亡细胞改变。     

釉基质蛋白对牙周膜成纤维细胞增殖活性的影响

目的:通过检测釉基质蛋白(Enamel matrix proteins,EMPs)作用下对促进牙周膜成纤维细胞增殖活性的影响,探讨EMPs促进牙周组织再生的作用机制.方法:酶消化法获得人牙周膜成纤维细胞(Human periodontal ligament cells,HP-DLC)用不同浓度的EMPs进行诱导,在3 d、7 d两个时间点,利用MTT法检测和分析诱导后细胞增殖活性的变化.结果:EMPs浓度在(50～200)mg/L时促增殖作用呈剂量依赖性.EMPs的最小显效浓度是50 mg/L,而200 mg/L EMPs的促增殖作用最强.25 mg/L与(50～200)mg/L差异显著(P＜0.05);(100～200)mg/L间无明显差异(P＞0.05).结论:EMPs在一定浓度下可以促进人PDLCs增殖.100 mg/L浓度最佳.     

大黄对肠黏膜上皮细胞呼吸功能影响的实验研究

目的 研究大黄对烫伤后大鼠肠黏膜上皮细胞线粒体呼吸链的影响。方法 采用大鼠背部烫伤模型,随机分为大黄治疗组、烫伤组和正常对照组。分离小肠黏膜上皮细胞内线粒体,监测呼吸控制率（ＲＣＲ）、琥珀酸脱氢酶和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（ＮＡＤＨ）脱氢酶活力和细胞色素Ｃ的含量。结果 烫伤后各时相点ＮＡＤＨ和琥珀酸氧化呼吸边的ＲＣＲ显著低于对照组,细胞色素Ｃ亦有同样改变,而烫伤对琥珀酸脱氢酶和ＮＡＤＨ脱氢酶活力无显著     

比色法检测抗体依赖性细胞介导的细胞毒活性在消化道癌症中的应用

人外周血单个核细胞中的K细胞,单核细胞等,具有抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用(ADCC);在抗感染、移植免疫和肿瘤免疫以及自身免疫病中起重要作用,测定AD-CC活性可了解机体免疫功能,对疾病疗效观察及预后有重要作用,目前ADCC活性测定最常用的方法是溶血空斑形成试验,Cr释放法等,以上方法操作复杂,有放射性污染,为此我们运用比色的方法测定了正常人及临床确诊为癌症病人的ADCC活性。     

兔角膜实验性碱烧伤的上皮组织化学研究

目的 :探索角膜碱烧伤后不同时期上皮及其邻近组织的形态、结构及生物分子 (以钌红RR颗粒表示 )的变化规律。方法 :用 1mol·L- 1 NaOH溶液造成兔角膜碱烧伤模型 ,采集不同时期标本用钌红染色、电镜观察照相。结果 :①碱烧伤后第 1天 ,角膜上皮全层脱落 ,第 3～ 7天时部分上皮再生 ,但细胞层数少、结构及形态不规则 ;第 7天时 ,再生上皮细胞层数增多。至第1 4天时 ,再生上皮已基本规则且桥粒结构明显、细胞器发达。②角膜碱烧伤后RR颗粒明显减少 ,第 7天时 ,上皮细胞器内RR颗粒略增多 ,其邻近浅基质层内RR颗粒增多明显。③这种变化与烧伤程度及创伤修复有关。结论 :角膜碱烧伤后上皮细胞的损伤、再生及生物分子变化有一定规律 ;基质浅层内的组织学变化明显依赖于上皮的再生情况     

白介素6生物活性简易测定法及其临床应用

报道了应用白介素６（ＩＬ－６）依赖细胞株７ＴＤ１，以及ＭＴＴ比色法测定ＩＬ－６生物活性的简便方法。本法测定结果和￣３Ｈ－ＴｄＲ掺入法一致；检测灵敏度为１ｐｇ或１Ｕ／ｍｌ以下；可用于正常人或病人血清中ＩＬ－６水平的测定。采用本法检测了我国正常成人５５例，血清ＩＬ－６活性为６．７５±２．９８Ｕ／ｍｌ；而１１例肺结核排菌者和１２例肺癌患者的血清ＩＬ－６活性分别为１４．２９±８．４６和１７．１４±９．１２Ｕ／ｍｌ，与正常人有显著差别（Ｐ＜０．０１和Ｐ＜０．００１），为进一步临床应用奠定了基础。     

MTT法在放射生物学中的应用

用MTT法(噻唑蓝比色分析法)及克隆法分别进行了乏氧及有氧下照射HeLa-s₃细胞的剂量_效应关系实验, 并以单击多靶模型分别拟合曲线。结果显示MTT法拟合度高于克隆法, 拟台参数D₀值也较高, 但OER值相近, D_q及N值也相近。提示MTT法有可能取代克降法。     

以氯化丁酰胆碱为底物测定假性胆碱酯酶活性的微量羟胺比色法

目的：建立适用测定假性胆碱酯酶（ＢＣｈＥ）活性的微量羟胺法。方法：酶促反应用人血清ＢＣｈＥ,选择优化以氯化丁酰胆碱为底物测定ＢＣｈＥ活性微量羟胺法的条件并进行了方法学评价。结果及结论：本法底物丁酰胆碱最适浓度为９ｍｍｏｌＬ－１,最佳反应时间为３０ｍｉｎ,最适比色波长为４９２ｎｍ,灵敏度是以乙酰胆碱做底物的微量羟胺法的２倍,呈色物质比５,５－二硫基双－２－硝基苯甲酸（ＤＴＮＢ）法中的稳定,重复性好,操作简单,试剂及酶用量少,适用于临床检验及实验研究中ＢＣｈＥ活性测定     

三种生物制剂复合应用对芥子气兔眼角膜损伤的治疗作用

目的 :观察角膜胶原膜 (CCS)及伍用纤连蛋白 (FN)、表皮生长因子 (EGF)对兔眼角膜芥子气损伤后的治疗作用 ,寻找芥子气眼损伤后眼睑水肿前救治的新方法、新技术和新药物。方法 :将2 4只兔左眼角膜芥子气染毒后 ,随机均分为A ,B ,C组 ,分别用PBS液、CCS及CCS +FN +EGF处理 ,于染毒后 2 ,8,16 ,2 4 ,36 ,4 8和 72h对角膜荧光素着色区拍照 ,计算其上皮愈合速率和上皮破损率。结果 :A ,B ,C三组的角膜上皮愈合速率分别为 (0 .879± 0 .139)mm2 /h、(1.2 2 3± 0 .16 6 )mm2 /h和 (1.543± 0 .2 2 4 )mm2 /h ,统计学处理发现角膜上皮愈合速率各组间差异均非常显著 (P <0 .0 1) ,三组的角膜上皮破损率分别为 71.6 %、57.3%和 4 4 .8% ,统计学差异也非常显著 (P <0 .0 1)。结论 :CCS能促进芥子气染毒引起的兔眼角膜损伤的上皮愈合 ,而伍用FN和EGF的效果更佳     

羊膜移植术联合佩戴绷带镜治疗持续性角膜上皮缺损的疗效

 目的 探讨羊膜移植术(amnitotic membrane transplantation,AMT)联合佩戴绷带镜(bandage contact lens,BCL)治疗持续性角膜上皮缺损(persistent corneal epithelial defects,PCEDs)的可行性及疗效。方法 选择 2015-02至2017-02收治的多种原因所导致PCEDs患者50例(53 只眼),随机分为治疗组和对照组,治疗组采用AMT联合角膜BCL治疗,对照组采用药物治疗或(和)结膜瓣遮盖治疗,比较两组术后视力,角膜溃疡或上皮愈合情况,羊膜转归,前房炎性反应情况和并发症等。结果 治疗组视力改善情况高于对照组。治疗组25例27眼,有效25眼,有效率92.5%;对照组25例26眼,有效17眼,有效率65.4%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。治疗组术后 2 周羊膜大部分溶解,术后1个月羊膜基本完全溶解,术后3个月治疗组中25眼获得稳定眼表面,无排斥和继发感染发生。结论 羊膜移植手术联合佩戴治疗用BCL有利于角膜上皮修复,加速伤口关闭,减少角膜新生血管等并发症的形成,促进恢复视力。     

两种手术方式治疗硬核白内障术后角膜内皮细胞的损伤分析

目的Ⅳ级硬核白内障分别采用超声乳化吸除术和手法小切口摘除术治疗,分析比较术后角膜内皮细胞损伤特点。方法回顾分析2008年5月～2011年5月收治的行Ⅳ级硬核白内障手术患者59例（59只眼）,其中A组行超声乳化吸除术27例（27只眼）,B组行手法小切口摘除术32例（32只眼）。非接触型角膜内皮显微镜分别观察计算两组患者术前、术后1W和术后1个月时的角膜内皮细胞密度及六角形细胞比例,以及术后1w和术后1个月角膜内皮细胞密度损失率。结果术后两组角膜内皮细胞密度和六角形细胞比例均降低;角膜内皮细胞密度,术后1w时A组低于B组（P〈0．05）;两组六角形细胞比例无显著差异（P〉0．05）。角膜内皮细胞密度平均损失率,术后1w和术后1个月时,均为B组小于A组（P〈0．05）。结论两种手术方式行硬核白内障治疗均有不同程度角膜内皮细胞损伤,手法小切口摘除术后角膜内皮细胞早期损伤小于超声乳化吸除术后。     

彩色多普勒超声对胎鼠小肠上皮细胞凋亡影响的实验研究

目的 :探讨彩色多普勒超声对胎鼠小肠粘膜上皮细胞是否构成影响。方法 :2 4只孕 14天SD大鼠按彩超辐照时间不同随机等分为四组 :Ⅰ组 (对照组 ) ,Ⅱ组 (照射 10min组 ) ,Ⅲ组 (照射 2 0min组 ) ,Ⅳ组 (照射 30min组 )。仪器采用Accuson公司Sequeoia 5 12型彩色电脑声像仪 ,照射条件 :4V1探头 ,二维频率H3.0MHz ,彩色频率 3.0MHz,Tis=1.8,Micd =1.6。照射后 2 4h取胎鼠小肠标本 ,HE染色光镜观察 ,TUNEL法检测凋亡细胞 ,透射电镜观察超微结构的变化。结果 :各组光镜下观察均未见异常 ,TUNEL法检测结果 ,Ⅰ组及Ⅱ组胎鼠小肠上皮可见散在凋亡细胞 ,Ⅲ组及Ⅳ组凋亡细胞明显增多。Ⅲ组及Ⅳ组荧光强度与Ⅰ组有显著差异 (ⅢvsIP <0 .0 5 ,IVvsIP <0 .0 1) ,荧光强度与照射时间呈正相关 (P <0 0 1) ,(r=0 .5 71)。Ⅳ组标本电镜检查发现核染色质浓缩边集 ,内质网及线粒体肿胀等超微结构变化。结论 :彩色多普勒超声照射孕鼠 2 0min以上可引起胎鼠小肠粘膜上皮细胞凋亡。     

更昔洛韦对肾小管上皮细胞生长和能量代谢的影响

目的:观察更昔洛韦对人肾小管上皮细胞生长及能量代谢的影响。方法:分别以3种不同浓度的更昔洛韦(1μg.ml-1,10μg.ml-1,100μg.ml-1)作用人肾小管上皮细胞HKCs细胞,应用MTT比色法作生长曲线,观察更昔洛韦对肾小管上皮细胞增殖的影响。同时,应用反相高效液相色谱法检测不同浓度药物作用24 h和48 h时各组细胞内ATP含量的变化。结果:实验组与对照组比较,不同浓度更昔洛韦对肾小管上皮细胞生长无明显影响(P>0.05)。药物浓度为100μg.ml-1实验组作用48 h后,细胞ATP含量比对照组低(P<0.05),其余与对照组无显著差异(P>0.05)。结论:更昔洛韦在治疗浓度范围内,对肾小管上皮细胞生长及能量代谢无明显影响,只有达较高浓度时对细胞能量代谢才有抑制作用,可能是临床上引起肾功改变的原因之一。     

空军飞行员角膜内皮细胞的初步分析

目的 探讨我国空军飞行员角膜内皮细胞密度和形态特征,初步了解细胞密度和形态学的生理学参数.方法 应用角膜内皮细胞显微镜及仪器自带的角膜内皮细胞分析系统,对男性56例(112眼)现役飞行员角膜内皮细胞进行了观察,同时选取30例(60眼)与其年龄和裸眼视力具有可比性的健康男性作为对照组,两组进行分析和比较.结果 数据显示空军飞行员平均角膜内皮细胞密度为2797.0±330.3个/mm2,显著低于对照组的2917.57±318.04个/mm2(t=2.286,P=0.024).平均六角形细胞构成比,飞行员组(56.46±7.19)显著低于对照组(60.33±7.68),差异有显著性意义(t=3.253,P=0.001).飞行员组和对照组随着年龄的增加,六角形细胞构成比均逐渐减少(r=-0.395、-0.268,P=0.000、0.038).通过偏相关系数分析,在年龄因素控制条件下,飞行员飞行时间的延长伴随着细胞平均面积的增大(r=0.244,P=0.01).结论 对飞行员角膜内皮细胞形态学参数的测定和初步数据分析将有助于进一步了解高速飞行情况下眼角膜内皮的变化.