可溶性人胎盘生长因子ELISA检测试剂盒的建立及性能分析

目的:研发人血清及尿液可溶性胎盘生长因子(sPLGF)的ELISA检测试剂盒并进行性能测试。方法:以抗人PLGF单克隆抗体包被微孔板,加入重组sPLGF和生物素标记的检测抗体,形成抗原抗体复合体,加入链亲合素辣根过氧化物酶和底物TMB实现比色反应;从线性范围、准确度、精密度、样品基质及样品前处理方法等指标进行性能评价,并与市售进口同类产品进行比较。结果:捕获抗体的最适包被量为400ng/well,包被条件为4℃孵育16~20h,检测抗体的最适工作浓度为1μg/ml,样品最适反应条件为37℃孵育2h,适合的封闭液及样品稀释液组合为3%BSAPBS和0.1%BSA-PBS;验证该试剂盒的有效检测范围为15.6~2000pg/ml,准确度为85%~115%;批次内变异系数CV≤10%,批次间变异系数CV≤15%;其检测范围、准确度、精密度、灵敏度及样品适用范围等与市售进口试剂盒基本一致。结论:本项目开发的人sPLGF检测试剂盒实现了人血清和尿液中的内源sPLGF的定量检测,其检测性能稳定、可靠,具有比进口试剂盒检测范围更广、价格更低的优势,可用于临床检测血液及尿液中的内源性sPLGF水平。     

双抗夹心ELISA法检测血浆HSP70的建立及初步应用

[目的]建立双抗体夹心法检测血浆中热休克蛋白70(heatshockprotein70,HSP70)水平。[方法]制备兔抗HSP70抗体 ,建立双抗体夹心法标准曲线 ,鉴定其最小检出限、精确度、回收率 ,并初步应用于检测40例男性健康成人血浆样本的HSP70水平。[结果]双抗夹心ELISA法检测HSP70的最小检出限为10ng/ml,标准曲线在10～100ng/ml范围内线性良好。3份同批血清标本分别重复8次测定 ,平均批内变异系数为7.6 % ;3份不同批血清分别重复6次测定 ,平均批间变异系数为12.7 %。血清中加入已知量的标准抗原 ,测得回收率为85.5 %。对40例男性健康成人(20.0±0.9)岁血浆样本检测 ,其HSP70浓度均值为 (151.0±13.8)ng/ml。[结论]本方法检测HSP70的可测范围广 ,灵敏度和精密度较高变异系数较小 ,表明其灵敏、特异、可靠     

流式荧光技术检测血清甲胎蛋白/癌胚抗原性能评价

目的对基于流式荧光技术联合检测血清AFP/CEA进行性能评价。方法通过流式荧光技术联合检测临床血清样本的AFP/CEA,评价该方法的灵敏度、精密度、准确度,并分析了AFP、CEA 2个指标在肝癌组与对照组中的差异。结果基于流式荧光技术的AFP、CEA最低检测限分别为0.57 ng/ml、0.23 ng/ml。AFP批内变异系数(CV)为2.26%~3.38%,室内CV为7.30%~10.95%。CEA批内CV为2.30%~5.26%,室内CV为7.76%~13.95%。与电化学发光法进行方法学比对AFP相关系数(r)=0.993 6,CEA相关系数(r)=0.993 7。肝癌组中AFP浓度为(253.24±316.47)ng/ml,CEA浓度为(14.07±53.70)ng/ml;对照组中AFP浓度为(3.28+1.82)ng/ml,CEA浓度为(2.74±1.60)ng/ml。肝癌组AFP/CEA浓度值显著高于对照组。结论通过流式荧光技术可以实现AFP、CEA并行检测,方法学性能良好,可应用于临床检验。     

联合疫苗中白喉类毒素抗原质量控制方法的研究

目的建立白喉类毒素含量测定方法,用于百白破为基础的联合疫苗的质量控制。方法采用棋盘滴定法确定抗白喉类毒素包被抗体及酶标抗体浓度,并对方法进行全面验证。结果棋盘滴定法确定包被抗体浓度为5μg/ml,酶标记抗体稀释2000倍为宜。验证双抗体夹心ELISA线性检测范围为0.0027 lf/ml^0.0429 lf/ml(相关系数r>0.99),检测方法特异性强、精密度及准确度均符合要求(精密度验证CV<10%,准确度验证回收率在85%~115%)。利用该法测定多批联合疫苗中DT的吸附率,分别使用该法和絮状单位法测定了17批类毒素原液中DT的含量,比较2种检测方法呈显著相关(r=0.594)。结论建立了白喉类毒素抗原含量检测方法,为白喉疫苗生产过程及联合疫苗中DT吸附率的评价提供有效质控方法。     

梅毒抗体酶联免疫吸附法检测试剂盒性能验证及评价

目的探讨酶联免疫吸附试验(ELISA)检测中试剂盒的性能验证评价方法,并对该实验室梅毒抗体(anti-TP)检测中所使用的英科新创生产的ELISA试剂盒进行性能验证评价,以判断所用试剂盒是否能满足实验室检测工作的基本要求。方法利用全自动酶标仪进行ELISA检测,从试剂盒最低检出限、重复性、精密度、正确度四个方面,评价该试剂盒的性能指标,并对试剂盒的CUTOFF值进行验证,判断其是否适合本实验室常规检测人群。结果梅毒抗体(anti-TP)ELISA检测中,该实验室所用英科新创试剂盒最低检出限为0.25 NCU/m L,低于厂家声称的0.3 NCU/ml,适合大批量样本筛检,避免了漏检;批内精密度试验中,弱阳性浓度水平(0.5 NCU/m L)和临界值浓度水平的变异系数(CV)分别为4.0%和3.2%;批间精密度实验中,在弱阳性浓度水平(0.5 NCU/m L)和临界值浓度水平的CV为8.5%和7.6%,均低于厂家声明的标准;正确度验证方面,阴阳性符合率达到100%;CUTOFF值验证实验中,检测的样本OD值的x+3SD=0.027,小于试剂盒提供的CUTOFF值0.105.结论该梅毒抗体检测试剂盒的各项性能指标符合本实验室的要求,CUTOFF值适合本实验室日常检测工作和受检人群。     

人肌红蛋白化学发光免疫分析定量检测方法的建立及性能评价

目的利用化学发光免疫分析技术,建立一种人肌红蛋白(myoglobin,MYO)定量检测方法。方法采用基于化学发光免疫分析的双抗体夹心法(以纳米磁微粒为固相载体包被抗人MYO抗体,以另一抗体交联碱性磷酸酶为标记物)研制MYO化学发光免疫定量检测试剂盒。并进行性能评估及临床试验。结果该检测方法的线性范围为(1.0~2 500)ng/m L;灵敏度为1.0 ng/m L;批内精密度和批间精密度均小于5%;添加回收率在(100±5)%以内(平均回收率101.92%);当样本中的MYO浓度为40 000 ng/m L时,未发现钩状效应;试剂在37℃放置72h后,稳定性良好,各性能指标均达到要求;相关性试验结果r>0.98,相关性方程为y=0.9837X-8.9256,与Beckman肌红蛋白测定试剂盒(化学发光法)的一致性结果良好。结论本研究建立的MYO化学发光免疫分析定量检测方法的各项性能指标均达到了临床检测要求,可用于临床血清MYO检测。     

糖类抗原CA19-9光激化学发光免疫分析方法的建立

目的:建立一种检测人血清糖类抗原CA19-9(CA19-9)浓度的光激化学发光免疫分析方法。方法:采用2株针对不同抗原表位的抗CA19-9抗体,其中一株抗体用来包被发光微粒,另一株抗体标记生物素,以双抗体夹心法检测血清中CA19-9浓度,并与Roche公司试剂(电化学发光法)进行比较。结果:发光微粒浓度为25 mg/ml、生物素标记抗体浓度为16.17 mg/ml时,监测范围为0 U/ml～500 U/ml,灵敏度为0.27 U/ml,平均回收率为101.26%,批内变异系数(CV)为1.67%～4.35%,批间CV为1.12%～3.25%,与CEA、CA12-5、CA15-3的交叉反应率低,稳定性好,与电化学发光免疫分析法的符合率高(符合率=98.8%,γ=0.991)。结论:光激化学发光免疫分析方法测定CA19-9具有高灵敏度、精密度和准确性,与电化学发光免疫分析法的符合率高,适用于临床测定。     

铁蛋白定量检测试剂盒性能评价

目的评价以量子点荧光免疫发光法为原理的铁蛋白定量检测试剂盒的性能指标。方法根据铁蛋白定量检测试剂盒技术要求中规定的检验方法,测定试剂盒的线性、准确度、精密度(批内精密度、批间精密度)、分析特异性。结果线性结果在1~400 ng/ml线性范围内,线性相关系数r=1.00;准确度结果为测试铁蛋白国家标准物质,高浓度样品相对偏差分别是-1.7%、-2.8%、-6.8%,低浓度样品相对偏差分别是2.6%、-3.4%、-0.7%;批内精密度结果为CV高值:2%,CV低值:4%,批间精密度结果为R高值:1%,R低值:5%;分析特异性结果为含干扰物胆红素浓度≤10 mg/dl时,B高:-1%,B低:-3%,含干扰物甘油三酯浓度≤900 mg/dl时,B高:0.05%,B低:-0.3%,含干扰物血红蛋白浓度≤200 mg/dl时,B高:-0.4%,B低:-5%。结论被检验铁蛋白定量检测试剂盒,各方面性能指标符合要求,适于临床使用。     

检测大鼠尿金属硫蛋白竞争ELISA法的建立和初步应用

目的建立竞争酶联免疫吸附法(ELISA)用以检测大鼠尿金属硫蛋白(UMT)的含量。方法用标准MT抗原包被酶标板,加入待测样品或标准MT与包被MT竞争鼠抗MT抗体(一抗)。再加入生物素化抗大鼠IgG(二抗)与一抗进行反应,然后在二抗联与亲和素化辣根过氧化物酶使底物显色,根据吸光度值计算样品浓度。结果该方法在150~2.34μg/ml间线性关系良好(r=0.9899);批内精密度为3.38%~6.43%,批间精密度为5.32%~9.38%;加标回收率为90.13%~96.40%;雄性和雌性大鼠UMT含量分别为17.74μg/mgCr和15.97μg/mgCr。结论该方法简便,灵敏,具有较好的精密度和准确度,可用于大鼠UMT的检测。正常大鼠尿中含有MT,但雄性和雌性大鼠之间UMT无明显差异。     

尿微量白蛋白检测试剂盒性能评价

目的评价深圳迈瑞免疫比浊法检测尿微量白蛋白的性能。方法评价深圳迈瑞免疫透射比浊法检测尿微量白蛋白的正确度、日内不精密度、日间不精密度、线性范围以及最大稀释度。结果迈瑞尿微量白蛋白检测试剂盒与西门子特定蛋白分析仪及配套试剂检测结果的偏倚为0.017 5 mg/L,相关系数(r)为0.996,决定系数(r2)为0.993。精密度试验显示,迈瑞尿微量白蛋白检测试剂盒的日内不精密度为1.04%~1.17%,日间不精密度为1.74%~2.71%。线性试验显示,该试剂盒在浓度为4 mg/L~300 mg/L时呈线性。如果以回收率≤(100%±20%)作为判定标准,则最大稀释度试验显示该试剂盒的最大稀释度为30倍。结论深圳迈瑞尿微量白蛋白检测试剂盒正确度高、精密度好、线性范围宽、最大稀释度高,其性能完全能满足临床的使用要求。     

免疫比浊法PGⅠ/PGⅡ试剂在全自动生化分析仪上检测性能验证分析

目的:在临床开展血清胃蛋白酶原Ⅰ和Ⅱ(PGⅠ/PGⅡ)检测前,对PGⅠ/PGⅡ试剂盒在全自动生化分析仪上检测性能进行评价。方法:以厂家配套的高、低值浓度样品为样本,进行批内精密度和批间精密度验证。以厂家配套的质控标准品为样本,进行正确度验证。将质控标准品稀释,PGⅠ范围为2.5~160.0 ng/mL,PGⅠI范围为2.0~70.0 ng/mL,将结果做回归与相关分析。以厂商提供干扰物进行抗干扰能力验证。结果:PGⅠ和PGⅡ的低值浓度样品批内精密度的分别为3.23%CV和2.93%CV,批间精密度分别为2.87%CV和2.80CV%。PGⅠ和PGⅡ的高值浓度样品批内精密度的分别为1.75%CV和2.60%CV,批间精密度分别为1.75%CV和2.46%CV。PGⅠ和PGⅡ准确度偏倚均在±5%以内。在PGⅠ范围为2.5~160.0 ng/mL,线性系数r=0.999;PGⅡ范围为2.0~70.0 ng/mL,线性系数r=0.996,均到达要求。结论:免疫比浊法PGⅠ/PGⅡ检测试剂盒在日立7600-010全自动生化分析仪上检测性能符合临床要求。     

半乳糖血症全自动筛查试剂盒的性能分析

目的:对一种检测新生儿滤纸干血片样品中总半乳糖含量的全自动检测试剂盒进行性能分析。方法:采用荧光分析法检测总半乳糖含量,评判试剂盒的性能指标。结果:该试剂盒的有效检测范围为2.5~70mg/dl,检测试剂盒的分析灵敏度为0.1mg/dl。批内、批间的不精密度分别为≤10%与≤15%,校准品的不精密度≤20%。试剂盒在37℃放置7d后荧光值变化≤15%,稳定性好。本试剂盒检测结果与国外公司的同类试剂盒有很好的相关性,差异无统计学意义(P0.05)。结论:该试剂盒对比国外产品,操作简单快速,已实现自动化,适合应用于新生儿半乳糖血症大批量样本的筛查。     

Vitros350全自动生化分析仪检测血清淀粉样蛋白A的性能评价

目的：分析强生Vitros350全自动生化分析仪检测血清淀粉样蛋白A(SAA)的性能。方法：选择本院2020年10月～2020年12月健康体检中心进行体检者50例为研究对象,采集体检者晨起空腹外周静脉血3mL,常温下静置至血液凝固后以3000 r/m的速度离心后收集血清,立即送实验室检测。采用美国强生Vitros350全自动生化分析仪对血液样本中SAA进行检测,按照卫生行业标准要求,对Vitros350全自动生化分析仪的精密度、准确度做出评价。结果：SAA浓度的批内精密度结果：低值CV(1.43%)、高值CV(1.62%),均≤8.0%;批间精密度结果：质控1 CV(2.27%)、质控2 CV(2.34%),均≤8.3%,精密度测定结果均符合要求;以校准品为检验参照标准,线性回归方程为Y=0.979X+1.306,r²=0.994>0.95,相关性良好;血液样本与便准品的检测结果比较,t=0.002,P=0.927,差异无统计学意义(P>0.05),准确度符合要求;对50例血液样本中SAA检测结果,均≤10mg/L,符合率为100.00%。结论：强生V...     

豪迈胱抑素C定量检测系统的性能验证

目的:验证由豪迈胱抑素C检测试剂盒和贝克曼库尔特UniCel DxC800全自动生化分析仪组成的检测系统的性能特征。方法:对该检测系统的精密度、正确度、可报告范围和参考区间进行验证。结果:2个不同浓度水平样本的批内、批间变异系数均小于2%,均小于厂家声明;对厂家的定值参考物质进行检测,低浓度参考物质的绝对偏差为0.03~0.06mg/L,高浓度参考物质的回收率为94%~102%。使用厂家的定值物质进行回收试验,回收率为104.5%~108.4%。绝对偏差和回收率均与厂家声明一致;验证的分析测量范围为0.10~8.0mg/L,临床可报告范围为0.10~16.0mg/L;验证的参考区间与厂家声明的(0.57~1.01mg/L)一致。结论:由豪迈胱抑素C检测试剂盒和贝克曼库尔特UniCelDxC800全自动生化分析仪组成的检测系统的性能特征与豪迈公司声明一致,本研究所用性能验证的方案和方法简便、可行。     

自动顶空气相色谱-质谱联用法测定血中甲酸

于血浆中加入硫酸异丙醇溶液，在自动顶空进样器中加热，甲酸与异丙醇发生酯化反应生成甲酸异丙酯经气相色谱分离，以质谱检测，外标法定量。结果显示，血中甲酸浓度在0.00~97.60 μg/ml时线性关系良好，相关系数r=0.999 9，方法检出限为0.25 μg/ml，定量下限0.75 μg/ml，加标回收率为97.1%~99.3%，批内精密度0.8%~6.9%，批间精密度1.3%~5.6%。该方法前处理简单，自动化程度高，特异性好，灵敏度、准确度、精密度高，可用于血中甲酸的测定。     

b型流感嗜血杆菌多糖竞争ELISA检测方法的建立

目的建立竞争酶联免疫吸附分析法（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA）,测定b型流感嗜血杆菌多糖（PRP）浓度。方法以b型流感嗜血杆菌多糖-酪胺（Ty）为包被抗原,待测多糖为竞争抗原,与优化的抗b型流感嗜血杆菌多糖抗体反应,建立标准曲线,并验证该方法的准确性和精密度。结果优化后的b型流感嗜血杆菌多糖-酪胺包被浓度为1∶400倍稀释,抗多糖血清稀释度为1∶40 K。检测线性范围6.25μg/ml~100μg/ml,最低检测限为3.13μg/ml,回归方程为B/B0=-34.328[PRP]＋105.03,线性相关系数为R2=0.995。批内精密度为3.4%~6.5%,批间精密度为8.48%,测定培养基中b型流感嗜血杆菌多糖的回收率为95.7%。结论本研究建立的b型流感嗜血杆菌多糖竞争ELISA方法准确性和精密性均较好,可以特异性地检测b型流感嗜血杆菌多糖浓度。     

甘胆酸均相酶免疫检测方法的建立及性能评估

目的建立一种均相酶免疫检测甘胆酸(glycocholic acid hydrate,CG)方法。方法采用竞争法,均相酶免疫分析技术,建立甘胆酸(CG)均相酶免疫检测方法,并对本方法进行了检出限、精密度、准确度、线性、干扰和相关性试验。结果本法试剂最佳pH值为7.8,最优兔抗人甘胆酸多克隆抗体浓度为25μg/ml。检测限为0.3μg/ml;精密度用低、高2种浓度的质控品检测,重复性精密度分别为3.43%、2.12%,中间精密度分别为5.43%、4.06%;准确度检测低、高2种浓度的质控品,相对偏差分别为-5.71%、-2.42%;线性范围为0.00μg/ml～50.00μg/ml。3种干扰物在试验浓度内(胆红素≤800μmol/L,血红蛋白≤0.500 g/L,维生素C≤6 mmol/L)的偏差分别为3.2%、2.2%、1.6%。与甘胆酸(CG)放射免疫检测试剂盒的决定系数(r~2)为0.992。以放射免疫法为标准,均相酶免疫法敏感度为97.53%,特异度为83.33%,符合率为94.95%。结论该研究建立了CG均相酶免疫检测方法,其测定结果准确、稳定、可靠,与参比试剂盒的测定结果具有较高的相关性。     

BAS-TRFIA检测抗核抗体Ig(GAM)方法学评估

目的 评估BAS-TRFIA法检测患者血清中抗核抗体Ig(GAM),为临床早期诊断相关疾病提供良好的试验依据.方法 从检测范围、精密度、回收率、稳定性、相关性试验等方面对建立的BAS-TRFIA法检测抗核抗体Ig(GAM)进行分析.结果 BAS-TRFIA法测ANA的曲线良好线性范围在1.1～37 355 U/ml;ELISA法测ANA的曲线良好线性范围在18.2～1167 U/ml,BAS-TRFIA法与ELISA法相比,ANA可测量范围明显提高;BAS-TRFIA法检测ANA低、中、高3种浓度混合血清的批内精密度(CV)分别为5.79％、3.81％和3.16％,批间CV分别为7.48％、6.33％和5.32％;ELISA法低、中、高3个浓度批内CV分别为9.27％、7.35％和5.51％,批间CV分别为12.31％、9.36％和7.15％;高、中、低浓度回收率分别为98.5％、102.2％、104.7％,平均回收率为101.8％;该方法测定值与进口ELISA法所得结果高度相关(R2=0.989);试剂盒置于37℃水浴箱7d后,BAS-TRFIA法结合率仅下降15.9％,而ELISA法结合率下降58.4％,BAS-TRFIA法试剂盒稳定性较好.结论 BAS-TRFIA法检测人血清中的ANA抗体灵敏度高、检测范围宽、重复性和稳定性好,对早期诊断自身免疫性疾病及监测疗效具有重要意义.     

免疫比浊法检测梅毒螺旋体抗体的应用研究

目的评价免疫比浊法在梅毒螺旋体特异性抗体检测中的临床应用效果。方法在自动生化分析仪上利用免疫比浊法测定梅毒阴性和阳性血清样本,确定该方法的精密度、线性范围和常见干扰因素对检测结果的影响,并对1 286份血清样本进行检测,比较该方法与明胶颗粒凝集试验(TPPA)检测结果的一致性。结果免疫比浊法批内变异系数为2.95%~5.43%,批间变异系数为4.55%~7.06%;检测线性为0~350U/ml;一定程度胆红素和溶血对检测结果无明显影响,乳糜血对检测结果影响较大。免疫比浊法与TPPA法具有良好的一致性(Kappa=0.994),检测结果总符合率为99.8%。结论免疫比浊法精密度好、线性范围宽,具有一定的抗干扰性,同时具有自动化分析、简便快速可定量的优势,适用于梅毒螺旋体抗体的大批量样本筛查。     

血清NT-proBNP与PCT在医院获得性肺炎病情及预后评估中的应用

目的探讨N-末端脑钠肽前体(N-terminal brain natriuretic peptide precursor,NT-pro-BNP)与降钙素原(PCT)在医院获得性肺炎病情及预后评估中的价值。方法选取2015年1月-2018年2月于医院治疗的医院获得性肺炎患者82例设为肺炎组,选取同期健康志愿者80例作为对照组,检测两组研究对象的血清NT-proBNP、PCT。结果肺炎组血清NT-proBNP、PCT分别为2 301.46(1 089.29,3 744.29)pg/L和(1.31±0.22)ng/ml高于对照组(P<0.001);肺炎组高危险患者血清NT-proBNP和PCT分别为3 032.18(2 674.39,4 010.02)pg/L和(1.51±0.31)ng/ml高于低危险和中危险患者(P<0.05);肺炎组中危险患者血清NT-proBNP和PCT分别为2 200.67(1 100.80,3 011.43)pg/L和(1.22±0.19)ng/ml高于低危险患者(P<0.05);死亡患者血清NT-proBNP、PCT分别为2 890.56(1 719.40,3 744.29)pg/L和(1.62±0.28)ng/L高于存活患者(P<0.05);血清NT-proBNP、PCT判断肺炎患者预后的ROC曲线下面积分别为0.963和0.889,差异有统计学意义(P<0.05),NT-proBNP、PCT截断值分别为2 526.33 pg/L和1.55 ng/ml,灵敏度分别为90.10%和75.00%,特异度分别为92.00%和91.00%。结论血清NT-proBNP、PCT在医院获得性肺炎患者病情及预后评价中有一定应用价值,可为临床诊治提供参考。