基于磁微粒的丙型肝炎病毒抗体快速检测方法的建立

目的开发一种基于磁珠、吖啶酯以及自制生物素化丙型肝炎病毒(HCV)抗原的新型快速诊断方法。方法将生物素化HCV合成抗原包被于磁性微粒,加入待检样品后,再加入吖啶酯标记的兔抗人二抗,经洗涤后加入激发液,激发吖啶酯发出光粒子,并通过专有设备进行检测,评估方法的灵敏度、重现性和稳定性;采用国家血清盘评估方法的准确性,比较与时间分辨免疫荧光法检测试剂盒的一致性。结果建立的基于磁微粒的HCV检测方法,设备样本反应时间/吖啶酯标记反应时间设置为5min/5min;在灵敏度、阴阳性符合率等方面皆符合国家HCV血清盘的质量要求;试剂盒总的变异系数CV高、中、低质量浓度质控分别为4.0%、4.6%、7.6%;试剂盒在37℃存放7d,发光值及S/Co值的变动幅度皆15%;与时间分辨免疫荧光法一致性Kappa值为0.949,具有较高的一致性。结论建立的基于磁微粒的HCV抗体快速检测方法快速、灵敏,具有良好的市场化应用前景。     

人肌红蛋白化学发光免疫分析定量检测方法的建立及性能评价

目的利用化学发光免疫分析技术,建立一种人肌红蛋白(myoglobin,MYO)定量检测方法。方法采用基于化学发光免疫分析的双抗体夹心法(以纳米磁微粒为固相载体包被抗人MYO抗体,以另一抗体交联碱性磷酸酶为标记物)研制MYO化学发光免疫定量检测试剂盒。并进行性能评估及临床试验。结果该检测方法的线性范围为(1.0~2 500)ng/m L;灵敏度为1.0 ng/m L;批内精密度和批间精密度均小于5%;添加回收率在(100±5)%以内(平均回收率101.92%);当样本中的MYO浓度为40 000 ng/m L时,未发现钩状效应;试剂在37℃放置72h后,稳定性良好,各性能指标均达到要求;相关性试验结果r>0.98,相关性方程为y=0.9837X-8.9256,与Beckman肌红蛋白测定试剂盒(化学发光法)的一致性结果良好。结论本研究建立的MYO化学发光免疫分析定量检测方法的各项性能指标均达到了临床检测要求,可用于临床血清MYO检测。     

磁微粒化学发光法检测梅毒螺旋体特异性抗体在临床筛查中的应用

目的对磁微粒化学发光法检测梅毒螺旋体特异性抗体在临床筛查中的应用进行评价。方法采用郑州安图生物工程股份有限公司生产的梅毒螺旋体抗体检测试剂盒(磁微粒化学发光法)对2016年7月28日-2017年3月13日术前常规检查的患者进行检测,初筛阳性样本加做快速血浆反应素环状卡片实验(RPR),并采用梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验(TPPA)进行确证,经SPSS 18.0软件对结果进行统计分析。结果 13 952份检测样本中初筛阳性133例,RPR阳性85例,阴性48例;TPPA确证阳性80例,阴性53例。梅毒螺旋体抗体检测(磁微粒化学发光法)与TPPA的总符合率为99.62%。结论磁微粒化学发光法可作为临床初筛实验,但也同样存在假阳性,因此梅毒的检测应根据特异性抗体、非特异性抗体检测情况以及患者的临床表现综合进行判定。     

酶联免疫吸附法和磁微粒化学发光法检测丙型肝炎病毒抗体的结果对比

目的 分析对比酶联免疫吸附法(ELISA)和磁微粒化学发光法检测丙型肝炎病毒(HCV)抗体的结果.方法 选取2019年2月至2020年10月我院检测的90例HCV抗体患者,随机将其分为对照组(ELISA)和观察组(磁微粒化学发光法)各45例.比较两组的丙型肝炎检出率、检测时间及满意度.结果 观察组的丙型肝炎检出率为95...     

基于磁微粒化学发光法的肝纤四项检测限与功能灵敏度研究

目的评价磁微粒化学发光法检测肝纤维化血清学标志物(透明质酸、层粘连蛋白、Ⅲ型前胶原N端肽、Ⅳ型胶原)的空白限、检出限和功能灵敏度。方法参照美国临床和实验室标准化协会(Clinical and Laboratory Standards Institute,CLSI)文件,利用空白样品及系列梯度稀释样品在Auto Lumo A2000全自动化学发光测定系统上进行检测,确定该方法配套试剂的空白限、检出限及功能灵敏度。结果透明质酸的空白限为7.59 ng/mL,检出限为16.17 ng/mL,20%变异系数(coefficient of variation,CV)功能灵敏度为18.72 ng/mL;层粘连蛋白的空白限为1.38 ng/mL,检出限为3.53 ng/mL,20%CV功能灵敏度为4.16 ng/mL;Ⅲ型前胶原N端肽的空白限为0.89 ng/mL,检出限为2.40 ng/mL,20%CV功能灵敏度为2.48 ng/mL;Ⅳ型胶原的空白限为2.42 ng/mL,检出限为6.49 ng/mL,20%CV功能灵敏度为9.21 ng/mL。结论 Auto Lumo A2000全自动化学发光测定仪肝纤四项的空白限、检出限和功能灵敏度的建立为临床诊断和治疗提供了更有价值的信息。     

人血清精氨酸毛细管电泳紫外检测方法的建立与应用

目的:建立一种准确、快速高效毛细管电泳-紫外检测法测定人血清精氨酸含量的方法。方法:采用高效毛细管电泳法,石英毛细管(70 cm×75μm,有效长度58 cm),分离电压15 kv,检测波长254 nm,高压进样15 s,电泳缓冲溶液比例20 mmol/L pH9.33四硼酸钠:166 mmol/L SDS∶乙腈=10∶10∶3。结果:线性范围为0.03 mmol/L～1.50 mmol/L(r=0.998);以噪声比(S/N)=2时浓度为最低检测限为0.01 mmol/L,精密度为2.4%～4.0%,重复性为2.3%～2.9%,回收率为90.5%～114.2%;检测烧伤患者住院后血中精氨酸含量变化,14 d含量达到高峰。结论:该方法样品预处理简单,分离效果好,可用于实际样品的分析。     

基于全自动管式化学发光免疫检测系统的人结核感染T细胞检测方法的建立

目的建立基于化学发光平台的人结核感染T细胞检测方法。方法将一株γ-干扰素单抗标记在磁微粒上,另一株γ-干扰素单抗标记在吖啶酯上,然后将检测体系与已有的细胞刺激培养体系相结合。结果本研究成功建立基于化学发光平台的人结核感染T细胞检测方法。以ELISA平台检测试剂的检测结果作为参考,该方法的灵敏度为98.3%,特异性为99.2%,总体符合率达到98.8%。结论该方法具有更高的分析灵敏度(可达0.27 pg/m L)、更宽的线性范围(1 pg/m L~5 000 pg/m L)、更好的重复性(批内与批间变异系数均<6.0%)及更易实现高通量检测,为临床诊断结核感染提供了有力的工具。     

人体血清二噁英化合物检测方法的建立

目的建立人体血清二噁英(polychlorinated dibenzo-p-dioxins and polychlorinated dibenzofurans,PCDD/Fs)化合物测定方法,为开展二噁英人体健康风险评估提供检测技术手段。方法基于国际二噁英的测定方法—同位素稀释的高分辨气相色谱/高分辨质谱联用法,血清样品经C18柱固相萃取、酸性硅胶柱和活性炭柱净化的前处理方法,用DB-5MS毛细管柱(60 m×0.25 mm×0.25μm)分离,高分辨质谱检测分析。结果本方法的检出限为0.35~3.26 pg/g脂肪计,采用血清国际标准参考物质(SRM 1958)进行方法验证,与SRM 1958给出的参考质量分数值范围对比,17个PCDD/Fs单体浓度测定值均在参考质量分数值范围内,相对标准偏差为2%~19%(n=3)。该方法进一步应用于实际人体血清分析,同位素标记的17个二噁英单体回收率为61%~135%。结论本方法灵敏度和准确度高、方法性能稳定,满足人体血清二噁英检测方法的要求。     

心衰患者血清NT-proBNP水平的检测临床意义分析

目的:分析心衰患者血清NT-pro BNP水平监测临床意义。方法:选取我院2016年7月至2016年12月收治的38例心衰患者为本次实验参与者,心衰患者采用胶体金免疫层析法(GICA)检测血清NT-pro BNP水平,比较不同心功能分期心衰患者血清NT-pro BNP水平,并探究血清NT-pro BNP水平与心衰患者预后影响。结果:心衰患者血清NT-pro BNP水平明显高于正常水平,且心衰患者心功能越低血清NT-pro BNP含量越高,心衰患者有10例再次入院,有3例出现心源性猝死。结论:对于心衰患者进行血清NTpro BNP检测能有效衡量患者心功能状态,为心衰患者临床诊疗提供重要的参考依据。     

血清p53抗体ELISA检测方法的建立

目的建立一种检测血清p53抗体的间接ELISA方法。方法以重组p53蛋白作为包被抗原,检测ELISA方法的敏感性、特异性、精密度与稳定性,同时对203份正常人血清及548份临床确诊恶性肿瘤病人血清进行检测。结果p53蛋白的最佳包被浓度为1μg/mL,包被液为0.05mol/L的碳酸盐缓冲液。3份p53抗体阳性血清稀释至1∶400时,仍均为阳性;重复8次其变异系数范围为3.67%~16.88%。中和阻断试验结果表明阻断率随着p53蛋白含量的增加而增高。203份健康人血清的p53抗体全部为阴性,548份病人血清有78例阳性,阳性率为14.23%。结论该方法敏感、特异、稳定,可用于人群血清p53抗体的检测。     

增强化学发光酶免疫法测定血清高尔基蛋白73方法的建立及应用

目的建立对碘苯酚增强化学发光酶免疫(CLEIA)测定血清高尔基蛋白73(serum Golgi Protein,sGP73)的方法,用于检测人sGP73含量。方法建立增强CLEIA测定血清GP73含量,对一批临床样品包括重症肝炎患者30份,肝硬化患者38份,肝癌患者79份以及健康人43份,进行sGP73含量的测定。结果该方法检测人sGP73的灵敏度为0.197 ng/ml,线性范围为3.90 ng/ml~250.00 ng/ml。重症肝炎患者sGP73含量为8.98 ng/ml~1 393.00 ng/ml,肝硬化患者sGP73含量为14.36 ng/ml~599.70 ng/ml,肝癌患者sGP73含量为26.02 ng/ml~1 288.00 ng/ml,健康人sGP73含量为2.67 ng/ml~139.20 ng/ml。肝病患者远高于健康人sGP73含量,其中重症肝炎sGP73含量最高,肝癌患者高于肝硬化患者sGP73含量。结论成功建立增强CLEIA测定血清GP73含量的方法,与常规ELISA相比,具有更高的灵敏度,可作为肝癌早期诊断的重要辅助手段之一。     

食品中玉米赤霉烯酮化学发光酶免疫方法建立

目的建立检测食品中玉米赤霉烯酮(ZEN)快速灵敏化学发光酶免疫方法。方法采用棋盘滴定法确定化学发光检测ZEN最佳工作条件(抗原包被浓度、包被量、一抗和二抗的工作效价、线性范围和检出限等),建立化学发光检测ZEN的方法并对实际样品进行检测,同时将检测结果与液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)结果进行比较。结果经多次实验,化学发光检测ZEN的工作条件为:玉米赤霉烯酮-牛血清蛋白(ZEN-BSA)最佳包被浓度为0.1μg/mL,包被量为100μL/孔,抗ZEN单克隆抗体的最佳工作效价为1:1600,标准曲线线性范围0.01~50 ng/mL,50%抑制浓度为13.04 ng/mL,ZEN的最低检出浓度为0.007 ng/mL,样品中ZEN的最低检出量为0.15μg/kg,在20~400μg/kg添加水平的回收率范围为66%~115%;用所建方法对23个食品样品进行分析,检测结果与LC-MS/MS结果高度相关(r²=0.98)。结论所建方法准确、灵敏,适用于食品中ZEN污染水平的批量筛选。     

实时定量PCR检测人全血中金黄色葡萄球菌DNA方法的建立

目的建立实时定量PCR（RQ—PCR）快速检测人全血中金黄色葡萄球菌DNA的方法,以便早期定量评估肠屏障损伤所致肠道内细菌移位引起或加重的全身感染。方法对15份模拟全血标本及26份外科发热患者全血标本进行RQ—PCR检测。选择金黄色葡萄球菌高度保守的看家基因femA基因作为靶基因设计引物和Taqman探针,建立20ul的RQ—PCR反应体系,采用含靶基因扩增片段的重组质粒建立标准曲线,提取血标本中的细菌基因组DNA。结果引物和探针特异性好,检测限为10^0拷贝／ul（10^3CFU／ml）,灵敏度为99．7％,特异度为94．6％。标准曲线线性关系好,R。在0．9918—0．9997。不同浓度的金黄色葡萄球菌样本检测的平均准确性为（96．25±2．26）％,批内及批间重复性的平均变异系数分别为（8．06±0．07）％和（10．01±4．40）％。全血标本中金黄色葡萄球菌DNA平均回收率为（111．72±20．72）％。临床血标本RQ-PCR检测阳性率为15．4％（4／26）,血培养结果皆为金黄色葡萄球菌阴性。结论RQ—PCR可用于定量检测全血标本中的金黄色葡萄球菌DNA含量,具有快速、灵敏、特异性强、重复性好的优点。     

人体血清二■英化合物检测方法的建立

目的建立人体血清二■英(polychlorinated dibenzo-p-dioxins and polychlorinated dibenzofurans, PCDD/Fs)化合物测定方法,为开展二■英人体健康风险评估提供检测技术手段。方法基于国际二■英的测定方法—同位素稀释的高分辨气相色谱/高分辨质谱联用法,血清样品经C18柱固相萃取、酸性硅胶柱和活性炭柱净化的前处理方法,用DB-5MS毛细管柱(60 m×0.25 mm×0.25μm)分离,高分辨质谱检测分析。结果本方法的检出限为0.35～3.26 pg/g脂肪计,采用血清国际标准参考物质(SRM 1958)进行方法验证,与SRM 1958给出的参考质量分数值范围对比,17个PCDD/Fs单体浓度测定值均在参考质量分数值范围内,相对标准偏差为2%～19%(n=3)。该方法进一步应用于实际人体血清分析,同位素标记的17个二■英单体回收率为61%～135%。结论本方法灵敏度和准确度高、方法性能稳定,满足人体血清二■英检测方法的要求。     

磁微粒成像——一种新的医学影像方法

磁颗粒成像是从二十一世纪开端的一种新的医学影像方法,前期研究表明其比传统成像技术具有更高的灵敏度、分辨率和成像速度.介绍了磁颗粒成像的原理,并从三个方面展开介绍了该领域的最新动态.     

血清中lncRNA-PVT1的检测方法建立及在肝癌诊断中的应用

目的:建立在血清中检测长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)PVt1的方法,并探讨该检测在肝癌诊断中的应用价值。方法:收集肝癌患者血清样本50例,正常志愿者血清样本40例,10对肝癌及癌旁组织样本。分别通过TRIzol和TRIzo LS提取组织和血清中的RNA,通过real-time PCR检测组织和血清中lncRNA-PVT1的相对含量。结果:lncRNA-PVT1在肝癌组织中的表达显著高于癌旁组织(P0.01),lncRNA-PVT1在肝癌患者的血清中的表达显著高于正常患者。结论:成功建立了在血清中检测lncRNA-PVT1的方法,血清中lncRNA-PVT1的表达可以作为肝癌诊断的生物标志。     

人血清狂犬抗体两种检测方法比较

注射狂犬疫苗后检测人血清狂犬抗体水平的传统方法是间接免疫荧光法，但该方法需配备荧光显微镜，大多数基层医疗卫生单位不具备条件，致使无法开展此项检测工作。我们在１９９７年对人血清狂犬抗体水平检测的同时采用了间接免疫荧光法和酶标诊断法，以寻找一个简便而准确...     

化学发光方法检测培养细胞释放的一氧化氮

「目的」用化学发光法检测培养细胞释放的ＮＯ。「方法」ＮＯ２＾－是生物样品ＮＯ代谢产物的志物。在酸性条件下,用ＫＩ将ＮＯ２＾－还原成ＮＯ,ＮＯ和ｌｕｍｉｎｏｌ－Ｈ２Ｏ２体系产生化学发光。按照去细胞、去蛋白、加络合剂ＥＤＴＡ、将样品和ＫＩ溶液充氮气、把ＫＩ加到样品中、测化学发光值这几个步骤,我们检测了加脂多糖（ＬＰＳ）、加Ｎ（Ｇ）－甲基－Ｌ－精氨酸（Ｌ－ＮＭＭＡ）、不加任何物质作对照三组培养细胞释放Ｎ     

人及禽类禽流感病毒蛋白芯片检测方法建立

目的建立可同时检测人及禽类禽流感病毒的蛋白芯片方法。方法采用醛基化玻璃载体蛋白芯片和双位点模式,将禽流感病毒H1、H3、H5、H7、H9、N1、N2、NP、NS1等9种亚型抗原以最佳浓度,点样于玻璃载体表面,构建相应抗体的检测芯片,分别用于禽类不同类型禽流感病毒血清及随机选择的人血清检测,并对特异性、敏感性及重复性进行测试,与血凝抑制法进行双向验证比较。结果探针H1、H3、H5、N1、N2、NP、NS1亚型抗原的最佳浓度为1 mg/mL,H7、H9亚型抗原最佳浓度为0.5 mg/mL;检测禽类禽流感病毒及人禽流感病毒使用的酶标抗体浓度分别为1:1 000和1:1 500;方法具有较好的特异性,对H7N7阳性血清的检测限为1:40稀释度;重复性检测的变异系数均<2%;血凝抑制法和蛋白芯片法的检测结果一致。结论所建立的蛋白芯片法可用于人类和禽类禽流感病毒的检测。     

人3型腺病毒快速实验室检测方法的建立

[目的]为不明原因的呼吸道感染疾病的诊断提供一个新的筛选检测方法。[方法]建立一套针对人Ad3型腺病毒的PCR检测方法并应用该方法对人Ad3型腺病毒进行灵敏度、特异性的试验。[结果]通过对提取的Ad3型腺病毒DNA定量测定,该建立的方法可检测到pg级的人Ad3型腺病毒DNA,PCR扩增产物为一条特异的502 bp条带。[结论]建立的快速检测人Ad3型腺病毒的方法大大改善了用细胞培养的不便,不仅缩短了检测时间,而且提高了检测的灵敏度。