携CXCL12抗体靶向超声造影与不同时期卵巢癌移植瘤新生血管密度的相关性研究

目的应用携CXCL12抗体的靶向超声造影剂(MBt),探讨裸鼠卵巢癌移植瘤模型不同时期靶向超声造影参数与移植瘤MVD的相关性。方法移植瘤模型随机分为(10、20、30、40、50、60d)6组,每组裸鼠移植瘤行普通(MBc)及靶向超声造影(MBt)检查,获取超声造影时间-强度曲线(TIC)参数;CD31计数裸鼠瘤体新生血管密度(MVD),分析各组靶向造影参数与移植瘤MVD的相关性。结果成功制备靶向超声造影剂;MBt组峰值强度(PI)均大于MBc组,在10、20、30、40d组间差异有统计学意义,(P0.05);MBt组达峰时间(TTP)均小于MBc组,各组间差异有统计学意义(P0.05);6组MVD差异有统计学意义(P0.05),MBt组PI值与MVD在20、30d组间呈正相关(r=0.673、0.697,P0.05),MBt组TTP值与MVD在20、30d组间呈负相关(r=-0.671、-0.707,P0.05)。结论携CXCL12抗体靶向超声造影参数PI、TTP与裸鼠卵巢癌移植瘤MVD在20、30d组时具有相关性,靶向超声造影一定程度上可实现在体评价肿瘤新生血管情况。     

携Sialyl Lewis^X超声微泡靶向探查缺血心肌的炎症分子“印记”

目的探讨应用靶向超声分子成像探查心肌缺血再灌注损伤炎症“印记”的可行性。方法采用“亲和素-生物素”桥接法构建携唾液酸化路易斯（Sibyl Lewis^X）靶向超声微泡（MBsLex）和同型对照微泡（MBc）。10只心肌缺血再灌注小鼠随机先后注入MBsLex和MBc（间隔30min）,分别于注入5min后行心肌对比超声检查,测量心肌缺血区和非缺血区的声强度（Ⅵ）。结果对比超声图像显示MBsLex组缺血区心肌造影见显著增强,Ⅵ值高达23．52±1．08,而在MBc组缺血区心肌造影仅见轻度增强,Ⅵ缸为9．81±0．41,两者之间差异有统计学意义（P〈0．05）。但无论MBsLex组还是MBc组,缺血区心肌Ⅵ值均明显高于非缺血区心肌Ⅵ值（P〈0．05）。两组非缺血区心肌之间Ⅵ值未见明显差异。结论应用携sLex超声微泡行对比超声能够靶向探查心肌缺血再灌注损伤的炎症“印记”。     

携CD54单抗的靶向超声造影剂增强兔腹主动脉内膜及粥样斑块显影的实验研究

目的　探讨携CD54单抗的超声造影剂在动脉粥样硬化中的诊断价值。方法　整和CD54单克隆抗体及白蛋白微泡制备靶向超声造影剂。新西兰大白兔 26只,高脂饮食建立动脉粥样硬化模型并随机分 3组。第 1、2组分别使用普通、靶向造影剂行腹主动脉超声造影,第 3组同时应用两种造影剂造影。视频密度法评价两种造影剂对动脉内膜、粥样斑块的造影增强效应,免疫组化检测白蛋白微泡在靶组织中分布情况。结果　各组造影后内膜、粥样斑块峰值视频密度与造影前基值相比均有显著增加 (P<0. 01)。第 1、2组间血管内膜、斑块峰值视频密度的差异有显著性意义 (P<0. 01)。第 3组使用普通造影剂的内膜、斑块峰值视频与使用靶向造影剂的对应峰值比较差异有显著性意义 (P<0. 05 )。腹主动脉壁上携CD54单抗的微泡免疫组化染色呈强阳性,普通微泡为弱阳性。结论　携CD54单抗造影剂对粥样硬化动脉内膜及斑块有靶向显影价值,可提高超声诊断敏感性。     

靶向造影剂对卵巢癌血管生成拟态的超声评价

目的探讨携带抗金属基质蛋白酶2(MMP2)单克隆抗体的靶向超声造影剂(MBt)对裸鼠卵巢癌移植瘤血管生成拟态(VM)的应用价值。方法以生物素-链霉素桥连法构建MBt,免疫荧光法体外检测造影剂与抗体的链接情况;建立小鼠卵巢癌SKOV3细胞株模型,分别注射MBt和普通超声造影剂(MBc)进行超声造影检查。分析各组的时间-强度曲线(TIC)相关参数,并行肿瘤组织血管生成拟态MMP2免疫组化的检测。结果成功制备携抗MMP2单抗的MBt;造影结果表明MBt组较MBc组达峰时间提前、持续时间更长(P0.01),两组峰值强度之间的差异无统计学意义(P0.05),MBt组峰值强度有二次高峰现象出现;免疫组化证明肿瘤组织血管生成拟态中MMP2高表达。结论携MMP2靶向造影剂在体内能与特异度表达MMP2受体的血管拟态特异度结合,能较好地评估卵巢癌血管拟态状况。     

RGD靶向微泡介导血管内超声评价斑块新生滋养血管

目的探索RGD靶向微泡介导血管内超声(IVUS)评价斑块新生滋养血管的可行性。方法新西兰大白兔12只,随机分为实验组(6例)采用高脂饮食加球囊损伤构建动脉粥样硬化模型,对照组(6例)予以单纯普食喂养。12周后通过RGD靶向微泡及RAD同型对照微泡行IVUS对比成像,观察微泡注射前后灰度超声回声的变化并与病理检查结果进行对照。结果对照组中,RGD微泡、RAD微泡与基线水平相比超声回声强度未见明显差异(P0.05);实验组中,RGD微泡造影后的超声回声明显增高(P0.01)。实验组中免疫组化结果显示实验组动脉粥样硬化斑块微血管密度(MVD)比对照组明显增加(P0.01)。结论 RGD靶向微泡介导IVUS能通过增强超声回声对反映斑块新生滋养血管密度,有望用于对动脉粥样硬化病变诊断及斑块稳定性的评估。     

携VEGFR2单抗靶向微泡评价小鼠肿瘤新生血管

目的 探讨携带抗血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)单克隆抗体的超声微泡造影剂(MBv)评价小鼠肿瘤新生血管的可行性.方法 以生物素-亲和素桥接法构建MBv.免疫荧光法体外鉴定其性质.建立小鼠H22肿瘤模型,分别注射MBv和普通脂质微泡(MBc)进行超声造影检查.定量分析造影图像视频强度变化,描绘时间-强度曲线,并行肿瘤组织VEGFR2免疫组化检测.结果 成功构建偶联抗小鼠VEGFR2单抗的MBv.造影结果 表明MBv组较MBc组达峰时间提前,峰值较高,持续时间更长.免疫组化证明瘤体内新生血管内壁VEGFR2高度表达.结论 应用MBv结合超声造影可较好地评估肿瘤新生血管状况.MBv是良好的肿瘤靶向造影剂.     

携GL-7靶向微泡造影剂对高脂饮食兔腹主动脉内膜的靶向作用

目的 探讨携GL-7靶向微泡造影剂对高脂饮食兔腹主动脉内膜体外特异性结合及体内增强显影效果.方法 14只新西兰兔用高脂饮食法建立腹主动脉内膜损伤模型,并随机分为两组,4周后分别使用对照微泡和靶向微泡造影剂进行腹主动脉超声造影,以视频密度法评价两种造影剂对动脉内膜的增强效果,荧光显微镜观察两种造影剂体内结合情况及与动脉内膜荧光染色的结合情况及荧光强度统计分析.结果 对照微泡、靶向微泡造影后血管内膜回声均较造影前增强,靶向微泡造影与对照微泡造影比较,血管内膜峰值视频密度差异有统计学意义(P<0.05).荧光显微镜观察,靶向微泡血管腔内呈现绿色荧光,而对照微泡血管腔内仅有微弱的绿色荧光.动脉血管冰冻切片结果显示,靶向微泡造影组动脉内膜有绿色荧光表达,而对照微泡造影组绿色荧光表达较弱,两组荧光强度差异有统计学意义(P<0.05).结论 GL-7靶向微泡造影剂与兔动脉血管内膜体内、体外特异性结合,可显著增强兔腹主动脉内膜靶向显影.     

超声三维造影成像技术用于颈动脉粥样软斑块新生血管检测及临床意义

目的探讨超声三维造影成像技术对颈动脉粥样斑块内新生血管的检测及临床意义。方法对伴有颈动脉粥样软斑块73例患者按照临床有无脑梗死分为脑梗死组（32例）和非脑梗死组（41例）,对其颈动脉粥样软斑块行超声三维造影成像检查,按统一标准测量并记录各斑块体积及斑块内新生血管指数（VI）,作对比分析。结果脑梗死组颈动脉软斑块的血管指数明显高于非脑梗死组（P=0．023）,而两组患者斑块体积、最大厚度及颈动脉管腔的狭窄率差异均无统计学意义。结论超声三维造影成像技术可对颈动脉粥样软斑块内的新生血管行定量检测,为研究斑块内的微血管灌注提供了一种新方法。     

双靶向超声微泡造影剂评价小鼠缺血再灌注心肌

目的 制备同时携载P选择素和ICAM-1抗体的靶向超声微泡造影剂,以评估小鼠缺血再灌注损伤心肌声学造影显像效果.方法 采用生物素-亲和素方法制备靶向微泡,于激光共聚焦显微镜下观察微泡形态,流式细胞仪检测连接效率.将24只健康昆明小鼠随机分成3组:结合双抗体选择素微泡组(MBd组)10只、结合P选择素单抗组(MBp组)10只,空白微泡组(MBc组)4只.结扎冠状动脉左前降支近左主干分支,制作心肌缺血再灌注模型,60 min后经尾静脉分别注射MBd、MBp及MBc,采集心肌对比造影图像.所有图像均采用Sonomath超声影像分析仪处理.结果 MBd组和MBp组对缺氧内皮细胞的黏附力以及对缺血再灌注区心肌显像增强程度显著高于MBc组(P均＜0.05),MBd组对缺血再灌注区心肌显像延迟时间高于MBp组(P＜0.05).结论 双靶向微泡联合超声造影是检测和评估小鼠缺血再灌注心肌的无创性手段.     

超声造影在颈动脉疾病诊断中的应用

目的探讨超声造影在颈动脉疾病诊断中的应用价值。方法超声造影检查72例（92个斑块）颈动脉粥样硬化伴斑块形成患者,了解超声造影时斑块回声有无增强及血管充盈情况,并与数字减影血管造影（DSA）结果对照。结果颈动脉超声造影可清晰显示动脉内-中膜厚度,发现造影前未发现的斑块24个,并能勾勒出动脉斑块大小及形态。与DSA对照,应用超声造影诊断动脉粥样硬化所致颈部动脉闭塞的敏感性为55．6％、特异性为94．7％、准确性为82．0％。92个颈动脉斑块超声造影后69个增强,低回声、等回声、混合回声、强回声斑块新生血管检出率分别为89％、75％、70％和25％;斑块内造影剂到达时间迟于颈动脉（P〈0．05）,达峰值时间较颈动脉延长（P〈0．05）。结论超声造影提高了颈动脉斑块的显示率,有助于判断动脉狭窄程度,并可显示斑块内新生血管,弥补了彩色多普勒超声的不足,为颈动脉疾病的诊断提供了一种安全、有效、无创的检查方法。     

下肢缺血＂晚时间窗＂的血管细胞黏附分子-1超声分子成像

目的 探讨应用携带血管细胞黏附分子-1（VCAM-1）分子探针的超声分子成像,评价下肢缺血＂晚时间窗＂炎症反应的可行性.方法 12只实验小鼠结扎一侧下肢股动脉制备缺血模型,另一侧股动脉为对照.术后第3天随机先后（间隔30 min）经尾静脉注入携抗小鼠VCAM-1单抗的靶向微泡（MBV）和携同型抗体的对照微泡（MBC）,并于8 min后行对比超声检查,测量双侧下肢的显影强度（VI）;最后进行双下肢病理学检查.结果 对比超声图像显示：缺血下肢MBV组可见明显的超声显影,VI值高达（18.4±2.9）U;而在缺血下肢MBC组仅见轻度的超声显影,VI值为（6.9±1.2）U,两微泡组间比较差异有统计学意义（P〈0.05）.两组微泡在非缺血下肢的VI值未见明显差异（P〉0.05）.但无论MBV还是MBC微泡,其在缺血下肢的VI值均明显高于非缺血下肢相应的VI值.免疫组化显示：缺血下肢血管有大量的VCAM-1表达,而非缺血下肢未见VCAM-1表达.结论 应用VCAM-1分子探针的超声分子成像可有效评价下肢缺血＂晚时间窗＂的炎症反应.     

携抗αvβ3-整合素单抗靶向微泡对肿瘤新生血管靶向效应的研究

目的 探讨携抗αvβ3-整合素单抗靶向微泡对肿瘤新生血管的靶向效应.方法 通过生物素桥接法制成携抗αvβ3-整合素单抗的靶向脂质微泡(MBa)、对照微泡携同型抗体脂质微泡(MBc);选取12只HepG2皮下移植瘤裸鼠模型(肿瘤组)和正常对照裸鼠(对照组),经尾静脉随机注射MBa、MBc和RGDfvV封闭10 min后再注射MBa(Blocking+MBa),并行对比超声检查,测量声强度(VI).分别取肿瘤组肿瘤组织和对照组正常骨骼肌组织行病理学和免疫组化检查.结果 肿瘤组中MBa的VI值(17.43±3.30)U,较MBc的VI值(5.88±1.04)U增大近3倍,差异有统计学意义(P <0.01),应用RGDfvV封闭αvβ3-整合素后MBa的VI值降至(6.14±2.25)U,与MBc及对照组的各VI值比较差异均无统计学意义.免疫组化检查显示:肿瘤组织的新生血管内皮有大量αvβ3-整合素显色,可被RGDfvV封闭;而骨骼肌中仅有少量αvβ3-整合素显色.结论 携抗αvβ3-整合素单抗的靶向微泡对肿瘤新生血管具有明显的靶向效应,有望用于肿瘤的诊断和疗效评估.     

αv-整合素超声分子成像可视化评价基质胶血管新生

目的 探讨应用携带αv-整合素分子探针的分子成像可视化评价基质胶血管新生的可行性.方法 10只实验小鼠分别于腹部皮下注射添碱性成纤维细胞生长因子(FGF)-2的基质胶制备血管新生模型.于注射后第10 d所有小鼠经尾静脉随机先后(间隔30min)弹丸注射携抗小鼠αv-整合素单抗靶向微泡(MBα)、携同型抗体对照微泡(MBc),并分别于注入后6 min行基质胶超声造影检查,测量基质胶的显影强度(video intensity,VI).随后,所有小鼠均预先αMBcv-整合素单抗封闭10 min后再注入MBα和MBc行超声造影检查.最后进行基质胶组织学检查.结果 超声造影图像显示MBα组呈明显的超声显影,VI值高达(20.5±3.3)U,而MBc组仅见轻度的超声显影,其VI为(4.8±1.5)U,两者之间差异有统计学意义(P＜0.05).预先单抗封闭αv-整合素后,MBα的VI值仅为封闭前的22.4%,两者之间差异有统计学意义(P＜0.05);而MBα的VI值较封闭前无明显变化,两者之间差异无统计学意义(P＞0.05).病理学检查显示基质胶中有丰富的新生血管形成,新生血管中有大量αv-整合素表达.结论 应用携带αv-整合素分子探针的超声分子成像可有效特异地评价基质胶血管新生.     

超声造影成像技术评价颈动脉斑块内新生血管与斑块声学特性的关系

目的本研究应用超声造影成像技术评价颈动脉斑块内新生血管与斑块声学特性的关系。方法104例伴颈动脉粥样斑块患者行颈动脉常规及超声造影检查,通过肉眼观测及定量分析斑块造影增强情况。结果软斑造影增强比例明显高于其他类型斑块（P〈0.001）;软斑的增强强度明显高于其他类型斑块（P〈0.001）;软斑的斑块增强强度与颈动脉管腔内造影增强强度比值也高于其他类型斑块（P〈0.001）。结论研究表明软斑造影增强显著高于其他类型斑块。超声造影技术为评价斑块内新生血管特点及其与斑块声学特性的关系提供了新方法。     

不同类型冠心病患者股动脉斑块超声特征

目的 探讨股动脉斑块声像特征诊断非ST段抬高型急性冠状动脉综合征（NSTE-ACS）的价值。方法 选取冠心病伴颈动脉及股动脉斑块患者72例,分为NSTE-ACS组（n=42）和慢性心肌缺血综合征（CIS）组（n=30）,行CEUS、三维超声及灰阶强度定量分析,检测斑块造影增强强度（EI）、斑块体积、形态特征及回声灰阶强度（EL）等参数并进行对比分析。结果 NSTE-ACS组斑块EI、形态不规则斑块比例高于CIS组,EL低于CIS组（P均<0.05）。颈动脉和股动脉斑块EI、EL和形态分类均与NSTE-ACS具有相关性（P均< 0.05）。股动脉斑块EI、EL为NSTE-ACS的危险因素（OR=1.222、1.177,P<0.05）。颈动脉斑块EI、EL诊断NSTE-ACS的曲线下面积（AUC）分别为0.801、0.757（P均< 0.001）,股动脉斑块EI、EL的AUC分别为0.814、0.774（P均< 0.001）。结论 股动脉斑块内新生血管、形态特征和内部回声均与NSTE-ACS存在相关性,且较颈动脉更强;多种超声技术联合评价股动脉斑块声像图特征有望成为预测冠状动脉斑块稳定性、筛查冠心病高危患者的参考指标。     

低频超声联合微泡造影剂诱导人胆囊癌GBC-SD细胞凋亡的实验研究

目的探讨低频超声联合微泡造影剂对人胆囊癌GBC-SD细胞凋亡的影响。 方法将培养的人胆囊癌GBC-SD细胞分为4组,每组设5个复孔。其中空白对照组不进行任何处理;微泡组加200 μl的微泡造影剂混匀,使微泡浓度为20%,不进行超声辐照;低频超声组以超声辐照声强为0.45 W/cm²、超声脉冲波频率为1 MHz的低频超声连续波辐照,连续辐照30 s,不加造影剂;联合组加入200 μl的微泡造影剂,混匀后以1 MHz低频超声,连续波辐照30 s。各组以CCK-8法检测细胞增殖活性,并用流式细胞仪测定各组细胞的凋亡情况。 结果空白对照组、微泡组、低频超声组、联合组GBC-SD细胞增殖活性分别为0.9272±0.1173、1.0088±0.0628、0.2116±0.0101、0.1470±0.0029。联合组细胞增殖活性低于空白对照组、微泡组、低频超声组,差异均有统计学意义（t=14.846、30.637、13.661,P均<0.05）。各处理组间细胞凋亡率差异有统计学差异（F=2390.900,P<0.05）,联合组细胞凋亡率为0.682±0.022,显著高于空白对照组的0.073±0.005、微泡组的0.031±0.003、低频超声组的0.259±0.012,差异均有统计学意义（P均<0.05）。 结论低频超声联合微泡造影剂能降低体外培养的人胆囊癌GBC-SD细胞增殖活性,明显诱导人胆囊癌GBC-SD细胞凋亡。     

诊断超声产生的血流增强效应及肿瘤释药研究

目的采用诊断超声激励微泡的方法增强肿瘤组织的血流灌注,增加肿瘤组织局部阿霉素的释放。 方法选取健康雄性SD大鼠10只,双侧大腿内侧皮下种植Walker-256肿瘤20个,随机配对分为对照组（10例）与超声治疗组（10例）。治疗前后分别进行超声造影,对超声造影图像进行定量分析。治疗后获取部分肿瘤组织后行高效液相色谱法检测肿瘤组织的药物浓度,另外采用冰冻切片观察肿瘤组织内阿霉素的荧光强度。治疗组与对照组定量分析峰值强度（PI）、曲线下面积（AUC）及阿霉素药物质量浓度比较,采用配对t检验。 结果（1）超声治疗后视觉造影效果中,6个明显增强,4个无明显变化,定量分析PI及AUC明显高于治疗前（PI：75.74±17.67 vs 66.22±16.25,AUC：3354.91±796.15 vs 2937.52±677.51）,差异均有统计学意义（t=-5.212、-5.259,P均<0.001）;（2）治疗组阿霉素药物质量浓度是对照组的1.2倍[（1.15±0.25）μg/g vs（0.96±0.21）μg/g],差异有统计学意义（t=2.403,P<0.05）;（3）各组肿瘤组织光镜下表现：肿瘤细胞排列成条索状,核大深染,治疗组可见血管充血,有少量炎症细胞浸润;（4）激光共聚焦显微镜下可见治疗组肿瘤组织间质中外漏的阿霉素荧光明显多于对照组。 结论诊断超声激励微泡治疗可增强大鼠Walker-256肿瘤的血流灌注,有助于化疗药物局部释放。