双酚A对大鼠睾丸支持细胞P38丝裂原活化蛋白激酶及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3表达的影响

目的 研究双酚A (bisphenol A,BPA)对离体培养青春前期大鼠睾丸支持细胞P38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)及相关凋亡基因表达的影响.方法 将睾丸支持细胞分别暴露于0(溶剂对照)、30、50、70 μmol/L的BPA.采用MTT法检测离体培养细胞活力,采用RT-PCR的方法检测p38 MAPK、caspase-3、FasL、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α) mRNA的相对表达情况,采用western-blotting的方法检测细胞中P38 MAPK、磷酸化P38 MAPK和caspase-3酶原蛋白的表达情况.结果 与溶剂对照组相比,30 μmol/L BPA组支持细胞p38 MAPK mRNA的相对表达量升高,而50 μmol/L BPA组p38 MAPK的表达明显降低(P＜0.05);各浓度BPA染毒组caspase-3mRNA的相对表达量均较高(P＜0.05);仅50 μmol/L BPA组TNF-α mRNA的相对表达量增加(P＜0.05);50、70 μmol/LBPA组FasL mRNA的相对表达量增加(P＜0.05);各剂量BPA染毒组总P38MAPK蛋白的相对表达量无显著变化;50和70 μmol/LBPA组磷酸化P38 MAPK蛋白的相对表达量均明显升高(P＜0.05);仅70 μmol/L BPA组caspase-3酶原蛋白的相对表达量下降(P＜0.05).结论 BPA可激活离体培养青春前期大鼠睾丸支持细胞p38 MAPK,并诱发caspase-3活化,导致细胞凋亡,这可能是通过FasL凋亡途径介导的.     

Piwil4基因敲除对HBV感染诱发肝癌细胞模型的抑制作用及相关机制

目的分析Piwil4基因敲除抑制乙型肝炎病毒(HBV)感染诱发肝癌细胞模型的相关机制。方法选取HBV全长的稳定肝癌细胞系HepG2.2.15作为HBV感染所诱发的肝癌细胞模型,做Piwil4基因敲除和过表达靶点选择、测序引物设计、质粒构建,转染至HepG2.2.15细胞,分为空白组(HepG2.2.15细胞未做任何处理)、敲除组(Piwil4基因敲除)、过表达组(Piwil4基因过表达)。测定细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭及JNK/p38MAPK信号通路蛋白表达量。结果与空白组比较,过表达组Piwil4基因mRNA表达量升高,敲除组Piwil4基因mRNA表达量降低(P0.05);与空白组比较,过表达组细胞增殖率升高,细胞凋亡率降低,敲除组细胞增殖率降低,细胞凋亡率升高,比较差异具有统计学意义(P0.05);与空白组比较,过表达组细胞迁移、侵袭数升高,敲除组细胞迁移、侵袭数降低,比较差异具有统计学意义(P0.05);与空白组比较,敲除组Caspase-3、Bax蛋白表达量升高,Survivin、Bcl-2、MMP-2、MMP-9蛋白表达量降低,JNK、p-JNK蛋白表达量升高,ERK、p-ERK、p38、p-p38蛋白表达量降低(P0.05)。结论 Piwil4基因敲除可抑制HBV感染所诱发的肝癌细胞增殖、迁移、侵袭,促进凋亡,发挥体外抗肿瘤作用,其机制可能与调控JNK/p38MAPK信号通路相关。     

p38丝裂原活化蛋白激酶在晚期妊娠合并急性胰腺炎相关胎鼠肾脏损伤中的作用

目的探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)在晚期妊娠合并急性胰腺炎(acute pancreatitis in pregnancy,APIP)相关胎鼠肾脏损伤中的作用及意义。方法 18只妊娠晚期SD妊娠大鼠随机分为3组,假手术(Sham-operation,SO)组、急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)组和p38MAPK抑制剂SB203580处理(SB)组。采用5%牛磺胆酸钠(sodium taurocholate,STC)逆行胰胆管注射法建立妊娠大鼠的APILP模型,SB组妊娠大鼠在建立APIP模型前0.5h给予SB203580腹腔注射(10mg/Kg·BW)。SO组妊娠大鼠仅在开腹后翻动暴露胰腺。SO组和AP组大鼠在开腹前0.5h给予对应体积的SB203580溶剂,各组大鼠均在术后12h剖杀取材。测定妊娠大鼠血清淀粉酶(AMY)和TNF-α的含量,光镜下观察胎鼠肾脏的病理学改变并进行评分。免疫组织化学法检测胎鼠肾脏中NF-κB、TNF-α和IL-1β的表达情况,Western Blot法检测胎鼠肾脏中pp38MAPK和p38MAPK的表达水平。结果与SO组比较,APILP组大鼠血清中AMY和TNF-α的含量显著升高,差异有统计学意义(P0.05),胎鼠肾脏的病理评分显著升高,差异有统计学意义(P0.05),胎鼠肾脏中NF-κB的表达量和核转位更为显著,差异有统计学意义(P0.05),p-p38MAPK的表达水平显著升高,差异有统计学意义(P0.05)。与APILP组比较,SB组大鼠血清中AMY和TNF-α的含量显著下降,差异有统计学意义(P0.05),胎鼠肾脏的病理评分显著降低,差异有统计学意义(P0.05),胎鼠肾脏中NF-κB表达量和核转位水平显著下降,差异有统计学意义(P0.05),胎鼠肾脏中pp38MAPK的表达水平显著下降,差异有统计学意义(P0.05)。结论 p38MAPK/NF-κB信号通路参与了APILP相关胎鼠肾脏损伤的过程;p38MAPK抑制剂SB203580对APILP相关胎鼠肾脏损伤具有保护作用,其机制可能与其下调p38MAPK的磷酸化,抑制NF-κB炎症信号通路激活有关。     

C5aR/C5L2在小胶质细胞炎症中的作用及机制

目的观察棕榈酸(PA)及C5aR拮抗剂(PMX53)干预后小胶质细胞的炎症改变,探讨C5a受体(C5aR)及C5L2在PA诱导的小胶质细胞炎症中的作用。方法取新生1日龄小鼠,分离脑组织,原代培养小胶质细胞并进行分离纯化及鉴定。纯化小胶质细胞随机分成3组:正常对照组、PA处理组、PA+PMX53处理组。分别应用Western blot检测PA及PA+PMX53干预后小胶质细胞C5aR、C5L2、p38MAPK蛋白表达;RT-PCR检测C5L2 mRNA表达及ELISA法检测IL-6表达变化。结果通过免疫组化鉴定,成功培养小胶质细胞。PA干预后,C5aR蛋白表达较对照组明显上升(P0.001),而加入PMX53后,C5aR蛋白表达较PA组显著下降(P0.001);PA干预后,C5L2蛋白及mRNA表达较对照组增加(P0.001),而加入PMX53后,C5L2蛋白表达与PA组差异无统计学意义(P=0.978),而C5L2 mRNA表达较PA组明显上升(P0.001);PA组较对照组p38MAPK蛋白的表达增加(P=0.002),PA+PMX53组p38MAPK蛋白表达较PA组降低(P=0.004);PA干预后,IL-6浓度较对照组显著升高(P0.001),而PMX53干预后,PA+PMX53组较PA组IL-6浓度显著下降(P0.001)。结论 PA可能通过C5a-C5aR激活MAPK信号途径中的p38MAPK通路,从而诱发小胶质细胞炎症反应,而C5L2在此过程中可能发挥抗炎作用。     

p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路在多菌灵致小鼠睾丸支持细胞增殖抑制和凋亡中的作用

目的通过建立多菌灵致小鼠睾丸支持细胞(TM4)损伤模型,探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路在多菌灵致小鼠TM4细胞增殖抑制和凋亡中的作用。方法将TM4细胞分别暴露于0(对照)、1、2、5、10、20μmol/L多菌灵溶液和10μmol/L SB203580抑制剂溶液及10μmol/L SB203580+5μmol/L多菌灵溶液染毒48 h,采用CCK-8法检测细胞存活率。将TM4细胞分别暴露于0(对照)、5μmol/L多菌灵溶液和10μmol/L SB203580抑制剂溶液及10μmol/L SB203580+5μmol/L多菌灵溶液染毒48 h,采用碘化丙啶(PI)染色法检测细胞周期,采用Annexin V/PI双标法检测TM4细胞凋亡,采用Western blot法检测细胞P38 MAPK和p-P38 MAPK蛋白的表达水平。结果与对照组比较,5、10、20μmol/L多菌灵组TM4细胞的存活率均下降,差异有统计学意义(P0.01);且随着多菌灵暴露浓度的升高,TM4细胞的存活率呈下降趋势。与5μmol/L多菌灵组比较,10μmol/L SB203580+5μmol/L多菌灵组TM4细胞的存活率升高,差异有统计学意义(P0.01);而10μmol/L SB203580抑制剂组TM4细胞的存活率无明显改变。与对照组相比,5μmol/L多菌灵组TM4细胞的凋亡率增加,差异有统计学意义(P0.01);而10μmol/L SB203580抑制剂组的凋亡率无明显改变。与5μmol/L多菌灵组比较,10μmol/L SB203580+5μmol/L多菌灵组TM4细胞的凋亡率下降,差异有统计学意义(P0.01)。与对照组比较,5μmol/L多菌灵组TM4细胞G_1/G_0期细胞所占比例降低,而G2/M期和S期细胞所占比例升高,差异均有统计学意义(P0.01);而10μmol/L SB203580抑制剂组各期细胞所占比例均无明显改变。与5μmol/L多菌灵组比较,10μmol/L SB203580+5μmol/L多菌灵组TM4细胞仅G_2/M期细胞所占比例下降,差异有统计学意义(P0.01)。与对照组比较,5μmol/L多菌灵组TM4细胞的p-P38 MAPK蛋白表达水平升高,差异有统计学意义(P0.01);而10μmol/L SB203580抑制剂组的p-P38 MAPK蛋白表达水平无明显改变。与5μmol/L多菌灵组比较,10μmol/L SB203580+5μmol/L多菌灵组TM4细胞的p-P38 MAPK蛋白表达水平下降,差异有统计学意义(P0.01)。各组TM4细胞的P38 MAPK蛋白表达水平间比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论多菌灵通过激活p38 MAPK信号通路抑制TM4细胞增殖,并诱导细胞凋亡及周期阻滞,从而造成细胞损伤。     

p,p’-DDE和β-六氯化苯对青春期大鼠睾丸组织波形蛋白和N-钙粘蛋白及卵泡刺激素受体mRNA和蛋白表达的影响

目的研究p,p’-DDE、β-六氯化苯(β-benzene hexachloride,β-BHC)联合染毒对青春期大鼠睾丸组织波形蛋白(Vimentin)、N-钙粘蛋白(N-cadherin)和卵泡刺激素受体(follicle stimulating hormone receptor,FSHR)mRNA和蛋白表达的影响。方法将20只50日龄清洁级雄性SD大鼠按体重随机分为4组,分别为对照(玉米油)组和p,p’-DDE(100 mg/kg)单独染毒组、β-BHC(100 mg/kg)单独染毒组、p,p’-DDE(100 mg/kg)+β-BHC(100 mg/kg)联合染毒组,每组5只。采用腹腔注射方式进行染毒,注射容积为10 ml/kg,隔天1次,连续进行10 d。采用Real-time PCR检测大鼠睾丸组织Vimentin、N-cadherin、FSHR mRNA的表达;采用Western Blot法检测Vimentin、N-cadherin、FSHR蛋白的表达。结果与对照组相比,β-BHC单独染毒组和p,p’-DDE+β-BHC联合染毒组大鼠睾丸组织Vimentin、FSHR mRNA的表达水平均下降,差异有统计学意义(P<0.05)。与p,p’-DDE+β-BHC联合染毒组相比,p,p’-DDE和β-BHC单独染毒组大鼠睾丸组织Vimentin mRNA的表达水平均较高,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,p,p’-DDE和β-BHC单独和联合染毒组大鼠睾丸组织Vimentin、N-cadherin、FSHR蛋白的表达水平均下降,差异有统计学意义(P<0.05)。而p,p’-DDE和β-BHC单独和联合染毒组大鼠睾丸组织Vimentin、N-cadherin、FSHR mRNA和蛋白的表达水平间比较,差异均无统计学意义。结论 p,p’-DDE、β-BHC暴露可降低青春期大鼠睾丸组织中Vimentin、N-cadherin、FSHR的表达水平。     

p38MAPK信号转导通路参与血管性痴呆大鼠海马细胞凋亡机制及Egb761保护作用的研究

目的观察应用银杏叶提取物(extract of ginkgo biloba,Egb761)后血管性痴呆(vascular dementia,VD)大鼠空间认知功能的变化、海马细胞凋亡及海马中p38MAPK磷酸化表达的变化,探讨银杏叶提取物对大鼠海马的保护作用机制。方法应用用两血管法制作VD大鼠模型,将60只雄性Wistar大鼠随机分成假手术组(SOG组)、VD组和Egb组。Egb组大鼠给予Egb761100 mg·kg-1·d-1腹腔注射,VD组和SOG组给予等量的2ml生理盐水,一月后测试各组大鼠的空间认知能力,TUNEL法检测海马CA1区细胞凋亡,蛋白印迹法观察大鼠海马区p38MAPK磷酸化变化。计数资料采用t检验,P0.05为差异有统计学意义。结果 1,2,3 dEgb组大鼠隐蔽平台逃避潜伏期[分别为(47.72±6.91)s、(42.84±4.19)s、(36.49±3.16)s]明显小于VD组隐蔽平台逃避潜伏期[(86.25±7.57)s、(79.17±8.43)s、(77.84±6.28)s],差异有统计学意义(P0.05);Egb761组大鼠原平台象限时间[(27.19±4.73)s]大于VD组[(19.26±4.16)s],差异有统计学意义(P0.05)。大鼠海马CA1区细胞凋亡、磷酸化p38MAPK的表达的比较:Egb组明显低于VD模型组,差异有统计学意义(P0.05)。结论 Egb761可能是通过减少磷酸化P38MAPK的表达而抑制p38MAPK信号转导通路,显著改善VD大鼠的学习记忆能力,同时抑制海马区细胞凋亡,这可能是其参与血管性痴呆治疗的作用机制之一。     

雷公藤甲素对PM_(2.5)损伤足细胞的保护作用

目的探讨PM_(2.5)对小鼠永生化足细胞(HSMPs)的损伤作用及雷公藤甲素(TPL)的保护作用及机制。方法将PM_(2.5)(0、20、200、400 mg/L)作用于HSMPs 24 h,以流式细胞术检测细胞凋亡率,比色法检测乳酸脱氢酶(LDH)活力,以western blot法检测足细胞裂孔膜蛋白(Nephrin)、B淋巴细胞癌2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)及p-p38 MAPK蛋白表达;分别加入TPL(0.5、2、4 mg/L)和p38 MAPK通路阻滞剂(25μmol/L SB203580)后,检测TPL的干预作用及机制。结果与对照组比较,200、400 mg/L PM_(2.5)可明显诱导HSMPs凋亡,HSMPs上清液LDH活力升高,HSMPs内Nephrin及Bcl-2蛋白表达降低,Bax及p-p38 MAPK蛋白表达升高,差异均有统计学意义(P0.01)。与200 mg/L PM_(2.5)组比较,2、4 mg/L TPL可明显减少由PM_(2.5)诱导的HSMPs凋亡,降低HSMPs上清液LDH活力,降低HSMPs中Bax及p-p38 MAPK蛋白表达,增加Bcl-2蛋白表达,差异有统计学意义(P0.05或P0.01);与4 mg/L TPL组比较,加入SB203580干预可进一步减少由PM_(2.5)诱导的HSMPs凋亡,降低HSMPs上清液LDH活力,降低HSMPs中Bax及p-p38 MAPK蛋白表达,并增加HSMPs中Nephrin及Bcl-2蛋白表达,差异有统计学意义(P0.01)。结论 TPL可减轻PM_(2.5)诱导的HSMPs损伤,其机制可能与抑制p38 MAPK通路有关。     

胆道闭锁患儿巨细胞病毒感染对外周血TLR4/p38 MAPK信号通路和肝脏损伤的影响

目的 研究巨细胞病毒(CMV)感染对胆道闭锁(BA)患儿外周血Toll样受体4(TLR4)/p38促分裂原活化的蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路和肝脏损伤的影响。方法 选取2018年1月-2020年12月浙江大学医学院附属儿童医院儿内科98例BA患儿为研究对象，根据有无合并CMV感染分为感染组和非感染组，采用聚合酶链反应(PCR)荧光定量分析检测外周血TLR4和p38 MAPK mRNA,采用蛋白免疫印迹法检测TLR4和p38 MAPK蛋白表达水平，同时检测外周血炎症因子和肝功能指标。结果 98例BA患儿中合并CMV感染37例占比37.76%。感染组外周血TLR4、p38 MAPK mRNA和蛋白表达水平高于非感染组，感染组血清白细胞介素(IL)-1β和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平高于非感染组，IL-10水平低于非感染组，差异均有统计学意义(P<0.05);感染组血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)和总胆红素(TBIL)水平高于非感染组(P<0.05),胆碱酯酶(ChE)和白蛋白(ALB)水平低于非感染组(P<0.05),两组血清γ-谷氨酰基转移酶(γ-GT)和总胆汁酸(TBA)水平比较，无统计学差异。结论 CMV感染可促进BA患儿TLR4/p38 MAPK信号通路激活，加重肝细胞炎症反应和损伤。     

高温致神经管畸形金黄地鼠HSP70及p38MAPK的通路变化

目的探讨热休克蛋白70(HSP70)及p38MAPK信号通路蛋白在高温致神经管畸形中的机制。方法将清洁级雌性金黄地鼠孕鼠于妊娠第8天进行水浴,分别于高温后的8、16、24、48、72、96h取出36只正常对照组孕鼠(水浴温度为37℃,持续20min)和36只高温致神经管畸形的实验组孕鼠(水浴温度为42℃,持续20min),取胚胎脑组织。应用Western blot检测HSP70和p38MAPK及P-p38MAPK蛋白的表达水平,RT-PCR法检测HSP70和p38MAPK的mRNA表达。结果高温处理后HSP70mRNA及蛋白表达水平在24～96h均不同程度地高于对照组(P0.05);高温后8～48hp38MAPK磷酸化蛋白产物增加,于16h表达增加最为显著(P0.01),而8～96h,对照组和实验组间p38MAPKmRNA及蛋白含量差异无统计学意义。结论 HSP70及p38MAPK信号通路蛋白的变化与高温致金黄地鼠神经管畸形密切相关。     

PDCD4对SKO-V3细胞生长凋亡及p-p38MAPK、p-STAT3水平的影响

目的探讨程序性细胞死亡4 (PDCD4)对SKO-V3细胞生长、凋亡及p-STAT3、p-p38MAPK表达的影响。方法卵巢癌细胞SKO-V3转染PDCD4过表达载体(p DsRes2-N1-PDCD4)和对照载体(p DsRes2-N1),记为过表达组和阴性组,同时以不转染的细胞为对照组,Realtime PCR和Western blot检测PDCD4水平,噻唑蓝(MTT)和细胞克隆实验检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测磷酸化的p38MAPK (p-p38MAPK)、磷酸化的STAT3 (p-STAT3)水平。结果阴性组细胞中PDCD4 mRNA和蛋白水平、光密度值(OD值)、细胞克隆形成数目、凋亡率和p-p38MAPK、p-STAT3水平与对照组相比差异无统计学意义(P0. 05)。过表达组细胞中PDCD4 mRNA和蛋白水平明显高于对照组,并且细胞OD值和克隆形成数目明显低于对照组,而细胞凋亡率明显高于对照组(P0. 01)。过表达组p-STAT3/STAT3水平与对照组相比明显降低,p-p38MAPK/p38MAPK水平与对照组相比明显升高(P0. 01)。结论 PDCD4抑制卵巢癌细胞生长,促进卵巢癌细胞凋亡,这可能与抑制STAT3信号通路激活和促进p38MAPK信号通路激活有关。     

葡萄籽原花青素对急性镉染毒大鼠肾细胞DNA损伤的影响

目的探讨葡萄籽原花青素(grape seed proanthocyanidins,GSP)对氯化镉染毒大鼠肾细胞DNA损伤的拮抗作用。方法将32只健康雄性SPF级SD大鼠按体重随机分为4组,分别为对照组(腹腔注射、灌胃生理盐水)、镉染毒组(腹腔注射1.5 mg/kg氯化镉溶液和灌胃生理盐水)和低、高剂量GSP干预组(腹腔注射1.5 mg/kg氯化镉,同时,分别灌胃20、40 mg/kg GSP溶液),每组8只。腹腔注射和灌胃染毒容量分别为3、5 ml/kg,连续染毒14 d。采用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)检测肾细胞的DNA损伤,采用实时荧光RT-PCR技术检测c-jun N末端激酶(JNK)、p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)mRNA的表达。结果与对照组比较,镉染毒组大鼠肾脏细胞DNA的尾长、Olive尾矩、尾矩均显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。低、高剂量GSP干预组大鼠肾脏细胞的DNA损伤均高于对照组,但差异无统计学意义。各剂量GSP干预组大鼠肾脏细胞DNA的尾长、Olive尾矩、尾矩均显著低于镉染毒组差异有统计学意义(P之0.05)。且随着GSP染毒剂量的升高,镉染毒大鼠肾脏细胞的尾长、Olive尾矩、尾矩均呈下降趋势。与镉染毒组比较,各剂量GSP干预组大鼠肾脏细胞中JNK mRNA的表达水平均显著下降,差异有统计学意义(P<0.05);而p38 MAPK mRNA的表达水平无显著变化。结论 GSP可能通过降低MAPK信号通路中JNK的表达拮抗氯化镉诱发的大鼠肾细胞DNA损伤效应。     

氟对体外大鼠睾丸支持细胞雄激素结合蛋白和抑制素B mRNA表达的影响

目的研究氟对体外培养大鼠睾丸支持细胞雄激素结合蛋白(ABP)和抑制素B(INHB)转录水平的影响。方法建立支持细胞体外培养模型,以浓度分别为2.5、5.0、10.0和20.0mg/L氟化钠溶液染毒细胞,用RT-PCR方法检测ABP和INHB mRNA的相对表达量。结果①ABP mRNA相对表达量在各剂量组与对照组相比,2.5mg/L组高于对照组,且差异有统计学意义(P0.05);5.0mg/L高于对照组,但差异没有统计学意义;其余各组低于对照组,但差异没有统计学意义(P0.05)。②INHB mRNA相对表达量在各剂量组与对照组比较,2.5和5mg/L组均高于对照组,差异具有统计学意义(P0.05);其余两组低于对照组,但是差异均无统计学意义(P0.05)。结论在2.5～20.0mg/L剂量范围内,未观察到氟对体外培养大鼠睾丸支持细胞ABP和INHB mRNA的表达有明显影响。     

姜黄素调控COX-2表达对内毒素诱导的肠黏膜信号通路转录影响的研究

目的探讨LPS诱导肠黏膜损伤时COX-2表达与相关信号通路的关系及姜黄素的干预作用。方法选取清洁级SD大鼠64只,随机分为8组。于LPS注射前后、姜黄素灌胃后检测各组大鼠的血象、内毒素变化。切取肠段及肠黏膜组织行病理学观察、免疫组化染色、检测p38MAPK、COX-2、ATF2、PPARγ的表达。结果与LPS组相比,p38MAPK抑制剂组、PPARγ拮抗剂组、姜黄素组体温显著增高,差异有统计学意义(P0.01);白细胞、血小板数明显升高,内毒素水平降低,差异有统计学意义(P0.05)。姜黄素能有效抑制内毒素诱导p38激酶磷酸化。姜黄素降低内毒素诱导的ATF2和ATF2磷酸化表达。结论姜黄素通过调控COX-2表达抗LPS诱导肠黏膜损伤,且与p38MAPK、PPARγ通路有关。     

p38MAPK在致痫鼠海马中的表达及肉桂醛干预的研究

目的:观察肉桂醛对戊四氮诱导癫痫大鼠海马组织p38MAPK蛋白的表达情况,研究肉桂醛降低癫痫发作的作用机制。方法:健康雄性SD大鼠40只,随机分成4组(n=10),对照组、癫痫组、肉桂醛中剂量组(50mg/ml)、肉桂醛高剂量组(75 mg/ml),通过苏木素-伊红(HE)染色法观察海马神经元细胞的形态学变化,免疫印记方法(Western blotting)检测海马组织p38MAPK蛋白表达。结果:与对照组比较,癫痫组p38MAPK表达显著增高;与癫痫组比较,肉桂醛组p38MAPK表达降低(P0.05),其中肉桂醛高剂量组下降最为明显。结论:肉桂醛可降低戊四氮致痫大鼠癫痫发作,可能与p38MAPK蛋白表达降低相关。     

TPX2基因调控p38MAPK信号通路抑制乳腺癌细胞增殖及促进凋亡的机制研究

目的探讨Xklp2靶蛋白(TPX2)基因调控p38MAPK信号通路抑制乳腺癌细胞增殖及促进凋亡的影响及机制。方法 Western blot检测乳腺癌组织及癌旁组织中TPX2基因的表达;siRNA-NC、TPX2-siRNA1和TPX2-siRNA2转染人乳腺癌MCF-7细胞,未转染任何siRNA作为对照组,Western blot检测转染后各组细胞中TPX2蛋白表达;siRNA-NC、TPX2-siRNA转染细胞48 h后,CCK8实验检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot检测Cleaved caspase3、p38、p-p38蛋白表达。结果 TPX2在乳腺癌组织的蛋白表达显著高于癌旁组织(P<0.01);TPX2-siRNA1组和TPX2-siRNA2组细胞中TPX2蛋白表达显著低于对照组(P<0.01),TPX2-siRNA2组的抑制效果更明显,选择作为后续研究;siRNA-NC组的细胞存活率、细胞凋亡率及Cleaved caspase3、p-p38蛋白表达与对照组差异无统计学意义(P>0.05),TPX2-siRNA组细胞存活率及p-p38蛋白表达显著低于对照组,细胞凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达显著高于对照组(P<0.01),p38蛋白表达在三个组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 TPX2基因在乳腺癌组织中高表达,抑制TPX2的表达可降低细胞增殖及促进细胞凋亡,其机制与p38MAPK信号通路有关。     

Effect of Nitricoxide Synthase Inhibitor on Neurons Apoptosis Induced by NMDA

目的 探讨一氧化氮合酶抑制剂(nitric oxide synthase inhibitor,NOS inhibitor)在N-甲基-D-天(门)冬氨酸( N-Methyl-D-Asparate,NMDA)诱导的兴奋性神经毒中的作用及其可能的作用机制.方法 原代培养24h内新生SD大鼠脑组织皮层神经元,利用免疫荧光方法鉴定细胞纯度.将培养的神经元随机分为对照组、NMDA染毒组和NMDA+NG-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)染毒组,每组24个平行.NMDA+L-NAME染毒组加入终浓度为100 μmol/L的L-NAME染毒1h后,在NMDA+L-NAME染毒组和NMDA染毒组分别加入终浓度为100 μmol/L的NMDA染毒2h.测定神经元细胞的活性、NO浓度、细胞凋亡情况及磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38MAPK)的表达.结果 免疫荧光显示90％细胞为兔抗大鼠神经元特异性烯醇化酶(neuronal specific enolase,NSE)阳性细胞;与对照组相比,NMDA染毒组与NMDA+L-NAME染毒组大鼠脑组织神经元中NO的浓度、细胞凋亡率及p-p38MAPK的表达明显升高,细胞活性明显下降,差异均有统计学意义(P＜0.01);而与NMDA染毒组相比,NMDA+L-NAME染毒组大鼠脑组织神经元中NO的浓度、细胞凋亡率及p-p38MAPK的表达明显降低,细胞活性明显上升,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 NMDA诱导的神经细胞凋亡部分依赖NO毒性作用,抑制NO的毒性作用可部分抑制神经细胞凋亡.     

PM_(2.5)对人脐静脉血管内皮细胞的损伤及黄芩苷的干预作用

目的探讨PM_(2.5)对人脐静脉内皮细胞(EA.hy926)的影响及黄芩苷的保护作用及机制。方法于2015年3月采集广州城区雾霾天气时的大气PM_(2.5),以不同质量浓度(0、50、200、400μg/ml)染毒EA.hy926细胞24 h,检测细胞存活率、凋亡率、丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)及乳酸脱氢酶(LDH)活力、细胞内p-p38 MAPK、Bax、Bcl-2蛋白表达。另外分别以黄芩苷(15、30、60μg/ml)和p38 MAPK通路特异性阻滞剂SB203580 20μmol/L预处理细胞,再加入200μg/ml PM_(2.5)染毒24 h,检测上述指标,探讨黄芩苷的干预作用及机制。结果与对照组比较,PM_(2.5)染毒后可降低EA.hy926细胞存活率和SOD活力,增加MDA含量及LDH活力,上调p-p38 MAPK蛋白表达及Bax/Bcl-2蛋白,差异均有统计学意义(P0.05);黄芩苷干预可增加EA.hy926细胞存活率和SOD活力,降低MDA含量及LDH活力,下调p-p38 MAPK蛋白表达及Bax/Bcl-2蛋白,差异均有统计学意义(P0.05)。结论黄芩苷可通过抑制p38 MAPK通路,减轻PM_(2.5)对EA.hy926细胞的损伤。     

DUSP1/p38/MAPK通路在子宫内膜异位症中的表达及意义

目的明确DUSP1在子宫内膜异位症中的表达及在子宫内膜异位症发病机制中的作用。方法采用SP和realtime-PCR法检测并比较同一患者卵巢子宫内膜异位病灶30例(异位灶组)及子宫内膜组织30例(内膜组)中DUSP1的表达差异。Western Blot法检测卵巢子宫内膜异位病灶和子宫内膜组织中DUSP1和p38/MAPK的表达。结果 DUSP1 mRNA和蛋白在异位灶组中的表达均高于内膜组(均P0. 01)。结论在子宫内膜异位症中,高表达的DUSP1经下调P-p38/MAPK抑制异位内膜细胞的凋亡,促进子宫内膜异位症的发生发展。     

孕期染毒壬基酚对子代雄性胎鼠睾丸发育和胰岛素样因子-3表达的影响

目的 探讨母体染毒壬基酚(NP)对雄性胎鼠生殖发育的影响,并检测胎鼠睾丸组织中胰岛素样因子-3(Insl-3)的mRNA以及蛋白的表达.方法 将已受孕的SD雌性大鼠随机分为对照组、5、40、100、200 mg/kg NP染毒组(每组20只),染毒组大鼠于孕14～19 d以NP灌胃染毒,对照组大鼠用纯花生油灌胃第19天处死孕鼠后检测孕鼠和雄性胎鼠生殖发育相关指标;反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹技术(Western blot)检测其睾丸组织中Insl-3的mRNA及蛋白的表达.结果 与对照组比较,40、100、200 mg/kg组胎鼠体重和睾丸系数明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).与对照组比较,40、100、200 mg/kg组的睾丸下降程度降低,差异有统计学意义(P＜0.05).与对照组比较,40、100、200 mg/kg组Insl-3mRNA及蛋白表达降低,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).结论 孕期暴露NP可致其雄性胎鼠睾丸发育不良,下降不全,并且可下调Insl-3的表达.