硼替佐米诱导Burkitt淋巴瘤Raji细胞凋亡的研究

本研究探讨硼替佐米对Burkitt淋巴瘤Raji细胞是否具有凋亡诱导作用及其机制。以硼替佐米处理Raji细胞,观察细胞增殖抑制作用的时间效应和剂量效应,在光学显微镜下观察药物作用前后细胞的形态变化,用流式细胞术检测药物孵育前后细胞凋亡率（AP）,用RT—PCR法检测药物孵育前后NF—κB和p53基因的表达水平。结果表明,在一定剂量和时间范围内硼替佐米能抑制Raji细胞生长;硼替佐米能诱导Raji细胞凋亡并显示时间和剂量效应;在硼替佐米诱导Raji细胞凋亡过程中,NF-κB及p53基因的袁达水平下调。结论：硼替佐米能诱导Raji细胞凋亡,NF—κB基因和p53基因很可能参与了硼替佐米诱导Raji细胞凋亡的调控。     

抑制有氧糖酵解增加硼替佐米诱导的非小细胞肺腺癌细胞凋亡

正无论从发病率和死亡率调查显示,肺癌都是世界上最常见的恶性肿瘤,肺癌是导致癌症相关死亡的最主要原因[1,2]。在肺癌的分类中,非小细胞肺癌(NSCLC)在所有肺癌病例中大约占80%[3]。早期诊断的NSCLC手术切除后的生存率较高[4]。然而,当病人处于中期或者晚期再进行治疗,特别是有明显转移的患者,其平均生存率一般不超过18个     

亚砷酸联合蛋白酶体抑制剂硼替佐米诱导人淋巴瘤细胞Raji凋亡的研究

本研究探索亚砷酸、硼替佐米对人Burkitt淋巴瘤细胞系Raji的协同诱导凋亡作用。小剂量亚砷酸、硼替佐米单用以及二者联合分别处理Raji细胞，用台盼蓝拒染法计数活细胞数和细胞生长抑制率；用流式细胞术分析细胞凋亡和周期的变化；以Western blot检测Caspase-3、BCL-2、BAX、JNK2、IκB-α等凋亡相关元件在蛋白水平的变化。结果表明：相比于单用亚砷酸和硼替佐米，以小剂量亚砷酸联合硼替佐米处理Raji细胞后，细胞生长受明显抑制（P〈0．01），细胞凋亡比例增加（P=0.001），但细胞周期未见明显阻滞；在蛋白水平，细胞凋亡相关元件Caspase-3、BAX和IκB-α表达增加，而BCL-2和JNK2表达量下降。结论：小剂量亚砷酸联合硼替佐米能更有效地诱导Raji细胞凋亡，并具有协同作用。该作用可能是通过抑制NF—κB和JNK2通路实现的。     

硼替佐米联合低浓度阿糖胞苷诱导U937细胞凋亡的研究

本研究探讨蛋白酶体抑制剂硼替佐米联合低浓度阿糖胞苷(Ara-C)对U937细胞株的作用及机制。通过细胞计数,细胞形态学检查,流式细胞术和Western blot方法检测硼替佐米(10 nmol/L)和(或)Ara-C(50 nmol/L)处理前后U937细胞的增殖抑制和凋亡及其机制。结果显示,硼替佐米和Ara-C单药均能抑制U937细胞增殖,两药联合的抑制作用更加明显,细胞增殖抑制率在24和48 h分别达(55.00±2.81)%和(70.02±3.33)%;硼替佐米联合低浓度Ara-C能协同诱导U937细胞凋亡,促使线粒体跨膜电位下降,阳性细胞率达(38.70±1.54)%。两药联合应用还能协同诱导caspase-9,-8,-3的活化。结论:硼替佐米联合低浓度Ara-C主要通过线粒体途径、可能还通过死亡受体途径诱导U937细胞凋亡。     

硼替佐米联合三氧化二砷诱导NB4细胞凋亡的机制研究

三氧化二砷(As2O3)是目前临床公认的治疗急性早幼粒细胞白血病(APL)的有效药物之一,被认为是APL复发治疗的最佳方案,其临床疗效已得到肯定,但诱导第2次缓解后的巩固方案还不明确,可选择重复使用As2O3、联合化疗和造血干细胞移植,因此积极寻求新的有效的治疗方法在当前仍然显得尤为重要.蛋白酶体抑制剂硼替佐米具有潜在的抗肿瘤价值,它可通过抑制泛素-蛋白酶体通路调节细胞周期,促进细胞凋亡,从而可能阻止或延缓肿瘤进展[1].已有研究表明单用硼替佐米即可诱导多种白血病细胞的凋亡[2-3].目前越来越多的研究致力于硼替佐米与常规化疗药物的联合作用,显示二者具有协同或叠加效应[3-4].     

硼替佐米联合三氧化二砷诱导NB4细胞凋亡的机制研究

三氧化二砷(As2O3)是目前临床公认的治疗急性早幼粒细胞白血病(APL)的有效药物之一,被认为是APL复发治疗的最佳方案,其临床疗效已得到肯定,但诱导第2次缓解后的巩固方案还不明确,可选择重复使用As2O3、联合化疗和造血干细胞移植,因此积极寻求新的有效的治疗方法在当前仍然显得尤为重要.蛋白酶体抑制剂硼替佐米具有潜在的抗肿瘤价值,它可通过抑制泛素-蛋白酶体通路调节细胞周期,促进细胞凋亡,从而可能阻止或延缓肿瘤进展[1].已有研究表明单用硼替佐米即可诱导多种白血病细胞的凋亡[2-3].目前越来越多的研究致力于硼替佐米与常规化疗药物的联合作用,显示二者具有协同或叠加效应[3-4].     

硼替佐米联合三氧化二砷诱导NB4细胞凋亡的机制研究

三氧化二砷(As2O3)是目前临床公认的治疗急性早幼粒细胞白血病(APL)的有效药物之一,被认为是APL复发治疗的最佳方案,其临床疗效已得到肯定,但诱导第2次缓解后的巩固方案还不明确,可选择重复使用As2O3、联合化疗和造血干细胞移植,因此积极寻求新的有效的治疗方法在当前仍然显得尤为重要.蛋白酶体抑制剂硼替佐米具有潜在的抗肿瘤价值,它可通过抑制泛素-蛋白酶体通路调节细胞周期,促进细胞凋亡,从而可能阻止或延缓肿瘤进展[1].已有研究表明单用硼替佐米即可诱导多种白血病细胞的凋亡[2-3].目前越来越多的研究致力于硼替佐米与常规化疗药物的联合作用,显示二者具有协同或叠加效应[3-4].     

蛋白酶体抑制剂-硼替佐米的研究进展

在过去的几十年中，多发性骨髓瘤没有像近两年来那样受到重视，因为近几年有几种新药改变了多发性骨髓瘤的治疗格局，尤其是硼替佐米（万珂）以全新的治疗理念、卓越的临床疗效引起临床医生的兴趣，使以前认为不可治愈的多发性骨髓瘤变成有可能治愈的疾病。由于蛋白酶体对调节蛋白的过度降解是多种肿瘤发病的共同机制，因而在骨髓瘤以外的恶性疾病也得以使用。下面就其研究进展做一综述。     

雷公藤内酯醇对硼替佐米诱导多发性骨髓瘤细胞凋亡的影响

本研究旨在探讨雷公藤内酯醇对硼替佐米诱导骨髓瘤细胞株NCI-H929(H929)凋亡的影响。通过MTT法检测不同浓度的雷公藤内酯和硼替佐米单用及联用对H929细胞的增殖抑制作用;采用Annexin Ⅴ-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率。结果表明:雷公藤内酯醇(10-100 ng/ml)和硼替佐米(10-100 nmol/L)单用和联用均可抑制H929细胞增殖,呈浓度依赖性,雷公藤内酯醇和硼替佐米联用组的细胞凋亡率明显高于单用硼替佐米组。经非抑制浓度的雷公藤内酯醇(10 ng/ml)联合硼替佐米(40 nmol/L)处理H929细胞24 h后的凋亡率明显高于单用硼替佐米组(P<0.05)。结论:雷公藤内酯醇能够显著增强硼替佐米对多发性骨髓瘤细胞的促凋亡活性。     

硼替佐米增加HL-60细胞对TRAIL的敏感性

本研究旨在探讨硼替佐米（bortezomib）是否可以增加HL-60细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TNF—related apoptosis—inducing ligand,TRAIL）的敏感性及其可能的作用机制。选择亚细胞毒浓度的硼替佐米与不同浓度的TRAIL联合处理HL-60细胞,用MTT法检测并绘制增殖抑制曲线．用Annexinv／PI双染色流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测caspase-8的表达。结果表明,亚细胞毒浓度的硼替佐米与10ng／ml的TRAIL联合作用于HL-60细胞时细胞凋亡率较单独应用TRAIL时增加,相应的caspase-8的表达也随之增加。结论：亚细胞毒浓度的硼替佐米可以增加HL-60细胞对TRAIL的敏感性,其机制可能与促进caspase-8表达有关。     

硼替佐米联合阿糖胞苷协同诱导U937细胞凋亡机制的深入研究

本研究旨在探讨蛋白酶体抑制剂硼替佐米联合低浓度阿糖胞苷协同诱导U937细胞凋亡的机制。通过细胞计数检测细胞增殖,用流式细胞仪分析细胞周期和活性氧（ROS）水平,Westernblot检测凋亡信号通路相关蛋白的表达。结果表明,10nmol／L硼替佐米联合50nmol／L阿糖胞苷对U937细胞有明显增殖抑制作用。两药联合协同诱导细胞凋亡。两药联合较单药处理能明显协同增加U937细胞ROS的水平,并能明显上调U937细胞中p-P38,p-JNK表达,下调p-ERK的表达。结论：硼替佐米联合阿糖胞苷协同诱导U937细胞凋亡．其机制可能与R0s的损伤导致JNK、P38通路的激活和ERK的下调,从而影响细胞线粒体途径有关。     

自噬在硼替佐米诱导的肾癌细胞凋亡中作用的研究

目的探讨自噬在硼替佐米诱导的肾癌细胞凋亡中的作用。方法采用MTT检测硼替佐米对人肾癌ACHN细胞增值率的影响;通过Western Blotting检测硼替佐米对人肾癌ACHN细胞凋亡相关蛋白cleaved caspase-3及自噬相关蛋白LC3表达水平的影响;联用自噬抑制剂3-MA后,MTT检测细胞增殖率,Western Blotting检测凋亡相关蛋白cleaved caspase-3表达水平。结果硼替佐米对肾癌ACHN细胞的增殖有抑制作用,并且增加人肾癌ACHN细胞凋亡相关蛋白cleaved caspase-3表达水平及自噬相关蛋白LC3表达水平,呈一定的浓度依赖性;联用3-MA可增加硼替佐米诱导的肾癌ACHN细胞的增殖抑制作用,并可增加硼替佐米诱导的肾癌ACHN细胞cleaved caspase-3表达水平。结论硼替佐米可诱导肾癌细胞凋亡并诱导肾癌细胞发生自噬,抑制自噬可以明显增强硼替佐米的肾癌细胞毒作用。     

硼替佐米联合阿霉素诱导霍奇金淋巴瘤L428细胞凋亡的实验研究

硼替佐米是首个进行临床研究的蛋白酶体抑制剂,已应用于治疗多发性骨髓瘤(MM)及部分非霍奇金淋巴瘤,同时Mitsiades[1]和Ma等[2]体外实验证实硼替佐米与阿霉素联合处理MM细胞具有协同作用,而硼替佐米与阿霉素联合对霍奇金淋巴瘤(HL)有无协同作用未见报道.为研究硼替佐米对HL的抗肿瘤作用,我们观察了硼替佐米对HL细胞株L428细胞的增殖抑制作用,同时观察硼替佐米联合阿霉素对L428细胞的协同作用,并对其凋亡机制进行探讨.     

硼替佐米联合三氧化二砷诱导NB4细胞凋亡及相关机制的研究

本研究旨在探索硼替佐米(bortezomib)联合三氧化二砷(As2O3)诱导急性早幼粒细胞白血病NB4细胞株的凋亡及相关调控机制。用流式细胞术AnnexinⅤ/PI双染法检测细胞凋亡;Hoechst染色法观察凋亡细胞形态;Western blot检测caspase-3,caspase-9的活化以及NOXA蛋白的表达;以小干扰RNA(siRNA)技术特异性"沉默"NOXA基因;用脂质体Lipofectamine2000转染pEGFP-Noxa质粒和空载体pEGFP。结果表明,bortezomib(10 nmol/L)联合As2O3(0.5μmol/L)诱导NB4细胞凋亡率较单药As2O3(0.5μmol/L)诱导时增加,相应的caspase-3,-9的活化明显加强。单药As2O3诱导的NB4细胞中Noxa蛋白水平未发生改变,bortezomib和As2O3联合诱导的NB4中NOXA蛋白水平上调。特异性"沉默"NOXA基因后bortezomib和As2O3联合诱导的NB4细胞中caspase-3的活化程度降低,细胞凋亡率也明显下降。通过转染质粒高表达NOXA蛋白,单药As2O3诱导的NB4细胞中caspase-3的活化程度增加。结论:bortezomib可以增加NB4细胞对As2O3诱导凋亡的敏感性,这可能和促凋亡蛋白NOXA的表达上调有关。     

硼替佐米联合阿霉素诱导霍奇金淋巴瘤L428细胞凋亡的实验研究

硼替佐米是首个进行临床研究的蛋白酶体抑制剂,已应用于治疗多发性骨髓瘤(MM)及部分非霍奇金淋巴瘤,同时Mitsiades[1]和Ma等[2]体外实验证实硼替佐米与阿霉素联合处理MM细胞具有协同作用,而硼替佐米与阿霉素联合对霍奇金淋巴瘤(HL)有无协同作用未见报道.为研究硼替佐米对HL的抗肿瘤作用,我们观察了硼替佐米对HL细胞株L428细胞的增殖抑制作用,同时观察硼替佐米联合阿霉素对L428细胞的协同作用,并对其凋亡机制进行探讨.     

硼替佐米减弱小鼠骨髓瘤细胞所致成骨细胞凋亡的作用

本研究探讨蛋白酶体抑制剂硼替佐米在骨髓瘤骨病(myeloma bone disease,MBD)病理状态下对成骨细胞的影响。以小鼠骨髓瘤细胞RPMI8226与小鼠成骨细胞MC-3T3E1共培养和上清干预培养的方式,模拟体内骨髓瘤骨病状态,采用改良四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法检测硼替佐米对MC-3T3E1细胞的增殖抑制,Annexin V/PI染色流式细胞术检测MC-3T3E1细胞的凋亡,RT-PCR及Western blot法比较加入硼替佐米后MC-3T3E1细胞成骨相关基因及蛋白Runx2/cbfa1、OSX(osterix)、骨钙蛋白(osteocalcin,OCN)的表达变化。结果表明:较高浓度的硼替佐米对成骨细胞MC-3T3E1的增殖抑制呈剂量依赖性,48小时IC50为38.1 nmol/L。低浓度(5 nmol/L)硼替佐米对单独培养的MC-3T3E1增殖无明显影响(p0.1),但可使与骨髓瘤细胞RPMI8226共培养及上清干预培养的MC-3T3E1凋亡比例分别降低24.6%和32.5%,并且促使成骨细胞相关基因osx、ocn的mRNA及蛋白表达增加(p0.05),而Runx2/cbfa1无明显变化(p0.05)。结论:低剂量硼替佐米可通过活化成骨细胞内部机制减弱骨髓瘤细胞引起的成骨细胞凋亡,增强Runx2/cbfa1通路中成骨细胞相关基因osx、ocn mRNA及蛋白的表达,可能在骨髓瘤骨病中保护成骨细胞,维持成骨细胞生存。     

Xbp-1基因沉默对硼替佐米诱导人多发性骨髓瘤细胞凋亡的影响

本研究旨在探讨xbp-1基因沉默对硼替佐米诱导骨髓瘤细胞株NCI-H929(H929)凋亡的影响。通过小发夹RNA(shRNA)干扰xbp-1基因表达,采用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测靶细胞凋亡率,采用Wes-ternblot检测XBP-1蛋白水平。结果表明:通过慢病毒载体PLL3.7介导的xbp-1 shRNA表达,能有效抑制H929细胞XBP-1蛋白表达,xbp-1 shRNA表达细胞的凋亡率显著高于对照组[(10.13±0.61)%vs(2.5±0.2)%,p0.05];经硼替佐米处理后,xbp-1基因功能缺陷的H929细胞的凋亡率显著高于空载体组[(45.07±1)%vs(2.73±0.25)%,p0.05]。结论:xbp-1基因沉默能够显著增强硼替佐米对多发性骨髓瘤细胞的促凋亡活性。     

白术内酯Ⅰ能诱导U266细胞凋亡和增强硼替佐米的作用

目的:探讨白术内酯Ⅰ对U266细胞增殖和凋亡的作用及其对硼替佐米抗多发性骨髓瘤的作用。方法:分别将不同浓度的白术内酯Ⅰ、硼替佐米以及硼替佐米+白术内酯Ⅰ作用于U266细胞,并应用CCK-8法检测细胞增殖活性,Annexin V-FITC/PI染色及流式细胞术检测细胞凋亡率及细胞周期,应用RT-PCR及Western blot分别检测目标基因Caspase-3、Caspase-9、BCL-2、BAX、JAK2、STAT3及IL-6的mRNA及相应蛋白的表达。结果:白术内酯Ⅰ能呈浓度依赖性抑制U266细胞的增殖(r=-0.98)和促进细胞凋亡(r=0.99),调控线粒体介导的凋亡途径;联合用药能显著增强对细胞增殖的抑制作用(P0.01);同时,单药组及联合用药组均能显著降低IL-6、JAK2、STAT3及BCL-2 mRNA及蛋白表达水平(P0.01)。结论:白术内酯Ⅰ能显著抑制U266细胞增殖,促进其凋亡,并能与硼替佐米产生协同作用,此作用与线粒体凋亡途径有关,可能与调节JAK2/STAT3通路上的IL-6、JAK2、STAT3等基因表达有关。     

PX-12促进硼替佐米诱导多发性骨髓瘤细胞H929凋亡的实验研究

目的:研究PX-12对硼替佐米诱导多发性骨髓瘤(MM)细胞凋亡的影响及机制.方法:以MM细胞株H929细胞为研究对象,将细胞分为PX-12组、硼替佐米组、联合组和对照组,分别加入单药PX-12 5.0 μmol/L、单药硼替佐米20 nmol/L、两药联合和DMSO对照,培养24、48及72 h后观察细胞活性变化,通过...     

2-甲氧基雌二醇联合硼替佐米对多发性骨髓瘤细胞凋亡的影响

目的 探讨2-甲氧基雌二醇(2-ME2)联合硼替佐米的抗多发性骨髓瘤(MM)效应及与聚集小体(aggresome)形成之间的相关性.方法 以MM细胞系RPMI 8226、NCI-H929、U266、SKO-007细胞作为研究对象,采用硼替佐米单药或联合2-ME2处理,通过等效应线图法分析两者是否具有抗MM协同效应;通过免疫荧光技术在同一组细胞群中研究聚集小体阳性和阴性细胞的凋亡情况.结果 ①硼替佐米呈浓度和时间依赖性地显著提高聚集小体阳性细胞比例,且聚集小体几乎全部出现于非凋亡细胞中.②等效应线图法分析显示一定浓度范围的硼替佐米与2-ME2联合具有显著的协同作用.③硼替佐米与2-ME2联合应用后聚集小体阴性的凋亡细胞显著增多而聚集小体阳性的非凋亡细胞明显减少.在RPMI 8226及U266细胞中,硼替佐米单药与联合用药组相比,聚集小体阴性的凋亡细胞分别由(14.5±2.6)%及(20.1±2.9)%增加至(80.7±6.9)%及(71.6±6.2)%;聚集小体阳性的非凋亡细胞分别由(75.3±5.7)%及(69.1±8.6)%减少到(13.8±3.8)%及(19.5±4.2)%.结论 硼替佐米诱导生成的聚集小体对MM细胞具有保护作用;2-ME2通过抑制聚集小体途径可以显著增强硼替佐米的抗MM效应.