陕西省婴幼儿食品中分离的132株蜡样芽胞杆菌呕吐型基因的检测

目的 了解2012-2016年陕西省市售婴幼儿食品中蜡样芽胞杆菌的呕吐型基因的携带情况及携带呕吐基因菌株的分子分型。方法 采用PCR 方法对2012-2016年陕西省不同地区市售婴幼儿食品中收集到的132株蜡样芽胞杆菌的呕吐型基因进行检测,用多位点序列分型(MLST)方法对携带呕吐型基因的蜡样芽胞杆菌进行分子分型。结果 132株蜡样芽胞杆菌中携带呕吐型基因的共计9株,携带率682%。这9株菌分为4个序列类型(Sequence Type,ST),分别为ST-100(1111%,1/9)、ST-164(1111%,1/9)、ST-246(1111%,1/9)、ST-26(6667%,6/9)。结论 陕西省市售婴幼儿食品中的蜡样芽胞杆菌携带有呕吐型基因,携带率682%,以ST-26为主要流行株,基因型多样,地区间有地区特征性差异。     

温州市市售奶粉蜡样芽胞杆菌污染情况调查及毒力基因分析

目的了解温州市市售奶粉中蜡样芽胞杆菌的污染状况及毒力基因的携带情况。方法采集温州市市售奶粉样品,依据国家标准GB 4789. 14—2014进行蜡样芽胞杆菌分离鉴定,并采用PCR法对分离株进行毒力基因检测。结果 400份奶粉样品,共检出76株蜡样芽胞杆菌,检出率为19. 00%。其中复合型非溶血性肠毒素nhe基因、溶血素BL基因携带率分别为75. 00%、21. 05%,2. 63%菌株携带呕吐毒素基因,非溶血性基因nhe基因与肠毒素FM基因为主要毒力基因。结论温州市市售奶粉存在一定程度的蜡样芽胞杆菌污染,且分离的蜡样芽胞杆菌毒力基因携带率较高,存在潜在的食品安全隐患。     

贵州省食源性蜡样芽孢杆菌毒力基因及耐药研究

目的 了解贵州省食源性蜡样芽胞杆菌的毒力基因分布及耐药谱,为蜡样芽胞杆菌食源性疾病的防治提供参考依据。方法 采用PCR方法对2015-2017年贵州省60株食源性蜡样芽胞杆菌进行10种毒力基因的检测;采用K-B法检测10种抗生素的敏感性。结果 60株蜡样芽胞杆菌共发现16种毒力基因携带模式,其中nheB、nheC检出率100%,nheA、entFM为96.67%(58/60),hblA为63.33%(38/60),hblC为56.67%(34/60),hblD为53.33%(33/60),bceT为15%(9/60),ces为3.33%(2/60)。60株蜡样芽胞杆菌对庆大霉素、氯霉素、环丙沙星、万古霉素敏感率100%,对四环素、红霉素、克林霉素、氨苄西林、甲氧苄啶的敏感率分别为98.33%、91.67%、86.67%、13.33%、3.33%,对头孢吡肟100%耐药。结论 贵州省食源性蜡样芽胞杆菌毒素基因携带率较高,存在引起食源性疾病的风险。氨苄西林、甲氧苄啶、头孢吡肟不建议作为蜡样芽孢杆菌引起的食源性疾病的临床治疗用药。     

北京朝阳164株蜡样芽胞杆菌耐药性及腹泻毒力基因分析

目的了解北京朝阳2013年-2014年164株蜡样芽胞杆菌生化分型、耐药及毒力基因携带情况。方法全自动细菌鉴定药敏系统进行药敏试验,手工生化分型,PCR检测毒力基因。结果 164株蜡样芽胞杆菌分成13型,主要为3型(45株)、8型(29株)、1型(19株)、12型(16株)、9型(14株)、6株未分型; 8种基因携带率依次为nheC(59. 15%)、hblC (49. 39%)、bceT (23. 17%)、cytK (16. 46%)、hblA (14. 02%)、nheA (9. 14%)、hblD (8. 54%)、nheB(6. 70%); 164株蜡样芽胞杆菌对氨苄青霉素、头胞西丁、青霉素G 100%耐药,对其余20种抗生素均敏感。结论 164株蜡样芽胞杆菌主要为3型,无13型、15型; 78%菌株至少携带一种毒力基因,52%菌株携带2种以上毒力基因,nheC携带率最高,食品来源菌株均不携带cytK;青霉素类、头孢类药物100%耐药。     

贵州省即食米面制品食源性致病菌污染及病原特征分析

目的 了解贵州省即食米面制品中食源性致病菌污染状况和病原学特征,为细菌性食源性疾病的防治提供参考依据。方法 2014—2019年在贵州省的88个县（市、区）采集即食米面制品1128份,依据食品安全国家标准（GB4789）进行五种食源性致病菌的检测;采用荧光定量PCR法和ELISA法分别检测金黄色葡萄球菌肠毒素基因及蛋白,普通PCR法检测蜡样芽胞杆菌毒力基因。结果 1128份即食米面制品有130份样品检出食源性致病菌,检出率为11.52%,分别是蜡样芽胞杆菌7.71%,金黄色葡萄球菌3.10%,沙门氏菌0.27%,单核细胞增生李斯特氏菌0.44%,未检出致泻大肠埃希氏菌。分离的35株金黄色葡萄球菌有65.71%携带肠毒素基因,54.29%呈肠毒素蛋白阳性。87株蜡样芽胞杆菌都至少携带两种以上毒力基因,同时携带hblACD及nheABC的有29.88%。结论 贵州省即食米面制品存在多种食源性致病菌污染,蜡样芽胞杆菌和金黄色葡萄球菌污染率较高且携带多种毒力基因,存在较大食源性疾病风险,监管部门应加强对即食米面制品的加工制作管理。     

应用多重PCR技术检测120株蜡样芽胞杆菌毒力基因

目的 应用多重PCR技术对蜡样芽孢杆菌毒力基因进行快速检测,为研究蜡样芽胞杆菌致病性提供有力依据。 方法 根据蜡样芽胞杆菌（B.cereus）的cer、hblA、hblC、nheA、nheB、cytK和bceT基因设计并合成引物,优化反应条件,应用多重PCR技术检测120株B.cereus毒力基因序列。结果 多重PCR检测结果非常理想,不同基因扩增条带清晰可辨,蜡样芽胞杆菌呕吐毒素基因cer携带率为96.66%（116/120),细胞毒素cytK基因携带率为42.37%(50/118),肠毒素bceT基因携带率为38.33%(46/120),非溶血性基因nheA携带率为78.33％(94/120),非溶血性基因nheB携带率为83.05％(98/118),溶血性基因hblA携带率为55.0%(66/120),溶血性hblC基因携带率为27.96%(33/118)。结论 多重PCR结果很好,7对引物所扩增出的DNA条带区分明显,电泳条带清晰,特异性强,敏感度高。本实验对120株蜡样芽胞杆菌7种毒力基因进行检测,为研究蜡样芽胞杆菌致病性提供有力依据。     

蜂蜜中蜡样芽胞杆菌的分离鉴定及其毒力基因的检测

目的 了解蜂蜜中蜡样芽胞杆菌的污染情况及其毒力基因的分布情况.方法 采用国家标准GB 4789.14-2014中MPN计数法对抽检蜂蜜样品的蜡样芽胞杆菌计数,并利用PCR法对分离的16株蜡样芽胞杆菌的毒力基因进行检测.结果 蜂蜜中蜡样芽胞杆菌的检出率为41.0％,分离的16株蜡样芽胞杆菌中至少检出2种毒力基因,非溶血性...     

脉冲场凝胶电泳技术对一起聚集事件病原学回顾性分析

目的对一起多因素引起腹痛、腹泻聚集事件调查中采集的样本进行致病菌检验,利用脉冲场凝胶电泳技术(PFGE)从分子水平对该起事件的病原学进行回顾性分析。方法依据相关标准对采集的样品进行病原菌分离、鉴定,选用SmaⅠ酶切事件中分离的可疑致病菌株,对菌株进行聚类分析。结果从44件可疑样品中检出蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus,Bc)17株,对可疑食品中分离的10株蜡样芽胞杆菌进行PFGE分子分型检测,其中7株为相同带型。结论 PFGE图谱佐证了Bc作为本次聚集事件病原的新证据,采集的食品并非被一个单克隆蜡样芽胞杆菌污染,而是存在多种Bc克隆,PFGE可有效应用于暴发事件溯源分析及分子流行病学研究。     

2008年-2010年台州市食源性副溶血性弧菌分子特征研究

目的:分析2008年-2010年台州市食源性副溶血性弧菌的主要毒力基因分布情况及分子分型特征,为建立台州市副溶血性弧菌的DNA指纹图谱数据库提供基础。方法:利用PCR方法对52株食源性副溶血性弧菌检测主要毒力基因(tdh、trh、tlh、ureC、T3SS-2(vscC2、vcrD2)),并用PFGE分析部分菌株的基因分型特征。结果:在52株食源性副溶血性弧菌中检出同时携带tdh基因和vscC2基因1株;25株菌被分为25种PFGE图谱,聚类分析显示菌株间呈现明显多态性。结论:台州市食源性副溶血性弧菌主要毒力基因携带率低,菌株间基因呈多态性,没有发现优势菌群,提示本地食品中副溶血性弧菌不存在流行趋势。     

米面食品中呕吐型蜡样芽胞杆菌的分子分型及耐药性分析

目的 了解陕西米面食品中呕吐型蜡样芽胞杆菌的分子分型和耐药性。方法 对近5年(2012-2016年)陕西地区的米面食品中收集到的208株蜡样芽胞杆菌用PCR方法进行呕吐型菌株的鉴别,用多位点序列分型(multi-locus sequence typing,MLST)技术对鉴别的呕吐型菌株分子分型,用微量肉汤稀释法测定其药物敏感性。结果 鉴别出8株呕吐型蜡样芽胞杆菌,分为ST-1050、ST-1606和ST-26三个ST 型。呕吐型蜡样芽胞杆菌对氨苄西林、青霉素、苯唑西林、复方新诺明耐药率100%。对头孢西丁、头孢唑林,耐药率分别为62.5%、50.0%。对红霉素、克林霉素、四环素,敏感率均为87.5%,对环丙沙星、达托霉素、万古霉素、氯霉素、庆大霉素100%敏感。结论 陕西地区米面食品中存在呕吐型蜡样芽胞杆菌的污染,ST-26是优势型别,应作为陕西防控工作的重点。氨苄西林、青霉素、苯唑西林、复方新诺明耐药率高不应作为临床治疗用药。     

河南省洛阳市餐饮食品中蜡样芽孢杆菌污染状况及毒力基因分析

目的 检测河南省洛阳市餐饮食品中蜡样芽孢杆菌的污染状况和毒力基因携带情况,为防控该菌引起的食源性疾病提供参考依据。方法 2021年,按照《国家食品污染物和有害因素风险监测工作手册》的要求,从洛阳市餐饮服务环节和流通环节采集餐饮食品样品113份,定量检测蜡样芽孢杆菌,并采用PCR方法对分离得到的31株蜡样芽孢杆菌菌株所携带的10种毒力基因进行检测。结果 蜡样芽孢杆菌总检出率为27.43%(31/113)。不同种类食品中,熟制米面的蜡样芽孢杆菌检出率最高,为32.69%(17/52)。第三季度蜡样芽孢杆菌的检出率最高,为39.53%(17/43);不同季度蜡样芽孢杆菌检出率差异有统计学意义(χ²=8.607,P=0.014)。不同采样地点中流动摊档食品蜡样芽孢杆菌的检出率最高,为37.50%(12/32)。散装食品蜡样芽孢杆菌的检出率(28.26%)略高于预包装食品(23.81%)。100%菌株至少携带一种腹泻型毒素基因,共计12种毒力基因携带模式,非溶血性肠毒素基因nheA、nheB检出率最高,为96.77%;未检出呕吐型毒素基因ces。结论 洛阳市餐饮食品中蜡样芽...     

蜡样芽胞杆菌食物中毒分离株分子分型分析

目的建立蜡样芽胞杆菌的分子分型方法,应用于蜡样芽胞杆菌食物中毒的溯源研究。方法从2000-2009年广东省深圳市食物中毒暴发和散发病例的临床分离株中挑选47株蜡样芽孢杆菌进行鉴定及生化分型,同时进行vrrA基因PCR扩增并对产物进行测序,用Bio-edit和MEGA软件对DNA序列进行同源性比较。结果传统生化分型:47株蜡样芽胞杆菌中有5株菌不能分型,其余42株菌可分为2型、10型和4型,其中2型16株,占34.04%,10型16株,占34.04%,4型10株,占21.28%;分子分型:47株菌可分为13个基因型MT1-MT13,其中MT13型19株,占40.43%,MT1型8株,占17.02%,MT10型4株,占8.51%。结论 vrrA基因作为蜡样芽胞杆菌分子分型的一个多态性遗传标记,可用于蜡样芽胞杆菌DNA分子分型研究,对食物中毒溯源有重要意义。     

炭疽与蜡样芽胞杆菌rpoB基因交叉反应的分子分析

目的发现炭疽芽胞杆菌与蜡样芽胞杆菌rpo B基因PCR交叉反应,对产生交叉反应的原因进行研究。方法对分离自食品及土壤的芽胞杆菌进行形态染色、生化反应、飞行时间质谱、蛋白毒素结晶试验、根状生长试验、炭疽噬菌体裂解试验、炭疽杆菌及蜡样杆菌荧光定量PCR等鉴定,并对rpo B基因实时荧光定量PCR扩增产物进行克隆测序,比对基因序列。对部分菌株进行MLST分型,探讨交叉反应的遗传关系。结果部分芽胞杆菌炭疽实时荧光定量PCR试验出现rpo B扩增阳性,经鉴定为蜡样芽胞杆菌。rpo B扩增产物测序显示,与炭疽杆菌高度相似。MLST分型显示分布在不同的群,发现4种新的ST型。结论蜡样芽胞杆菌与炭疽芽胞杆菌的rpo B基因存在PCR交叉反应,其分子生物学基础是基因组序列的高度相似性,与菌株遗传变异关系不大,对炭疽杆菌及蜡样杆菌的基因诊断应该参考毒素质粒及染色体基因的联合鉴定。     

多重实时荧光PCR检测金黄色葡萄球菌和蜡样芽胞杆菌

[目的]建立多重实时荧光PCR方法以检测金黄色葡萄球菌和蜡样芽胞杆菌.[方法]通过设计引物和探针,优化反应条件,建立多重实时PCR,检测金黄色葡萄球菌nuc基因、蜡样芽胞杆菌16S rRNA保守区基因及其ces基因(编码致呕毒素cereulide).该多重实时荧光PCR方法检测23株金黄色葡萄球菌、4株蜡样芽胞杆菌菌株和6株乳杆菌,比较其与菌株鉴定结果及ces基因普通PCR检测结果.[结果]多重实时荧光PCR方法检测23株金黄色葡萄球菌、4株蜡样芽胞杆菌菌株和6株乳杆菌,与菌株鉴定结果的符合率为100%.蜡样芽胞杆菌的ces基因检测结果也与普通PCR结果相符.[结论]建立了同时检测金黄色葡萄球菌nuc、蜡样芽胞杆菌168保守区基因及ces基因多重实时PCR方法,可应用于金黄色葡萄球菌和蜡样芽胞杆菌在种水平上的菌株鉴定、以及蜡样芽胞杆菌cereulide毒力菌株的鉴定.     

广州地区70株副溶血性弧菌病原学特征分析

目的 了解广州地区人源性和食源性副溶血性弧菌优势血清型、携带毒力基因和分子分型情况。方法 收集2014 - 2016年广州地区腹泻患者和食源性监测中分离到的副溶血性弧菌进行血清分型、毒力基因鉴定和脉冲场凝胶电泳分型（PFGE）。结果 70株副溶血性弧菌,临床分离株48株,血清型分别为O3∶K6、O4∶K8、O1∶K1、O4∶K9、O1∶K36,其中O3∶K6为主要型别（70.8%）,其次为O4∶K8（20.8%）。食品分离株22株,血清型分散无明显优势。毒力基因检测,临床分离株46株tdh、toxRS/new、orf8全部阳性。食品分离株6株tdh阳性,toxRS/new、orf8全部阴性。所有菌株均未检出trh基因。PFGE分析70株副溶血性弧菌可分为45种带型,2种聚类,菌株间的相似值为45.6 %～100 %。结论 副溶血性弧菌临床分离株与食品分离株在血清型和毒力基因分布上具有分离现象。引起广州地区食源性疾病的副溶血性弧菌株,是主要以携带tdh、toxRS/new、orf8基因的O3:K6型菌株。PFGE图谱显示,本区域70株副溶血弧菌呈现基因多样性。     

2009年四川省副溶血性弧菌血清型、致病力及分子分型研究

目的 了解四川地区2009年副溶血弧菌食物中毒疫情分离株和监测食品样品分离菌株菌型分布、致病力及分子分型特征,为四川地区副溶血性弧菌疾病防治提供科学依据.方法 采用血清玻片凝集试验对2009年从食物中毒疫情和常规监测食品中分离的副溶血孤菌菌株进行血清分型、应用PCR方法进行耐热直接溶血素基因(tdh)和耐热直接溶血素相关基因(trh)的检测、小鼠腹腔注射进行致病力实验和进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析等.结果 40株菌分属于5个血清群,疫情分离株分属于O3和O4群,监测分离株主要为O1群占43.75％ (7/16),其中2起疫情分离到多个血清型的菌株;所有菌株trh基因均为阴性,其中20株携带tdh毒力基因,携带tdh毒力基因和不携带tdh、tlh毒力基因的菌株均有致病力.40株菌通过PFGE分型,共得到29个带型,同一疫情分离株具有多个PFGE型别..结论 四川省食品分离株和暴发疫情无太多联系,食品分离株血清型和PFGE型别呈多样性.对于从同一起暴发疫情中检出的不同血清型和不同PFGE型别的副溶血性弧菌需要确认各菌株与暴发的关系.     

一起蜡样芽胞杆菌食物中毒分离株的毒力基因分析研究

目的 对红河州发生的一起蜡样芽孢杆菌食物中毒分离株进行毒力基因分析研究。方法 本次食物中毒从一位病人肛拭子标本和三种剩余食物中分离出4株蜡样芽孢杆菌,利用PCR检测分离株的腹泻型毒力基因:hbl(ACD)、nhe（ABC）、cytK、entFM、bceT 和呕吐型毒力基因:NRPS 。结果 病人（肛拭子）和剩余食物（火腿烩乳饼）分离株均携带有hbl(ACD)、nhe（ABC）、cytK、entFM、bceT 基因;剩余食物（虾）分离株携带有nhe（ABC）、entFM 基因;剩余食品（冰木瓜凉水）分离株携带有hbl(CD)、nhe（ABC）、cytK、entFM、bceT 基因;所有分离株均不携带有呕吐型毒力基因NRPS 。结论 本次食物中毒根据毒力基因检测结果,可以确定为由蜡样芽孢杆菌引起的腹泻型食物中毒。     

潜江市2010年-2011年食源性致病菌监测分析

目的:了解潜江市售食品中食源性致病菌的污染状况及分布。方法:按照湖北省食源性致病菌监测方案的要求,2010和2011两年在潜江市6个监测点内采集十六类市售食品共计331份,对其进行沙门菌、单核细胞增生李斯特氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌O157:H7、副溶血性弧菌、蜡样芽胞杆菌、阪崎肠杆菌七种食源性致病的监测分析。结果:331份食品样品中,分离出目的菌14株,其中沙门菌4株,单核细胞增生李斯特氏菌2株,蜡样芽胞杆菌2株,金黄色葡萄球菌6株,总检出率4.23%。结论:通过主动监测,掌握食源性致病菌的分布情况,及早发现食品的安全隐患,有助于进一步确立风险管理决策,降低人群食源性疾病的发病率。     

开封市售奶茶中蜡样芽胞杆菌的鉴定与分析

目的确认市售奶茶中的蜡样芽胞杆菌污染状况。方法按照GB 4789.14-2014《食品安全国家标准食品微生物学检验蜡样芽胞杆菌检验》和蜡样芽胞杆菌及其呕吐毒素基因的实时荧光PCR鉴定方法,对市售奶茶进行检测并对其中的疑似蜡样芽胞杆菌进行定性和定量鉴定。结果从市售奶茶中检出非呕吐型蜡样芽胞杆菌,其污染量为4.56×104CFU/m L。结论首次在开封市售奶茶中检出高污染量的非呕吐型蜡样芽胞杆菌。     

泰安市婴幼儿食品食源性致病菌检测及耐药性研究

目的了解泰安市婴幼儿食品中常见致病菌污染及耐药状况,为婴幼儿食品安全管理及食源性疾病预警和临床用药提供科学依据。方法依据GB 4789—2010及GB/T 4789—2003检测程序,对泰安市婴幼儿食品进行蜡样芽胞杆菌、阪崎肠杆菌、金黄色葡萄球菌的分离、鉴定及药敏测试,并对阪崎肠杆菌进行毒力基因检测。结果共检测样品260份,检出41株致病菌,总检出率为15.8%。3种致病菌检出率以蜡样芽胞杆菌最高(11.9%),金黄色葡萄球菌最低(1.2%),差异有统计学意义(χ2=35.423,P0.01)。阪崎肠杆菌均对头孢西丁100%耐药,金黄色葡萄球菌对红霉素耐药率为100%,而万古霉素、环丙沙星及苯唑西林均敏感,蜡样芽胞杆菌对万古霉素、环丙沙星及甲氧苄啶100%敏感。7株阪崎肠杆菌hly毒力基因检测全部阳性。结论泰安市婴幼儿食品存在严重的食源性致病菌污染,对婴幼儿的健康构成严重的潜在危害。相关部门应加强监管,确保食品生产安全。临床合理用药以避免耐药菌株产生。