食品中玉米赤霉烯酮化学发光酶免疫方法建立

目的建立检测食品中玉米赤霉烯酮(ZEN)快速灵敏化学发光酶免疫方法。方法采用棋盘滴定法确定化学发光检测ZEN最佳工作条件(抗原包被浓度、包被量、一抗和二抗的工作效价、线性范围和检出限等),建立化学发光检测ZEN的方法并对实际样品进行检测,同时将检测结果与液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)结果进行比较。结果经多次实验,化学发光检测ZEN的工作条件为:玉米赤霉烯酮-牛血清蛋白(ZEN-BSA)最佳包被浓度为0.1μg/mL,包被量为100μL/孔,抗ZEN单克隆抗体的最佳工作效价为1:1600,标准曲线线性范围0.01~50 ng/mL,50%抑制浓度为13.04 ng/mL,ZEN的最低检出浓度为0.007 ng/mL,样品中ZEN的最低检出量为0.15μg/kg,在20~400μg/kg添加水平的回收率范围为66%~115%;用所建方法对23个食品样品进行分析,检测结果与LC-MS/MS结果高度相关(r²=0.98)。结论所建方法准确、灵敏,适用于食品中ZEN污染水平的批量筛选。     

酶联免疫双抗体法测定血清中视黄醇结合蛋白

本文报告了一种酶联免疫测定人血清视黄醇结合蛋白（ＲＢＰ）含量的方法。以辣根过氧化物酶标记人ＲＢＰ抗血清ＩｇＧ，建立的酶联免疫双抗体法具有较好的灵敏度和稳定性，变异系数在１６％以下，血清样品的测定只需几微升。应用该方法测定了６０例健康成人血清ＲＢＰ含量为４４．９０±１４．００μｇ／ｍｌ（Ｍ±ＳＤ）。测定９例烧伤病人、１８例胆结石和胃病手术患者血清ＲＢＰ水平，均明显低于健康成人的水平。     

免疫透射比浊法测定成人血清视黄醇结合蛋白的参考值建立

目的:建立本实验室应用免疫透射比浊法测定成人血清视黄醇结合蛋白(RBP)的参考值范围。方法:使用全自动生化分析仪和免疫透射比浊法试剂盒检测广州地区500名健康成年男性和女性新鲜空腹静脉血清中RBP,按照年龄和性别分别统计其结果,将均数±1.96标准差确定为参考值范围。结果:检测结果在任意两个年龄段之间差异均无统计学意义(t=1.972,P>0.05),但男、女性别之间差异有统计学意义(t=1.965,P<0.05):男性为49.3±11.8mg/L,女性为46.2±12.3mg/L。结论:本实验室应用免疫透射比浊法测定成人血清RBP的参考值范围确定为:男性49.3±23.1mg/L,女性46.2±24.1mg/L;在建立参考值范围时应考虑和分析仪器、检测方法、地域、年龄、性别等影响因素。     

直接化学发光免疫法测定血清25羟基维生素D的性能验证

目的 验证直接化学发光免疫法(CLIA)测定血清25羟基维生素D[25(OH)D]的性能。方法 用意大利DiaSorin的CLIA分析仪测定美国国家标准技术研究院血清标准品(Nist SRM 972a)、DiaSorin质控品、维生素D检测质量外部评估计划盲样(DEQAS)和门诊人群血清中的25(OH)D浓度,测试该方法的功能灵敏度、精密度、准确度、回收率、线性等指标,并检测轻微溶血、4℃下储存5天和-80℃冻存1年以上的血清25(OH)D浓度。结果 该法血清25(OH)D浓度检测的功能灵敏度4 ng/mL,日内和日间相对标准偏差(RSD)8.1%,仪器测量相对误差-3.1%～5.7%,回收率82.8%～112.9%,线性范围7.6～128.1 ng/mL;与新鲜血清相比,轻度溶血或4℃下储存5天对测定结果无影响(P0.05);-80℃冻存1年以上,测定值平均降低7.6%。该方法与常见的几种方法相比,其测定结果的偏差为-2.9%～3.6%;3个不同单位间该方法精密度、准确度和回收率的差异较小。结论 直接CLIA法测定血清25(OH)D的性能符合临床检验方法的基本技术要求,且简便、快速。     

合成肽检测巨细胞病毒酶联免疫方法的建立及应用

目的：应用合成肽建立检测人巨细胞病毒（HCMV）特异敏感的酶联免疫方法，并用于临床检测患者血清中HCMV－IgM。方法：根据人巨细胞病毒PP150氨基酸序列，利用计算机辅助设计。决定含HCMV PP150国强抗原决定簇的单链多肽序列，合成肽作抗原，建立检测抗HCMV－IgM的酶联免疫吸附试验（ELISA）法，并用聚合酶链反应（PCR）方法检测全血中HCMV DNA，比较ELISA与PCR两种方法的相关性。结果：本实验所建立的检测抗HCMV－IgM的ELISA方法具有较好的特异性，正常孕妇血清中抗HCMV－IgM阳性率与HCMV DNA存在相关性。结论：本研究所建立的以合成多肽作抗原检测巨细胞病毒酶联免疫方法具有较好的特异性，简单，快速，适用与临床标本的检测。     

人肌红蛋白化学发光免疫分析定量检测方法的建立及性能评价

目的利用化学发光免疫分析技术,建立一种人肌红蛋白(myoglobin,MYO)定量检测方法。方法采用基于化学发光免疫分析的双抗体夹心法(以纳米磁微粒为固相载体包被抗人MYO抗体,以另一抗体交联碱性磷酸酶为标记物)研制MYO化学发光免疫定量检测试剂盒。并进行性能评估及临床试验。结果该检测方法的线性范围为(1.0~2 500)ng/m L;灵敏度为1.0 ng/m L;批内精密度和批间精密度均小于5%;添加回收率在(100±5)%以内(平均回收率101.92%);当样本中的MYO浓度为40 000 ng/m L时,未发现钩状效应;试剂在37℃放置72h后,稳定性良好,各性能指标均达到要求;相关性试验结果r>0.98,相关性方程为y=0.9837X-8.9256,与Beckman肌红蛋白测定试剂盒(化学发光法)的一致性结果良好。结论本研究建立的MYO化学发光免疫分析定量检测方法的各项性能指标均达到了临床检测要求,可用于临床血清MYO检测。     

放射免疫法与酶联免疫法测定血清铁蛋白的比较

血清铁蛋白是反映机体铁储备的简便和可靠的指标,本文用商业上生产的盒子比较了放射免疫法(RIA)和酶联免疫法(EIA)的准确性,并对两种方法测定血清铁蛋白值进行了比较,两种方法均可获得较好的结果,灵敏度达1μg/ml,同一份血清测定10次CV％在3.62—24.08之间。但血清浓度在10μg/ml以下时标准曲线较平,技术上容易造成误差,故应加大取样量。 一般酶联免疫法测得结果常较放射免疫法测得值高,本实验共测定35份血清,其直线回归方程式为RIA=0.82·EIA+11.8 r=0.98 两者结果密切相关,因此在无条件或不愿接触同位素的实验室,可采用EIA法测定血清铁蛋白,同样可以得到满意的结果。但酶联法影响因素较多,在操作上更要注意。     

MAGIA 120L化学发光酶免疫仪及其临床应用

法国Biotrol Diagnostic公司的MAGIA 120L是应用磁性颗粒分离技术的全自动化学发光酶免疫仪。其机械结构完善,具有高灵敏度、准确可靠、反应速度快、操作界面良好和触屏功能及检测项目较多和报告结果及时等优点,值得在临床上应用推广。     

磁微粒化学发光检测人血清中NT-proBNP方法的建立

目的利用化学发光免疫分析快速法定量检测人血清中NT-proBNP。方法将生物素和吖啶酯衍生物分别标记识别NT-proBNP抗原的2个抗体,当抗原与试剂混合后形成的双抗体夹心复合物被链霉亲和素磁珠抓捕分离,复合物在激发液的作用下发光,该相对发光强度(RLU)与样本中的NT-proBNP浓度呈正相关。结果性能分析显示,这种检测方法的线性范围是8 pg/ml~2 0000 pg/ml,线性相关系数(r)≥0.999,检测下限(LOB)≤6 pg/ml,其批内精密度≤5%,批间精密度≤8%,添加回收率在88.3%~106.1%,稀释回收率在93.4%~106.8%。与罗氏Pro BNPⅡ试剂盒比对,检测临床样本的浓度相关性为r2=0.979 7。结论该试剂盒的优良性能为临床检测人血清中NT-proBNP含量提供了坚实的基础。     

酶促化学发光免疫分析检测梅毒抗体的临床应用评价

目的以梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验(TPPA)为标准参考方法,采用ROC曲线分析,判断酶促化学发光免疫分析(CLIA)对梅毒抗体检测的应用价值。方法回顾性分析218例CLIA检测梅毒抗体阳性血清及100例阴性血清及其与TPPA结果进行比对,采用SPSS19.0统计软件进行ROC曲线分析。结果 ROC曲线分析曲线下面积0.942,在S/CO=7.22时,CLIA检测梅毒抗体的灵敏度96%,特异性88.2%。结论 CLIA检测梅毒抗体具有较好的灵敏度与特异性,适用于输血或手术前的大批量筛查。     

原发性肝癌肿瘤标志物化学发光酶免疫分析方法在临床中的应用

目的探讨原发性肝癌肿瘤标志物化学发光酶免疫分析法在临床中的应用价值。方法选取2013年2—8月收治的肝癌患者100例及正常体检者100例,将肝癌患者作为观察组,正常体检者作为对照组。两组患者进入院后,分别检测AFU(血清α-L-岩藻糖苷酶)、AFP(甲胎蛋白)、CHE(胆碱酯酶)、GGT(γ-谷氨酰基转移酶)、SF(铁蛋白)等指标,并进行对比分析。计量资料采用t检验,计数资料采用χ2检验,P0.05为差异有统计学意义。结果观察组AFU、AFP、CHE、SF分别为(52.00±0.20)、(32.00±1.20)、(45.25±1.10)×103U/L、(252.00±1.20)μg/L,对照组分别为(32.00±1.20)、(18.00±0.10)、(5.25±1.10)×103U/L、(198.20±0.20)μg/L,两组比较差异均有意义(t=164.399、116.264、257.130、442.233,均P0.05)。观察组AFU、AFP、CHE、SF检测阳性率分别为8.00%、44.00%、54.00%、57.00%,对照组分别为43.00%、70.00%、85.00%、87.00%,两组比较差异均有统计学意义(χ2=32.241、13.792、22.668、22.321,均P0.05)。结论检测肿瘤标志物化学发光酶免疫分析法对原发性肿瘤的临床诊断与分析中起到至关重要的作用,扮演着必不可少的角色,具有重要的临床应用价值与可行性,值得推广应用。     

人胰岛素定量测定试剂盒化学发光免疫分析法的建立及方法学评价

目的建立了一种定量测定人血清中胰岛素的化学发光免疫方法 ,并对其试剂盒性能进行方法学评价。方法试剂盒采用双抗体夹心法,以磁微粒交联的单抗作为捕获抗体,碱性磷酸酶标记的单抗作为检测抗体,分别对本试剂盒的溯源性、参考范围、最低检测限、线性、准确度、精密性、分析特异性、抗干扰性、药物影响及样本比对方面进行评价。结果用胰岛素NIBSC国际标准品(66/304)进行溯源,相关性方程为y=1.0335x+0.3349,相关系数r=0.999;建立了健康人群空腹血清胰岛素参考范围,覆盖2.5%~97.5%百分位数人群的参考值范围为1.59μIU/m L~14.64μIU/m L;对此方法建立的试剂进行了方法学评价,最低检测限可达0.08μIU/m L;线性在0μIU/m L~300μIU/m L内,相关系数r=0.9999;精密性CV<8%;准确度在±10%之内;当样本中的胰岛素浓度为200 000μIU/m L时,未发现钩状效应;与Roche电化学发光系统测定结果显著相关,相关方程为y=0.9541x+0.177,相关系数r=0.9917,两种方法学的测定结果具有较高的一致性。结论本研究建立的人胰岛素化学发光免疫分析定量检测试剂盒的各项性能指标均达到了临床检测要求,可用于临床血清胰岛素的检测。     

超敏妊娠相关血浆蛋白A均相化学发光免疫检测方法的建立

目的建立有关急性冠脉综合征(ACS)患者血清中妊娠相关血浆蛋白A(PAPP-A)的均相化学发光免疫检测方法。方法使用PAPP-A抗体与受体微球和生物素连接,以双抗体夹心法,生物素化抗体和受体微球与血清中PAPP-A结合,以鲁米诺氧途径免疫分析(LOCI)检测PAPP-A浓度。评价此方法各项性能指标。数据分析使用ELISA Calc软件。结果本研究PAPP-A检测方法灵敏度为0.55 m U/L,回收率为95%~100%;线性、稳定性及特异性良好;重复性批内变异系数(CV)10%,批间CV15%;检测不易受血红蛋白、甘油三酯和胆红素的干扰。该方法与时间分辨荧光免疫方法(TRFIA)进行相关分析(r=0.990,P0.05)。检测104例正常健康人(男/女为43/61,年龄为24岁~69岁)血清PAPP-A,初步推算正常参考范围为1.60 m U/L~25.12 m U/L。结论本研究所建立的超敏PAPP-A检测方法准确性好,灵敏度、回收率、特异性较高,与TRFIA相关性良好,评价了其应用于临床检测的可行性,并为参考范围的确定提供了一定的依据。     

免疫-PCR检测HBsAg方法的建立及临床应用

目的：建立一种免疫聚合酶链反应技术。方法：与ELISA相比较，对其敏感性、特异性、重复性进行试验研究。结果：该法检测HBsAg的最低限是1pg／ml，敏感性是ELISA法的800倍，且特异性强，重复性好。应用此方法对51例乙肝患者血清中的HBsAg进行检测，阳性率为17．6％（9／51）。结论：此方法敏感性高、特异性强、重复性好，对乙肝的诊断、治疗及预后均有重要意义。     

化学发光免疫分析技术的应用进展

化学发光免疫分析(CLIA)技术借助免疫标记技术将化学发光测定与免疫反应结合,可进行毒物定量检测分析,具备灵敏度高、线性范围宽、操作简便等优点。该技术已在临床检验、农药残留及生物毒素检测、药物分析等领域广泛应用。本文特对CLIA技术的应用进展进行综述,并对其在急性中毒临床毒物检测中的应用前景进行展望。     

化学发光免疫分析法与酶联免疫法检测艾滋病抗体的对照研究

目的对照研究化学发光免疫分析法(CLIA)与酶联免疫法(ELISA)检测艾滋病(HIV)抗体的效果,以便探究CLIA检测HIV抗体的可行性。方法于2013年2月至2015年3月随机抽查我市3 542例艾滋病高危人员,采集血清,分别采用CLIA与ELISA法检测血清中的HIV抗体,并采用蛋白印迹检测法对检测结果进行确证。结果 ELISA法检测显示血清标本为阳性的56份,阳性率为1.58%,而CLIA检测阳性61份,阳性率为1.72%;3 542份血清标本中,11份标本ELISA法与CLIA法检测结果不一致;CLIA法的阳性预测值为96.72%,检测灵敏度为98.33%,特异度为99.94%;ELISA法的阳性预测值为96.43%,检测灵敏度为90.00%,特异度为99.94%;ELISA法与CLIA法在阳性预测值、检测灵敏度、特异度等指标上无显著的差异性(P>0.05)。结论 CLIA的灵敏度、特异度、准确性高,可用于HIV抗体检测。     

化学发光免疫分析法与酶免疫法检测艾滋病抗体时的对照分析

目的:研究化学发光免疫分析法与酶免疫法检测艾滋病抗体的临床效果,探究两种检测方法的临床可行价值。方法:选取我市2014年2月至2018年2月进行抽查的4670例艾滋病高危人员作为本次的研究对象,在采集血清样本后,分别对其进行化学发光免疫分析法与酶免疫法进行HIV抗体检测,同时对所有检测样本,同时进行蛋白印迹检测法,确定两组检测结果的准确性。结果:经临床检测对比,酶免疫法检测结果中有21份阳性,所占比率1.52%,化学发光免疫分析法检测结果中显示28份阳性,所占比率1.67%,其中,酶免疫法检测结果与化学发光免疫检测结果中,有23例检测结果不一致,经临床对比两种不同检测方法,在检测中的特异性以及灵敏性能上均无显差异,P0.05,这表明,两种方法在临床中,都有较好的应用价值。结论:在临床检测艾滋病抗体中,不论化学发光免疫分析法,还是酶免疫法检测都能较为精确的判定患者是否感染HIV,因此这两种方法,化学发光免疫分析法检测灵敏性更高,可应用于HIV的临床检测中。     

酶联免疫法和化学发光免疫法检测乙肝病毒标志物的对比研究

目的：探讨酶联免疫法和化学发光免疫法检测乙肝病毒标志物的效果。方法：选取在2010年5月到2013年5月来我院接受治疗的100例疑似乙型肝炎患者,随机分成两组,对照组和观察组,每组各50人,对观察组患者的血清进行化学发光免疫法检测,对照组患者的血清经酶联免疫法检测,比较两组患者经两种方法检测后的乙肝病毒标志物检出率及其灵敏度。结果：对乙肝病毒标志物的五项检测结果中,HBeAb、HBeAg、HBsAb三项检测结果的差异不明显,没有统计学意义即p〉0．05;HBsAg和HBcAb的检测结果差异明显,有统计学意义即p〈0．05。结论：采用两种方法对乙肝病毒标志物进行检测时,化学发光免疫法较酶联免疫法的灵敏度和检出率都高,可以在临床免疫测定方面得到广泛的应用。     

应用免疫酶染色法快速测定血清中伤寒抗体

血清中伤寒抗体的测定一般都用肥达氏反应,此法操作繁锁且完成时间长。张知今等曾用免疫酶染色法(IES)测定水弧菌抗体。本文根据其原理应用于测定血清中伤寒沙门氏菌抗体。现介绍如下。1 材料与方法1.1 材料伤寒沙门氏菌O及H标准菌液(100亿/ml,购自浙江省监检中心(批号89-0406和89-0420)。抗伤寒沙门氏菌O及H免疫血清(原效价均为1:1280):兰州生物制品研究所产(批号7-04)。辣根过氧化物酶标记马抗人IgG结合物:浙江省卫生防疫站供给,工作稀释度1:120。     

C-反应蛋白乳胶增强免疫比浊检测方法研究

正C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP)是由肝脏合成的一种急性时期反应蛋白,具有多种生物活性,被认为最敏感的炎症指标之一~[1]。炎症、感染和组织损伤均可使其浓度升高,升高程度取决于炎症刺激的强度~[2]。在各种急性和慢性感染、组织损伤、恶性肿瘤、手术创伤时会迅速升高,病变缓解时又迅速降至正常水平~[3-6]。CRP可以激活补体和加强吞噬