RhBMP-2通过抑制PI3K/Akt信号通路对肝细胞癌SK-Hep-1细胞增殖影响的体外研究

目的探讨体外条件下rhBMP-2对肝细胞癌SK-Hep-1细胞系增殖能力的影响及其作用机制。方法无血清条件下,不同浓度的rhBMP-2处理肝癌SK-Hep-1细胞,通过MTT法检测不同浓度的rhBMP-2对细胞增殖能力的影响。利用流式细胞分析技术检测细胞周期,通过Real-time PCR检测不同浓度的rhBMP-2对p21、cyclin E表达的影响,应用Western blot技术检测不同浓度的rhBMP-2处理对p21、cyclin E蛋白水平及对PI3K/Akt磷酸化水平的影响。结果无血清条件下,不同浓度的rhBMP-2处理细胞,研究发现rhBMP-2可显著抑制肝癌SK-Hep-1的增殖能力。无血清条件下,不同浓度的rhBMP-2处理细胞24小时,发现rhBMP-2可增加G1期细胞所占比率。rhBMP-2可显著促进p21的表达,显著抑制cyclin E的表达,并显著抑制PI3K/Akt信号通路的磷酸化过程。结论研究证实在体外条件下rhBMP-2通过抑制PI3K/Akt信号通路的磷酸化过程对肝细胞癌SK-Hep-1细胞增殖能力发挥显著抑制作用,从基础水平进一步论证了rhBMP-2的临床应用不能显著增加肝癌的患病风险,为脊柱融合手术及骨不连等骨科疾病的治疗中应用rhBMP-2提供了一定的理论基础。     

苦参碱对HepG2细胞DLK1基因表达及细胞生长的影响

目的:探讨苦参碱能否重新诱导HepG2细胞DLK1基因被印记及对细胞生长的影响。方法:RT-PCR检测不同浓度苦参碱处理HepG2细胞后DLK1基因表达水平变化;MTT、transwell和流式细胞术检测苦参碱作用后HepG2细胞的增殖、凋亡及侵袭力的变化。结果:HepG2细胞经苦参碱处理后,DLK1基因的mRNA表达量降低,细胞的增殖能力、侵袭能力均降低,细胞抑制在G1期。结论:苦参碱能有效地抑制DLK1基因的表达,且能抑制肿瘤细胞HepG2生长、增殖和侵袭能力。     

TIMP-2基因对白血病细胞系SHI-1细胞在裸鼠体内生长的调节作用

目的 研究高表达组织型基质金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP-2)基因对人急性单核细胞白血病细胞系SHI-1细胞在裸鼠体内浸润能力的影响.方法 ①经尾静脉将转染TIMP-2基因的SHI-1(SHI-1-TIMP-2)细胞与转染空载体MSCV的SHI-1(SHI-1-MSCV)细胞1×107分别接种于经切脾、环磷酰胺腹腔注射和全身亚致死量照射等预处理的6周龄裸鼠体内.接种后第30天各组处死8只裸鼠,其余8只观察生存期,通过病理学检测及CD45抗体免疫组织化学染色检测SHI-1细胞在裸鼠体内各脏器中浸润情况,并埘中枢神经系统白血病(CNSL)进行分级.②将5×106个SHI-1-TIMP-2和SHI-1-MSCV细胞分别接种于未经预处理的6周龄裸鼠前肢腋侧皮卜,各组10只.分别丁第23及30大各处死5只,测量肿瘤体积,并行TIMP-2及vWF抗体免疫组化染色,观察TIMP-2蛋白表达及微血管密度.结果 经尾静脉接种SHI-1-TIMP-2细胞的裸鼠生存期较接种SHI-1-MSCV细胞者明显缩短,体内各脏器中成瘤增加,苏木精-伊红染色及CD45抗体免疫组化染色显示脏器中白血病细胞浸润增加,CNSL发生程度更严重.接种于裸鼠皮下时,尽管SHI-1-TIMP-2细胞成瘤时间提前,其在第23及30天时所形成的瘤块体积较SH1-1-MSCV细胞组显著减少,并出现中央坏死区,免疫组化染色示瘤块TIMP-2蛋白表达增加,而微血管密度减少.结论 TIMP-2基因具有多样性,在肿瘤细胞浸润及其转移中似有双相调节作用.     

肝癌细胞HepG2外泌体对其自身生长行为的影响及其机制研究

目的探讨肝癌细胞HepG2外泌体对细胞增殖、迁移、周期和凋亡的影响及其机制。方法培养肝癌细胞HepG2并用差速离心法提取其外泌体,采用粒径分析、透射电镜、蛋白质印迹法(Western blot)等方法对其进行鉴定。将外泌体与肝癌细胞HepG2共培养,采用细胞划痕实验比较其对细胞增殖能力的影响;采用Transwell实验比较其对细胞迁移能力的影响;采用流式细胞仪分析其细胞周期变化;采用实时荧光定量PCR检测实验组和对照组的细胞周期蛋白(Cyclin D)、细胞周期蛋白依赖性激酶调节亚基1(CKS1)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关x蛋白(Bax)的相对表达水平。结果提取后的外泌体经过Western blot实验,CD63和CD9均有条带出现,颗粒大小在30～100nm,电镜形态正常。与对照组比较,实验组的细胞增殖率较高,肿瘤迁移能力提升;细胞G1期缩短,G2期延长;Cyclin D、CKS1和Bax相对表达水平均上升,Bcl-2相对表达水平降低。结论肝癌细胞HepG2外泌体通过调控Cyclin D、CKS1基因缩短其细胞周期,调控Bax、Bcl-2基因抑制细胞凋亡,从而对其增殖和迁移能力起促进作用。     

四逆汤对hepa1-6肝癌细胞的抑瘤作用和细胞周期影响的体内外实验研究

目的:研究四逆汤对肝癌细胞的体内外抗癌作用;从细胞周期角度揭示温阳法抗癌的作用机制;为采用温阳法治疗肝癌提供理论与实验依据,为肝癌的防治开辟新的研究领域。方法:运用细胞培养技术,MTT法,整体小鼠移植瘤实验等从整体及细胞水平评价四逆汤对肝癌细胞增殖的抑制作用。并采用流式细胞术(FCM)检测细胞周期变化,从细胞周期角度观察四逆汤对肝癌细胞周期的影响。结果:①四逆汤对肝癌细胞有显著的抑制作用,具有浓度依赖性。②四逆汤对免疫器官具有保护作用,脾脏指数与胸腺指数明显上升,与化疗组相比有显著差异(P0.05),四逆汤与化疗联合,脾脏指数与胸腺指数明显上升,与单纯化疗组比较有显著差异(P0.05)。③四逆汤可以通过G0/G1期阻滞诱导细胞凋亡,与化疗联合出现S期阻滞。     

体内实验检测红景天甙对SACC-2细胞的影响

目的探究红景天甙对体内SACC-2细胞增殖作用的影响。方法小鼠右侧腹股沟处行SACC-2细胞皮下注射,注射细胞量为3×106/只。种瘤第2天通过腹部注射的方式对小鼠进行不同的治疗处理,分为红景天甙处理组、5-Fu处理组、联合用药组及生理盐水处理组。治疗时间自种瘤第2天开始,周期为2天,共进行5次治疗。取出含瘤组织后利用HE染色观察药物对肿瘤形态的影响;免疫组织化学染色检测红景天甙处理对SACC-2细胞增殖的影响和对SACC-2细胞凋亡相关蛋白表达的影响。结果 HE染色显示生理盐水组细胞内胞核异型性大,核染色较深,红景天甙组、5-Fu组和联合用药组肿瘤细胞内胞核异型性较小,核染色较浅,其中联合用药组胞核染色最浅,细胞核异型性最小。免疫组织化学染结果显示,生理盐水组Ki-67阳性表达细胞多,阳性率高,联合用药组表达细胞最少,阳性率低,红景天甙组阳性率低于联合用药组。结论红景天甙对SACC-2具有抑制作用,且这种作用是通过抑制肿瘤细胞的增殖来完成的。     

人脐带源间充质干细胞条件培养液对人肝癌HepG2细胞生长的影响

目的 探讨人脐带源间充质干细胞(HUC-MSC)条件培养液(CM)对人肝癌HepG2细胞生长的影响.方法 选择2011年2月至2014年1月于中国人民解放军第105医院妇产科分娩的35例足月妊娠剖宫产健康胎儿脐带为研究对象,取其用于分离、培养并扩增HUC-MSC.传代扩增至第3代HUC-MSC融合达80％时,更换培养液,继续培养24 h后收集上清液,即为HUC-MSC-CM备用.将对数生长期的人肝癌HepG2细胞按照随机数字表法随机分成相等的3份,分别于含50％,20％及不含HUC-MSC-CM的培养中培养,并分别纳入高含量组、低含量组和空白对照组.采用倒置显微镜观察人肝癌HepG2细胞生长状态,采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法和细胞划痕愈合实验分别检测3组人肝癌HepG2细胞增殖和迁移情况,并采用流式细胞术(FCM)法检测各组细胞的细胞周期变化情况.本研究遵循的程序符合中国人民解放军第105医院人体试验委员会所制定的伦理学标准,得到该委员会批准,脐带获取前,均征得孕妇知情同意,并与之签署临床研究知情同意书.结果 ①所分离的原代HUC-MSC培养至第3代后,细胞形态开始比较均一.②MTT法检测结果显示,人肝癌HepG2细胞培养24,48和72 h时,3组相对吸光度(A)值比较,差异均有统计学意义(F=21.330,6.223,9.345;P=0.004,0.032,0.027),且在这3个时间点,高含量组和低含量组相对A值均显著高于空白对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05),高含量组相对A值亦显著高于低含量组,差异亦均有统计学意义(P＜0.05).③划痕愈合实验结果显示,3组人肝癌HepG2细胞过河时间比较,差异有统计学意义(F=12.860,P=0.025),且高含量组人肝癌HepG2细胞过河时间短于低含量组和空白对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05),低浓度组人肝癌HePG2细胞过河时间亦短于对照组,差异亦有统计学意义(P＜0.05).④FCM法检测人肝癌HepG2细胞周期结果显示,3组G0/G1期和S期人肝癌HepG2细胞比例比较,差异均有统计学意义(F=30.600,30.590;P＜0.05).且与空白对照组相比,高含量组和低含量组人肝癌HepG2细胞G0/G1期细胞比例显著降低,S期细胞比例显著增加,差异均有统计学意义(P＜0.01);且高含量组G0/G1期细胞比例比低含量组下降更显著,而S期细胞比例显著增加,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 HUC-MSC-CM可促进入肝癌HepG2细胞增殖和迁移,并可促进人肝癌HepG2细胞周期G1/S转换.     

肝癌细胞HepG2外泌体对其自身生长行为的影响及其机制研

目的探讨肝癌细胞HepG2外泌体对细胞增殖、迁移、周期和凋亡的影响及其机制.方法培养肝癌细胞HepG2并用差速离心法提取其外泌体,采用粒径分析、透射电镜、蛋白质印迹法(Western blot)等方法对其进行鉴定.将外泌体与肝癌细胞HepG2共培养,采用细胞划痕实验比较其对细胞增殖能力的影响;采用Transwell实验...     

两组中药复方影响前列腺癌细胞生长的体内外实验研究

目的 探讨两组中药复方对前列腺癌细胞PC-3 体内外生长的影响及其可能的作用机制.方法 以临床常用的抗癌中药组成两组复方(复方B:白花蛇舌草、半枝莲、土茯苓和莪术;复方C:白花蛇舌草、半枝莲、土茯苓、莪术、三棱和皂角刺),分别用等量生理盐水和两组复方的水煎剂对成年雄性去势SD 大鼠灌胃后取血制成空白对照(A 组)和含药血清(B、C组);三组血清加入PC-3 的细胞培养液,应用MTT 法、流式细胞术、Hoechst 染色法检测细胞存活率、细胞周期分布及凋亡的差异.建立BALB/C 裸鼠荷前列腺癌动物模型,分别用生理盐水和两组复方的水煎剂灌胃,观察裸鼠肿瘤生长情况,HE 染色观察肿瘤组织形态学变化,TUNEL 法检测肿瘤细胞凋亡情况,免疫组化染色法检测肿瘤组织中Ki-67 表达.结果 体外细胞培养实验中B 组的细胞存活率最低,且随着培养时间的增加而持续降低;C 组的细胞存活率较B 组高,但显著低于对照组;两个复方组的S 期细胞比例显著低于对照组,而G0/G1 期细胞比例显著高于对照组(均P ＜0.05);B 组和C 组的凋亡细胞比例约为30%和10%,均多于对照组.裸鼠体内实验中B 组的抑瘤率大于C 组的抑瘤率(23% vs.18%),B 组的平均瘤重最小,平均肿瘤体积最小;B 组的TUNEL 阳性率最高,Ki-67 阳性率最低.结论 两组中药复方在体外显著抑制PC-3 细胞增殖,同时诱导其凋亡,在体内也能抑制肿瘤生长;并且复方B 的抑瘤作用最强.     

缺氧对DEC1在肝癌细胞中表达的影响

目的探讨肝癌中分化型胚胎软骨发育基因1(differentiated embryo-chondrocyte expressed gene 1,DEC1)的表达水平,并评价缺氧对其表达的影响。方法选取人正常肝细胞系QSG-7701及肝癌细胞系BEL-7402、SMMC-7721,分别进行正常氧培养和缺氧培养(0、2、4、6、24和48 h),用RT-PCR和western blot检测各组缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)、DEC1 mRNA及蛋白质的水平,并进行相关性分析。结果正常氧培养时,BEL-7402、SMMC-7721细胞DEC1 mRNA和蛋白质表达均明显高于QSG-7701细胞(P均<0.01)。不同时相缺氧时HIF-1αmRNA表达无明显变化(F=1.995,P>0.05),但随缺氧时间延长,HIF-1α蛋白、DEC1 mRNA及DEC1蛋白表达显著增加(F分别为18.950、92.567和15.775,P均<0.01)。HIF-1α蛋白与DEC1 mRNA及DEC1蛋白的表达均呈正相关(r分别为0.885、0.826,P均<0.05)。结论 DEC1在人肝癌细胞中高表达,缺氧可诱导肝癌细胞中DEC1表达升高。     

莲房原花青素对人肝癌细胞HepG2生长及凋亡的作用

目的：通过莲房原花青素（LSPC）抑制人肝癌细胞HepG2的生长及诱导其凋亡探讨原花青素抗肿瘤作用的分子机制。方法：以四甲基噻唑蓝(MTT)来分析不同浓度LSPC对人肝癌细胞HepG2的存活率的影响；用流式细胞术(FCM)分析细胞周期和细胞凋亡；通过RT-PCR分析LSPC引起的生长抑制、DNA损伤基因GADD45β、GADD153、GADD34表达水平的变化。结果：原花青素可诱导HepG2细胞凋亡，药物组的生长明显受到抑制（P<0.05），且还呈浓度依赖性。生长抑制损伤基因GADD45β、GADD153、GADD34表达水平随着LSPC浓度增加表达量也增加。结论：原花青素可抑制人肝癌细胞HepG2凋亡，具有抗肿瘤的药理作用。     

罗格列酮对CD34修饰脱细胞血管支架体内生长的影响

背景：早期研制的脱细胞血管基质支架上预载CD34＋抗体会促进其再内皮化,但同时会加重支架内血管内膜增生。国内外研究证实过氧化物酶增殖体受体γ激动剂罗格列酮在体外可抑制平滑肌细胞增生及迁移,可减少血管损伤处内膜增生。目的：进一步验证过氧化物酶增殖体受体γ激动剂罗格列酮对CD34抗体修饰脱细胞血管支架体内移植后平滑肌细胞生长及内膜增生的影响。方法：获取新鲜兔颈动脉,应用光化学偶联法将CD34抗体固定到去细胞光氧化的血管支架上,构建抗体修饰的组织工程血管。将制备的血管分别移植于实验兔的颈动脉上,其中对照组予以移植单纯光氧化处理的脱细胞血管,CD34组予以CD34抗体预载的血管,罗格列酮组移植CD34抗体预载的血管并予喂养罗格列酮。结果与结论：移植后10d：对照组移植血管内皮样细胞数量稀少,CD34组和罗格列酮组可见较多的内皮样细胞覆盖;CD34组血管内膜较罗格列酮组厚,α-SMA染色显示CD34组血管平滑肌细胞数量较后者为多,其差异有显著性意义。移植后30d：CD34组和罗格列酮组血管内皮样细胞基本覆盖管腔全层,对照组内皮样细胞数量仍较少;另外,CD34组血管内膜及管壁中可见大量的平滑肌样细胞及细胞外基质沉积,而罗格列酮组血管结构中平滑肌样细胞数量相对较少,内膜增生亦较轻。提示CD34修饰脱细胞血管支架可促进其内皮细胞的增生,罗格列酮可抑制血管支架中平滑肌细胞的增殖,减少内膜增生。     

罗格列酮对CD34修饰脱细胞血管支架体内生长的影响

背景:早期研制的脱细胞血管基质支架上预载CD34+抗体会促进其再内皮化,但同时会加重支架内血管内膜增生.国内外研究证实过氧化物酶增殖体受体γ 激动剂罗格列酮在体外可抑制平滑肌细胞增生及迁移,可减少血管损伤处内膜增生.目的:进一步验证过氧化物酶增殖体受体γ 激动剂罗格列酮对CD34 抗体修饰脱细胞血管支架体内移植后平滑肌细胞生长及内膜增生的影响.方法:获取新鲜兔颈动脉,应用光化学偶联法将CD34 抗体固定到去细胞光氧化的血管支架上,构建抗体修饰的组织工程血管.将制备的血管分别移植于实验兔的颈动脉上,其中对照组予以移植单纯光氧化处理的脱细胞血管,CD34 组予以CD34抗体预载的血管,罗格列酮组移植CD34 抗体预载的血管并予喂养罗格列酮.结果与结论:移植后10 d:对照组移植血管内皮样细胞数量稀少,CD34 组和罗格列酮组可见较多的内皮样细胞覆盖;CD34组血管内膜较罗格列酮组厚,a-SMA 染色显示CD34 组血管平滑肌细胞数量较后者为多,其差异有显著性意义.移植后30 d:CD34 组和罗格列酮组血管内皮样细胞基本覆盖管腔全层,对照组内皮样细胞数量仍较少;另外,CD34 组血管内膜及管壁中可见大量的平滑肌样细胞及细胞外基质沉积,而罗格列酮组血管结构中平滑肌样细胞数量相对较少,内膜增生亦较轻.提示CD34 修饰脱细胞血管支架可促进其内皮细胞的增生,罗格列酮可抑制血管支架中平滑肌细胞的增殖,减少内膜增生.     

缺氧对人肝癌HepG2细胞HIF-1α、PCNA表达水平的影响

目的：探讨缺氧对人肝癌HepG2细胞中缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）及增殖细胞核抗原（PCNA）表达的影响。方法：体外培养HepG2细胞,通过CoCl2化学模拟缺氧作用,采用实时荧光定量聚合酶链式反应实验（Real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,PCR）检测基因HIF-1α、PCNA mRNA水平变化,蛋白质印迹（Western Blot,WB）检测HIF1-1α、PCNA蛋白表达水平的变化,细胞化学染色检测HIF-1α、PCNA蛋白表达变化。结果：CoCl2导致的化学缺氧可诱导人肝癌HepG2细胞HIF-1α、PCNA的上调表达。结论：缺氧可提高HIF-1α的表达,可能促进肝癌细胞的进一步增殖。     

Beclin1基因过表达对肝癌细胞生物学行为的影响机制研究

目的 探讨自噬基因Beclin1对肝癌细胞生物学行为的影响机制.方法 蛋白质印迹法检测Beclin1在正常肝细胞系LO-2及肝癌细胞系HepG2、QSG7701、Hep3B、SMMC7721、HUH-7、BEL7402中的表达情况;实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)试验检测Beclin1 mRNA的转录和翻译水平....     

肝素酶RNAi对HepG2肝癌细胞生物学行为的影响

目的利用筛选出的肝素酶有效干扰细胞株HepG2/RNAi/1和HepG2/RNAi/3研究肝素酶RNAi对HepG2肝癌细胞生物学行为的影响。方法通过MTT实验、流式细胞技术、平皿克隆形成实验、Transwell侵袭实验、裸鼠成瘤实验分别检测HepG2肝癌细胞肝素酶RNAi后生长速度、单个细胞形成克隆能力、侵袭能力及成瘤能力的变化。结果MTT实验表明HepG2/RNAi/1与HepG2/RNAi/3组细胞增殖能力明显低于HepG2组和HepG2/RNAi/N组;流式细胞生长周期实验表明,与HepG2和HepG2/RNAi/N细胞相比,HepG2/RNAi/1与HepG2/RNAi/3 G0/G1期细胞比例增加,而增殖指数下降;平皿克隆形成实验表明HepG2/RNAi/1与HepG2/RNAi/3组单个细胞形成克隆的能力与HepG2组和HepG2/RNAi/N组相比显著降低[分别为(34±4)、(26±5)和(138±7)、(123±22),P<0.05)];Transwell体外侵袭实验表明,HepG2/RNAi/1与HepG2/RNAi/3细胞穿膜数较HepG2和HepG2/RNAi/N细胞穿膜数明显减少[分别为(85.1±9.1)、(78.1±10.4)和(182.2±9.7)(、183.5±9.3),P<0.05)];裸鼠成瘤实验显示,HepG2、HepG2/RNAi/N细胞成瘤率为100%,虽然HepG2/RNAi/1细胞成瘤亦为100%,但裸鼠皮下肿瘤体积较HepG2、HepG2/RNAi/N细胞明显缩小[分别为(0.099±0.030)和(0.585±0.135)(、0.690±0.099),P<0.01)],而HepG2/RNAi/3细胞裸鼠皮下未见肿瘤形成。结论肝素酶RNA干扰可以明显抑制HepG2肝癌细胞增殖速度、单个细胞克隆形成能力、体外侵袭能力以及裸鼠皮下成瘤能力。     

lincRNA ULK4P2对肝癌细胞生物学行为的影响

目的通过干扰肝癌细胞株中长链基因间非编码RNA ULK4P2（lincRNA ULK4P2）的表达,初步观察lincRNA ULK4P2对肝癌细胞生物学行为的影响。 方法运用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测lincRNA ULK4P2在不同肝癌细胞株和正常肝细胞株中的表达,根据RT-qPCR检测结果,选择肝癌细胞株HepG2进行后续干扰实验。将针对lincRNA ULK4P2的小干扰RNA（siRNA）序列,包括siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3、siRNA -mock（空白对照）、siRNA -Scramble（将目的siRNA序列打乱后重新组合所得的阴性对照)转染HepG2细胞,根据转染序列siRNA后对HepG2细胞lincRNA ULK4P2的干扰效果,选择siRNA-2进行之后的功能检测。应用siRNA下调HepG2细胞中lincRNA ULK4P2的表达,运用CCK-8技术研究lincRNA ULK4P2表达下降对肝癌细胞增殖情况的影响,运用流式细胞仪检测lincRNA ULK4P2表达下降对肝癌细胞凋亡和细胞周期分布的影响。对CCK-8实验中siRNA-2组、siRNA-mock组和siRNA-Scramble组HepG2细胞增殖活性（吸光度）的比较采用单因素方差分析。对分别转染siRNA-2、siRNA-mock、siRNA-Scramble的HepG2细胞通过流式细胞仪检测所得细胞周期分布情况,采用单因素方差分析。 结果CCK-8实验显示,与siRNA-mock组和siRNA-Scramble组比较,siRNA-2组HepG2细胞在转染后72 h增殖活性明显下降,差异具有统计学意义（P<0.05）。下调HepG2细胞lincRNA ULK4P2的表达后,细胞各个周期时相中细胞数目无明显变化;siRNA-2组HepG2细胞中G2/M期细胞的比例（43.92%）相对于siRNA-mock组（7.81%）和siRNA-Scramble组（8.21%）明显上升,差异具有统计学意义（P<0.05)。 结论lincRNA ULK4P2可能参与了肝癌细胞增殖和细胞周期的分子调控过程。     

肝癌干细胞标志物及细小病毒H-1非结构蛋白NS-1对肝癌干细胞生长的影响

目的:研究肝癌细胞系SMMC7721肿瘤干细胞表面标志物,探讨细小病毒H-1非结构蛋白NS-1对肝癌细胞的生长抑制作用,以及其对肝癌细胞中具有干细胞特性群体的影响。方法:用流式细胞仪将肝癌细胞按细胞表面标志CD133、CD44进行分离,分为CD133+CD44+、CD133+CD44-、CD133-CD44+、CD133-CD44-4个群体,采用脂质体法将细小病毒H-1非结构蛋白NS-1质粒转染入人肝癌细胞SMMC7721,采用G418筛选稳定转染的细胞克隆,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测转染细胞NS-1基因的表达。流式细胞仪分析SMMC7721转染前后肿瘤干细胞表面标志CD133、CD90、CD44的表达和细胞生长周期,检测细胞群体的变化。以裸鼠成瘤实验和软琼脂克隆形成实验评价具肿瘤干细胞性质的肝癌细胞表面标志物以及细小病毒H-1非结构蛋白NS-1转染对肝癌细胞生长的影响。结果:肝癌SMMC7721细胞分成CD133+CD44+、CD133+CD44-、CD133-CD44+、CD133-CD44-4组亚群的细胞存在着异质性,4组亚群细胞中均有少数肿瘤干细胞样细胞能在软琼脂上形成克隆,其中CD133+CD44+、CD133+CD44-亚群克隆形成率分别为3.5%和1.8%,CD133-CD44+、CD133-CD44-亚群克隆形成率为0.7%和0.5%。转染细小病毒H-1非结构蛋白NS-1后,4组亚群细胞克隆的形成率都显著下降。裸鼠成瘤实验提示,CD133+表型的细胞成瘤能力强于CD133-表型细胞,CD133-CD44+亚群细胞成瘤能力最弱。流式细胞仪分析显示转染NS-1后,CD133+群体细胞被明显抑制,由31.9%下降至6.3%,而CD90+和CD44+的表达未出现改变;转染NS-1后细胞S期百分率明显下降。结论:肝癌细胞表型为CD133+CD44+和CD133+CD44-亚群中富含肝癌干细胞,转染细小病毒H-1非结构蛋白基因NS-1的部分亚群SMMC7721细胞生长被抑制,提示其对肝癌细胞株中具有干细胞特性的CD133+群体有一定的抑制效应。     

重组TRAIL抑制7402肝癌细胞生长的实验研究

目的　重组TRAIL对BALB/c裸鼠肝癌细胞皮下移植模型的抑瘤作用。方法　建立裸鼠 740 2肝癌细胞皮下移植瘤模型 ,纯化后的质粒DNA与PEI混合后经肌肉注射进行基因转染 ,体内验证重组蛋白的抑瘤活性 ,采用原位缺如末端标记 (TUNEL)法 ,进行肿瘤组织凋亡检测。结果　肿瘤体积测定显示TRAIL对肝癌生长有明显抑制作用 ,凋亡检测表明实验组镜下有蓝紫色凋亡细胞。结论　荷瘤小鼠经肌肉注射TRAIL质粒DNA后 ,能引起肿瘤细胞的凋亡 ,有效抑制 740 2肝癌细胞在裸鼠体内的生长。     

沉默HeLa细胞端粒酶活性对其在裸鼠体内移植瘤生长的影响

目的 沉默HeLa细胞人端粒酶催化亚单位(human telomerase catalytic subunit,hTERT)基因、抑制细胞端粒酶活性,观察细胞生长状态和其对裸鼠体内移植接种成瘤能力的影响.方法 RNAi技术,脂质体转染,筛选沉默hTERT基因稳定转染细胞株和无干扰效果的对照细胞株,端粒重复序列扩增-酶联免疫吸附测定法(TRAP-ELISA)测定所筛选的细胞株端粒酶活性;进一步绘制各细胞株的生长曲线;裸鼠移植接种实验观察各株细胞在裸鼠体内成瘤能力.结果 成功获得稳定转染具有沉默hTERT基因,端粒酶活性明显降低的实验组细胞株2个即T1,T2,同时获得对照细胞株1个(N1),还以无转染的HeLa细胞为亲本对照.细胞生长曲线显示与相应的对照组相比,实验组细胞(T1,T2)生长速度明显减慢(P＜0.05).裸鼠体内成瘤实验结果显示实验组和对照组均有皮下肿瘤形成,移植接种20天后,处死裸鼠取出肿瘤称量结果显示对照组形成的实体肿瘤平均重量分别为:0.057 7±0.034 9 g和0.054 4±0.033 5 g,而实验组T1和T2组肿瘤重量明显减轻(P＜0.05),仅分别为:0.024 5±0.010 9 g和0.027 2±0.007 5 g.结论 沉默Hela细胞hTERT基因降低肿瘤细胞的端粒酶活性,使细胞的体外增殖速度减慢,在裸鼠体内皮下成瘤能力受到明显抑制.