乌司他丁对炎症状态下血管内皮屏障功能的影响及机制

目的阐明乌司他丁（UTI）对炎症状态下血管内皮屏障功能的影响及具体分子机制。 方法以人脐静脉内皮细胞系EA.hy926为研究对象,建立炎症细胞模型及RhoA过表达细胞模型,分别用UTI和TNF-α处理细胞,采用Transwell法、TEER法检测细胞通透性;Western Blot法及RT-PCR法检测Rho/ROCK信号通路相关关键分子（RhoA、ROCK2、MYPT1、p-MYPT1及VE-cadherin）的表达变化情况。 结果与正常对照组相比,TNF-α作用后EA.hy926细胞电阻值明显降低,细胞通透性显著升高,差异具有统计学意义[（33.67±4.04）Ω/cm² vs（67.17±3.81）Ω/cm²,t=10.435,P<0.01],细胞内RhoA、ROCK2、p-MYPT1的表达量明显增加,差异具有统计学意义（均P<0.05）,VE-cadherin的表达量明显降低,差异具有统计学意义（P<0.05）,而UTI可逆转上述变化情况;与UTI处理组相比,RhoA过表达细胞模型中RhoA、ROCK2及p-MYPT1的表达显著增高,VE-cadherin表达降低,细胞通透性增加,差异具有统计学意义（均P<0.05）,而空载病毒组中上述分子的表达水平以及细胞通透性无明显变化,差异无统计学意义（均P>0.05）。 结论UTI能通过Rho/ROCK信号通路抑制TNF-α引起的血管内皮细胞通透性增加,改善血管内皮屏障功能障碍。     

Slit2/Robo4信号通路在神经元迁移中的活力与凋亡影响

目的探讨Slit2/Robo4信号通路在神经元迁移中的活力与凋亡影响,为阐明脑缺血后神经血管新生的机制提供理论和实验依据。方法选择成年雄性远交群(SD)大鼠,建立缺血性脑卒中动物模型,采用Western blot方法测定梗死侧与非梗死侧Slit2和Robo4的表达。取原代培养10~14d的神经元种六孔板,分为加药组H2O2(100μmol/L)、对照组、H2O2(100μmol/L)+Slit2(3μg/mL)组,行MTT方法检测细胞活力与双染流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果 Western blot结果显示,梗死侧Slit2和Robo4表达均较非梗死侧明显升高,差异有统计学意义(P0.05)。100μmol/L H2O2处理原代培养神经元24h会导致Slit2和Robo4表达升高(P0.05)。MTT结果示,H2O2、H2O2+Slit2组细胞活力都有明显下降,其中,H2O2+Slit2组的细胞存活率明显高于单纯H2O2组(P0.05)。流式细胞学显示,H2O2+Slit2组的细胞凋亡率明显低于H2O2组,差异有统计学意义(P0.05)。结论缺血性脑卒中有内源性Slit2/Robo4信号通路的激活,而外源性Slit2可以促进氧化应激时神经元的存活能力,抑制其凋亡作用,从而起到神经保护作用。     

微小RNA-320检测在体外循环所致急性呼吸窘迫综合征中的临床价值及其机制研究

目的研究微小RNA（microRNA）在体外循环（CPB）诱导的急性呼吸窘迫综合征（ARDS）患者中表达,并初步探讨其机制。 方法设定体外循环转流开始前（T1）、转流结束后4 h（T2）、术后8 h（T3）、术后16 h（T4）等4个时间点,采用microRNA微阵列芯片分析32例因CPB诱发ARDS患者microRNA变化,并通过实时荧光定量PCR（qRT-PCR）技术加以验证。酶联免疫分析法检测患者肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）在T1~T4等4个时间点的水平变化,同时计算呼吸指数和氧合指数。Pearson相关性分析研究microRNA-320（miR-320）与TNF-α、IL-6、呼吸指数、氧合指数、Murray急性肺损伤评分以及急性病生理学和长期健康评价（APACHE）Ⅱ评分的相关性。体外培养人肺腺癌A549细胞,并转染pcDNA3.1-miR-320,采用细胞增殖检测试剂盒8（CCK-8）法和流式细胞术分析pcDNA3.1-miR-320转染对A549细胞48 h存活和凋亡率的影响。 结果在T1与T4时间点,ARDS患者血液标本中共有8个microRNA表达差异有统计学意义（t=28.313、30.014、25.313、20.312、29.442、21.443、18.427、22.369,P均< 0.001）,其中5个出现降低,3个出现增高,其中miR-499的降低程度（0.28 ± 0.09）最为显著,而miR-320的增高程度（1.62 ± 0.12）最为显著（P均< 0.05）。qRT-PCR证实从T1至T4时间点,miR-320相对表达水平（1.00、1.14 ± 0.07、1.34 ± 0.06、1.71 ± 0.08）逐渐升高,差异有统计学意义（F=20.648,P < 0.05）。CPB诱发ARDS的患者T1与T4时间点相比,TNF-α[（110 ± 10）ng/L vs.（254 ± 16）ng/L]、IL-6[（86 ± 8）ng/L vs.（165 ± 11）ng/L]、呼吸指数[（0.182 ± 0.021）vs.（0.381 ± 0.032）]均增高,氧合指数[（350 ± 22）vs.（245 ± 18）]下降,差异均有统计学意义（P均< 0.05）。Pearson相关性分析发现,miR-320的表达水平与Murray急性肺损伤评分,APACHEⅡ评分,T4时间点TNF-α、IL-6、呼吸指数均呈正相关（r=0.685、0.744、0.737、0.711、0.846,P均< 0.05）,而与氧合指数呈负相关（r=-0.745,P < 0.05）。pcDNA3.1-miR-320转染的A549细胞组与对照组48 h细胞存活率[（82% ± 8%）vs. 100%]、凋亡率[（20.0% ± 1.1%）vs.（9.4% ± 0.8%）]相比,差异均具有统计学意义（P均< 0.05）。 结论miR-320水平与TNF-α、IL-6等肺部损伤指标具有相关性,miR-320的高表达可能介导CPB导致的ARDS,作用机制为诱导肺泡上皮细胞的凋亡,因此miR-320具有临床诊断、评估ARDS生物学指标的潜能。     

血必净对脓毒性急性肾损伤大鼠肾小管细胞凋亡和相关蛋白表达的影响

目的探讨早期应用血必净对脓毒性急性肾损伤大鼠肾小管细胞凋亡,及相关蛋白B细胞淋巴瘤2（Bcl-2）和Bcl-2相关X蛋白（Bax）表达的影响。 方法54只雄性大鼠分为假手术组（Sham组）、脓毒症组（CLP组）、血必净组（CLP + XBJ组）三组,每组18只;以术后12、24和48 h作为时间观察点,将各组再分为3个亚组,每组6只。在各时间点检测大鼠的肌酐清除率（CrCl）、肾脏血流灌注量,并留取肾脏组织观察病理学变化,计算肾小管损伤评分,采用原位末端标记（TUNEL）法并通过计算积分光密度值（IOD）测定肾小管凋亡细胞,采用Western-blotting法测定肾脏髓质Bcl-2、Bax的变化。 结果三组大鼠的CrCl和肾脏血流灌注量在术后各时间点差异均有统计学意义（F = 6.405、18.821,P < 0.05）;且CLP + XBJ组在术后48 h时CrCl和肾脏血流灌注量明显高于CLP组[（2.1 ± 0.5）ml/min/100 g vs.（1.1 ± 0.3）ml/min/100 g,（159 ± 38）BPU vs.（79 ± 32）BPU;P均< 0.05]。三组大鼠肾小管损伤评分比较,不同时间点差异存在统计学意义（F = 5.461,P < 0.05）;且CLP + XBJ组与CLP组比较,24、48 h时评分均有显著下降[（1.6 ± 0.5）vs.（2.8 ± 0.8）,（1.8 ± 0.8）vs.（3.6 ± 0.6）;P均< 0.05]。三组大鼠各时间点凋亡细胞IOD值,差异存在统计学意义（F = 7.259,P < 0.05）;CLP + XBJ组各时间点的IOD值均明显小于CLP组[（26.6 ± 6.9）vs.（34.4 ± 5.0）,（38.2 ± 5.3）vs.（48.0 ± 5.8）,（37.6 ± 2.2）vs.（53.8 ± 6.7）;P均< 0.05]。同时,CLP + XBJ组能升高大鼠肾脏髓质Bcl-2的表达,抑制Bax的表达,维持Bcl-2/Bax的平衡,24、48 h时其Bcl-2[（1.30 ± 0.09）vs.（0.76 ± 0.09）,（2.12 ± 0.38）vs.（0.51 ± 0.07）;P均< 0.05]和Bax[（1.19 ± 0.37）vs.（1.95 ± 0.90）,（1.48 ± 0.15）vs.（2.69 ± 0.39）;P均< 0.05]的表达水平与脓毒症组相比差异均有统计学意义。 结论早期应用血必净可以减少肾小管细胞在脓毒症进程中的凋亡,改善脓毒性急性肾损伤大鼠肾脏的病理学改变,维持Bcl-2/Bax的平衡,减轻脓毒症导致的肾功能损害。     

脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶1在氧化应激介导大鼠肺微血管内皮细胞损伤中的调控作用

目的探讨脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶1（APE1）在过氧化氢（H₂O₂）介导的大鼠肺微血管内皮细胞（PMVECs）氧化应激中的调控作用。 方法分离培养大鼠PMVECs并分成4组：对照组（未加H₂O₂）及各剂量H₂O₂组（终浓度分别为50、100、200 μmol/L的H₂O₂）。在H₂O₂刺激细胞24 h后检测细胞增殖活性、细胞内活性氧水平及APE1蛋白表达,同时检测100 μmol/ml的H₂O₂刺激细胞24、48、72 h后APE1蛋白表达并比较。另外利用慢病毒载体转染构建APE1过表达PMVECs,将其分成对照组（未加H₂O₂）,H₂O₂组（终浓度为100 μmol/L的H₂O₂）,H₂O₂+空载体转染组（100 μmol/L的H₂O₂刺激慢病毒空载体转染的细胞）及H₂O₂+APE1转染组（终浓度为100 μmol/L的H₂O₂刺激APE1过表达细胞）,并在24 h检测细胞活性氧水平及细胞增值情况。 结果不同剂量组H₂O₂刺激细胞24 h后,四组间细胞增殖活性、活性氧的水平和APE1蛋白表达相对值差异均有统计学意义（F = 80.238、445.608、547.566,P均< 0.001）。在100 μmol/L的H₂O₂刺激细胞0、24、48和72 h后,APE1蛋白表达相对值的比较有统计学意义（F = 422.324,P < 0.001）,且随时间增加APE1表达也逐渐下降[（0.781 ± 0.043）、（0.611 ± 0.026）、（0.407 ± 0.014）、（0.272 ± 0.013）,P均< 0.05]。在转染慢病毒载体后,H₂O₂组活性氧水平明显高于对照组[（86.4 ± 1.2）vs.（56.4 ± 0.9）,P < 0.05];而H₂O₂ + APE1转染组细胞活性氧水平较H₂O₂组显著下降[（66.8 ± 1.0）vs.（86.4 ± 1.2）,P < 0.05],细胞增殖活性明显增加[（0.209 ± 0.001）vs.（0.153 ± 0.001）,P < 0.05]。 结论H₂O₂刺激可导致APE1蛋白表达下降,而上调APE1表达可增加细胞增殖活性,并抑制活性氧的产生。因此,APE1可能具有减轻H₂O₂介导的大鼠PMVECs氧化应激反应的作用。     

丙泊酚对大鼠大脑神经元的影响及相关作用研究

目的探讨丙泊酚对大鼠大脑神经元的影响及相关作用机制,为阐明丙泊酚的作用机制提供理论和实验依据。方法 2017年8月到2018年2月选择SPF级3周龄雄性Wistar大鼠16只,随机分为对照组与丙泊酚组各8只。对照组与丙泊酚组分别注射生理盐水10 ml/kg与丙泊酚10 ml/kg,连续给药5 d。采用水迷宫测试记忆能力,Westernblot检测Slit2和Robo4表达,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果丙泊酚组大鼠从清醒到麻醉状态,诱导时间为200～300 s,维持时间为(60. 00±21. 04) min。丙泊酚组的潜伏期时间多于对照组,通过平台区次数少于对照组,差异有统计学意义(P 0. 01)。丙泊酚组大脑组织的Slit2和Robo4表达量高于对照组,差异有统计学意义(P 0. 01)。丙泊酚组的神经元细胞的凋亡率显著高于对照组,差异有统计学意义(P 0. 01)。结论丙泊酚可促进激活大鼠内源性Slit2/Robo4信号通路,提高脑神经元细胞的凋亡,从而抑制大鼠的记忆活动能力。     

舌下脱敏治疗对哮喘患儿外周血2型固有淋巴细胞及相关细胞因子的免疫调节作用

目的研究舌下脱敏治疗（SLIT）对尘螨致敏儿童哮喘的疗效及其对外周血2型固有淋巴细胞（ILC2）及白介素（IL）-13的表达水平,进一步明确其作用及治疗机制。 方法选择2016年2月至2017年1月苏北人民医院哮喘专病门诊就诊的轻中度哮喘患者40例,所有患儿入组时（基线）均已接受抗哮喘药物治疗3个月。按照不同治疗方案分为SLIT组20例,采用抗哮喘药物联合SLIT;药物组20例,仅采用抗哮喘药物治疗。统计2组患者在基线、半年、1年后的哮喘症状评分（TASS）、用药评分（TMS）外周血ILC2表达量及ILC2表达的细胞因子IL-13的水平。采用t检验比较TASS、TMS及外周血ILC2组间及不同时间点的差异,比较外周血IL-13组间及基线和治疗半年后的差异,采用秩和检验比较外周血IL-13治疗1年后的组间差异。 结果（1）SLIT组TASS评分在基线、治疗半年后及治疗1年后分别为（1.95±0.69）分、（1.10±0.60）分及（0.70±0.66）分,治疗后TASS低于基线时,差异具有统计学意义（P=0.01;P=0.001）;药物组TASS评分在基线、治疗半年后及治疗1年后分别为（2.25±0.76）分、（1.75±0.52）分及（1.10±0.64）分,治疗后TASS低于基线时,差异具有统计学意义（P=0.03;P<0.001）,治疗后SLIT组TASS低于药物组,组间比较差异均有统计学差异（t=1.79,P=0.08;t=2.32,P=0.03）。（2）SLIT组在基线、治疗半年、治疗1年后TMS分别为（2.10±0.72）分、（1.50±0.51）分及（0.70±0.57）分,治疗后TMS低于基线时,差异具有统计学意义（P=0.003;P<0.001）;药物组在基线、治疗半年、治疗1年后TMS分别为（2.20±0.83）分、（1.55±0.61）分及（1.20±0.62）分,治疗后TMS低于基线时,差异具有统计学意义（P=0.004;P=0.12）;治疗1年后SLIT组TMS低于药物组,组间差异具有统计学意义（t=2.66,P=0.01）。（3）SLIT组ILC2表达量在基线、治疗半年后、1年后分别为（2.96±0.30）%、（2.47±0.20）%和（2.05±0.19）%,治疗后ILC2表达量低于基线时,差异均具有统计学意义（P均<0.001）;药物组ILC2表达量在基线、治疗半年后、1年后分别为（2.94±0.26）%、（2.87±0.27）%和（2.28±0.21）%;治疗1年后ILC2表达量低于基线时,差异具有统计学意义（P<0.001）,治疗后SLIT组ILC2表达量低于药物组,差异均具有统计学意义（t=5.36,P<0.001;t=3.73,P<0.001）（4）SLIT组IL-13水平在基线、治疗半年后、1年后分别为（21.67±1.13）%、（20.34±1.03）%和（18.17±1.33）%,治疗后IL-13水平低于基线时,差异均具有统计学意义（P均<0.001）;药物组IL-13水平在基线、治疗半年后、1年后分别为（21.99±0.83）%,（21.83±0.81）%和（19.08±0.63）%;治疗1年后IL-13水平低于基线时,差异具有统计学意义（P<0.001）,治疗后SLIT组IL-13水平低于药物组,差异均具有统计学意义（t=5.05,P<0.01;Z=2.76,P=0.01）。 结论抗哮喘药物治疗联合SLIT可减少哮喘药物使用。SLIT可抑制哮喘患儿外周血ILC2表达并下调细胞分泌细胞因子IL-13水平。     

妊娠高血压疾病患者内脂素和VE-cadherin的含量变化

目的 研究妊娠期高血压疾病患者静脉血清及胎儿脐血中内脂素（visfatin）和血管内皮细胞钙黏蛋白（VE-cadherin）的含量变化及意义.方法 采用酶联免疫吸附法（ELISA）进行内脂素和VE-cadherin含量的测定,分别测定90例妊娠期高血压疾病患者（其中妊娠期高血压、轻度子痫前期、重度子痫前期各30例）及30例正常对照组产妇静脉血清及胎儿脐血中内脂素和VE-cadherin的含量.结果 内脂素和VE-cadherin在妊娠期高血压疾病组及对照组血清及胎儿脐血中均有表达.VE-cadherin在妊娠期高血压疾病各组血清中含量与对照组血清中的比较,差异有显著意义（t=7.31,9.82,10.04,P值均〈0.05）,且重度子痫前期组明显高于轻度子痫前期和妊娠期高血压组（t=7.23,8.95,P值均〈0.05）;轻度子痫前期组明显高于妊娠期高血压组（t=7.68,P〈0.05）.内脂素在妊娠期高血压疾病各组血清中含量与对照组血清中的比较,差异有显著意义（t=7.83,9.85,10.51,P值均〈0.05）,且重度子痫前期组明显高于轻度子痫前期和妊娠期高血压组（t=7.68,8.73,P值均〈0.05）;轻度子痫前期组明显高于妊娠期高血压组（t=7.69,P〈0.05）.妊娠期高血压疾病患者内脂素和VE-cadherin含量呈正相关（r=0.67,P〈0.01）.内脂素和VE-cadherin在妊娠期高血压疾病各组胎儿脐血中的含量,差异无显著意义（P〉0.05）.结论 内脂素和VE-cadherin的高表达说明,妊娠期高血压疾病患者内皮细胞损伤,且内脂素和VE-cadherin在损伤过程中起作用.     

机械牵张对人肺血管内皮细胞通透性的影响及其分子机制

目的观察机械牵张对人肺动脉内皮细胞（HPAEC）和人肺微血管内皮细胞（HPMVEC）通透性的影响及对通透性关键蛋白VE-cadherin、Claudin-5和Caveolin-1表达的调控。 方法采用机械牵张装置Flexcell FX-5000T对HPAEC（ATCC）和HPMVEC（ATCC）施加0.5 Hz频率10%或20%牵张应力。应用qRT-PCR及Western Blot方法检测机械牵张前后内皮通透性关键蛋白VE-cadherin、Claudin-5、Caveolin-1 mRNA和蛋白含量表达变化。采用细胞动态分析仪以及Transwell小室/异硫氰酸荧光素（FITC）-白蛋白法检测机械牵张后的HPAEC细胞和HPMVEC细胞通透性改变。 结果20%机械牵张后，与对照组比较，HPAEC细胞通透性关键蛋白VE-cadherin mRNA和蛋白表达、Claudin-5 mRNA和蛋白表达和Caveolin-1 mRNA表达均下降（P<0.05），而Caveolin-1蛋白水平较对照组无明显变化；HPMVEC细胞通透性关键蛋白VE-cadherin mRNA和蛋白表达，Caveolin-1 mRNA和蛋白表达均下降（P<0.05），而Claudin-5 mRNA和蛋白水平较对照组无明显变化。 结论机械牵张会导致肺血管内皮通透性增高，是通过下调通透性关键蛋白的表达，并且两种细胞的通透性影响机制有差异，HPAEC牵涉紧密连接，HPMVEC牵涉跨内皮细胞途径。     

高迁移率族蛋白B1 / Toll样受体4信号通路在脓毒症大鼠致急性肺损伤中的作用研究

目的探讨高迁移率族蛋白B1（HMGB1） / Toll样受体4（TLR4）信号通路对脓毒症导致的急性肺损伤大鼠的影响。 方法将60只清洁级雄性Sprague Dawley大鼠分为假手术组、脓毒症组和实验组,每组各20只。假手术组大鼠麻醉后开腹翻动肠道,随即关腹;脓毒症组和实验组行盲肠结扎穿孔（CLP）术后0.5 h于尾静脉分别注射等渗NaCl溶液（4 mL / kg）及抗HMGB1单克隆抗体（2 mg / kg）。各组分别取10只用于观察大鼠CLP建模后7 d存活情况,其余大鼠于造模后24 h处死并留取肺组织标本。计算各组大鼠的肺损伤Smith评分,并比较各组大鼠HMGB1和TLR4阳性蛋白在肺组织中的表达水平。采用酶联免疫吸附测定检测各组大鼠肺泡灌洗液（BALF）中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）、HMGB1和TLR4水平,计算每个巨噬细胞内微球蛋白数以比较各组大鼠肺泡巨噬细胞（AM）的吞噬功能,并采用Western-blotting法测定AM内HMGB1、TLR4蛋白表达水平。 结果假手术组大鼠建模后7 d全部存活,脓毒症组大鼠仅3只存活,实验组大鼠5只存活。各组大鼠间存活情况的比较,差异有统计学意义（ χ² = 10.833,P = 0.004）;且假手术组大鼠的存活情况明显优于脓毒症组与实验组大鼠（P均< 0.017）,而脓毒症组与实验组大鼠间存活情况比较,差异无统计学意义（P = 0.120）。假手术组、脓毒症组及实验组大鼠间肺组织损伤评分[（2.20 ± 0.27）、（8.20 ± 1.27）、（4.25 ± 2.21）分,F = 56.432,P < 0.001],肺组织HMGB1阳性蛋白[（10.4 ± 1.5）、（34.4 ± 5.0）、（26.6 ± 6.9）,F = 35.203,P = 0.003]、TLR4阳性蛋白[（10.6 ± 2.1）、（48.0 ± 5.8）、（38.2 ± 5.3）,F = 103.414,P = 0.002],BALF中TNF-α[（19 ± 4）、（45 ± 4）、（35 ± 4）μg / L,F = 2.749,P < 0.001]、IL-6[（56 ± 19）、（86 ± 15）、（70 ± 19）μg / L,F = 4.648,P = 0.001]、HMGB1[（41 ± 18）、（70 ± 15）、（56 ± 12）μg / L,F = 7.254,P = 0.002]、TLR4[（20.9 ± 1.8）、（51.2 ± 1.6）、（49.8 ± 2.6）μg / L,F = 3.978,P = 0.035],AM的吞噬功能[（21.8 ± 2.7）、（3.1 ± 1.9）、（12.6 ± 2.2）个,F = 32.821,P = 0.001]及AM中HMGB1蛋白[（11 ± 3）、（40 ± 15）、（24 ± 13）,F = 7.253,P < 0.001]、TLR4蛋白[（0.9 ± 0.4）、（1.2 ± 0.6）、（1.1 ± 0.4）,F = 3.984,P = 0.028]的比较,差异均有统计学意义。进一步两两比较发现,脓毒症组与实验组大鼠肺组织损伤评分,肺组织HMGB1阳性蛋白、TLR阳性蛋白表达水平,BALF中TNF-α、IL-6、HMGB1水平及AM中HMGB1蛋白表达水平均明显高于假手术组大鼠,且脓毒症组大鼠更高（P均< 0.05）;脓毒症组及实验组大鼠AM的吞噬功能均显著低于假手术组,且脓毒症组更低（P均< 0.05）;脓毒症组及实验组大鼠BALF中TLR4水平及AM中TLR4蛋白表达水平均显著高于假手术组（P均< 0.05）,但脓毒症组与实验组间上述指标的比较,差异均无统计学意义（P均> 0.05）。 结论通过抑制HMGB1 / TLR4信号通路可以缓解脓毒症致肺损伤大鼠肺组织的炎症损伤,抑制炎症介质过度释放,并增强AM的细胞吞噬功能。     

俯卧位通气对肺内源性急性肺损伤大鼠的影响

目的探讨俯卧位通气对脂多糖（LPS）诱导的肺内源性急性肺损伤（ALI）大鼠的治疗作用及其机制。 方法32只雄性SD大鼠随机分为对照组、ALI组、ALI仰卧位通气组（ALIS组）及ALI俯卧位通气组（ALIP组）,每组各8只。通过气管内滴注LPS 6 mg/kg建立ALI动物模型,24 h后ALIS组及ALIP组分别实施仰卧位或俯卧位通气4 h。之后观察动脉血氧分压（PaO₂）、二氧化碳分压（PaCO₂）、肺组织湿/干重比（W/D）;比较血清中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）水平;光镜下观察肺组织病理形态学变化。 结果与对照组比较,ALI组、ALIS组和ALIP组PaO₂明显降低（F = 57.369,P < 0.001）,ALI组、ALIS组PaCO₂均明显升高（F = 8.448,P < 0.001）,ALI组、ALIS组和ALIP组肺W/D及血清中TNF-α、IL-6均明显升高（F = 13.609、6.443、23.849,P = 0.001、0.017、< 0.001）;与ALI组比较,ALIS组和ALIP组PaO₂明显升高,PaCO₂、肺W/D比值、血清中TNF-α、IL-6均明显降低（P均< 0.05）。与ALIS组相比,ALIP组PaO₂升高[（83 ± 6）mmHg vs.（71 ± 5）mmHg,P < 0.05],PaCO₂降低[（50 ± 7）mmHg vs.（58 ± 6）mmHg,P < 0.05],肺组织W/D比值降低[（4.65 ± 0.56）vs.（4.82 ± 0.41）,P < 0.05]及TNF-α、IL-6在血清中的水平均降低[（293 ± 68）ng/L vs.（366 ± 44）ng/L;（358 ± 39）ng/L vs.（440 ± 38）ng/L,P均< 0.05]。同时肺组织病理形态学显示,与ALIS组相比,ALIP组腹侧过度膨胀区域减少（F = 63.423,P < 0.001）,正常通气区域增加（F = 73.229,P < 0.001）;ALIP组背侧塌陷区域减少（F = 68.586,P < 0.001）,正常通气区域及过度膨胀区域增加（F = 61.871,P < 0.001;F = 9.800,P = 0.001）。 结论俯卧位通气能促进LPS诱导的肺内源性ALI大鼠的气体交换,减轻肺水肿,降低炎症反应。     

Enhancement of endothelial permeability by coculture with peripheral blood mononuclear cells in the presence of HLA Class II antibody that was associated with transfusion-related acute lung injury

BACKGROUND: HLA Class II antibody–initiated activation of monocytes possessing the corresponding antigen is thought to participate in the pathogenesis of transfusion‐related acute lung injury (TRALI). Pulmonary edema, a hallmark of TRALI, is caused by increasing vascular permeability. STUDY DESIGN AND METHODS: To investigate the contribution of HLA Class II antibody and monocytes to the development of pulmonary edema in TRALI, we studied whether the permeability of human lung microvascular endothelial cells (HMVECs) could be enhanced by coculturing HMVECs with peripheral blood mononuclear cells (PBMNCs) in the presence of HLA Class II antibody–containing plasma, which was implicated in TRALI (anti‐HLA‐DR plasma). In addition, similar experiments were performed with human umbilical vein endothelial cells (HUVECs). The endothelial permeability to fluoresceinated dextran, which was added from the start of coculture, was measured. RESULTS: The coculture of HMVECs or HUVECs with PBMNCs in the presence of anti‐HLA‐DR plasma resulted in the increase of endothelial permeability in the corresponding antigen‐antibody–dependent manner. CV‐3988, a platelet‐activating factor (PAF) receptor antagonist, almost completely suppressed the increase in endothelial permeability. Neutralizing antibodies to tumor necrosis factor (TNF)‐α alone and simultaneous addition of the antibodies to TNF‐α and interleukin (IL)‐1β to the coculture partially suppressed the permeability increase of HMVECs and HUVECs, respectively. CONCLUSIONS: HLA Class II antibody and monocytes in the corresponding antigen‐antibody combination caused the enhancement of endothelial permeability. PAF, TNF‐α, and/or IL‐1β might be involved in the endothelial permeability increase. HLA Class II antibody–initiated monocyte activation could lead to the development of pulmonary edema in TRALI.     

脓毒症大鼠肺组织中尿激酶型纤溶酶原激活剂受体的表达及其与肺损伤程度的相关性研究

目的探讨脓毒症大鼠肺组织中尿激酶型纤溶酶原激活剂受体（uPAR）表达变化及其与肺损伤的关系。 方法将48只雄性成年大鼠分为假手术组及脓毒症组,每组各24只大鼠。采用盲肠结扎穿孔术建立脓毒症损伤模型,假手术组大鼠只行开腹手术、不行结扎及穿孔,各组分别在术后6、12、24 h各取8只大鼠分批处死后收集肺泡灌洗液并留取肺脏。观察所有大鼠各时间点肺组织病理变化,测定肺组织干湿重比及肺泡灌洗液中蛋白变化,并采用免疫组织化学染色测定uPAR表达情况。 结果光镜下可见,假手术组大鼠肺组织肺泡结构完整,术后24 h只有少量炎症细胞浸润;脓毒症组大鼠肺泡腔内大量炎症细胞浸润,肺泡结构破坏,并以术后24 h最明显。两组大鼠各时间点肺组织干湿重比、肺泡灌洗液蛋白水平及uPAR表达比较,差异均有统计学意义（F = 32.000、97.770、72.780,P均< 0.001）。与假手术组相比,脓毒症组大鼠6、12、24 h肺组织干湿重比[（0.75 ± 0.03）vs.（0.78 ± 0.03）;（0.77 ± 0.04）vs.（0.83 ± 0.05）;（0.78 ± 0.04）vs.（0.89 ± 0.05）]、肺泡灌洗液蛋白水平[（79 ± 22）mg/L vs.（110 ± 40）mg/L;（79 ± 23）mg/L vs.（168 ± 36）mg/L;（94 ± 24）mg/L vs.（199 ± 56）mg/L]及uPAR表达[（2.2 ± 1.3）分vs.（4.6 ± 1.9）分;（2.3 ± 0.9）分vs.（6.4 ± 1.8）分;（2.4 ± 0.9）分vs.（7.0 ± 1.8）分]均明显升高（P均< 0.05）;且脓毒症组大鼠12、24 h亚组肺组织干湿重比、肺泡灌洗液蛋白水平均显著高于6 h亚组,而uPAR表达仅24 h亚组显著高于6 h亚组（P均< 0.05）。同时,肺组织中uPAR表达与肺组织干湿重比、肺泡灌洗液蛋白浓度均呈正相关（r = 0.618,P< 0.001;r = 0.652,P< 0.001）。 结论与假手术组相比,uPAR在脓毒症大鼠肺组织中表达明显增加,并且与肺损伤程度呈正相关。     

Effects of Autonomic Manipulation on Ventricular Fibrillation and Internal Cardiac Defibrillation Thresholds in Pigs

Autonomic tone may contribute to cardiac arrhythmogenesis and influence the efficacy of implantable defibrillators. Fifty-two anesthetized pigs were randomized to: (1) methacholine (n = 12); (2) nitroprusside (n = 12); (3) phenylephrine (n = 12); (4) carbachol (n = 8); and (5) saline (n = 8). Ventricular fibrillation threshold (VFT) and triplicate defibrillation thresholds (DFT) were obtained before and during each intervention. Mean (± SE) VFT was increased with: methacholine (76 ± 10.6 V vs 39 ± 7.1 V, P < 0.001); phenylephrine (68 ± 10.5 V vs 38 ± 6.2 V, P < 0.001); and carbachol (106 ± 11.5 V vs 30 ± 6.5 V, P < 0.0001). Nitroprusside and saline failed to alter VFT. Mean (± SE) DFT was decreased with: methacholine (7.7 ± 0.8 J vs 9.7 ± 0.8 J, P < 0.001); phenylephrine (9.8 ± 0.9 J vs 11.3 ± 1.0 1, P < 0.05); and carbachol (9.2 ± 0.7 J vs 12.2 ± 0.8), P < 0.0001), remaining unchanged following nitroprusside and saline infusion. Thus, modulation of autonomic tone modified arrhythmia susceptibility and the energy necessary for defibrillation, increased parasympathetic tone, increased VFT, and decreased DFT. Evaluation of autonomic balance, particularly parasympathetic tone, may be useful with the implantation of automatic defibrillators.     

CYP3A4*1G基因多态性对老年患者全髋置换术后舒芬太尼药效学的影响

目的探讨CYP3A4*1G基因多态性对老年患者全髋置换术后舒芬太尼药效学的影响。 方法选择2016年1月至2017年8月台州市中心医院择期行全髋置换手术的老年患者116例,术后患者静脉自控镇痛（PCIA）。采用焦磷酸测序法检测CYP3A4*1G基因多态性,根据基因型将患者分成野生型纯合子（AA）组69例、突变型杂合子（GA）组39例和突变型纯合子（GG）组8例。记录并比较所有患者术后6、12、24、48 h静息状态下的视觉模拟疼痛评分（VAS）,术后48 h的舒芬太尼总用量、PCIA次数。 结果三组患者术后6、12、24、48 h的VAS的比较差异均无统计学意义（F=0.907、0.192、0.757、0.256,P均>0.05）。而达到相同镇痛效果的GG组患者术后48 h舒芬太尼消耗量[（89.8 ± 0.8）、（95.8 ± 0.5）、（96.0 ± 0.4）μg,F=25.113,P<0.001]及PCIA次数[（10.9 ± 2.0）、（17.4 ± 4.5）、（18.3 ± 3.7）次,F=35.227,P<0.001]均显著少于AA组和GA组患者。而GA组和AA组术后48 h舒芬太尼消耗量及PCIA次数比较差异均无统计学意义（P均>0.05）。 结论结合患者基因型调整舒芬太尼药量可减少老年患者药物使用量。     

Effects of Procainamide and dl-Sotalol on the Changes of Atrial Electrophysiology Induced by High Current Stimulation

The relation between high current atrial stimulation and antiar-rhythmic drugs was not clear. We evaluated the effects of procainamide and dl-sotalol on the electrophysiological changes induced by high current stimulation. Effects of high current atrial stimulation on effective refractory period, dispersion of refractoriness, conduction velocity, and wavelength of the earliest atrial premature beat were evaluated at baseline and after infusion of procainamide (10 patients) and dl-sotalol (10 patients). High current atrial stimulation shortened effective refractory period locally (−12%± 4.0%, −7.0%± 3.0%, −5.1 ± 3.3%, and −3.0 ± 2.0%, at 0, 7, 14, and 21 mm from the S1 stimulation site, respectively; P < 0.001); increased the dispersion of refractoriness (from 17.8 ± 8.5 to 27.4 ± 12.5 ms, P < 0.001); decreased conduction velocity of the earliest premature beat (from 0.58 ± 0.10 to 0.52 ± 0.09 ms, P = 0.01); and decreased wavelength of the earliest atrial premature beat (from 10.9 ± 2.4 to 8.8 ± 2.1 cm, P < 0.001). These effects of high current stimulation persisted after procainamide infusion. However, after dl-sotalol infusion, high current atrial stimuli did not change the dispersion of refractoriness (23.1 ± 10 ms vs 26.4 ± 10.4 ms; P > 0.05, twice diastolic threshold vs 10 mA); conduction velocity of the earliest premature beat (0.54 ± 0.06 ms vs 0.50 ± 0.06 ms, P > 0.05); or wavelength of the earliest premature atrial beat (11.5 ± 1.6 m/s vs 10.1 ± 1.7 cm; P > 0.05). Although high current atrial stimulation shortened effective refractory period locally, increased dispersion of refractoriness, and decreased the wavelength of the earliest premature atrial impulse, these effects were abolished by dl-sotalol but not procainamide.