CYP2E1基因在2型糖尿病大鼠肝脏的表达

[目的]运用基因芯片技术，比较正常大鼠和糖尿病大鼠肝脏中细胞色素p4502E1(CYP2E1)基因表达的差异。[方法]对雄大鼠腹腔注射链脲佐菌素(STZ)，并予以高脂饮食制造2型糖尿病模型；从其肝脏抽提总RNA，进行反转录，并用Cy3-dUTP和Cy5-dUTP分别对正常组与实验组探针进行荧光标记，探针与基因表达谱芯片杂交，结果由扫描仪扫描并用软件进行分析统计。[结果]糖尿病组与对照组的肝脏相比，Cy5／Cy3比值为10．082，有统计学意义，CYP2E1 mRNA表达升高。[结论]2型糖尿病可诱发肝脏CYP2E1基因表达增高。     

CYP1A1和CYP2E1基因多态性与燃煤型砷中毒发病风险关系

目的探讨CYP1A1基因和CYP2E1基因多态性与燃煤型砷中毒发病风险的关系。方法以130例燃煤型砷中毒患者为病例组, 以140名健康居民为对照组, 应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)法检测CYP1A1 Msp I、CYP2E1 Dra I和 CYP2E1 Pst I位点基因多态性, 并进行基因联合作用分析。结果CYP1A1基因 Msp I位点 m1/m1(纯合野生型) 基因型和m1/m2+m2/m2(杂合型+纯合突变型)基因型在病例组和对照组的分布频率分别为34.2%、65.8%和30.9%、69.1%; CYP2E1基因 Pst I位点 c1/c1(纯合野生型) 基因型和c1/c2+c2/c2(杂合型+纯合突变型)基因型在病例组和对照组的分布频率分别为62.6%、37.4%和57.4%、42.6%;CYP2E1基因 Dra I位点 DD(纯合野生型) 和DC+CC(杂合型+纯合突变型) 基因型在病例组和对照组的分布频率分别为58.7%、41.3%和61.4%、42.6%;上述3个多态位点各基因型在两组间的分布差异无统计学意义(P=0.341、0.574、0.972)。未发现CYP1A1 Msp I、CYP2E1 Pst I和 CYP2E1 Dra I多态位点与燃煤型砷中毒的发病风险存在统计学关联(P_校正= 0.433、0.219、0.832);上述多态位点各基因型之间未发现存在联合作用。结论CYP1A1和CYP2E1基因多态性与燃煤型砷中毒的发病风险无关。     

紫杉醇对大鼠肝脏CYP2C19酶活性的影响

目的 通过大鼠肝微粒体体外代谢系统考察紫杉醇对CYP2C19酶活性的影响.方法 用RP-HPLC法测定CYP2C19酶活性,考察紫杉醇对CYP2C19酶活性的影响.结果 加入抗肿瘤药紫杉醇后,CYP2C19酶活性较不加入紫杉醇前降低了(17.56±2.60)％(P＜0.01),酶活性改变具有统计学意义(P＜0.01).结论 临床紫杉醇与经CYP2C19酶代谢的药物联合时,应注意代谢性相互作用对药物疗效的影响.     

大青叶对CYP1A1酶活性及转录水平影响

细胞色素P450（CYP450）酶系由一群基因超家族编码的酶蛋白所组成，人类的CYP450基固有18个家族和42个亚家族．调控180多个人类CYP450亚型蛋白质。体内外研究表明，多种CYP450的酶活性可因某些药物、环境因子甚至食物成分等的影响而发生改变。大青叶（Folium Statidis．FS）为十字花科植物菘蓝的叶，其化学成分主要台有靛玉烷B、靛蓝、靛玉红、色氮酸、色氯酮等．其味苦性寒，具有清热、解毒和瘟血之功效。本实验通过大青叶对CYP1A1酶活性及其mRNA表达的影响。探讨大青叶在癌症发生和预防中的作用。     

氯化消毒饮用水有机提取物对雄性大鼠生殖细胞凋亡的影响

目的探讨氯化消毒饮用水水样中有机提取物染毒对大鼠生殖细胞凋亡以及精子数量的影响。方法于2011年7—9月(丰水期)采集贵阳市某地水厂的管网末梢水水样并制备有机提取物。将40只清洁级SD雄性大鼠随机分为4组,分别为对照(玉米油)组和3、15、75 L/kg饮用水有机提取物染毒组,每组10只。采用经口灌胃方式进行染毒,每天1次,连续染毒4周。大鼠生殖细胞凋亡情况采用TdT介导的dUTP缺口末端标记技术检测,并取附睾进行精子计数。结果镜下观察可见各染毒组均有生殖细胞凋亡,对照组和3 L/kg饮用水有机提取物染毒组以精原细胞凋亡为主,15、75 L/kg饮用水有机提取物染毒组则多见精原细胞和初级精母细胞凋亡。与对照组比较,15、75 L/kg饮用水有机提取物染毒组大鼠生精细胞和精子细胞的凋亡指数均较高,仅75 L/kg饮用水有机提取物染毒组大鼠精子数量较低,差异有统计学意义(P0.05)。大鼠生精细胞凋亡指数、精子细胞凋亡指数与有机提取物染毒剂量呈正相关(P0.05),大鼠精子计数与有机提取物染毒剂量呈负相关(P0.05)。结论在本实验条件下,该地氯化消毒饮用水有机提取物促进雄性大鼠生殖细胞凋亡。     

鸡尾酒法评价阿普唑仑对大鼠CYP450酶活性的影响

目的 评估阿普唑仑对CYP450酶活性能力的影响,运用鸡尾酒法评价CYP2B1、CYP2D1、CYP1A2、CYP3A2和CYP2C11酶活性.方法 将大鼠随机分为对照组和阿普唑仑3组.对照组给予生理盐水,阿普唑仑3组(低、中、高)大鼠灌胃给药5 mg/kg、10 mg/kg、20 mg/kg阿普唑仑,连续给药28 d...     

氯化消毒饮用水有机提取物对大鼠肝脏芳香烃受体和相关基因表达的影响

目的探讨氯化消毒饮用水水样中有机提取物染毒对大鼠肝脏芳香烃受体(aryl hydrcarbon receptor,AhR)和相关基因表达的影响。方法于2012年7—9月(丰水期)采集贵阳市某地水厂的管网末梢水水样并制备有机提取物。将40只清洁级SD大鼠随机分为4组,分别为对照(玉米油)组和5、20、80 L/kg饮用水有机提取物染毒组,每组10只,雌雄各半。采用经口灌胃方式进行染毒,每天1次,连续染毒12周。采用实时荧光定量PCR法检测肝脏中Ah R、热休克蛋白(HSP90)、芳香烃受体核转位蛋白(ARNT)和细胞色素1A2(CYP1A2)mRNA的表达水平,采用Western Blot法检测肝脏中AhR、HSP90、ARNT与CYP1A2蛋白的表达水平。结果与对照组比较,5、20、80 L/kg饮用水有机提取物染毒组大鼠肝脏中HSP90的mRNA和蛋白表达水平均增高,20、80 L/kg组大鼠肝脏中AhR、ARNT与CYP1A2 mRNA和蛋白的表达水平均增高,差异有统计学意义(P0.05)。结论在本实验条件下,氯化消毒饮用水有机提取物暴露可活化AhR通路。     

氯化消毒饮用水有机提取物对L-02肝细胞凋亡相关基因及蛋白表达的影响

目的探讨氯化消毒饮用水水样中有机提取物染毒对人肝细胞株(L-02)细胞凋亡相关基因及蛋白表达的影响。方法于2012年7—9月(丰水期)采集贵阳市某地水厂的管网末梢水水样并制备有机提取物。将L-02细胞分别于含0(对照)、0.312 5、0.625、1.25、2.5、5 L/ml氯化消毒饮用水有机提取物的培养基中暴露48 h。测定细胞中半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)、聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1(PARP-1)、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)与B细胞淋巴瘤2相关x基因(Bax)m RNA及蛋白的表达水平。结果与对照组比较,2.5、5 L/ml饮用水有机提取物染毒组L-02细胞中caspase-3、Bax的m RNA及蛋白表达水平均较高,而0.625、1.25、2.5、5 L/ml饮用水有机提取物染毒组L-02细胞中Bcl-2、PARP-1的m RNA及蛋白表达水平均较低(除0.625 L/ml组PARP-1蛋白外),差异均有统计学意义(P0.05)。结论在本实验条件下,较高剂量的氯化消毒饮用水有机提取物暴露可上调L-02肝细胞中caspase-3与Bax基因,下调Bcl-2及PARP-1基因,促进细胞凋亡的发生。     

饮用水有机提取物致大鼠肝脏损伤中GSTs活性及其编码基因表达的变化

[目的]观察饮用水有机提取物对大鼠肝脏谷胱甘肽-S-转移酶(glutathione-S-transferase,GSTs)活性及谷胱甘肽-S-转移酶A1(GSTA1)基因m RNA和蛋白表达的影响,探讨其在饮用水有机提取物肝脏损伤中作用。[方法]采用固相萃取法提取水样中有机污染物,50只SD大鼠随机分成5组,分别为空白对照组、溶剂对照组(玉米油)和低、中、高3个染毒组(剂量分别为每天5、20、80 L/kg·bw),进行经口灌胃染毒12周。分光光度法检测GSTs的活性,实时荧光定量聚合酶链反应法和Western blot法分别检测GSTA1基因的m RNA和蛋白质表达水平,同时检测肝功能各指标。[结果](1)大鼠肝脏GSTs酶活性:与空白对照、溶剂对照及低剂量组相比,中剂量[(50.66±5.62)U/mg蛋白]和高剂量组[(39.80±12.95)U/mg蛋白]的GSTs酶活性升高(P<0.05);与中剂量组相比,高剂量组GSTs的酶活性则明显降低(P<0.05)。(2)GSTA1的m RNA及蛋白表达水平:中、高剂量组高于空白对照组、溶剂对照及低剂量组(P<0.05);而与中剂量组相比,高剂量组GSTA1的m RNA表达水平下降(P<0.05)。Western blot检测结果显示,随染毒剂量的增加,GSTA1蛋白表达呈先升高后降低的趋势,与空白对照、溶剂对照及低剂量组比较,中、高剂量组的升高,差异具有统计学意义(P<0.05);而与中剂量组比较,高剂量GSTA1的蛋白表达则下降(P<0.05)。(3)肝功能指标:与对照组比较,血清胆碱酯酶(CHE)在中、高剂量染毒组升高,差异均具有统计学意义(P<0.05);丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转换酶(AST)则仅在高剂量组升高(P<0.05)。总蛋白(TP)和白蛋白(ALB)在高剂量组下降(P<0.05)。GSTA1蛋白表达、GSTs活性与染毒大鼠肝脏CHE水平均呈正相关关系(r=0.490 5,r=0.685 2;P<0.05)。[结论]在本实验条件下,饮用水有机提取物较高剂量染毒可上调大鼠肝脏GSTA1的m RNA及蛋白质表达水平,调控GSTs活性改变,从而导致大鼠肝细胞对毒物的易感性增强,肝损伤加重。     

饮用水有机提取物致大鼠肝脏DNA及蛋白质氧化损伤的研究

目的探讨饮用水有机提取物致大鼠肝脏DNA及蛋白质的氧化损伤情况。方法采集某地管网末梢水,利用固相萃取法提取水样中有机污染物,对40只SD大鼠进行经口灌胃亚慢性染毒(12周)。设立溶剂对照组(玉米油)和3个染毒组(剂量分别为5 L/kg BW·d、20 L/kg BW·d、80 L/kg BW·d)。8羟基脱氧鸟苷(8-OHd G)采用酶联免疫法(ELISA)、蛋白质羰基(PCO)采用2,4-二硝基苯肼(DNPH)比色法、蛋白定量采用微量酶标法检测。结果随染毒剂量的增加,大鼠血清8-OHd G含量呈上升趋势,与溶剂对照组比较,中、高剂量组的升高差异有统计学意义(P0.05);大鼠肝组织8-OHd G含量亦在中、高剂量组明显升高(P0.05)。随染毒剂量的增加,大鼠肝组织PCO含量呈上升趋势,与溶剂对照组比较,中、高剂量组的升高差异有统计学意义(P0.05)。相关性分析显示,大鼠血清8-OHd G含量、肝组织8-OHd G含量及肝组织PCO含量均与有机提取物染毒剂量呈高度正相关关系(相关系数分别为0.9383,0.8631和0.9136,均P0.05),同时大鼠血清8-OHd G含量与肝组织8-OHd G含量亦呈高度正相关关系(相关系数为0.9843,P0.05)。结论饮用水有机提取物较高剂量接触可诱发大鼠肝脏DNA及蛋白质的氧化损伤,此可能为饮用水有机提取物肝脏毒性重要机制之一。     

苯及其同系物接触对细胞色素P450酶活力的影响

目的探讨在职业接触中,苯及其同系物对细胞色素P450(CYPlAl、CYP2E1)酶活力的影响。方法对苯接触组和对照组中工人的血液样本进行检测,得出其细胞色素P450的酶活力并进行分析。结果苯接触组与对照组CYP1A1酶活力分别为(0.075±0.054)和(0.660±0.437)μmol/(mg.min);CYP2E1酶活力分别为(0.361±0.267)和(0.573±0.040)μmol/(mg.min)。2组酶活力差异存在统计学意义(P<0.01,P<0.05)。苯接触组男性CYP1A1野生型及变异纯合型的酶活力明显低于对照组。结论苯接触对CYP1A1野生型及变异纯合型男性酶活力存在一定的影响,对CYP2E1杂合型也存在一定的影响。     

GSTM1和CYP2E1遗传多态及饮酒因素对苯酚和丙酮作业工人DNA损伤的影响

目的　研究GSTM 1和CYP2E1基因型与苯酚、丙酮生产工人外周血淋巴细胞DNA损伤的关系。方法　应用PCR RFLP方法对苯酚、丙酮作业工人和非接触对照人员的GSTM1和CYP2E1基因型进行检测 ,采用“彗星”电泳技术检测外周血淋巴细胞DNA的损伤。结果　苯酚、丙酮作业工人中GSTM1基因缺陷型个体的人均彗星细胞数为 (1 34± 1 38) ,彗星细胞尾长与总长的比值为 (0 17± 0 15 ) ,与基因正常型个体比较 ,差异有显著性 (P <0 0 5 ) ,CYP2E1突变型酒精消耗个体人均彗星细胞数为 (1 88± 0 83) ,彗星细胞尾长与总长的比值为 (0 2 2± 0 11) ,均明显高于野生型非酒精消耗个体 ,差异有显著性 (P <0 0 5 ,P <0 0 1)。结论　苯酚、丙酮作业工人的DNA损伤因GSTM 1和CYP2E1基因型的不同存在差异 ,饮酒可加重损害作用     

CYP2E1 Ras Ⅰ基因型对苯酚诱导的酶活性和DNA损伤作用的影响

[目的]研究3种CYP2E1Ras，基因型对苯酚诱导永生化人淋巴细胞的CYP2E1酶活性及DNA损伤作用的影响。[方法]加入不同浓度的苯酚对CYP2E1Ras，不同基因型的永生化人淋巴细胞进行24—72h染毒，采用四甲基偶氮唑蓝法（Methyl Thiazolyl Tetrazolium，MTY）测定细胞毒性并确定苯酚染毒剂量；采用苯胺分光光度法测定CYP2E1酶活性；采用单细胞凝胶电泳（SCGE）法测定DNA损伤作用。[结果]0．05％苯酚24h染毒对CYP2E1Ras，野生、杂合及突变基因型细胞均产生生长抑制作用，苯酚对细胞24～72h染毒的最大无作用浓度为0．01％。各基因型细胞经一定浓度苯酚诱导后酶活性升高（P〈0．05），其中野生型细胞经0,005％和0．01％浓度的苯酚染毒可出现酶活性增高的效应，突变型和杂合型细胞经0,01％浓度染毒可出现酶活性增高的效应，且染毒72h时，在0．01％苯酚染毒剂量下各基因型细胞的CYP2E1酶活力出现明显差异，其中野生基因型细胞的CYP2E1酶活力显著高于突变型、杂合型基因型细胞（P〈0．05）。各基因型细胞经一定浓度苯酚染毒后可出现DNA损伤效应，与对照相比，细胞的拖尾率、尾DNA含量及尾长显著升高（P〈0．05），且染毒48h、72h时，野生基因型细胞的DNA损伤效应与突变型、杂合型细胞相比更为明显（P〈0．05）。苯酚诱导后细胞的DNA损伤与CYP2E1酶活性之间呈现明显正相关性。[结论]CYP2E1Rasj不同基因型明显影响苯酚对人淋巴细胞CYP2E1酶的诱导活性和DNA的损伤程度，其中CYP2E1Ras，野生基因型细胞的作用最为明显。     

CYP2E1 Ras I基因型对苯酚诱导的酶活性和DNA损伤作用的影响

[目的]研究3种CYP2E1 Ras I基因型对苯酚诱导永生化人淋巴细胞的CYP2E1酶活性及DNA损伤作用的影响。[方法]加入不同浓度的苯酚对CYP2E1 Ras I不同基因型的永生化人淋巴细胞进行24～72 h染毒,采用四甲基偶氮唑蓝法(Methyl Thiazolyl Tetrazolium,MTT)测定细胞毒性并确定苯酚染毒剂量;采用苯胺分光光度法测定CYP2E1酶活性;采用单细胞凝胶电泳(SCGE)法测定DNA损伤作用。[结果]0．05％苯酚24 h染毒对CYP2E1 Ras I野生、杂合及突变基因型细胞均产生生长抑制作用,苯酚对细胞24～72 h染毒的最大无作用浓度为0．01％。各基因型细胞经一定浓度苯酚诱导后酶活性升高(P<0．05),其中野生型细胞经0．005％和0．01％浓度的苯酚染毒可出现酶活性增高的效应,突变型和杂合型细胞经0．01％浓度染毒可出现酶活性增高的效应,且染毒72 h时,在0．01％苯酚染毒剂量下各基因型细胞的CYP2E1酶活力出现明显差异,其中野生基因型细胞的CYP2E1酶活力显著高于突变型、杂合型基因型细胞(P<0．05)。各基因型细胞经一定浓度苯酚染毒后可出现DNA损伤效应,与对照相比,细胞的拖尾率、尾DNA含量及尾长显著升高(P<0．05),且染毒48 h、72 h时,野生基因型细胞的DNA损伤效应与突变型、杂合型细胞相比更为明显(P<0．05)。苯酚诱导后细胞的DNA损伤与CYP2E1酶活性之间呈现明显正相关性。[结论]CYP2E1 Ras I不同基因型明显影响苯酚对人淋巴细胞CYP2E1酶的诱导活性和DNA的损伤程度,其中CYP2E1 Ras I野生基因型细胞的作用最为明显。     

Polymorphisms in GSTT1, GSTZ1, and CYP2E1, Disinfection By-products,and Risk of Bladder Cancer in Spain

Background

Bladder cancer has been linked with long-term exposure to disinfection by-products (DBPs) in drinking water.

Objectives

In this study we investigated the combined influence of DBP exposure and polymorphisms in glutathione S-transferase (GSTT1, GSTZ1) and cytochrome P450 (CYP2E1) genes in the metabolic pathways of selected by-products on bladder cancer in a hospital-based case–control study in Spain.

Methods

Average exposures to trihalomethanes (THMs; a surrogate for DBPs) from 15 years of age were estimated for each subject based on residential history and information on municipal water sources among 680 cases and 714 controls. We estimated effects of THMs and GSTT1, GSTZ1, and CYP2E1 polymorphisms on bladder cancer using adjusted logistic regression models with and without interaction terms.

Results

THM exposure was positively associated with bladder cancer: adjusted odds ratios (ORs) and 95% confidence intervals (CIs) were 1.2 (0.8–1.8), 1.8 (1.1–2.9), and 1.8 (0.9–3.5) for THM quartiles 2, 3, and 4, respectively, relative to quartile 1. Associations between THMs and bladder cancer were stronger among subjects who were GSTT1 +/+ or +/− versus GSTT1 null (p_interaction = 0.021), GSTZ1 rs1046428 CT/TT versus CC (p_interaction = 0.018), or CYP2E1 rs2031920 CC versus CT/TT (p_interaction = 0.035). Among the 195 cases and 192 controls with high-risk forms of GSTT1 and GSTZ1, the ORs for quartiles 2, 3, and 4 of THMs were 1.5 (0.7–3.5), 3.4 (1.4–8.2), and 5.9 (1.8–19.0), respectively.

Conclusions

Polymorphisms in key metabolizing enzymes modified DBP-associated bladder cancer risk. The consistency of these findings with experimental observations of GSTT1, GSTZ1, and CYP2E1 activity strengthens the hypothesis that DBPs cause bladder cancer and suggests possible mechanisms as well as the classes of compounds likely to be implicated.     

CYP1A2基因沉默及其对三氯乙烯毒性影响

目的 构建细胞色素氧化酶1A2(CYP1A2)基因沉默载体,转染L02人正常肝细胞(简称“L02细胞”),建立CYP1A2沉默细胞株并观察其对三氯乙烯(TCE)毒性的影响.方法 设计合成短发卡RNA(shRNA),连接到pLKO.1-puro质粒中构建CYP1 A2 shRNA慢病毒表达载体,感染L02细胞.筛选CYP1A2沉默细胞株,采用荧光定量聚合酶链式反应和免疫印迹法鉴定.分别采用浓度为0.25、0.50、1.00、2.00和4.00 mmol/L的TCE(设为相应的染毒剂量组)对L02细胞和CYP1A2沉默细胞染毒12h,同时设置二甲基亚砜溶剂对照组(即0.00 mmoL/L染毒剂量组),观察凋亡基因[B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3、Caspase-8、Caspase-9]和癌基因(c-fos、c-myc、K-ras、p53)等基因表达的变化.结果 测序证明插入pLKO.1-puro载体的CYP1A2基因干扰序列与设计的shRNA 序列一致.CYP1A2沉默细胞的CYP1A2mRNA和CYP1A2蛋白相对表达水平分别较L02细胞下降75.9％和82.4％(P＜0.01).TCE染毒后,0.25 ～4.00 mmol/L 4个染毒剂量组CYP1A2沉默细胞Bcl-2表达水平均高于相应染毒剂量组L02细胞(P＜0.01);部分0.25 ～4.00 mmol/L染毒剂量组Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9和c-fos、c-myc k-ras、p53相对表达水平均低于相应染毒剂量组的L02细胞(P＜0.05或P＜0.01).结论 CYP1A2沉默降低TCE对L02细胞凋亡基因和癌基因的活化作用.     

CYP 2E1 5''''侧翼区基因多态性与职业性锰中毒易感性病例对照研究

[目的]探讨CYP2E1 5'侧翼区基因多态性与职业性慢性锰中毒易感性的关系.[方法]本研究以51例职业性锰中毒患者为病例,以相同环境锰暴露而未发病、匹配条件相当者为对照,进行11配对病例-对照研究,应用PCR-RFLP方法进行CYP2E1 5'侧翼区基因Pst Ⅰ/Rsa Ⅰ位点和DraⅠ位点多态性分析.[结果]CYP2E1基因Rsa Ⅰ位点基因型及等位基因的分布在病例组和对照组之间差异无统计学意义.CYP2E1 Dra Ⅰ位点基因型分布在病例组和对照组有差别.CYP2E1基因Dra Ⅰ位点野生型纯合子(DD)在病例组的分布明显高于对照组,突变型纯合子(CC)在病例组的分布明显低于对照组.[结论]携带野生型CYP2E1基因者,其Dra Ⅰ位点更易突变,对锰的神经毒性可能更敏感,推测CYP2E1基因的多态性可能与锰中毒的易感性有关.     

特征性化学物对CYP2A13代谢活化黄曲霉毒素B1的影响

黄曲霉毒素B1（AFB1）污染是一个全球性公共卫生问题,在发展中国家问题尤为严重。尽管AFB1是一种公认的肝致癌物,但有研究表明,AFB1与呼吸系统肿瘤的发生有关。虽然以往的研究表明CYPIA2是代谢活化AFB1的关键酶,但由于其主要在肝脏中表达,而在肺脏中甚微,因而至今还不清楚在人肺脏中究竟哪些CYPs在AFB1的代谢活化中发挥关键作用。我们前期研究结果表明,CYP2A13可以高效地代谢活化AFB1,且CYP2A13主要在人呼吸系统组织中表达,研究结果为深入探讨AFB1污染与人群呼吸系统肿瘤发生的关系提供了新的途径。