亚甲蓝光化学法病毒灭活血浆技术及应用

随着医学技术的发展,血液的安全性越来越受到重视。为提高输血安全性,在血液检测项目增加的同时,血液检测技术也在不断改进。但这些都无法完全杜绝输血传播病毒的可能性。近年来发展起来的亚甲蓝光化学法血浆病毒灭活技术对于提高输血安全性有很大潜力,本文就该技术的研究进展,以及在我国血站开展后的应用情况进行综述。     

联合应用滤除白细胞和亚甲蓝光化学病毒灭活对新鲜血浆成分的影响

目的探讨联合应用滤除白细胞和亚甲蓝光化学病毒灭活处理后血浆主要成分的生物活性变化。方法应用去白细胞四联血袋采集全血分离制备成滤除白细胞的新鲜血浆10袋(100 ml/袋),加入1μmol/L亚甲蓝并放置2~6℃,光照度为30 000 Lux的可见光下左右摆动照射30 min。留取白细胞滤过前和亚甲蓝光照处理后新鲜血浆各5 ml,分别计数白细胞并检测血浆中部分凝血因子活性,血浆蛋白含量和补体水平变化。结果 2种方法处理后的新鲜血浆白细胞滤除率>99.91%,APTT,FⅧ∶C、FⅨ∶C水平与处理前比较t值分别为3.041、8.039、3.617,P<0.05。FⅧ∶C,FⅨ∶C回收率均>81%。PT,FⅡ∶C Fib较处理前无统计学意义,P>0.05。血浆白蛋白,IgG、IgM、IgA以及补体C3,C4水平较处理前变化不大。结论联合应用滤除白细胞和亚甲蓝光化学灭活病毒法对新鲜血浆处理前后的主要成分和生化指标影响不大。     

亚甲蓝光化学法病毒灭活血浆对凝血因子的影响

目的:探讨亚甲蓝(methylene blue,MB)光化学法病毒灭活血浆对凝血因子的影响.方法:制备过程中随机抽取新鲜血浆120人份,根据新鲜血浆进行病毒灭活情况分为对照组和试验组,分别对上述两组标本进行PT、APTT、TT、Fg、FⅤ、FⅧ、TP测定.对照组,即新鲜冰冻血浆(fresh frozen plasma,FFP)组,不进行病毒灭活,直接进行检测;试验组,即病毒灭活血浆组,先对其进行MB法病毒灭活,后再检测.结果:试验组中APTT、FⅤ、FⅧ水平与对照组比较差异有显著性(P＜0.01),PT、TT、Fg、TP较对照组无显著变化(P＞0.05).结论:MB法病毒灭活对于新鲜血浆中内源性凝血因子,特别是不稳定因子FⅤ、FⅧ有显著影响,对外源性凝血因子及血浆蛋白成分影响不大.     

亚甲蓝光化学法灭活血浆病毒的研究进展

提高血液制备技术，可有效地减少经血传播传染性疾病的发生。亚甲蓝（methylene blue，MB）光化学法灭活病毒技术能提高血浆输注的安全性，本文针对该技术的研究进展进行系统综述。     

亚甲蓝光化学病毒灭活法对血浆质量指标的影响

<正>血浆输注在临床输血中占有重要的地位,主要用于治疗各种凝血因子缺乏引起的凝血功能障碍。由于血浆传播病毒的危险比较大,因此,用适合于血浆病毒灭活的方法处理临床输注的血浆,对于提高输血的病毒安全性有重要意义。本站于2007年8月起对血浆进行亚甲蓝光化学病毒灭活法处理后才供应于临床。为探讨本灭活处理对血浆FⅧ因子、纤维蛋白原和总蛋白几个质量指标的影响,笔者对病毒灭活后的血浆FⅧ因子、纤维蛋白原和总蛋白的抽样进行检测,现报道如下。     

亚甲蓝光病毒灭活血浆的研究进展

随着输血医学的发展,血液安全得到了显著改善,但仍受到新发传染病病原体和未知病原体的威胁。免疫介导的反应是输注血浆最常见的不良反应。血浆输注的两大风险是感染风险和免疫风险。亚甲蓝光化学法是目前我国用于血浆病毒灭活的主要方法之一,能有效灭活大多数脂质包膜病毒。为探讨亚甲蓝光病毒灭活血浆应用的安全性,本文对其灭活病毒的有效性、对凝血因子的影响、输注的不良反应及血浆残余亚甲蓝的安全性作一综述。     

亚甲蓝光化学法血浆病毒灭活前后血浆成分的变化

目的探讨亚甲蓝光化学法（methylene blue photochemistry,MB-P）病毒灭活前后血浆有效成分及残留白细胞含量的变化,为临床应用病毒灭活血浆进行治疗提供剂量使用依据。方法对152份全血分离制备的血浆进行MB-P病毒灭活,灭活前后留样,制成新鲜冰冻血浆后融化,测定纤维蛋白原、因子、总蛋白及残留白细胞的含量,同时计算有效成分回收率。结果经MB-P病毒灭活后新鲜冰冻血浆中因子和纤维蛋白原含量明显降低,差异有统计学意义;但总蛋白含量无明显变化,因子回收率达到80.8%,纤维蛋白原回收率为74.9%;残留白细胞计数由（3.0±2.1）×10^6/L下降到（7.4±1.4）×10^4/L（n=30）,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论MB-P病毒灭活血浆可以提高血浆输注安全性。建议临床应用MB-P病毒灭活血浆应在原使用剂量基础上增加25%的用量,以保证临床治疗效果。     

亚甲蓝光化学法灭活病毒的分子生物学机制

用模型病毒进行的基本反应机制研究表明．亚甲蓝（Methylene blue,MB）光化学法灭活病毒时形成的病毒RNA-蛋白交联是导致病毒灭活的主要损伤。此外,氧．特别是亚甲蓝被光激活后通过Ⅱ型途径所产生的单线态氧。对亚甲蓝光化学法灭活病毒也起到重要作用。     

亚甲蓝光化学法病毒灭活对血浆主要质量指标的影响

目的探讨亚甲蓝（MB）／光化学法病毒灭活对血浆主要质量指标的影响。方法随机抽取新鲜血浆192袋,分别于病毒灭活前和病毒灭活后无菌留取血浆标本各1ml,对凝血因子（Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ、Ⅺ、Ⅻ）的活性及血浆纤维蛋白原（Fg）和血浆总蛋白（TP）的含量进行测定。结果采用MB／光化学法对血浆进行病毒灭活后,凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ、Ⅺ、Ⅻ的活性及Fg和TP的含量均有一定程度的降低,但仍然符合国家要求。结论采用MB光化学法进行血浆病毒灭活,对血浆主要质量指标无显著影响。临床输注病毒灭活冰冻血浆,疗效可靠,无不良反应。     

亚甲蓝光化学法病毒灭活对血浆质量的影响

目的探讨亚甲蓝光化学法(methylene blue photochemistry,MB-P)病毒灭活对不同规格血浆质量的影响,为临床应用病毒灭活血浆提供参考依据。方法测定90份血浆(包含25份100 ml/袋和10份50 ml/袋)病毒灭活前、后的Fib、Ⅴ因子、Ⅷ因子和总蛋白含量,PT、APTT的变化情况;同时测定20份病毒灭活血浆(包含10份150 ml/袋和10份200 ml/袋)的有效Fib、Ⅴ因子、Ⅷ因子和总蛋白含量;PT、APTT的变化情况。结果 Fib、Ⅴ因子、Ⅷ因子和APTT灭活前后差异比较:t值分别为10.30、14.09、12.15、5.00,P<0.05;TP的回收率为97.13%;Fib的回收率为82.1%;Ⅴ因子的回收率为81.3%;Ⅷ因子的回收率82.9%。不同规格的病毒灭活血浆除Fib和Ⅷ因子有差异(大规格优于小规格)。结论经MB-P病毒灭活的血浆,提高输血安全的同时也造成有效成分一定程度的损失,在临床应用时应在原来的剂量基础上增加约20%的用量,同等输注量尽量减少使用的血浆袋数,有利于达到预期效果,也可减少输血不良反应的发生。     

亚甲蓝光化学法病毒灭活血浆的质量控制措施

自2005年以来,本站已对部分血浆进行了病毒灭活,临床应用效果令人满意,并且用量呈逐年上升的趋势,现将本站的做法和体会介绍如下.     

亚甲蓝光化学法对血浆凝血因子活性的影响研究

目的考察亚甲蓝光化学法中各种因素对血浆凝血活性和主要成分的影响。方法将血浆分为3组,每组10袋(200 m l/袋),加入亚甲蓝至终浓度为1μmol/L,分别采用照度为2 000 lux的红光(Ⅰ组)、10 000 lux的荧光(Ⅱ组)和30 000 lux的荧光(Ⅲ组)照射30 m in,然后采用3种不同灭菌方式(高压蒸汽、环氧乙烷和辐照灭菌)的滤器过滤去除血浆中的亚甲蓝。检测处理前后血浆的PT、APTT、FⅧ、纤维蛋白原等的变化情况。结果加入亚甲蓝前后,血浆的PT、APTT无明显差异,FⅧ∶C分别为(103.96±2.54)%vs(95.50±1.92)%。不同的光源光照后,3组血浆的PT在光照前后无明显差异。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组光照前后血浆的APTT分别为(34.93±1.26)svs(39.96±2.54)s,(35.87±1.83)svs(40.37±1.58)s,(35.73±1.92)svs(41.66±2.01)s。光照后3组血浆的FⅧ∶C的回收率分别为(89.05±1.36)%,(87.04±1.03)%,(84.62±0.51)%。采用不同灭菌方式的滤器过滤后,3组血浆的PT无明显差异。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组血浆过滤前后的APTT分别为(39.96±2.54)svs(41.37±2.14)s,(40.37±1.58)svs(42.21±2.17)s,(41.66±2.01)svs(55.64±2.34)s。3组血浆经滤器过滤去除亚甲蓝后的FⅧ∶C的回收率分别为(93.75±1.23)%,(93.05±1.54)%,(58.61±1.17)%。亚甲蓝光化学法灭活病毒后滤除亚甲蓝的血浆的纤维蛋白原和总蛋白的回收率分别为(77.30±0.18)%和(97.57±1.78)%。结论亚甲蓝光化学法中亚甲蓝、光源、过滤对PT无明显影响,但APTT有所延长,且FⅧ和纤原都有不同程度的损失;高照度的荧光、辐照灭菌的滤器对APTT和FⅧ影响最大。     

亚甲蓝光化学法病毒灭活前后血浆凝血因子等的质量分析

目的探讨亚甲蓝光化学法(methylene blue photochemistry,MB-P)病毒灭活前后血浆成分的活性与含量,为国家制定病毒灭活血浆的质量标准提供参考依据。方法随机抽取40人份全血按照标准操作规程制备新鲜血浆和病毒灭活新鲜血浆,同1人份制备的新鲜血浆分2组留样,1组为不灭活的新鲜血浆(记为灭活前组),另1组为病毒灭活后新鲜血浆(记为灭活后组),检测灭活前后样本的FⅡ∶C、FⅤ∶C、FⅦ∶C、FⅧ∶C、FⅨ∶C、FⅩ∶C、Fg和总蛋白含量的变化。结果病毒灭活前后FⅡ∶C、FⅤ∶C、FⅦ∶C、FⅧ∶C、FⅨ∶C、FⅩ∶C、Fg的含量比较:t值分别为7.335 2、6.169 3、6.091 3、6.808 1、10.397 2、7.448 3、13.806 1,均为P0.05;总蛋白含量:灭活前61.5±6.98、灭活后62.00±5.93,t为0.422 9,P0.05。结论血浆经亚甲蓝灭活处理后6种凝血因子活性及纤维蛋白原含量均降低,总蛋白含量无明显差异,说明病毒灭活对血浆成分的活性损伤是存在的,但在可接受的范围内。     

亚甲基蓝光化学法灭活血浆中病毒研究的新进展

亚甲基蓝与可见光结合可高效灭活脂包膜病毒，如输血传播的ＨＩＶ、ＨＣＶ、ＨＢＶ等，血浆成分没有免疫学特征改变和新抗原产生，大多数血浆蛋白成分活性均未降低。亚甲基蓝作为光敏染料不可逆地插入病毒核酸，诱导断裂缺口产生，导致病毒功能和遗传结构基础破坏。ＭＢ的毒理学性质渐已阐明。静脉注射用ＭＢ可随血浆输入人体，未发现输血后副反应。ＭＢ／光化学法灭活单袋血浆中的病毒为成分输血的血液制品提供了更为安全、简便的病     

1年保存期内病毒灭活新鲜血浆中凝血因子的质量调查

目的 探讨亚甲蓝光化学法(MB-P)灭活处理新鲜血浆后对1年保存期内部分凝血因子活性的影响.方法 随机抽取30(人)份全血(400 ml/份),按照标准操作规程将每份制备成新鲜血浆和病毒灭活新鲜血浆(100ml/份),分成未灭活组和灭活组,分别检测保存0(制备期＜1个月检测)、6、8、10、12个月后的2组各自的FⅡ∶C、FⅤ:C、FⅦ∶C、FⅧ∶C、FⅨ∶C、FⅩ:C及Fg含量变化.结果 与未灭活组相比,灭活组除FⅦ∶C含量无明显变化外,其他6种凝血因子含量在保存期内均明显下降(尤其FⅧ∶C和Fg下降最为明显);0、6、8、10、12个月保存时间的FⅧ∶C含量(％)分别为灭活前58.7±20.1、59.6±34.0、52.0±35.3、57.5±34.7、54.1±31.2和灭活后45.8±13.9、49.3±23.5、44.6±21.7、49.7±22.9、43.9±20.7(均为P＜0.05),Fg含量(mg/dl)分别为灭活前225.3±72.3、277.9±64.2、272.3±74.9、262.6±70.8、287.55±83.0)和灭活后188.8±54.7、205.8±54.0、205.8±54.0、220.2±66.7、202.2±56.8(均为P＜0.05).保存0和12个月相比,FⅩ:C含量(％)分别为93.0±30.5 vs 83.1±18.0(P ＜0.05).结论 新鲜血浆经MB-P病毒灭活处理后,1年冰冻保存期内起7种凝血因子含量相对稳定;MBP对凝血因子活性造成了一定损伤(尤其是Fg和FⅧ:C),但除FⅧ∶C外,其他凝血因子含量在可接受的范围内.     

亚甲蓝光化学法对血浆中细菌的灭活效果初步观察

目的 观察亚甲蓝光化学法灭活血浆中已知细菌的效果.方法 用高浓度的革兰阳性菌和革兰阴性菌作为指示菌株,接种入血浆,采用 BacT/Alert全自动血培养仪进行细菌筛检,观察细菌灭活效果.结果 亚甲蓝结合可见光照射后的血浆中没有检测到细菌,而未灭活的血浆样本通过BacT/alert全自动血培养仪检测到细菌.结论 初步证明...     

亚甲蓝/光化学法灭活病毒对血浆成分的影响

背景:对血液进行病毒灭活是保障安全输血的措施之一,亚甲蓝/光化学法灭活人血浆中病毒的效果已被证实,但其对血浆成分影响的报道很少。目的:观察亚甲蓝光化学法病毒灭活血浆对血液成分结构和功能的影响。方法:随机选择40份采血后6h内400mL全血制备的新鲜血浆称质量留样,然后与亚甲蓝病毒灭活过滤器无菌连接,亚甲蓝的终浓度在0.9～1.3μmol/L。将加入亚甲蓝的血浆置入4℃病毒灭活箱的搁架上,摆动频率60次/min,利用32000～38000Lx光照强度的可见光4℃照射35min,将光照后的血浆通过病毒灭活过滤器滤除亚甲蓝和残余白细胞,混匀后留样10mL,立即置于-80℃冰箱冻存。检测照射前后样品的血浆量、亚甲蓝浓度、FⅧ∶C、FⅤ∶C、VWF、Fib含量的变化。结果与结论:血浆病毒灭活后血浆容量、FⅧ∶C、FⅤ∶C、VWF、Fib的回收率分别为(96.39±1.73)%、(82.55±9.25)%、(81.03±15.27)%、(93.25±6.17)%、(81.61±14.25)%。亚甲蓝光化学法灭活血浆病毒对血浆中大多数成分的影响不明显,可以满足临床安全输血的需求。     

亚甲蓝/光化学法灭活病毒对血浆成分的影响

背景：对血液进行病毒灭活是保障安全输血的措施之一,亚甲蓝/光化学法灭活人血浆中病毒的效果已被证实,但其对血浆成分影响的报道很少。目的：观察亚甲蓝光化学法病毒灭活血浆对血液成分结构和功能的影响。方法：随机选择40份采血后6h内400mL全血制备的新鲜血浆称质量留样,然后与亚甲蓝病毒灭活过滤器无菌连接,亚甲蓝的终浓度在0.9～1.3μmol/L。将加入亚甲蓝的血浆置入4℃病毒灭活箱的搁架上,摆动频率60次/min,利用32000～38000Lx光照强度的可见光4℃照射35min,将光照后的血浆通过病毒灭活过滤器滤除亚甲蓝和残余白细胞,混匀后留样10mL,立即置于-80℃冰箱冻存。检测照射前后样品的血浆量、亚甲蓝浓度、FⅧ∶C、FⅤ∶C、VWF、Fib含量的变化。结果与结论：血浆病毒灭活后血浆容量、FⅧ∶C、FⅤ∶C、VWF、Fib的回收率分别为（96.39±1.73）%、（82.55±9.25）%、（81.03±15.27）%、（93.25±6.17）%、（81.61±14.25）%。亚甲蓝光化学法灭活血浆病毒对血浆中大多数成分的影响不明显,可以满足临床安全输血的需求。     

光照度对亚甲蓝光化学法灭活血浆病毒的影响

目的在亚甲蓝(Methylene Blue,MB)光化学法灭活血浆病毒的过程中,采用不同光照度对血浆进行灭活,探讨血浆主要生化指标的变化情况,以找出对血浆影响最小的灭活光照度。方法将300袋机器单采血浆(200ml/袋),处理为含MB浓度为1μmol/L的MB血浆。分3组(100袋/组),分别置于3种不同光照度下处理35min(其它灭活条件相同),并检测血浆相关质控指标。结果在MB光化学法灭活血浆的过程中,不同光照度对血浆总蛋白浓度和凝血因子Ⅷ含量会造成不同影响,而对血浆其它主要成分和生化指标的影响不明显。结论初步证明,当可见光的光照度为30000—33000Lux时,MB光化学法灭活血浆的主要成分和生化指标变化最小,较适合于输注人体。