茶多酚对卵巢癌SKOV3细胞自噬水平的影响及相关机制研究

目的研究茶多酚(EGCG)对人卵巢癌SKOV3细胞自噬水平的影响及相关机制。方法用EGCG处理SKOV3细胞,Western blot检测自噬相关蛋白LC3-II及蛋白激酶B(PKB)信号通路相应蛋白表达变化。结果 EGCG处理SKOV3细胞后,自噬相关蛋白LC3-II表达上调,并呈一定的时间浓度依赖性。EGCG处理SKOV3细胞后,AKT的磷酸化水平下调,AKT激活剂胰岛素样生长因子1(IGF-1)预处理后,自噬相关蛋白LC3-II高表达被抑制。结论 EGCG通过AKT介导的信号通路诱导SKOV3细胞自噬水平升高。     

G9a在L-NAME诱导胎盘滋养细胞自噬中的作用

目的探讨组蛋白甲基转移酶G9a在胎盘滋养细胞自噬中的作用。方法体外培养人胎盘滋养细胞,加入100μmol/L N-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)干预48 h后,Western blot检测自噬相关蛋白LC3II/I,p62以及G9a的蛋白表达,感染自噬流双标腺病毒(mRFP-GFP-LC3双标腺病毒)观察自噬流的改变,了解L-NAME对滋养细胞自噬的影响及G9a的表达改变;在细胞中转染G9a过表达腺病毒及干扰质粒,Western blot和qRT-PCR对G9a自身表达进行验证,同时给予100μmol/L L-NAME后,Western blot检测自噬相关蛋白LC3II/I和p62的蛋白表达,阐明G9a在L-NAME介导的滋养细胞自噬中的作用。结果与对照组比较,L-NAME组LC3II/I增加1.4倍,p62表达降低40%,G9a表达降低38%,差异均有统计学意义(P0.05);且观察到滋养细胞内自噬体及自噬溶酶体均增多,自噬增强。过表达G9a后自噬相关蛋白LC3II/I表达降低降22%,p62表达升高2.12倍,差异有统计学意义(P0.05);干扰G9a后,p62表达降低62%,差异有统计学意义(P0.05)。结论 G9a可抑制L-NAME诱导的胎盘滋养细胞自噬的发生。     

丹酚酸B介导AMPK活化加剧氧化应激诱导的甲状腺癌细胞凋亡和自噬

【摘要】 目的 探讨丹酚酸B对氧化应激诱导的甲状腺癌细胞凋亡和自噬的影响。 方法 选择不同浓度的丹酚酸B处理甲状腺癌TPC-1和甲状腺滤泡上皮细胞Nthy-ori 3-1细胞,24 h后CCK8检测细胞存活率;选择无显著毒性的剂量 (2.5、5、10 μg/mL) 进行后续实验,流式细胞术检测细胞内活性氧（ROS）水平和细胞凋亡;蛋白印迹法检测细胞内和线粒体内细胞色素C以及凋亡、自噬相关蛋白的表达水平;免疫荧光检测LC3的水平;此外,在细胞中加入腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）抑制剂Compound C (50 nM) 后,将细胞随机分为对照组、丹酚酸B 10 μg/mL组、Compound C组、Compound C+丹酚酸B 10μg/mL组,〖JP2〗流式细胞术检测细胞内ROS水平和细胞凋亡;蛋白印迹法检测AMPK相关蛋白和自噬相关蛋白的表达。结果 TPC-1 和Nthy-ori 3-1细胞的存活率以丹酚酸B浓度依赖的方式降低,丹酚酸B浓度超过20 μg/mL时,TPC-1细胞的存活率显著降低（P＜0.05）;当丹酚酸B浓度超过40 μg/mL时,Nthy-ori 3-1细胞的存活率显著降低（P＜0.05）。与对照组相比,经5、10 μg/mL丹酚酸B预处理后,TPC-1细胞内的ROS水平、凋亡率、Bax、Cleaved caspase 3、Beclin1和细胞质中Cyto C的蛋白表达水平、LC3的水平、AMPK磷酸化水平、LC3 II/LC3-I 的比值均显著升高（P＜0.05）;Bcl-2、P62和线粒体中Cyto-C的蛋白表达水平均显著降低（P＜0.05）。与对照组相比,丹酚酸B 10 μg/mL组AMPK磷酸化水平、LC3 II/LC3 I比值、ROS水平、细胞凋亡率均显著升高（P＜0.05）;Compound C组AMPK磷酸化水平,LC3-II/LC3-I比值、ROS水平、细胞凋亡率均显著降低（P＜0.05）。与Compound C组比较,Compound C+丹酚酸B 10 μg/mL组AMPK磷酸化水平、LC3-II/LC3-I 的比值、ROS水平、细胞凋亡率均显著升高（P＜0.05）。结论 5、 10 μg/mL的丹酚酸B可通过介导的AMPK活化加剧氧化应激诱导的甲状腺癌细胞的凋亡和自噬,以10 μg/mL的丹酚酸B效果最佳。     

多种细胞自噬调节剂对自噬标记物LC3II及p62表达的影响

利用Western杂交检测自噬标记物LC3II和p62的表达是评价细胞自噬活性的常用方法。为了比较作用于不同靶点的细胞自噬调节剂对LC3II和p62表达的影响,分别利用以mTOR依赖或非依赖方式活化细胞自噬的雷帕霉素或海藻糖、抑制自噬起始的3-甲基腺嘌呤、抑制自噬小体与溶酶体融合的巴弗洛霉素A1以及抑制溶酶体酶活性的E64d和pepstatin A处理HEK293细胞,通过Western杂交检测LC3II和p62的表达。结果显示,雷帕霉素增强LC3I向LC3II转化,促进p62降解,而海藻糖仅引起LC3II表达的上调;阻断细胞自噬过程各个阶段均导致LC3II和p62堆积,并呈现出剂量和时间依赖性。这些结果提示尽管LC3II和p62均为自噬标记物,但不同的调节剂对其表达的调控存在差异。     

PM2.5对小鼠肺部自噬、核因子相关因子2、核因子κB表达影响实验研究

目的:探究PM2.5对小鼠肺部自噬及核因子相关因子2(Nrf2)、核因子κB(NF-KB)表达的影响。方法:以32只SPF级BALB/c雄性小鼠为研究对象,随机分为正常组、低剂量组、中剂量组和高剂量组。正常组使用生理盐水,低剂量组、中剂量组和高剂量组使用PM2.5,浓度分别为25 mg/L、50 mg/L和100 mg/L,通过雾化进入玻璃容器内。观察不同浓度PM2.5对小鼠肺组织的影响,对不同组别肺部自噬相关蛋白、Nrf2、NF-κB的表达进行检测,将Beas-2B暴露于PM2.5下,激光共聚焦显微镜下对肺部细胞自噬进行观察。结果:随着PM2.5浓度增加,小鼠肺组织结构受损程度、炎性改变均明显增大。与正常组相比,低剂量组、中剂量组和高剂量组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ条带分吸光度比值明显较高(P<0.05),且呈现明显的浓度效应关系(P<0.05)。PM2.5暴露可导致小鼠肺部细胞内Nfr2/LaminB、NF-κB p65/LaminB的光密度值明显增加(P<0.05),且具有明显的浓度效应(P<0.05)。对于仅转染pEGFP-LC3质粒的细胞,LC3在胞浆中均一表达,部分细胞细胞核中见少量LC3蛋白聚集,荧光强度较弱。对于转染pEGFP-LC3质粒和PM2.5的细胞,LC3在胞浆中呈现聚集性表达,胞核内现少量明亮荧光斑点,荧光强度明显增强。结论:PM2.5能够使小鼠肺部组织发生炎性改变,且呈浓度依赖性的提高小鼠肺部自噬、Nrf2以及NF-κB水平。     

丹参多糖促进自噬抑制脂多糖诱导的心肌细胞凋亡的实验研究

目的 探究丹参多糖(SMP)调控脂多糖(LPS)诱导的心肌细胞凋亡的机制。方法 不同浓度(0.0.5、1、2mg/mL)SMP预处理乳鼠心肌细胞12h后,1μg/mL LPS刺激乳鼠心肌细胞24h,以LPS单独处理构建心肌细胞损伤模型,对照组加入等量生理盐水,四唑盐比色法(MTT)观察细胞存活率改变,流式细胞仪检测细胞凋亡比率改变,免疫印迹(Western blot)检测各组细胞自噬相关蛋白LC3、Beclin1及凋亡相关蛋白Bax、Caspase3变化;SMP联合自噬抑制剂氯喹(CQ)或自噬激活剂雷帕霉素靶蛋白抑制剂(Torin1)处理LPS处理的心肌细胞,MTT观察细胞存活率改变,流式细胞仪(FACS)检测细胞凋亡比率改变,Western blot检测各组细胞自噬相关蛋白LC3、Beclin1及凋亡相关蛋白Bax、Caspase3变化。结果 相比于对照组,LPS 处理乳鼠心肌细胞24h,细胞活力显著下降,凋亡细胞比例升高,凋亡相关蛋白Bax、cleaved-Caspase3表达增多,自噬相关蛋白Beclin1和LC3II表达增多。相比于LPS组,丹参多糖处理组细胞活力升高,凋亡细胞比例下降,Bax、cleaved-Caspase3蛋白表达减少, LC3-II 、Beclin1蛋白表达增多;相比于丹参多糖处理组,CQ抑制细胞活力,增加细胞凋亡数,促进Bax、cleaved-Caspase3和LC3II蛋白表达,抑制Beclin1蛋白表达,Torin1上调细胞活力,减少细胞凋亡数,促进LC3-II 、Beclin1蛋白表达,抑制Bax、cleaved-Caspase3蛋白表达。结论 SMP促进自噬抑制LPS诱导的心肌细胞自噬凋亡。     

Ox-LDL对PMA诱导的THP-1巨噬细胞自噬的影响

目的探讨氧化型低密度脂蛋白（Ox-LDL）对PMA诱导的THP-1巨噬细胞自噬的影响。方法 PMA诱导THP-1细胞24 h,使其分化为巨噬细胞,再分别用0、10、20、40或80 mg/L的Ox-LDL处理24 h,逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫印迹技术（Western blotting）分别检测Beclin-1以及LC3的mRNA及蛋白表达;细胞免疫荧光检测LC3在细胞内的含量;MDC染色检测自噬囊泡的形成。结果随着Ox-LDL浓度的增加,THP-1源性巨噬细胞Beclin-1 mRNA及蛋白表达显著降低（P〈0.05）;LC3 mRNA表达无明显改变（P〉0.05）,但蛋白水平LC3II/LC3I显著降低（P〈0.001）;免疫荧光结果表明随着Ox-LDL浓度的增加,LC3II含量降低,MDC染色结果显示自噬囊泡随着Ox-LDL浓度的增加而减少。结论 Ox-LDL抑制PMA诱导的THP-1巨噬细胞自噬。     

自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤增强鼻咽癌细胞对放射和化学治疗的敏感性

目的：探讨自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)增强鼻咽癌细胞对放射治疗(放疗)和化学治疗(化疗)敏感性的作用及其相关的分子机制。方法：采用MTT法检测3-MA对细胞的增殖抑制作用;集落克隆形成法检测3-MA对细胞集落克隆形成的影响;Annexin V/PI双染法、线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)、DAPI染色检测细胞凋亡;Western 印迹检测内质网应激相关蛋白葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)、自噬相关蛋白beclin1和微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)表达。结果：不同体积浓度或剂量的顺铂(cisplatin,DDP)、电离辐射(ionizing radiation,IR)、衣霉素(tunicamycin,TM)、3-MA对鼻咽癌细胞HONE-1均具有增殖抑制作用,且随着体积浓度或剂量的增加和作用时间的延长,对HONE-1细胞增殖抑制作用随之增加。经1.00mmol/L 3-MA预处理细胞后,再次给予6.00 μmol/L DDP,4.00 Gy IR,1.00 μmol/L TM处理,细胞存活率明显降低,均低于单用组,与空白对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。3-MA增强DDP,IR,TM抑制细胞集落克隆形成作用。用6.00 μmol/L DDP或4.00 Gy IR处理HONE-1细胞24 h后,细胞凋亡率分别为5.8%和6.7%,与阴性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。JC-1和DAPI染色显示3-MA增强DDP,IR或TM诱导的细胞凋亡作用;Western 印迹结果显示DDP,IR或TM处理组GRP78,beclin1表达呈时间依赖性上调,LC3 I向LC3 II转化,3-MA预处理组beclin1表达明显降低,LC3 I向LC3 II的转化。结论：自噬抑制剂3-MA可增强鼻咽癌细胞对放化疗的敏感性,其机制可能与3-MA抑制内质网应激诱导的自噬所产生的保护作用相关。     

自噬在染料木素抑制结肠癌HCT116细胞增殖中的作用

目的:观察染料木素(genistein)对结肠癌HCT116细胞的自噬诱导作用并探讨其在抗肿瘤增殖中的作用。方法:不同浓度(0、5、10、20、40、60、80 mg/L)染料木素及80 mg/L染料木素联合2 mmol/L自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)分别作用于HCT116细胞24、48、72 h后,CCK8法检测细胞增殖活力。通过双荧光素酶慢病毒载体构建LC3及突变LC3(LC3 Mu)基因过表达的HCT116细胞,经100 mg/L的染料木素处理24 h后,荧光显微镜观测荧光在细胞内聚集情况。不同浓度(0、10、50、100 mg/L)染料木素处理HCT116细胞24 h后,Western blot检测细胞内LC3蛋白Ⅱ/Ⅰ的比例。结果:CCK8法细胞增殖实验的结果表明,染料木素对HCT116细胞具有显著的增殖抑制作用,染料木素对HCT116细胞的增殖抑制呈时间-剂量依赖性(P0.01)。染料木素对HCT116细胞的24 h、48 h、72 h半数抑制浓度IC50分别为85.70 mg/L、34.44 mg/L、20.56 mg/L,而3-MA可以降低染料木素对HCT116细胞的抗增殖作用(P0.01)。荧光显微镜观测结果表明,染料木素可以诱导HCT116细胞中LC3荧光蛋白的聚集(P0.01),从而参与自噬小体的形成;Western blot结果显示,随着染料木素浓度的增加,LC3蛋白Ⅱ/Ⅰ的比例逐渐升高(P0.01)。结论:染料木素可能通过上调LC3蛋白Ⅱ/Ⅰ的比例诱导细胞内自噬体的产生,从而抑制结肠癌细胞的增殖。     

高糖对体外培养的足细胞自噬的影响

目的:研究不同葡萄糖浓度?不同作用时间对体外培养的足细胞自噬的影响?方法:体外培养小鼠永生性足细胞系,给予不同浓度的葡萄糖(5.6?11.0?20.0?30.0 mmol/L)刺激,作用时间分别为6?12?24?36 h?Western blot检测足细胞自噬标记蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅱ的表达;透射电镜观察足细胞自噬小体的形成;荧光显微镜观察足细胞转染GFP-LC3荧光蛋白后绿色荧光蛋白颗粒的变化?结果:①与0 h相比,30 mmol/L葡萄糖刺激后足细胞LC3-Ⅱ蛋白的表达随着作用时间的延长逐渐增加,到24 h时增加最明显,差异有显著性(P < 0.05)?24 h时,透射电镜下足细胞自噬小体形成最多;荧光显微镜下足细胞转染GFP-LC3绿色荧光蛋白颗粒最多?②与对照组5.6 mmol/L相比,随着葡萄糖刺激浓度的增加足细胞LC3-Ⅱ蛋白的表达明显增加,30 mmol/L浓度时最明显,差异有显著性(P < 0.05)?结论:高糖呈浓度和时间依赖性增加体外培养的足细胞LC3-Ⅱ蛋白的表达?诱导足细胞自噬体的形成?     

麻疹的双相移位研究进展

近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。     

正常增殖期子宫内膜细胞增生状态的定量观察

以＾３氢－胸腺嘧啶核苷放射自显影法及ＨＥ染色，观察并分别测定了１８例正常子宫内膜增殖中期，１５例增殖晚期的腺上皮细胞或间质细胞的标记指数、分裂指数。结果显示：子宫内膜增殖晚期腺上皮细胞或间质细胞之ＬＩ均明显高于增殖中期。同时，增殖晚间质细胞之ＭＩ也明显高于增殖中期，即此两种细胞在增殖晚期中增生明显，其增生状态初步获得了定位定量测定的正常值。     

人工全髋关节置换术的手术配合

目的：介绍人工全髋关节置换术的手术配合做法;方法：主要在手术配合的六个方面,解决防感染、防栓塞等问题。结果：30例人工全髋关节置换术均获成功,结论：手术配合是护士责任心和基本功的全面体现,对提高手术效果有至关重要的影响。     

尿微量白蛋白检测在继发性肾脏疾病中的临床意义

目的探讨尿微量白蛋白（m-Alb）检测在继发性肾脏疾病中的临床意义。方法采用Beckman Immage全自动特种蛋白分析仪对糖尿病组、高血压组、心脏病组患者进行了m-Alb测定,同时与健康组结果作对比。结果m-Alb检测糖尿病组为3.7±5.26mg/dl,高血压组为7.5±8.18mg/dl,心脏病组为7.8±3.76mg/dl,健康组为0.66±0.48mg/dl,各试验组m-Alb增高百分率为糖尿病组48.9%,高血压组37.5%,心脏病组26.9%。结论尿蛋白阴性的糖尿病、高血压、心脏病患者进行m-Alb检测,可以监测病程的进展。     

尿液pH值对红细胞检验影响的探讨

[目的 ]通过尿液 pH值对红细胞检验影响的观察 ,更加科学、准确地诊断血尿和血红蛋白尿。[方法 ]采用干化学分析仪检测和尿液显微镜红细胞计数 ,观察 180例正常人尿标本加入正常人血标本后 ,不同 pH值 ,不同时间内 ,观察红细胞溶解情况。 [结果 ]pH <5 .5以下时 ,随着时间的延长 ,红细胞溶解现象明显。 1h后观察有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;2h后有非常显著性差异 (P <0 .0 1)。[结论 ]pH <5 .5时对红细胞计数影响较大 ,易致红细胞发生溶解现象 ,出现假性血红蛋白尿 ,对血尿和血红蛋白尿很难区分 ,给临床诊断造成不便 ,更易引起漏诊和误诊。     

喉癌主癌灶手术切缘的临床特点分析

目的探讨研究喉癌主癌灶手术的安全切缘在临床上的特点。方法回顾性分析2007年6月—2011年3月已经确诊喉癌的患者100例,随机分成A、B两组,A组为观察组50例,主要采取手术切缘后,然后采取镜下观察分析;B组为观察组50例,主要采取手术切缘后,然后采取肉眼观察分析,将结果进行临床特点分析比较。结果早期的喉癌患者和晚期的喉癌患者的阳性切缘例数,差异无统计学意义（P〉0.05）;晚期的阳性切缘发生次数高于早期的阳性切缘发生次数,差异有统计学意义（P〈0.05）。声门上区[SG]2、3和5、10mm;跨声门型[TG]2、3mm和5、10mm的切缘对比,差异有统计学意义（P〈0.05）。SG、G、TG、IG的2mm和3mm,5mm和10mm对,差异无统计学意义（P〉0.05）。肉眼阳性切缘观察39个,镜下阳性切缘观察43,两者差异无统计学意义（P〉0.05）。结论依据原发不同部位、不同分期和不同范围选取适合的切线,就可以有效地减少阳性切缘的发生。     

儿童腹痛328例病因诊断及分析

目的：根据儿童急性腹痛的特点,诊断儿童腹痛应综合临床及相关检查提供的依据,做出准确诊断,给予适当治疗。方法：对临床328例腹痛患儿进行选择性辅助检查和分析。结果：小儿腹痛病因复杂,腹腔内疾病占64．63％,共17种病因;腹腔外疾病占35．37％,共6种病因。结论：仔细询问病史、认真体格检查、密切观察病情、针对性地选择辅助检查,在儿童腹痛的诊断上具有重要的意义。