二甲双胍增强子宫内膜癌顺铂化疗敏感性及其可能机制

目的探讨二甲双胍(Met)增强子宫内膜癌顺铂(DDP)化疗敏感性及其可能机制。方法体外培养子宫内膜癌Ishikawa细胞,采用不同浓度的Met和DDP单药或联合用药处理。MTT检测各组细胞的增殖活性,流式细胞术检测两药单用及合用对Ishikawa细胞凋亡和周期的影响,Western blot法检测药物干预后子宫内膜癌细胞内胰岛素生长因子1(IGF-1)和雷帕霉素靶蛋白(mTOR)表达量的变化。结果 Met呈浓度和时间依赖性增强DDP对Ishikawa细胞增殖的抑制(P<0.05)。与Met或DDP单药组比较,联合用药组细胞的凋亡率高(P<0.05),Ishikawa细胞中G0/G1期细胞比例增加,S期细胞比例降低,IGF-1和mTOR蛋白表达水平下降(P<0.05)。结论 Met不仅能对子宫内膜癌细胞的增殖产生抑制作用,同时也可以增强DDP对子宫内膜癌化疗的敏感性,其作用机制可能与Met降低IGF-1和mTOR的表达有关。     

二甲双胍增强子宫内膜癌化疗药物敏感性的临床研究

目的:探讨二甲双胍(Met)增强子宫内膜癌化疗药物敏感性的临床价值.方法:选取2014年1月～2017年1月在我院就诊的子宫内膜癌患者50例,随机抽签分为顺铂(DDP)单药组和DPP+Met联合用药组各25例,体外培养子宫内膜癌Ishikawa细胞,使用MTT检测细胞增殖活性,流式细胞术检测两药单用及合用对癌细胞凋亡和周期的影响.结果:Met浓度和时间呈依赖性逐渐增强现象,与单药组相比,Met+DDP联合组的细胞凋亡率更高(P<0.05).结论:相比单纯的顺铂化疗,采用二甲双胍联合顺铂进行化疗,可有效抑制癌细胞的繁殖和增长,增强DDP化疗药物的敏感性,可直接作用于IGF-1和mTOR等细胞因子,达到抑制癌细胞扩散的效果,值得在临床上推广.     

二甲双胍对弥漫大B细胞淋巴瘤细胞的抑制作用及机制探讨

目的 探讨二甲双胍对人弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）U2932细胞的抑制作用及其相关机制。方法 采用不同浓度二甲双胍作用于体外培养的U2932细胞，分为对照组（0 mmol/L）和二甲双胍实验组（分别为5、10、20、40 mmol/L），分别培养24、48、72 h。通过CCK-8法检测细胞增殖活性改变；流式细胞术检测细胞周期分布及凋亡情况；Western blot检测AMP活化蛋白激酶（AMPK）、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、自噬及凋亡等通路相关蛋白的表达水平。结果 经二甲双胍处理后的U2932细胞存活率较对照组明显下降（P<0.05）。5、10和20 mmol/L二甲双胍组G0/G1期细胞比例均较对照组增加（P<0.05）。20 mmol/L二甲双胍组24 h、48 h、72 h的细胞凋亡比例较对照组增加（P<0.05）。与对照组相比，5、10和20 mmol/L二甲双胍组磷酸化AMP活化蛋白激酶α亚基（p-AMPKα）、P53、B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）关联X蛋白（Bax）、活化的胱天蛋白酶3(Cleaved Caspase-3)、微管相关...     

二甲双胍对胰腺癌BxPC-3细胞恶性表型的影响

目的:探索二甲双胍对胰腺癌BxPC-3细胞恶性表型的影响。方法:以Smad4基因天然缺失型人胰腺癌BxPC-3细胞为对象,采用CCK-8法和流式细胞术分别检测不同剂量二甲双胍(5、10、20 mmol/L)作用24 h后的细胞增殖和凋亡情况,并计算细胞存活率和凋亡率;采用Transwell迁移试验检测不同剂量二甲双胍(10、20 mmol/L)作用24 h后的细胞迁移情况,记录迁移细胞数;采用实时定量聚合酶链反应法和Western blotting法分别检测细胞中钙黏着蛋白E(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、补体反应基因32(RGC-32)的mRNA及蛋白表达情况。结果:与对照组和5 mmol/L二甲双胍组比较,10、20 mmol/L二甲双胍组细胞的存活率均显著降低,凋亡率均显著升高,且20 mmol/L二甲双胍组细胞的凋亡率显著高于10 mmol/L二甲双胍组(P<0.05)。与对照组比较,10、20 mmol/L二甲双胍组迁移细胞数均显著减少,且20 mmol/L二甲双胍组显著少于10 mmol/L二甲双胍组(P<0.05);10、20 mmol/L二甲双胍组细胞中E-cadherin mRNA及其蛋白的相对表达量均显著升高,且20 mmol/L二甲双胍组E-cadherin mRNA的相对表达量显著高于10 mmol/L二甲双胍组;10 mmol/L二甲双胍组细胞中Vimentin mRNA,20 mmol/L二甲双胍组细胞中Vimentin mRNA及其蛋白以及10、20 mmol/L二甲双胍组细胞中RGC-32 mRNA及其蛋白的相对表达量均显著降低,且20 mmol/L二甲双胍组Vimentin mRNA及其蛋白、RGC-32 mRNA的相对表达量均显著低于10 mmol/L二甲双胍组(P<0.05或P<0.01)。结论:二甲双胍可剂量依赖性地通过Smad4非依赖性通路抑制BxPC-3细胞的增殖和迁移,促进其凋亡,这可能与胰腺癌细胞上皮间质转化过程以及RGC-32表达受到抑制有关。     

二甲双胍在子宫内膜癌细胞增殖及凋亡中的作用

目的探讨二甲双胍对子宫内膜癌细胞增殖及凋亡的影响。方法二甲双胍作用于人子宫内膜癌RL95-2和KLE细胞不同时间后,采用流式细胞术检测细胞周期的变化,TUNEL荧光染色观察凋亡小体。结果流式细胞术检测显示二甲双胍使Go/G1期细胞比例升高,S期细胞比例降低;二甲双胍分别干预12、24、36h,凋亡小体数量依次增加。结论二甲双胍显著抑制子宫内膜癌RL95-2和KLE细胞的增殖,使细胞生长周期停滞,同时能够促进癌细胞凋亡。     

EGCG 对5-氟尿嘧啶用于食管癌 CaEs-17细胞增加疗效的实验研究

目的：观察表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）体外增强5-氟尿嘧啶（5-Fu）对食管癌CaEs-17细胞化疗敏感性的作用,并探讨可能的作用机制。方法实验分为空白对照组、5-Fu 组（培养液中5-Fu 终浓度为6μmol/L）,EGCG组（培养液中EGCG终浓度为20 mg/L）、联合组（培养液中EGCG终浓度为20 mg/L,5-Fu浓度为6μmol/L）,4组作用24 h,CCK-8法和细胞克隆形成法检测细胞增殖抑制率和存活率,金氏公式评价二药的协同效果;流式细胞仪检测细胞凋亡率及周期分布;Transwell法检测细胞侵袭力;免疫印迹法检测突变型P53（mtP53）蛋白表达水平。结果 EGCG、5-Fu均可抑制CaEs-17细胞增殖、诱导细胞凋亡、降低细胞存活率和侵袭力;EGCG、5-Fu均可阻滞细胞于G0/G1期,并能下调mtP53蛋白表达水平（ P ＜0．05）,二药联用上述作用效果更为显著（ P ＜0．01）。结论 EGCG能够增强5-Fu对食管癌CaEs-17细胞的化疗敏感性,这种作用部分是通过下调mtP53蛋白实现的。     

二甲双胍对高糖诱导的肾小管上皮细胞TGF-β/ERK/MMP-9通路及上皮间质转化的影响

目的探讨二甲双胍对高糖诱导的肾小管上皮HK-2细胞上皮间质转化(EMT)的影响及其机制。方法以0、7.5、15.0、30.0、60.0、120.0mmol/L二甲双胍作用48h后,采用噻唑蓝(MTT)法检测HK-2细胞活力以筛选合适的二甲双胍作用浓度;将体外培养的HK-2细胞分为对照组(5.5 mmol/L D-葡萄糖)、高渗组(24.5 mmol/L甘露醇和5.5 mmol/L D-葡萄糖)、高糖组(30 mmol/L D-葡萄糖)、高糖+7.5 mmol/L二甲双胍组(30 mmol/L D-葡萄糖+7.5 mmol/L二甲双胍)和高糖+15 mmol/L二甲双胍组(30 mmol/L D-葡萄糖+15 mmol/L二甲双胍),倒置显微镜观察各组HK-2细胞形态,免疫印迹法(Western blotting)检测各组HK-2细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏附蛋白(E-cadherin)、转化生长因子-β(TGF-β)、细胞外信号调节激酶(ERK)、磷酸化(p)-ERK、基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达水平,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测α-SMA、E-cadherin、TGF-β、ERK、MMP-9 mRNA表达水平。结果与对照组相比,30.0、60.0mmol/L二甲双胍作用后HK-2细胞活力明显升高,120.0mmol/L二甲双胍作用后HK-2细胞活力明显降低(P0.05),而7.5、15.0mmol/L二甲双胍作用后HK-2细胞活力差异无统计学意义(P0.05);与对照组比较,高渗组细胞形态无明显改变,且细胞中α-SMA、E-cadherin、TGF-β、MMP-9蛋白和mRNA表达水平以及p-ERK/ERK蛋白、ERK mRNA表达水平差异均无统计学意义(P0.05),但高糖组细胞失去原有形态变为长梭形,且细胞中α-SMA、TGF-β蛋白和mRNA表达水平以及p-ERK/ERK蛋白、ERK mRNA表达水平明显升高,而MMP-9、E-cadherin蛋白和mRNA表达水平明显降低(P0.05);与高糖组比较,高糖+7.5mmol/L二甲双胍组、高糖+15.0mmol/L二甲双胍组细胞形态由长梭形逐渐变成圆形或椭圆形,且α-SMA、TGF-β蛋白和mRNA表达水平以及p-ERK/ERK蛋白、ERK mRNA表达水平明显降低,而MMP-9、E-cadherin蛋白和mRNA表达水平明显升高(P0.05),且高糖+15.0 mmol/L二甲双胍组细胞上述指标变化幅度大于高糖+7.5 mmol/L二甲双胍组。结论二甲双胍可抑制高糖诱导的肾小管上皮HK-2细胞EMT,其作用机制可能与抑制TGF-β/ERK/MMP-9通路活化有关。     

Nrf2/LASS2在子宫内膜癌细胞中的表达意义及二甲双胍的干预作用

目的 探讨Nrf2/LASS 2在子宫内膜癌细胞中的表达意义及二甲双胍的干预作用.方法 采用Western-Blot法和IHC法检测不同子宫内膜细胞株Nrf 2和LASS 2蛋白的表达.RT-PCR法检测mRNA和蛋白的表达水平.通过CCK-8法监测细胞生长.AnnexinV-PI染色及流式细胞术检测细胞凋亡.用siRNA敲除技术观察Nrf2对细胞增殖的影响.分析二甲双胍治疗后子宫内膜癌Nrf2和LASS2蛋白水平的变化及细胞增殖的影响.结果 Nrf2和LASS 2在子宫内膜癌细胞中的表达明显高于良性子宫内膜细胞(P＜0.05),LASS2染色强度的增加与子宫内膜癌的病理进展相关,其表达峰值出现在子宫内膜癌中,而Nrf2峰值强度出现在EAH中,Nrf2和LASS2之间的表达具有正相关性.Nrf2/LASS2 mRNA和蛋白质的表达随着雌激素的加入而增加,其增殖活性也随之增强,敲除LASS2可减轻雌激素诱导的增殖效应.停止使用孕激素LASS2表现为持续下降,细胞增殖活性也会持续减弱.二甲双胍以剂量依赖性方式抑制Nrf2/LASS2蛋白表达,并可显著增强LASS2敲除细胞中的孕激素反应,抑制LASS2过度表达的增殖效应.二甲双胍还能增强孕激素对子宫内膜癌的抑制作用.结论 Nrf2/LASS 2在子宫内膜癌细胞中表达明显升高,二甲双胍能够抑制Nrf2/LASS2蛋白表达,增强孕激素对子宫内膜癌的抑制作用.     

二甲双胍通过激活自噬促进MC3T3-E1细胞系成骨分化的研究

目的探讨二甲双胍通过激活自噬促进MC3T3-E1细胞系成骨分化的作用。方法用含有不同浓度二甲双胍的成骨诱导剂处理MC3T3-E1细胞,其中二甲双胍的浓度分别为0(对照)、200、400、800μmol/L。利用碱性磷酸酶(ALP)染色检测二甲双胍促进MC3T3-E1细胞成骨的最适浓度,采用免疫印迹法(Western blotting)和免疫荧光法检测自噬相关蛋白,并选择出二甲双胍的最佳干预浓度。对照组、二甲双胍400μmol/L组、二甲双胍400μmol/L+3-甲基腺嘌呤(3-MA,5 mmol/L)组和3-MA 5 mmol/L组分别干预MC3T3-E1细胞4 h后,采用Western blotting法、免疫荧光法、透射电镜检测自噬指标,并利用ALP染色、半定量RT-PCR和Western blotting检测成骨能力。结果二甲双胍能够剂量相关性地促进MC3T3-E1细胞的ALP活性,并且400μmol/L二甲双胍是促进MC3T3-E1细胞成骨的最适浓度。二甲双胍0(对照)、200、400μmol/L组的LC3 Ⅱ/Ⅰ比值逐渐增大,P62/β-actin比值逐渐减小,LC3荧光强度逐渐增强;800μmol/L二甲双胍组的LC3 Ⅱ/Ⅰ值减小,P62/β-actin比例增大,LC3荧光强度下降;且与对照组比较,400μmol/L二甲双胍组的LC3Ⅱ/Ⅰ比值明显增大,P62/β-actin比值明显降低(P0.05),LC3荧光强度最强。与对照组比较,二甲双胍400μmol/L组中LC3 Ⅱ/Ⅰ的比值增大,P62蛋白表达减少(P0.05),LC3荧光强度增强,自噬体数量增多;ALP活性增强,成骨相关基因和蛋白OCN,COL1的表达增强(P0.001、0.05、0.01)。二甲双胍中加入3-MA 5 mmol/L后,LC3 Ⅱ/Ⅰ的比值减小,P62蛋白表达增多,LC3荧光强度减弱,自噬体数量减少;ALP活性减弱,成骨相关基因和蛋白OCN,COL1的表达减弱。结论二甲双胍能通过激活MC3T3-E1细胞系的适度自噬促进其成骨分化。     

优选顺铂、二甲双胍、槲皮素三药联用方案影响人鼻咽癌细胞活性的研究

本研究在单因素试验基础进行正交试验，采用Cell Counting Kit-8评价顺铂、二甲双胍和槲皮素不同剂量联合用药方案对鼻咽癌细胞增殖的作用，利用SPSS20.0软件对正交试验结果进行方差和组间差异显著性SSR检验，优选三药联用最佳组合方案。结果表明，随着顺铂、二甲双胍和槲皮素浓度的升高，其对Sune-1细胞的抑制作用越显著，这三种药物对Sune-1的IC₅₀值分别为30.68、6.85、81.96μmol/L,其中顺铂对Sune-1细胞的IC₅₀值最低，表明Sune-1细胞对顺铂的敏感程度强于其他两种药物，槲皮素次之；三药联用有强大抗肿瘤活性，三者的贡献水平由高到低分别为顺铂、二甲双胍、槲皮素，当顺铂浓度61.36μg/mL、二甲双胍浓度13.71 mmol/L、槲皮素浓度163.92μmol/L的高剂量联合用药方案时对人鼻咽癌Sune-1细胞增殖的抑制作用最强，但是，中、低剂量的联合用药方案对人鼻咽癌Sune-1细胞增殖的抑制率也都超过50%,因此，临床上可结合药物毒副作用、患者耐受程度、经济情况等综合因素，考虑选用较低剂量的联合用...     

RNA干扰Aurora A表达对人子宫内膜癌细胞的生长与细胞周期的影响

目的 探讨应用RNA干扰技术抑制Aurora A基因表达,并研究Aurora A基因表达下调对人子宫内膜癌细胞生长和细胞周期分布的影响.方法 用RNA干扰法抑制Aurora A的蛋白表达,RT-PCR及Western blot方法 检测Aurora A mRNA和蛋白表达,流式细胞仪检测细胞周期分布的变化,四氮唑盐法(MTT)检测转染前后细胞生长抑制率变化.结果 siRNA Aurora A可明显降低Aurora A mRNA和蛋白的表达,siRNA Aurora A导入Ishikawa细胞48 h后,细胞的生长被抑制,细胞周期阻滞于G2/M期和S期;细胞的凋亡率明显升高.结论下调AuroraA表达可抑制人子宫内膜癌细胞系Ishikawa的增殖,同时导致细胞阻滞于G2/M期及S期并且促进细胞凋亡.     

二甲双胍通过抑制内质网应激诱导的细胞凋亡对子痫前期大鼠的保护作用

目的 研究二甲双胍对子痫前期(PE)大鼠胎盘内质网应激的影响,探讨二甲双胍对子痫前期大鼠的保护作用及机制。方法 30只成功受孕Sprague-Dawley大鼠随机分为对照组、PE组和二甲双胍组,每组10只。采用N-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)诱导建立子痫前期大鼠模型,于妊娠第14～18天,PE组和二甲双胍组皮下注射L-NAME 200 mg/kg,对照组皮下注射等量生理盐水;同时,二甲双胍组给予200 mg/kg二甲双胍灌胃,PE组和对照组在相应的妊娠天数采用相等剂量的等渗盐水灌胃。检测大鼠的血压、24 h尿蛋白含量;妊娠第20天麻醉剖宫取胎,测量胎鼠的顶臀长、体重,胎盘直径、重量;RT-qPCR检测胎盘组织中内质网应激相关分子葡萄糖调节蛋白78 (GRP78)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12(caspase-12)的mRNA水平;Western blot分析胎盘组织中GRP78和caspase-12蛋白水平的表达结果;TUNEL染色法分析胎盘组织的凋亡情况。结果 与对照组比较,PE组大鼠收缩压水平和24 h尿蛋白水平升高(P<0.01);与PE组相比,二甲双胍干预可降低子痫...     

二甲双胍与二氯乙酸盐对MYCN扩增神经母细胞瘤BE-2C细胞的协同抗肿瘤作用

目的研究二甲双胍和二氯乙酸盐(dichloroacetate,DCA)单独与联合应用,对MYCN扩增神经母细胞瘤BE-2C细胞增殖的抑制作用及其作用机制。方法 CCK-8法检测二甲双胍与DCA单独或联用对BE-2C细胞增殖的抑制作用;采用葡萄糖和乳酸测定试剂盒,检测葡萄糖吸收量和乳酸生成量的变化;Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术检测细胞凋亡; Western blot分析凋亡相关蛋白的表达变化。结果二甲双胍和DCA对BE-2C细胞增殖均具有明显的抑制作用,联用组的葡萄糖消耗和乳酸的产生量较二甲双胍单独用药组明显减少(P<0. 01);联用组的细胞凋亡率较单独用药组均明显升高(P<0. 01);联用组细胞的Bax、cleaved caspase-3蛋白表达水平较单用组均明显增加,而Bcl-2蛋白表达水平较单用组明显降低。结论二甲双胍联用DCA对MYCN扩增神经母细胞瘤BE-2C细胞具有协同抗肿瘤作用,且与减少二甲双胍引起的乳酸堆积和诱导肿瘤细胞发生凋亡有关。     

华蟾素对子宫内膜癌Ishikawa细胞生物学行为的影响

目的 探讨华蟾素对体外培养的子宫内膜癌Ishikawa细胞形态、增殖、凋亡、周期分布及侵袭能力的影响.方法 体外培养Ishikawa细胞,不问浓度的华蟾素干预后,光镜观察细胞形态改变,采用MTT法检测细胞的增殖,流式细胞术分析细胞凋亡及其周期,用Transwell小室检测细胞体外侵袭能力.结果 华蟾素作用后细胞由梭形、多边形变成圆形,浮起.华蟾素能有效地抑制Ishikawa细胞的增殖,降低侵袭能力,诱导细胞凋亡,并使细胞周期阻滞于G1期,减少S和G2期的细胞.华蟾素终浓度为3.0 mg/ml抑制作用最明显.结论 华蟾素抑制Ishikawa细胞增殖,降低侵袭能力,诱导细胞凋亡并阻断细胞周期.     

2-APB对顺铂诱导人卵巢癌SKOV3细胞内质网应激途径凋亡的影响

目的观察2-APB对顺铂诱导人卵巢癌SKOV3细胞内质网应激途径凋亡的影响。方法体外培养SKOV3细胞,分别加入3.5、7和14μg/ml顺铂作用12和24 h后,用MTT法检测顺铂对SKOV3细胞的抑制率,应用激光共聚焦显微镜观察细胞质内钙离子浓度变化;将SKOV3细胞随机分为空白对照组、顺铂组、2-APB组和顺铂+2-APB组,分别处理24 h后,用倒置相差显微镜观察顺铂对SKOV3细胞形态的影响,用激光共聚焦显微镜观察细胞质内钙离子浓度变化;分别处理12 h后,采用Western blot检测Caspase-3、CHOP和GRP78蛋白表达。结果 MTT结果显示,3.5、7和14μg/ml顺铂作用SKOV3细胞12和24 h,SKOV3细胞存活率明显降低,作用12和24 h的IC50分别为(14.7±0.1)μg/ml和(6.6±0.1)μg/ml。激光共聚焦显微镜检测发现,随顺铂浓度及作用时间的增加,SKOV3细胞质游离钙离子浓度逐渐增加。顺铂与2-APB联合作用后,经倒置相差显微镜观察,与顺铂组比较,顺铂+2-APB组细胞密度明显增多。MTT结果显示,与顺铂组比较,顺铂+2-APB组细胞存活率由56.8%±0.9%上升至74.4%±1.0%,激光共聚焦显微镜检测发现,游离钙荧光点数由(58.4±0.2)×10~3个降低至(23.8±0.3)×10~3个,差异有统计学意义(P0.01)。Western blot结果表明,与顺铂组比较,顺铂+2-APB组的Caspase-3、CHOP和GRP78蛋白表达显著降低,差异有统计学意义(P0.05或P0.01)。结论细胞内钙离子参与调控顺铂诱导的SKOV3细胞凋亡。     

复方木鸡颗粒联合顺铂对人肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的机制研究

目的探讨复方木鸡颗粒联合顺铂对人肝癌Hep G2细胞增殖、凋亡的影响及其潜在的作用机制。方法体外培养人肝癌Hep G2细胞,取对数生长期细胞,将其消化后随机分为对照组,复方木鸡颗粒高、低(10、5mg/m L)剂量组,顺铂组(1mg/m L)和复方木鸡颗粒(5mg/m L)联合顺铂(1mg/m L)组,采用CCK-8法检测细胞增殖情况,采用Hoehcst染色法检测细胞凋亡情况,采用免疫荧光联合激光共聚焦分别检测各组细胞中凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、蛋白天冬氨酸蛋白水解酶-9(Caspase-9)、细胞色素C氧化酶(Cyt-C)表达水平。结果与对照组比较,复方木鸡颗粒10、5 mg/mL组及顺铂组、联合组的细胞活力显著降低(P0.01),细胞凋亡显著增加,细胞内Bcl-2蛋白表达显著下调(P0.05、0.01),而Bax、Caspase-9、Cyt-C蛋白显著上调(P0.05、0.01),且联合组在抑制人肝癌Hep G2细胞增殖、促进其凋亡、调控凋亡相关蛋白表达的作用效果最佳。结论复方木鸡颗粒可显著抑制Hep G2细胞增殖并促进其凋亡,其与顺铂联合起到协同增效的效果,其作用机制可能与下调人肝癌Hep G2细胞内抑凋亡蛋白Bcl-2,上调促凋亡蛋白Bax、Caspase-9、Cyt-C表达水平有关。     

二甲双胍对葡萄糖-6-磷酸酶基因表达的抑制作用及其机制

目的探讨二甲双胍对葡萄糖-6-磷酸酶(G6Pase)基因表达作用及其分子机制。方法应用稳定表达G6Pase的鼠肝细胞瘤H4ⅡE M1.3细胞,一组细胞分别给予二甲双胍0.1～5.0mmol·L-1孵育16h;另一组细胞先加入化合物C 20μmol·L-1,Bay11-7085 5μmol·L-1或雷帕霉素25nmol·L-1作用30min后,再加入二甲双胍2mmol·L-1共育16h,采用荧光素酶报告基因检测方法测定G6Pase基因表达水平;细胞加入化合物C 20μmol·L-1作用30min后,再分别加入二甲双胍2mmol·L-1、5-氨基-4-甲酰胺咪唑核糖核苷酸(AICAR)1mmol·L-1孵育15min,Western印迹法检测腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)蛋白表达及其磷酸化水平;细胞加入二甲双胍2mmol·L-1和胰岛素1μmol·L-1作用15min,Western印迹法检测蛋白激酶B(Akt)蛋白表达及其磷酸化水平。结果二甲双胍0.5,1,2和5 mmol·L-1作用16h可以显著抑制G6Pase基因表达(P<0.05,P<0.01),二甲双胍0.5和5mmol·L-1时,分别抑制G6Pase基因表达26%(P<0.05)和85%(P<0.01)。AMPK抑制剂化合物C可部分逆转二甲双胍的抑制作用(P<0.05);二甲双胍可诱导AMPK磷酸化,与AICAR作用相似,但这一作用可被化合物C抑制。结论二甲双胍抑制G6Pase基因表达,其作用机制可能与激活AMPK有关,而可能与Akt,雷帕霉素靶蛋白(mTOR)及核因子-κB(NF-κB)介导的通路无关。     

苦参碱抑制人子宫内膜癌细胞增殖转移及机制研究

目的探讨苦参碱对人子宫内膜癌细胞增殖转移的抑制作用及机制。方法 MTT法检测苦参碱对人子宫内膜癌Ishikawa细胞株的抑制作用;流式细胞术观察对细胞周期的影响;ELISA法检测细胞培养上清液中炎性因子IL-8的浓度;Western印迹法检测经苦参碱干预该细胞48h后,NF-кB信号途径中p65的变化。结果苦参碱可显著抑制Ishikawa细胞生长,并呈时间和剂量依赖性。苦参碱使细胞阻滞于G0/G1期。细胞培养上清液中IL-8的浓度随着干预时间延长而减少(P<0.05)。苦参碱作用48h后,细胞NF-кBp65表达明显下降(P<0.05)。结论苦参碱具有抑制人子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖的作用,使细胞阻滞于G0/G1期;抑制子宫内膜癌转移的作用,可能与抑制IL-8分泌及阻断NF-кB信号通路有关。     

二甲双胍联合马法兰抑制多发性骨髓瘤细胞增殖作用的实验性研究

目的探讨二甲双胍联合马法兰抑制多发性骨髓瘤细胞增殖作用的效果。方法选择骨髓瘤细胞株RPMI8226和U266作为研究细胞株,将不同浓度的二甲双胍与马法兰联合作用于细胞株24、48、72 h,采用CCK-8法检测二甲双胍与马法兰对骨髓瘤细胞株增殖的影响,采用流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果当二甲双胍和马法兰浓度为80 mmol/L时,培养24、48、72 h的RPMI8226细胞株凋亡率均显著高于浓度为20mmol/L和5 mmol/L(P<0.05);当二甲双胍和马法兰浓度为80 mmol/L时,培养24、48、72 h的U266细胞株凋亡率均显著高于浓度为20 mmol/L和5 mmol/L(P<0.05);观察组C骨髓瘤细胞RPMI8226、U266凋亡率均显著高于观察组A、观察组B,且当二甲双胍和马法兰浓度为80 mmol/L时,培养24、48、72 h的U266细胞株凋亡率均显著高于浓度为20 mmol/L和5 mmol/L。结论二甲双胍与马法兰联合使用抑制多发性骨髓瘤细胞增殖作用的效果明显,可有效促使细胞凋亡,可在临床上广泛推荐应用。     

p15基因对人肝癌HepG2顺铂耐药细胞周期和耐药性的影响研究

目的:利用p15-shRNA表达载体干扰细胞周期相关基因p15,探讨p15基因对人肝癌HepG2顺铂耐药细胞周期和耐药性的影响。方法:用梯度浓度的顺铂诱导HepG2细胞耐药并建立动态耐药模型HepG2/顺铂/2.0,以不同浓度(30、60、90nmol·L-1)的干扰质粒p15-shRNAY2和阴性对照质粒(shRNA-F)转染HepG2/顺铂/2.0细胞后48h检测p15荧光阳性细胞,筛选最佳干扰浓度;以筛选结果转染HepG2/顺铂/2.0细胞,与未转染细胞和阴性对照转染细胞比较,检测细胞存活情况、周期分布和p15、Bcl-2、Bax的蛋白表达。结果:最佳干扰浓度为60nmol·L-1;与未转染细胞和阴性对照转染细胞比较,p15-shRNAY2转染细胞的存活率明显增加,G1期细胞明显减少,p15、Bax蛋白表达明显降低,Bcl-2蛋白表达明显增加(P均<0.01)。结论:p15-shRNA可抑制p15基因表达,干扰细胞周期使G1期的比例减少,增加HepG2/顺铂/2.0对顺铂的耐药性。