敲低Fascin抑制宫颈癌细胞增殖及裸鼠的成瘤能力

目的研究敲低Fascin对宫颈癌细胞增殖及裸鼠成瘤能力的影响。方法Fascin siRNA慢病毒（干扰组）和阴性对照慢病 毒（阴性组）感染宫颈癌CaSki细胞,用qRT-PCR和Western blot方法检测Fascin mRNA以及蛋白表达水平评价干扰效果。MTT 方法测定Fascin 敲低对CaSki细胞增殖能力的影响。取对照组、阴性组、干扰组CaSki细胞接种至裸鼠皮下,建立裸鼠移植瘤模 型,测定移植瘤生长体积和质量,Western blot方法检测移植瘤组织中增殖细胞核抗原（PCNA）、survivin、细胞周期依赖性蛋白 激酶4（CDK4）、p21 蛋白水平。结果Fascin siRNA慢病毒感染后的CaSki 细胞中Fascin mRNA和蛋白水平低于没有感染的 CaSki细胞（P<0.05）。阴性对照慢病毒感染对CaSki细胞中Fascin mRNA和蛋白水平没有影响。敲低Fascin后的CaSki细胞增 殖能力明显降低（P<0.05）。干扰组CaSki接种的裸鼠移植瘤体积和质量也降低,移植瘤组织中PCNA、survivin、CDK4蛋白水平 降低,p21蛋白水平升高。阴性组CaSki细胞接种对细胞增殖、裸鼠成瘤能力及移植瘤中PCNA、survivin、CDK4、p21蛋白水平 没有影响。结论敲低Fascin 能够抑制宫颈癌细胞生长和裸鼠成瘤能力。     

RNA干扰survivin基因对Eca-109细胞体内增殖的影响

目的利用RNA干扰抑制Eca-109细胞survivin基因表达,观察survivin沉默后对食管癌细胞Eca-109体内增殖的影响。方法构建靶向survivin基因的小干扰RNA(siRNA)真核表达载体,利用LipofectamineTM2000脂质体转染Eca-109细胞,建立稳定转染干扰组细胞Eca-109/si-survivin;同法建立阴性对照组细胞Eca-109/si-control,并以Eca-109为空白对照组细胞;通过Western blot检测survivin基因沉默效果;借助裸鼠移植瘤模型分析survivin干扰前后裸鼠成瘤时间及瘤结节质量的改变,比较各组Eca-109细胞的体内增殖速度;通过末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸缺口末端标记技术法检测移植瘤细胞凋亡的变化。结果干扰组细胞survivin蛋白表达显著低于阴性对照组和空白对照组(P<0.05),而阴性对照组细胞survivin蛋白表达与空白对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。干扰组裸鼠平均瘤结节质量显著低于阴性对照组和空白对照组(P<0.05),而阴性对照组与空白对照组裸鼠的平均瘤结节质量差异均无统计学意义(P>0.05)。干扰组裸鼠移植瘤细胞凋亡指数明显高于阴性对照组和空白对照组(P<0.05),而阴性对照组与空白对照组裸鼠移植瘤细胞凋亡指数比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论靶向survivin的siRNA能特异性沉默survivin基因表达,诱导细胞凋亡,进而抑制人食管癌Eca-109细胞的体内增殖。     

沉默HPV16 E6基因对人宫颈癌裸鼠移植瘤的抑制作用

目的 采用RNA干扰抑制人宫颈癌CaSki细胞裸鼠移植瘤中人乳头瘤病毒(human papillomavirus-16,HPV16)E6基因的表达,观察对裸鼠移植瘤的抑制作用.方法 将HPV16 E6特异性的小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)真核表达载体转染到人宫颈癌细胞株CaSki细胞中,经G418筛选,RT-PCR检测E6基因的表达;将细胞接种到BALB/c裸鼠背部皮下,同时将该质粒注射到人宫颈癌CaSki细胞移植瘤的裸鼠中,观察肿瘤出现时间及体积变化;观察肿瘤组织的病理改变.结果 成功筛选到持续表达E6 siRNA的CaSki细胞,经RT-PCR检测该细胞中HPV16 E6基因表达降低;裸鼠成瘤实验结果显示,处理后的CaSki细胞成瘤能力明显降低,抑瘤率为71.4%;注射质粒进行基因治疗后,裸鼠肿瘤生长受到抑制,肿瘤的体积与质量明显低于CaSki细胞组,差异具有显著性(P＜0.05).病理检查结果显示,经pGensil-CH2处理的肿瘤生长不佳,细胞分裂像少见,组织内有较多坏死区域.结论 沉默CaSki细胞中HPV16 E6基因的表达能明显降低宫癌细胞的成瘤作用.     

靶向Notch1基因的siRNA对裸鼠人肝细胞癌移植瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨Notch1基因在人肝细胞癌HepG2细胞裸鼠移植瘤中的作用。方法于裸鼠腋下接种0.2×108/mL的HepG2细胞悬液,建立人肝细胞癌裸鼠移植瘤模型,将其分为3组:未处理组(接种PBS悬浮的未转染细胞)、空载体转染组(接种空载体转染的细胞)和Notch1转染组(接种靶向Notch1基因的siRNA转染的细胞)。连续2周观察转染荷瘤裸鼠的生长情况,采用TdT介导的dUTP缺口末端标记技术(TUNEL)研究肿瘤组织中的细胞凋亡,利用R T-PCR和蛋白质印迹技术检测肿瘤组织中Notch1、bcl-2和bax mR NA和蛋白的表达。结果 Notch1 siRNA转染组中肿瘤的生长明显受到抑制,其肿瘤的重量为(0.685±0.138)g,显著低于未处理组(2.896±0.513)g和空载体转染组(2.776±0.623)g(F=29.672,均P<0.01)。TUNEL结果表明,Notch1 siR NA转染组每500个细胞中凋亡的细胞数为(91±3),明显高于未处理组(10±3)和空载体转染组(11±2)中细胞凋亡的数目(P<0.05);此外,RT-PCR和Western印迹结果表明Notch1 siRNA转染组中裸鼠肿瘤组织Notch1和bcl-2 mRNA和蛋白表达均显著下降,而bax的表达显著上升,3组间比较差异具有统计学意义(均P<0.05)。结论降低Notch1基因的表达能抑制人肝细胞癌细胞HepG2裸鼠皮下移植瘤的生长,诱导HepG2细胞凋亡,后者可能与bax表达的上升和bcl-2表达的下调相关。     

Claudin-7基因敲减细胞对裸鼠原位移植胰腺癌模型的致癌作用

[摘要]　目的　研究Claudin-7基因敲减细胞对裸鼠原位移植胰腺癌模型的致癌作用。　方法　采用Claudin-7基因敲减表达质粒和pcDNA6-Scramble空载质粒转染的人胰腺癌细胞BxPC-3建立裸鼠原位移植胰腺癌模型,裸鼠随机分为两组,即Claudin-7敲减组和阴性对照组。制模30 d后比较两组间成瘤情况,并采用病理学方法检测两组肿瘤细胞生长程度。　结果　Claudin-7敲减组成瘤率和大体观肿瘤大小测量值明显高于对照组,两组间差异有显著性意义（P<0.05）。胰腺肿瘤组织的病理学检测发现肿瘤细胞生成率和肿瘤最大直径两组间差异有显著性意义（P<0.05）。　结论　Claudin-7基因敲减能有效促进裸鼠原位移植胰腺癌模型的形成。     

HSV-TK/GCV系统治疗口腔鳞癌移植瘤的研究

【目的】探讨腺病毒介导单纯疱疹病毒胸苷激酶基因 (AdCMVHSV TK) /丙氧鸟苷 (GCV)自杀基因系统对口腔鳞癌移植瘤的治疗作用。【方法】Tca8113细胞接种于裸鼠右侧腋下 ,移植瘤形成时随机分成 4组 :①空白对照组 ,②Ad CMVHSV TK对照组 (2× 10 9PFU ,瘤内注射 ) ,③GCV对照组 (2 5mg/kg ,Bid× 6 ,腹腔注射 ) ,④AdCMVHSV TK/GCV治疗组 ,并开始治疗。观察肿瘤的生长状态、计算抑瘤率和肿瘤群体倍增时间 ;观察肿瘤的组织病理学改变 ;高效液相色谱法(HPLC)检测GCV的体内代谢。【结果】与对照组比较 ,AdCMVHSV TK/GCV治疗组肿瘤的生长受到抑制 (P <0 0 0 1) ,抑瘤率达 90 6 9% ,肿瘤的群体倍增时间延长 ;肿瘤组织中可见灶性坏死及淋巴细胞浸润 ;HPLC检测显示治疗组肿瘤组织中存在GCV和磷酸化GCV ,血液中仅有GCV ,而对照组肿瘤组织和血液均只能检测到GCV。【结论】AdCMVHSV TK/GCV系统对口腔鳞癌移植瘤具有强的抑瘤作用。     

肝素酶特异性RNAi对人食管癌移植瘤组织中Hpa基因表达的影响

目的:应用RNAi技术沉默肝素酶(heparanase,Hpa)基因,探讨其对人食管癌裸鼠移植瘤组织中Hpa基因表达的影响.方法:①先转染后成瘤:采用浓度为15 μmol/L体外合成的Hpa小分子干扰RNA(siRNA)转染EC9706细胞72 h,另设无关序列组及空白对照组.然后将转染后的EC9706细胞种植于裸鼠皮下构建裸鼠食管癌移植瘤,待瘤体长至足够大时,取瘤组织;②先成瘤后转染:构建裸鼠食管癌移植瘤模型,待肿瘤长出1周后,依每次3 μg/只腹腔注射siRNA及无关序列,连续3 d,另1组仅注射PBS作空白对照,然后取瘤组织.采用免疫组化及原位杂交技术观察各组瘤组织中肝素酶蛋白及mRNA的表达.结果:无论是先转染后成瘤组还是先成瘤后转染组siRNA均可下调裸鼠食管癌移植瘤组织中Hpa蛋白及mRNA的表达,与无关序列组及空白对照组相比,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:应用RNAi技术沉默Hpa基因可以有效下调裸鼠食管癌移植瘤组织中Hpa蛋白及mRNA的表达,为临床防治食管癌浸润转移奠定了一定的理论基础.     

siRNA沉默血管VEGFR-1基因对乳癌生长抑制作用

目的 探讨应用化学修饰的小干扰RNA(siRNA)沉默人裸鼠乳癌移植瘤新生血管中的血管内皮生长因子受体-1(VEGFR-1) 基因对移植瘤生长的影响.方法 将组织瘤块接种于裸鼠右侧第二对乳腺的脂肪垫内,肿瘤长至一定大小时, 随机分为对照(A)组、转染试剂对照(B)组、siRNA治疗(C)组.于肿瘤局部分别注射PBS溶液、Lipofectamine 2000TM转染试剂和Lipofectamine 2000TM转染试剂包裹的VEGFR-1 siRNA.22 d后处死全部动物,取肿瘤,测其大小;用RT-PCR及蛋白印迹法检测乳癌组织VEGFR-1 基因的表达.结果 与A、B组比较,C组移植瘤增长趋势受到明显抑制(F=158.18、55.72,q=11.39、14.05,P<0.01);RT-PCR结果表明,与A、B组比较,C组明显下调了VEGFR-1 mRNA的表达(F=385.06,q=33.43,34.52,P<0.01);蛋白印迹法结果亦显示,C组明显下调了VEGFR-1 mRNA的表达(F=114.11,q=9.31,20.75,P<0.01).A组和B组各指标差异无显著性(P>0.05).结论 化学修饰的siRNA介导的RNAi可以降低人乳癌裸鼠移植瘤血管中VEGFR-1的表达, 抑制血管生成进而抑制肿瘤的生长,是潜在的肿瘤治疗的新方法.     

加压氧对人喉咽癌裸鼠皮下移植瘤的作用

目的观察加压氧对人喉咽癌裸鼠皮下移植瘤的作用。方法将40只雄性裸鼠随机分为空白对照组A1(成瘤5d后处死)、空白对照组A2(成瘤10d后处死)、加压氧组B1(成瘤后加压氧暴露5d后处死)、加压氧组B2(成瘤后加压氧暴露10d后处死),每组10只,接种喉咽鳞癌Fadu细胞建立裸鼠喉咽癌移植瘤模型,分别暴露于空气中和加压氧中,实验结束后处死各组裸鼠,观察和记录肿瘤质量、体积,计算肿瘤质量抑制率和体积抑制率,并进行组织病理学观察。结果各组肿瘤组织病理学检查均示肿瘤为低分化鳞状细胞癌。加压氧组B1肿瘤质量抑制率为20.1%,体积抑制率为20.5%;加压氧组B2肿瘤质量抑制率为13.7%,体积抑制率为10.3%。结论加压氧对裸鼠喉咽癌移植瘤生长有一定的抑制作用。     

pSilencer2.0-c-Met-siRNA基因在裸鼠体内对人喉癌Hep-2细胞生长的影响

目的探讨pSilencer2.0-c-Met-siRNA重组质粒对人喉癌Hep-2细胞裸鼠移植瘤生长的影响。方法采用裸鼠喉癌皮下荷瘤模型模拟c-Met-siRNA基因治疗实验,观察c-Met-siRNA重组质粒的抗瘤疗效,Western-blot法检测重组质粒对c-Met基因及MMP-2、MMP-9、VEGF基因表达的影响。结果肿瘤接种后第35 d,重组质粒组肿瘤体积为13 827 mm^3,与对照组相比差异有统计学意义（P〈0.01）;重组质粒组瘤体内c-Met、MMP-2、MMP-9、VEGF基因表达率比对照组明显降低（P〈0.05）。结论pSilencer2.0-c-Met-siRNA重组质粒能明显抑制人喉癌Hep-2细胞移植裸鼠成瘤后的生长,siRNA表达质粒介导的基因治疗有希望成为喉癌靶向性c-Met治疗的新策略。     

VEGF—siRNA对人舌癌TCA8113细胞体内及体外生长影响的初步研究

目的探讨针对血管内皮生长因子(VEGF)的小分子RNA干扰(siRNA)对舌癌TCA8113细胞体内和体外生长的影响。方法将两对特异性针对VEGF的siRNA真核表达载体,以空载体组做实验对照组,经脂质体转染人舌癌TCA8113细胞,经G418筛选后获得稳定表达,以未转染舌癌细胞作空白对照组,MTT检测转染后各组细胞增殖情况;将稳定转染的各组细胞接种裸鼠,接种后7 d开始,每4 d测量瘤体积,绘制肿瘤生长曲线,比较各时间段肿瘤生长,接种后47 d处死,比较瘤体积和瘤重。结果与实验对照组和空白对照组相比较,两个实验组细胞生长速度降低,细胞抑制率均显著增高,差异有统计学意义(P<0.05),裸鼠接种肿瘤生长缓慢,处死后测量到瘤体体积小、重量轻(P<0.05),而实验对照组和空白对照组细胞抑制率、瘤体体积、瘤重等差异无统计学意义(P>0.05)。结论VEGF-siRNA在体内和体外能有效的抑制人舌癌细胞的生长。     

慢病毒载体介导siRNA对人喉癌抑瘤作用的实验研究

目的研究慢病毒载体介导siRNA抑制survivin基因表达后对人喉癌hep-2细胞体内增殖能力的影响以及对裸鼠移植人喉癌的抑瘤活性。方法应用裸鼠成瘤实验测定致瘤能力的改变,采用RT-PCR和Western blotting测定干扰后survivin基因及其蛋白的表达水平;流式细胞术检测喉癌细胞凋亡指数和增殖指数。结果靶向survivin基因的siRNA可以有效抑制survivin基因的表达,使survivin-mRNA表达减少60%-85%,蛋白表达减少70%;流式细胞术检测细胞凋亡率明显提高(P<0.01),降低了在裸鼠体内成瘤的能力。结论RNA干扰survivin基因表达后明显抑制了人喉癌hep-2细胞的体内增殖能力;siRNA介导的survivin基因下调可明显抑制肿瘤细胞在体内的生长。     

靶向survivin的siRNA对裸鼠肾癌移植瘤生长的影响

目的 观察生存素(survivin)小干扰RNA(siRNA)在体内是否能抑制肾癌移植瘤体的生长.方法 BALB/c雌性裸鼠皮下种植786-O细胞,将成瘤阳性的裸鼠按照随机区组法分为8组(A～H组),每组5只.选取2组survivin序列特异性双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA),导入裸鼠皮...     

Rb94联合放疗对裸鼠肺腺癌皮下移植瘤的抑制作用

目的  观察人视网膜母细胞瘤基因（Rb94）对裸鼠肺腺癌皮下移植瘤的放射增敏作用及其机制。方法  将40只裸鼠分别皮下接种5×106个A549细胞,当肿瘤长至180mm3时随机分为8组,每组5只,即空白对照组、空白对照+射线组、脂质体组、脂质体+射线组、空载体组、空载体+射线组,每两组分别于肿瘤内注射PBS、脂质体、pIRES。另有转染Rb94基因组、转染Rb94基因+射线组,分别注射pIRES-Rb94。空白对照+射线组、脂质体+射线组、空载体+射线组、转染Rb94基因+射线组裸鼠瘤体内注射后加照一定剂量X线。观察肿瘤生长情况并计算抑瘤率,采用实时RT-PCR和Western bolt法检测瘤组织中Rb94基因的表达,Hoechst染色观察细胞凋亡情况,实时RT-PCR检测hTERT、Bcl-2mRNA的表达,免疫组织化学SP法检测细胞周期阻滞。结果  转染Rb94基因+射线组抑瘤率为95.84%,与转染Rb94基因组和空白对照+射线组相比,差异有统计学意义(P<0.01)。结论  Rb94基因对裸鼠皮下移植瘤具有明显的抑制作用,联合射线抑瘤效果更好,其作用机制可能与Rb94基因引起细胞凋亡、G2/M期周期阻滞以及下调hTERT、Bcl 2 mRNA的表达有关。     

siRNA抑制人舌癌细胞VEGF表达对MMP-9蛋白表达的影响

目的利用小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）抑制人舌癌Tca883细胞血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）表达,观察其对培养细胞和移植瘤基质金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinase-9,MMP-9）蛋白表达的影响。方法以稳定转染携带VEGF—siRNA真核表达载体的人舌癌Tca8113细胞（VEGF—siRNA1、VEGF—siRNA2）为实验组,以转染空载体人舌癌Tca8113细胞及未转染的人舌癌Tea8113细胞为实验对照组和空白对照组,将各组细胞分别接种于裸鼠皮下,用免疫细胞／组织化学法分别测定各组培养细胞和移植瘤VEGF及MMP-9的蛋白表达。结果在培养细胞和移植瘤中,与实验对照组和空白对照组相比,VEGF—siRNA1组和VEGF—siRNA2组VEGF染色平均灰度值高,差异有统计学意义（P〈0．05）;各组培养细胞中均未见MMP-9表达;各组移植瘤MMP-9染色平均灰度值之间的差异无统计学意义（P〉0．05）。结论以siRNA干扰沉默人舌癌Tca8113细胞VEGF基因,可明显抑制细胞及移植瘤内VEGF蛋白表达,但是对MMP-9蛋白的表达无明显影响。     

角果木提取物对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的作用

目的观察角果木提取物——Tagalsin对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤组织中bcl-2、p53基因表达水平的影响,探讨Tagalsin对卵巢癌的干预作用。方法建立人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为空白对照组、顺铂作用组、Tagalsin作用组和Tagalsin+顺铂组,连续给药后,定期观察各组裸鼠移植瘤生长情况,免疫组织化学方法检测各组Bcl-2、P53蛋白的表达,RT-PCR方法检测各组bcl-2、p53基因的表达。结果各药物作用组移植瘤体积明显小于空白对照组,其中Tagalsin+顺铂组移植瘤体积最小,差异有统计学意义(F=59.31,q=2.47～9.66,P<0.05)。与空白对照组相比,各药物作用组Bcl-2蛋白表达水平明显下降,P53蛋白表达水平均明显升高,以Tagalsin+顺铂组变化最明显(u=3.425～9.652,P<0.05),顺铂作用组与Tagalsin作用组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 Tagalsin可能通过调控癌基因及抑癌基因的表达来实现抑瘤作用,Tagalsin与顺铂联合应用可以明显增强其抑瘤作用。     

应用小干扰RNA技术阻断VEGF-C基因体内抑制乳癌细胞增殖

目的 应用化学修饰的小干扰RNA(siRNA)阻断裸鼠乳癌移植瘤中血管内皮生长因子C(VEGF-C)基因, 探讨其对人乳癌MCF-7裸鼠移植瘤生长的影响.方法 于雌裸鼠皮下种植MCF-7细胞,将成瘤阳性的裸鼠随机分为VEGF-C siRNA处理组、脂质体组和对照组,每组5只.VEGF-C siRNA处理组肿瘤局部注射VEGF-C siRNA 1 mg/kg和PEITM,脂质体组肿瘤局部注射PEITM和PBS,对照组仅注射PBS,每3 d注射1次,连续注射8次.22 d后拉颈处死全部动物, 取肿瘤,采用半定量 RT-PCR 分析VEGF-C mRNA水平,Western blotting检测VEGF-C蛋白表达水平.结果 VEGF-C siRNA处理组瘤组织的增长受到明显抑制,VEGF-C基因的mRNA和蛋白表达水平显著降低(F=73.64～197.15,q=8.74～25.56,P＜0.05).对照组各指标无显著变化.结论 化学修饰的siRNA介导的RNAi在体内能成功下调人乳癌裸鼠移植瘤中VEGF-C基因的表达, 抑制肿瘤的生长,是潜在的肿瘤基因治疗新方法.     

沉默B7-H3基因抑制人恶性血液病裸鼠移植瘤的体内成瘤和转移

目的：探讨靶向B7 H3基因沉默对人恶性血液病细胞株在裸鼠体内成瘤和转移的影响及机制。方法： 应用实时荧光定量PCR（real-time quantitative polymerase chain reaction,qPCR）和流式细胞术（flow cytometry,FCM）检测13株恶性血液病细胞中B7 H3分子的表达水平,筛选高表达的U937、Maver和Z138细胞。分别利用慢病毒转染技术靶向敲减B7-H3,建立稳定低表达细胞株,应用qPCR和FCM验证基因沉默效果。将U937、Maver和Z138各自分为空白对照组（non-infected control group,CON）、靶向B7-H3敲减组（B7-H3 knockdown group,KD）和阴性无关序列对照组（negative nontargeted control infected group,NC）,将以上9组分别构建裸鼠皮下移植瘤模型,比较肿瘤生长和转移情况,免疫组织化学（immunohistochemistry,IHC）染色检测Ki-67表达,蛋白质免疫印迹法（Western blot）检测基质金属蛋白酶2（matrix metalloproteinase 2,MMP-2）水平。结果： 筛选B7-H3分子高表达的U937、Maver和Z138细胞进行靶向敲减B7-H3,成功建立稳定低表达细胞株。U937、Maver和Z138细胞各自的KD组与NC组比较,观察终点的平均肿瘤生长抑制率分别为61.83%（F=43.78,P<0.05）、59.12%（F=36.51,P<0.05）和67.37%（F=40.29,P<0.05）,而各自NC组与CON组相比,肿瘤体积增长趋势差异无统计学意义（P>0.05）。在所有移植瘤裸鼠模型中肝转移最常见,KD组裸鼠的远处转移较相应NC组明显降低。3种细胞各自KD组的Ki-67指数均较相应NC组显著下降(U937移植瘤：40.3%±5.2% vs. 79.1%±6.3%, q=30.31,P<0.05;Maver移植瘤：35.2%±6.4% vs. 69.6%±5.1%, q=24.82,P<0.05;Z138移植瘤：38.4%±7.1% vs. 75.7%±4.8%, q=28.07,P<0.05）, 而NC组与CON组Ki 67表达差异无统计学意义（P>0.05）。3种细胞各自KD组肿瘤组织的MMP-2蛋白表达显著降低（U937移植瘤：q=14.59,P<0.05;Maver移植瘤：q=9.25,P<0.05;Z138移植瘤：q=11.04,P<0.05）, NC组与CON组MMP-2表达差异无统计学意义（P>0.05）。结论： 靶向B7-H3基因沉默能够抑制人恶性血液病细胞在裸鼠体内的成瘤和转移能力,其机制可能与Ki-67和MMP-2的表达下调有关。     

反义bcl-2 和反义survivin对人神经母细胞瘤细胞系SK-N-MC细胞生长的作用

目的研究反义bcl-2和反义survivin(svv)对人神经母细胞瘤(NB)细胞系SK-N-MC细胞生长的作用.方法利用基因重组技术,采用定向克隆构建在真核细胞中能够稳定表达反义bcl-2 或反义svv 的逆转录病毒载体PBabe puro-Asbcl-2和PBabe puro-Assvv,并分别经脂质体LipofectamineTM介导转染人NB细胞株SK-N-MC细胞,经嘌呤霉素(2.0 μg/ml)筛选得到抗性克隆,同时以空载体Pbabe puro 转染SK-N-MC作为对照;以免疫组化和Western 印迹分析反义bcl-2、反义svv对细胞内源性Bcl-2、SVV蛋白质的表达抑制作用,应用MTT法研究细胞(5×103 /孔)的生长和增殖情况,并接种于裸鼠(3只/组),观察107 个细胞在6周时的成瘤情况,以研究反义bcl-2、反义svv对SK-N-MC细胞生长的作用.结果反义bcl-2转染后的细胞SK-N-MC/PBabe puro-Asbcl-2中的Bcl-2表达明显降低,反义svv转染后的细胞SK-N-MC/PBabe puro-Assvv中的SVV表达也明显降低;且这两种细胞均生长缓慢, 裸鼠移植瘤体积均明显小于SK-N-MC原始细胞或转染空载体的细胞接种形成的移植瘤.结论稳定表达的反义bcl-2、反义svv均能够有效抑制SK-N-MC细胞内源性相应蛋白质Bcl-2、SVV的表达,提示这两个基因在NB细胞的肿瘤形成中均具有一定的作用.