长链非编码RNA PVT1对非小细胞肺癌细胞增殖和迁移能力的影响及其机制研究

目的 通过上调或者下调PVT1的表达，分析探究长链非编码RNA PVT1在非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖和迁移能力中的作用及机制，并在此基础上运用RNA-Seq分析PVT1的靶向基因，说明其作用机理。 方法 ①通过TCGA数据库(The Cancer Genome Atlas)分析NSCLC细胞中PVT1的表达与NSCLC患者生存时间之间的关系；②探究PVT1上调或下调对NSCLC细胞增殖及迁移能力的影响；③运用RNA-seq技术探究PVT1的下游靶基因，然后运用siRNA沉默该基因，探究此基因对NSCLC细胞增殖和迁移能力。 结果 ①PVT1的高表达与肺癌患者存活时间减少有显著关系(P<0.001)；②PVT1高表达可以显著促进肺癌患者肿块体积的增大，并且与肿瘤分期和淋巴结转移程度密切相关(均P<0.05)；③过表达PVT1可以促进NSCLC细胞的增殖及迁移；④用Si-RNA下调PVT1可以抑制NSCLC细胞的增殖及迁移；⑤PVT1下调会使LATS2的表达水平显著升高。 结论 PVT1通过表观调控LATS2促进NSCLC细胞增殖和迁移能力。      

肺鳞癌差异性长链非编码RNA表达谱分析及初步验证

目的:探讨及分析肺鳞癌差异性长链非编码RNA(lncRNA)的表达谱并进行初步验证。方法:采用Arraystar高通量lncRNAs基因芯片研究20例肺鳞癌混合组织及对应的癌旁组织,获得lncRNAs差异性表达谱。同时采用实时荧光定量PCR方法对40例肺鳞癌相关的lncR NA分子进行验证。结果:本实验所用的基因芯片包含30586个lncRNAs和26109个mRNAs探针;与癌旁组织比较肺鳞癌混合组织出现了1741条lncRNAs(≥2或≤0.5倍差异)和1716条mRNAs(≥2或≤0.5倍差异)差异性表达;信号通路分析显示了P53信号通路、细胞周期等发生明显变化。我们初步证实了10个lncRNAs分子在肺鳞癌组织中的表达与基因芯片一致,其中KRT16P2、BC016831是表达差异最为明显的lncRNAs分子。结论:肺鳞癌存在明显的lncRNAs差异性表达,这些lncRNAs及某些信号通路可能在肺鳞癌发生和发展中发挥重要作用。     

长链非编码RNA BANCR对非小细胞肺癌增殖和侵袭的影响

目的:探讨长链非编码RNA BANCR在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织及细胞系中的表达水平,以及BANCR对NSCLC细胞增殖和侵袭的影响?方法:用定量PCR技术检测NSCLC组织及细胞系中BANCR的表达水平;通过转染pcDNA-BANCR上调BANCR的表达水平,并通过qPCR检测转染效率?用Transwell实验检测上调BANCR的水平对SPC-A1细胞和A549细胞增殖和侵袭能力的影响,Western blot检测这2种细胞中上调BANCR的水平对上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)标志物上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)表达水平的影响?结果:相比正常肺组织及细胞,在NSCLC组织和细胞中BANCR的表达出现显著下调?MTT实验显示,上调BANCR的表达能降低SPCA1细胞和A549细胞的增殖和侵袭能力?BANCR过表达能通过上调E-cadherin表达并下调Vimentin表达,影响EMT?结论:BANCR可通过影响EMT,抑制NSCLC细胞的增殖和侵袭?     

长链非编码RNA SNHG10对胰腺癌细胞的迁移及侵袭的影响

目的分析长链非编码RNA(long non-coding RNA, lncRNA)小核仁RNA宿主基因10(small nucleolar RNA host gene 10,SNHG10)在胰腺癌(pancreatic cancer, PC)细胞中的表达水平,并观察其对细胞迁移及侵袭能力的影响。方法采用荧光定量PCR(qRT-PCR)检测5株PC细胞(AsPC-1、Capan-1、CFPAC-1、PANC-1和PaCa-2)和正常胰腺导管上皮细胞(HPDE)中SNHG10的表达特征。采用pcDNA3.1(+)-SNHG10载体过表达SNHG10,以pcDNA3.1(+)载体为对照;采用shRNA-SNHG10载体干扰SNHG10表达,以shRNA-control载体为对照。采用细胞划痕和Transwell侵袭试验观察过表达和干扰SNHG10后AsPC-1和PANC-1细胞迁移及侵袭能力的变化。结果 SNHG10在AsPC-1、Capan-1、CFPAC-1、PANC-1和PaCa-2细胞中的表达水平均显著高于HPDE细胞(P0.05),并以AsPC-1和PANC-1细胞的表达水平为最高(P0.05)。转染pcDNA3.1(+)-SNHG10载体可显著提高AsPC-1和PANC-1细胞中SNHG10的表达水平(P0.05),而转染shRNA-SNHG10载体显著抑制AsPC-1和PANC-1细胞中SNHG10的表达水平(P0.05)。转染shRNA-SNHG10载体可显著促进AsPC-1和PANC-1细胞的迁移及侵袭能力(P0.05),而转染shRNANHG10载体显著抑制AsPC-1和PANC-1细胞的迁移及侵袭能力(P0.05)。结论 SNHG10在PC细胞中表达上调。过表达SNHG10可促进PC细胞的迁移及侵袭能力,而干扰SNHG10可抑制PC细胞的迁移及侵袭能力。     

长链非编码RNA HOTAIR与肿瘤发生发展的研究进展

长链非编码RNA(lncRNAs)是一类无蛋白质编码功能的RNA分子,参与多种生物学过程的调控,在生命活动中扮演着重要角色,在表观遗传学水平、转录水平和转录后水平调控基因表达。同源盒基因转录反义RNA(HOTAIR)是第一个被发现的反义转录长链非编码RNA,因其在多种恶性实体肿瘤中高表达,且与肿瘤发生、发展密切相关而引起人们重视。HOTAIR与肿瘤发生、发展关系的研究,对深入了解肿瘤的发病机制具有重要的理论意义,同时为肿瘤的早期诊断和靶向治疗亦提供参考。     

长链非编码RNA HOTAIR在肿瘤中的研究进展

长链非编码RNA是多种生物学过程的关键调控因子,可在表观遗传学、转录及转录后等多层面调控基因表达,对个体生长发育及肿瘤发生、发展过程至关重要。新近研究显示,长链非编码RNA同源盒基因转录反义RNA(HOTAIR)在多种实体肿瘤中均高表达,且与肿瘤侵袭转移、预后等密切相关。该文对近年来HOTAIR在多种实体肿瘤中的研究进展予以综述。     

长链非编码RNA与肺癌的关系研究进展

长链非编码RNA是一类长度大于200个核苷酸、因缺少有意义的开放阅读框而不具有编码蛋白功能的非编码RNA分子。近年来的研究表明,长链非编码RNA在肿瘤的发生、发展过程中起着重要的作用。本文就长链非编码RNA在肺癌中的异常表达、与肺癌发生和转移的关系、在肺癌患者早期诊断和判断预后中的意义等研究进展做一综述,为肺癌的早期诊断和治疗提供新的思路。     

VE-cadherin在不同侵袭性能非小细胞肺癌细胞株的表达及沉默VE-cadherin对非小细胞肺癌细胞株侵袭、迁移的影响

目的：了解广东省全科医生转岗培训项目实践技能培训短期效果,为改进培训策略和措施提供科学依据。方法按照卫生部制定的《基层医疗卫生机构全科医生转岗培训大纲（试行）》,对来自广东省15个经济欠发达地市的451名基层医生进行为期1年的全科医生转岗培训。采用自行设计问卷对学员进行实践培训前、后效果调查,内容包括实践技能掌握情况以及对培训质量的评价。应用SPSS 13.0处理数据,对数据进行描述性分析、t检验、方差分析及相关分析。结果学员培训前、后实践技能水平自评总分均值分别为（136.37±21.74）分和（169.39±17.12）分,培训前、后分值差异具有统计学意义（t=29.028,P=0.000）,各类技能分值均高于培训前;学员对实践技能培训的总满意率为91.6%,对培训环境和培训保障方面满意度较低;学员实践技能水平提高程度的影响因素包括学历、职称、培训意愿以及是否参加过全科医生培训;实践技能培训效果和学员对培训的总满意度呈正相关（r＝0.162,P＝0.037）。结论全科医生实践技能培训取得了较好的效果;今后培训应该注意增加学员实践操作机会,科学设计实践培训内容,进一步加强培训项目管理,以期持续提高实践技能培训效果。     

LncRNA SNHG3对宫颈癌细胞SiHa增殖、迁移及侵袭的影响

目的 探究长链非编码RNA（lncRNA）小核仁RNA宿主基因3（SNHG3）对人宫颈癌细胞系SiHa增殖、迁移及侵袭的影响。方法 利用 GEO 数据库芯片分析 lncRNA SNHG3 在正常宫颈组织和宫颈癌样本中的表达;通过实时定量 PCR 检测LncRNA SNHG3、上皮-间质转化标志物 N-cadherin、Snail、Vimentin 和 E-cadherin 基因表达水平;通过 Western blot 检测 N-cadherin、Snail、Vimentin和E-cadherin蛋白表达水平;在SiHa细胞中转染siRNA干扰片段来敲低lncRNA SNHG3,并采用qRT-PCR验证转染效率;通过CCK8实验检测细胞增殖能力,划痕愈合实验检测细胞横向迁移能力,Transwell小室实验检测细胞纵向迁移及侵袭能力。结果 LncRNA SNHG3在宫颈癌组织及细胞系中高表达;敲低lncRNA SNHG3后,明显抑制SiHa细胞的增殖能力（P<0.001）、迁移能力（P<0.01）和侵袭能力（P<0.001）;qRT-PCR和Western blot结果显示敲低lncRNA SNHG3可下调N-cadherin、Snail和Vimentin表达水平（P<0.001）,同时上调E-cadherin表达水平（P<0.001）。结论 LncRNA SNHG3可通过激活EMT通路促进宫颈癌细胞SiHa增殖、迁移及侵袭能力。     

长链非编码RNA C6orf176两个转录本在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的：探讨长链非编码RNA C6orf176两个转录本C6orf176-TV1和C6orf176-TV2在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达及临床意义。方法：采用实时荧光定量PCR技术检测57例NSCLC组织及配对癌旁组织中C6orf176-TV1与C6orf176-TV2的表达水平,并分析其与临床病理特征的关系。结果：NSCLC组织中C6orf176-TV1表达下调42例,表达上调15例,其表达与肿瘤分化程度有关(P<0.05),与性别、年龄、吸烟史、病理类型、TNM分期均无关。C6orf176-TV1表达诊断癌组织与癌旁组织的受试者工作特征(receiver operator characteristic,ROC)曲线下面积(area under curve,AUC)为0.708(95% CI：0.615~0.802),灵敏度和特异度分别为51%和88%。NSCLC组织中C6orf176-TV2表达下调39例,表达上调的18例,其表达与肿瘤分化程度有关(P<0.05),与性别、年龄、吸烟史、病理类型、TNM分期均无关。C6orf176-TV2表达诊断癌组织与配对癌旁组织的ROC的AUC为0.64(95% CI: 0.531~0.749),灵敏度和特异度分别为49%和75%。57例标本中C6orf176-TV1与C6orf176-TV2同时上调或下调的标本有53对,其相关系数为0.99。结论：C6orf176-TV1与 C6orf176-TV2在NSCLC组织中均表达下调,其与肺癌肿瘤细胞分化程度相关,可作为NSCLC的诊断指标。     

miR-424对非小细胞肺癌细胞株A549迁移及侵袭的影响

目的探讨miR-424对非小细胞肺癌细胞株A549迁移及侵袭的影响。方法 RT-PCR法检测肺癌细胞NCI-H460、NCI-H1975、NCI-H446、A549、NCI-H1299、NCI-H157及人胚肺成纤维细胞MRC-5中miR-424表达,脂质体LipofectamineTM2000将miR-424 inhibitor和miR-424 NC转入A549细胞中,48 h后,RT-PCR法检测miR-424表达,CCK-8法检测细胞活力,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力,western blot检测基质金属蛋白酶2(MMP2)、MMP9、转化生长因子-β1(TGF-β1)及p-Smad3的表达。结果 miR-424在肺癌细胞NCIH460、NCI-H1975、NCI-H446、A549、NCI-H1299、NCI-H157中的[(1.78±0.13),(1.69±0.10),(1.89±0.18),(2.88±0.27),(2.52±0.20),(2.49±0.23)]表达量显著高于miR-424在人胚肺成纤维细胞MRC-5中的(0.58±0.05)表达量(P0.01)。与miR-424 NC组比较,miR-424 inhibitor组miR-424表达量显著降低(P0.01),细胞活力下降(P0.01),细胞迁移及侵袭能力降低(P0.01),MMP2,MMP9,TGF-β1及p-Smad3表达量均显著下调(P0.01)。结论 miR-424表达量下调后能通过抑制TGF-β1/Smad3信号通路进而抑制A549细胞的迁移及侵袭。     

长链非编码RNA HOTAIR 对胃肠间质瘤 细胞化疗敏感性的影响

目的 研究长链非编码RNA（lncRNA）HOTAIR 对胃肠间质瘤细胞伊马替尼化疗敏感性的影响, 并探讨其作用机制。方法 首先在胃肠间质瘤组织中检测HOTAIR 的表达水平。选择胃肠间质瘤细胞GIST-T1 为研究对象,si 干扰HOTAIR 后,采用dUTP 缺口末端标记测定法（TUNEL）和半抑制浓度（IC50）法检 测GIST-T1 对伊马替尼化疗敏感性的变化。通过实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）法、RNAhybird 软件分析和荧光素酶报告法,筛选并验证与HOTAIR 存在内源性竞争关系的miRNAs。最后将miRNA 与 HOTAIR 共转染,观察HOTAIR 与miRNA 的竞争性结合能否改变GIST-T1 细胞对伊马替尼的化疗敏感性。 结果 HOTAIR 在胃肠间质瘤组织中表达含量高于正常组织（P <0.05）。伊马替尼药物作用下,si-HOTAIR 组细胞IC50 低于si-NC 组（P <0.05）;TUNEL 阳性细胞比例高于si-NC 组（P <0.05）;差异有统计学意 义。qRT-PCR 结果显示,si-HOTAIR 组细胞miRNA-21 表达水平高于si-NC 组（P <0.05）;RNA hybird 分析及荧光素酶验证结果显示HOTAIR 与miR-21 核心序列区存在碱基互补。将miRNA-21 与HOTAIR 共转染GIST-T1 细胞后,与miRNA-21+HOTAIR- 突变型组比较,miRNA-21+HOTAIR- 野生型组细 胞IC50 增高（P <0.05）;TUNEL 阳性细胞比例降低,差异有统计学意义（P <0.05）。结论 长链非编码RNA HOTAIR 可通过内源性竞争结合miRNA-21,降低胃肠间质瘤细胞对伊马替尼的化疗敏感性。     

miR-200a对非小细胞肺癌迁移、侵袭的调控作用及机制研究

目的:研究miR-200a对非小细胞肺癌迁移、侵袭的调控作用及机制。方法:培养肺癌A549细胞并分组,阴性对照(NC)过表达组转染NC的模拟物,miR-200a过表达组转染miR-200a的模拟物,NC抑制组转染NC的抑制物,miR-200a抑制组转染miR-200a的抑制物。采用划痕实验检测细胞的迁移能力,采用transwell检测细胞的侵袭能力,采用Western blotting检测迁移基因N-钙黏蛋白(N-cadherin)及波形蛋白(Vimentin)、侵袭基因基质金属蛋白酶(MMP)2及MMP9、β-catenin的表达量。结果:与NC过表达组比较,miR-200a过表达组的迁移和侵袭能力明显减弱,N-cadherin、Vimentin、MMP2、MMP9、β-catenin的表达量明显减少;与NC抑制组比较,miR-200a抑制组的迁移和侵袭能力明显增强,N-cadherin、Vimentin、MMP2、MMP9、β-catenin的表达量明显增加。结论:miR-200a能够抑制非小细胞肺癌的迁移、侵袭且这一抑制作用与靶向抑制β-catenin有关。