携带AML1/ETO+融合基因儿童急性髓细胞白血病患者骨髓细胞形态学特点

目的探讨携带急性髓细胞白血病1／821（acute myeloid leukemia 1／eighttwenty-one。AMLl／ETO）融合基因的儿童急性髓细胞白血病（AML）的形态学特点。方法对46例经多重逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测AML1／ETO融合基因阳性的儿童AML骨髓片用瑞特染液或与姬姆萨染液一起染色后，按照国内AML分型标准进行观察分析，同时，对免疫分型及细胞化学染色结果也进行了回顾分析。结果46例AML1／ETO融合基因阳性患儿中M2a、M2b、M4EO、M4、M5b分别占67．2％、19．6％、2．2％、6．6％、4．4％，其中M2b的构成比显著低于文献报道。免疫分型、细胞化学结果均支持形态学分型。结论儿童AML患者AML1／ETO融合基因阳性不能提示形态学是否可诊断为M2b；AMLl／ETO融合基因对儿童M2b没有成人特异。     

荧光原位杂交技术在急性髓系白血病诊断中的应用

目的探讨荧光原位杂交技术（FISH）在急性髓系白血病（AML）的诊断中的意义。方法对初发的经骨髓常规形态学、细胞化学染色和免疫分型初步诊断的10例AML-M2、19例AML-M3，11例AML不能确定为M2或者M3的患者，进行FISH技术检测AML1／ETO和／或PML／RARα融合基因，进而协助诊断和指导治疗。结果10例AML-M2中AML1／ETO融合基因阳性率40％（4／10）；19例AML-M3中PML／RARα融合基因阳性率89％（17／19），1例AML1／ETO融合基因阳性，确诊为AML-M2；11例AML中AML1／ETO融合基因阳性率18％（2／11），PML／RARα融合基因阳性率45％（5／11），其余4例未检测到以上两种融合基因。结论FISH是一种敏感的分子遗传学的新技术，具有高效、快速、灵敏等优点。对AML的诊断分型具有重要帮助，进一步指导临床治疗。     

伴有t(8;21)的急性髓细胞白血病M2b型病人的临床特征(附67例报告)

分析67例急性髓细胞白血病（AML）M2b型病人的临床特征。方法：以细胞形态学为基础，结合细胞遗传学、分子生物学等方法检查AML M2b型病人的骨髓标本。结果：在67例病人骨髓片中，异常中幼粒细胞的特征性形态变化主要表现为核浆发育不平衡，占6％－66％，其中有5例＜10％。57例作染色体检查均发现t(8;21)（q22;q22)。34例进行融合基因检测，均发现急性髓细胞白血病21号染色体的1基因和8号染色体的Eight Twenty-One基因交互易位形成融合基因（AML1－ETO）。结论：（1）染色体t(8;21)与M2b密切相关，且常伴性染色体的选择，尤以Y染色体丢失常见。（2）AML1－ETO融合基因可作为M2b亚型的分子标志物，同时对判断预后和监测残留白血病等方面也有一定价值。（3）异常中幼粒的特征性形态改变是细胞形态学分类的关键，而其数量不一定＞30％。     

伴AML-1/ETO融合基因的急性髓细胞白血病M2型患者骨髓的多参数免疫表型特征

目的探讨伴AML-1／ETO基因重排的急性髓细胞白血病M2型（AML-M2）患者骨髓的多参数免疫表型特征及多参数免疫表型检测对此亚型的预测性。方法应用多参数流式细胞术分析30例经荧光原位杂交（FISH）检测AML-1／ETO融合基因阳性，FAB分型为AML-M2（简称M2／ETO^＋）患者骨髓的免疫表型，并与36例FAB分型为AML-M2、AML-1／ETO融合基因检测为阴性（简称M2／ETO^-）和34例FAB分型为AML-M2（急性早幼粒细胞白血病，APL）患者的免疫表型进行比较。结果30例M2／ETO^＋患者骨髓中均可见一群原始细胞（15．89％～68．53％）和一群侧向散射（SSC）较高异质性、分化的粒细胞。原始细胞表达干细胞相关抗原CD34、HLA-DR和髓系抗原CD33、CD13、MPO，并显示特异的抗原表达模式。在M2／ETO^＋患者中CD33表达的平均荧光强度显著低于M2／ETO^-和APL患者（MFI分别为98±75、244±184和845±523，P均〈0．01），CD19（90．0％）和CD34^＋CD56^＋（100％）共表达的阳性率均显著高于M2／ETO^-（11．11％，25．0％）和APL患者（8．82％，0％），P均〈0．01，与APL比较CD9^＋MPO^＋的共表达率显著降低（0％vs．93．75％），而HLA-DR表达则显著升高（100％vs．27．27％）。M2／ETO^＋患者粒细胞表达分化的髓系抗原CD11b和CD15，并可分为CD15^＋CD11b^-和CD15^＋CD11b^＋两群，而成熟的粒细胞标志CD10均为阴性，并且81．48％M2／ETO^＋患者的粒细胞表达CD56，显著高于M2／ETO^-患者（22．22％）和APL患者（17．56％）。结论伴AML-1／ETO基因重排的AML—M2型白血病具有独特的免疫表型，对其基因重排有较高的预测性。应用多参数免疫分型技术可较容易地将M2／ETO^＋亚型白血病与APL鉴别。     

伴有t（2；21；8）（p12；q22；q22）急性髓系白血病M2的MICM特征与诊断的探讨

本研究应用形态学、免疫学、细胞遗传学和分子生物学（MICM）分型技术联合检测伴有复杂变异核型t（2;21;8）（p12;q22;q22）的急性髓系白血病（AML—M2）,并探讨其特征及诊断意义。取患者骨髓涂片行瑞氏-姬姆萨染色和细胞化学染色进行骨髓细胞形态学FAB分型;流式细胞术（FCM）检测白血病细胞免疫表型;新鲜骨髓细胞短期培养法常规制备染色体标本,RHG显带技术进行核型分析,采用双色双融合AML／ETO探针及全染色体涂染（CP）探针检测有丝分裂中期荧光原位杂交（FISH）信号,并与常规R显带细胞遗传学检测结果进行比较分析,巢式RT—PCR检测AML1-ETO融合转录本。结果表明：病例1原始粒细胞伴嗜酸粒细胞及单核细胞比例增高;病例2符合以异常中幼粒细胞增高为主的AML—M2b;染色体核型分析结合FISH检测证实两例患者均存在t（2;21;8）（p12;q22;q22）复杂核型;AMLL／ETO融合基因转录本阳性,免疫表型显示CD34和HLA—DR共表达,伴CD19和cD56表达。结论：应用WHO提出的细胞形态学、免疫学、细胞遗传学和分子生物学技术（MICM）联合检测的实验室诊断方法对准确诊断复杂变异核型t（2;21;8）（p12;q22;q22）AML的分型具有重要意义。     

Musashi-2在急性髓系白血病干细胞中的表达研究

本研究旨在探讨检测AML患者Musashi-2（Msi2）的表达与其他临床参数特别是CD34表达的相关性.提取临床初诊确诊为急性髓系白血病（AML）患者骨髓标本的总RNA,荧光定量RT-PCR检测患者Msi2的表达水平;流式细胞术检测上述病人的CD34表达水平;综合分析其他实验室检查资料和患者的临床表现,分析初诊AML患者Msi2表达情况以及Msi2表达与CD34表达的相关性.结果表明：①初诊AML患者骨髓Msi2表达显著高于正常对照骨髓（P＜0.05）,各亚型中Msi2表达以M1、M4和M5中表达较高,显著高于AML其他亚型中的表达（P＜0.05）;②Msi2的表达与患者年龄、性别、初诊时外周血白细胞数、AML1/ ETO融合基因、PML/ RARa融合基因均无关（P＞0.05）;③CD34＋组AML患者Msi2表达显著高于CD34-AML患者（P＜0.05）.结论：Msi2表达于白血病干细胞,Msi2在初诊AML中高表达,以M1、M4和M5亚型中表达尤为显著,在CD34＋ AML患者中Msi2高表达.     

AML-1/ETO基因相关的AML-M2型白血病免疫表型分析

本研究探讨AML/ETO基因重排的FAB分型为AML-M2患者的骨髓免疫表型的特征和预测性,以及与急性早幼粒白血病（APL）的区别。应用流式细胞术分析17例经荧光原位杂交（FISH）检测AML-1/ETO融合基因阳性、FAB分型为AML-M2（M2/ETO＋）患者骨髓的免疫表型,并与34例AML-1/ETO阴性、FAB分型AML-M3、临床诊断为APL患者进行了比较。结果发现,17例M2/ETO＋患者骨髓中均可见一群（15.89%-68.53%）原始细胞和一群SSC较高异质性的粒细胞。原始细胞表达干细胞相关抗原CD34、HLA-DR和髓系抗原CD33、CD13、MPO。在M2/ETO＋患者中CD33表达强度显著低于APL患者（P〈0.001）,HLA-DR、CD19和CD34＋CD56＋共表达的阳性率均显著高于APL患者（P〈0.001）,而CD9的表达率则显著低于APL患者（P〈0.001）。M2/ETO＋患者粒细胞表达分化的髓系抗原CD11b和CD15,并可分为CD15＋CD11b-和CD15＋CD11b＋两群,而成熟的粒细胞标志CD10均为阴性,与早幼粒细胞的表达图形相似。17例（100%）M2/ETO＋患者的粒细胞均表达CD56,显著高于M3患者（6/34例,17.56%）。结论：AML-1/ETO基因重排的AML-M2型（FAB分型）白血病具有独特的免疫表型,对其基因重排有较高的预测性。应用多参数免疫分型技术可较容易地将M2/ETO＋亚型白血病与APL鉴别。     

AML1/ETO阳性急性髓系白血病患者FLT3基因高表达及其临床意义

本研究旨在探讨AML1/ ETO融合基因阳性的急性髓系白血病M2（acute myeloid leukemia with maturation,AML/M2）患者FLT3基因表达量与临床症状和预后的相关性及其意义.采用RQ-PCR法定量检测21例AML1/ETO阳性AML-M2患者初诊骨髓标本中FLT3基因的表达水平,并分析FLT3基因表达量的高低与临床特征、实验室其它检测结果及预后的关系.结果表明：患者FLT3基因表达水平（FLT3基因/内参基因）初诊时为1.65％-261.5％.据此将FLT3基因表达水平大于35％者归为高表达组（12例）,其表达水平低于35％者归为低表达组（9例）.高表达组患者初诊时白细胞计数＞ 10×109/L者8例（66.67％）,低表达组2例（22.22％）;伴有髓外浸润患者的比例在高表达组为25％,低表达组为0％,但由于例数较少,暂无统计学意义（P=0.0805;P=0.2286）.两组患者年龄以及骨髓原始细胞比例无明显差异（P =0.1369,P=0.6923）.FLT3基因高表达组和低表达组化疗完全缓解（CR）率为（66.67％ vs 88.89％）,其差异无统计学意义（P =0.3383）,而复发率（66.67％ vs 22.22％）及死亡率（50％ vs 22.22％）的差异虽无统计学意义（P =0.0805,P=0.3666）,但有很明显的差异趋势.结论：AML1/ETO阳性AML-M2患者FLT3基因表达量高提示患者预后不良,易复发,常规检测初诊AML1/ ETO阳性AML-M2患者骨髓中FLT3基因表达量对患者的危险度分层、预后评估以及个体化治疗方案的选择可能具有重要的指导意义.     

实时定量RT-PCR技术测定初治白血病患者常见融合基因转录子水平及其标准化的探讨

目的 了解白血病常见融合基因M—bcr—abl（表达产物为P210^bcr-abl）、m—bcr—abl（表达产物为P190^bcr-abl）、TEL—AML1、AML1-ETO、PML—RARα、CBFβ-MYH11在初治白血病患者中的表达水平。方法 采用基于TaqMan探针的实时定量RT—PCR（RQ—PCR）技术检测195例白血病患者骨髓细胞融合基因转录子水平，其中M—bcr—abl^＋慢性粒细胞白血病慢性期（CML—CP）50例、M—bcr—abl^＋急性淋巴细胞白血病（ALL）10例、m—bcr—abl^＋ALL19例、TEL—AML1^＋ALL11例、AML1-ETO^＋急性髓系白血病（AML）30例、PML—RARα急性早幼粒细胞白血病（APL）58例、CBFβ-MYH11^＋AML患者17例，并检测13例M—bcr-abl^＋CML-CP患者的外周血细胞融合基因转录子水平。以abl作为内参基因，融合基因转录子水平以融合基因转录子拷贝数／abl基因转录子拷贝数×100％表示。结果CML—CP患者骨髓及外周血M-bcr—abl转录子水平相似（中位值分别为30％和35％，P〉0.05）、ALL患者M—bcr—abl及m-bcr-abl转录子水平相似（中位值分别为64％和54％，P〉0．05），ALL患者M—bet—abl转录子水平明显高于CML—CP患者（P〈0．001）。ALL患者TEL—AML1转录子中位水平为228％。表达特异性融合基因的AML患者中，AML1-ETO转录子水平明显高于CBFβ-MYH11及PML—RARα（中位值分别为388％，145％和47％，P值均〈0．001），CBFβ-MYH11转录子明显高于PML—RARα（P〈0．001）。L型、V型及S型PML—RARα转录子中位水平分别为45％、44％及55％，L型明显低于S型（P=0．04）。结论 不同类型融合基因转录子在初治白血病患者中的水平不同，并有个体差异。初治患者融合基因转录子水平的测定不仅为检测微量残留病、评价疗效提供基准值，而且是不同实验室间数据比较、实现标准化的基础。     

自体外周造血干细胞移植治疗13例AML1/ETO(+)急性髓系白血病的疗效观察

本研究分析自体外周造血干细胞移植治疗AML1／ETO（＋）急性髓系白血病（AML）的疗效及定量监测融合基因AML1／ETO在治疗中的应用。对2007年8月-2012年11月在本院进行自体移植的AML1／ETO（＋）AML患者13例进行回顾性分析,中位随访26（7．8—75．8）个月,计算总生存率（OS）、无白血病生存率（1eukemia—freesurvival,LFS）和累积复发率（relapserate,RR）,并对生存情况进行单因素分析。结果表明,3年的总体存活率为（70．5±15．3）％,3年的无白血病存活率为（51．3±16．7）％,3年的累积复发率为48．7％。在5例复发患者中对4例进行了A舭J／ETO定量监测,发现形态学复发前AML1／ETO表达量均明显升高。在单因素分析中,患者年龄、性别、初诊时白细胞数量、自确诊白血病到进行移植的时间间隔、回输MNC数量等对总体存活率的影响均差异无统计学意义（均P〉0．05）。结论：自体造血干细胞移植对AML1／ETO（＋）AML患者具有良好疗效,定期定量监测AML1／ETO表达量可预知早期复发,中高危患者复发后采用异基因移植可再次获得长期生存机会。     

环腺苷酸拟似物8-CPT-cAMP诱导M2b型急性髓系白血病细胞系Kasumi-1细胞分化的研究

为了解环腺苷酸拟似物8-对氯苯硫基环腺苷酸（8-CPT-cAMP）对M2b型急性髓系白血病（AML-M2b）细胞的作用,以AML-M2b细胞株Kasumi-1细胞为模型,通过观察细胞生长、形态、表面分化抗原、细胞周期分布以及对四氮唑蓝的还原能力的改变,研究8-CPT-cAMP对Kasumi-1细胞增殖及分化的影响,并应用半定量RT-PCR和Western blot检测药物处理前后Kasumi-1细胞内AML1-ETO融合蛋白的变化。结果发现,8-CPT-cAMP（200μmol/L）可明显抑制Kasumi-1细胞增殖而促使细胞趋向分化,但这种分化不是典型的完全终末性分化,8-CPT-cAMP对Kasu-mi-1细胞内AML1-ETO融合基因及其编码蛋白的表达无显著影响。结论：8-CPT-cAMP对AML-M2b细胞具有诱导分化效应。     

急性髓细胞性白血病M2患者形态学及免疫学分型与融合基因染色体检查的价值

背景:传统的形态学分型法仅能使70%左右的急性白血病得以准确分型,单纯的FAB分型已远远不能满足临床需要。目的:评价形态学、免疫分型、融合基因、染色体检查在急性髓细胞性白血病(M2)中的诊断价值及预后意义。方法:选择新疆医科大学第一附属医院收治的急性髓细胞性白血病患者M2型76例,男40例,女36例。用反转录-聚合酶链反应技术检测AML1/ETO融合基因的表达、R带法进行染色体核型分析、流式细胞仪免疫分型检测,应用形态学和免疫分型、融合基因、染色体检查,并持续观察,定期检查血象等相关检查,由是否能明确诊断或协助诊断,对复发有无相关检查预测性来分析其诊断价值及预后影响因素。结果与结论:76例患者中有形态学不易分类的6例患者,结合免疫分型、融合基因及染色体检查可明确,单纯髓系抗原表达较伴有干祖系抗原表达缓解率高,CD19抗原可与部分急性髓系白血病有交叉表达,且有交叉表达的有较好的预后,伴有CD7抗原表达7例均完全缓解,可能更倾向于分化成熟的细胞,具有单纯t(8,21)、融合基因阳性者预后较佳,完全缓解率高。提示形态学、免疫学分型结合融合基因、染色体检查可提高急性白血病M2的诊断准确性、判断预后。     

荧光原位杂交技术在急性髓系白血病诊断中的应用

目的探讨荧光原位杂交技术(FISH)在急性髓系白血病(AML)的诊断中的意义。方法对初发的经骨髓常规形态学、细胞化学染色和免疫分型初步诊断的10例AML-M2、19例AML-M3,11例AML不能确定为M2或者M3的患者,进行FISH技术检测AML1/ETO和/或PML/RARα融合基因,进而协助诊断和指导治疗。结果10例AML-M2中AML1/ETO融合基因阳性率40%(4/10);19例AML-M3中PML/RARα融合基因阳性率89%(17/19),1例AML1/ETO融合基因阳性,确诊为AML-M2;11例AML中AML1/ETO融合基因阳性率18%(2/11),PML/RARα融合基因阳性率45%(5/11),其余4例未检测到以上两种融合基因。结论FISH是一种敏感的分子遗传学的新技术,具有高效、快速、灵敏等优点。对AML的诊断分型具有重要帮助,进一步指导临床治疗。     

多参数流式细胞术在AML1/ETO阳性急性髓系白血病诊断中的应用研究

目的本研究旨在探讨多参数流式细胞术(multiparameter flow cytometry,MFCM)在AML1/ETO融合基因阳性的急性髓系白血病(AML)诊断中的应用价值以及分析AML1/ETO融合基因阳性患者的骨髓细胞免疫表型,为病人早期诊断、分型和预后分层提供依据。方法将细胞遗传学或分子遗传学检查到AML1/ETO融合基因阳性作为金标准,筛选南昌大学第一附属医院2010年1月-2018年1月期间收治初诊AML1/ETO阳性AML患者44例,阴性患者44例,收集所有患者实验室信息(主要包括骨髓细胞形态学,多参数流式细胞术,细胞遗传学或分子遗传学检测结果)。采用四格表分别对骨髓细胞形态学和流式细胞术两种方法诊断AML1/ETO融合基因结果真实性和可靠性进行评价,比较骨髓细胞形态学、流式细胞术检查的诊断效能指标,探讨多参数流式细胞术在AML1/ETO融合基因相关的AML早期诊断中的应用价值并分析AML1/ETO阳性AML的免疫表型特点。结果 AML1/ETO阳性患者均表达CD117、CD34、CD33以及HLA-DR(阳性率100.00%),43例表达CD13(阳性率97.73%),42例表达CD19(阳性率95.45%)。CD117、CD34、HLA-DR以及CD19共表达的阳性率高达95.45%,而在44例AML1/ETO阴性患者中,均无此表型特点。多参数流式细胞术检测的灵敏度(81.82%vs25.00%),符合率(88.64%vs62.50%)以及阴性预测值(84.00%vs57.14%)明显高于形态学,漏诊率(18.18%vs75.00%)明显低于形态学,特异度(95.50%vs100%)略低于形态学,综合诊断效能明显优于形态学。结论多参数流式细胞术在AML1/ETO融合基因阳性AML的诊断中具有重要的应用价值,CD117、CD34、HLA-DR以及CD19的共表达是AML1/ETO融合基因阳性AML独特的免疫表型。     

急性髓系白血病伴t（8;21）的临床特点及预后

目的探讨t（8;21）急性髓系白血病（acute myeloid leukemia,AML）的临床特点及预后,提高对t（8;21）AML的认识。方法 2010年5月收治1例t（8;21）AML患者,对其临床资料并复习相关文献进行分析。患者因乏力、皮下瘀斑入院,查体发现患者有胸骨压痛,脾肋下3cm触及,血常规：白细胞80.37×10^9/L,异常细胞23%,取患者骨髓液行形态学、流式细胞术检测及染色体核型检测。结果患者诊断为急性粒细胞白血病部分分化型（AML-M2b）,AML1/ETO融合基因阳性,染色体核型分析t（8;21）（q22;q22）。结论 t（8;21）AML是一类较为特殊的急性髓系白血病,在诊断时需寻找疾病的预后因素并进行分层,实施个体化治疗。     

荧光原位杂交技术在儿童急性髓系白血病诊断中的作用

本研究探讨荧光原位杂交技术(FISH)在儿童急性髓系白血病(AML)临床诊断中的作用。对2005年4月至2010年4月于我院就诊的179例儿童AML的临床实验室检查资料进行回顾性分析,分析FISH法与染色体核型分析(CA)、聚合酶链反应(PCR)检测手段对融合基因检测结果的差异性和互补性。结果表明:FISH对细胞遗传学异常的检出率较高,27例AML-M3应用探针检测PML/RARα融合基因,22例为阳性;24例AML-M2b应用探针检测AML1/ETO融合基因,24例均为阳性;3例AML-M4Eo应用探针检测CBFβ/MYH11融合基因,3例均阳性。结论:FISH法检测儿童AML中融合基因阳性率较高,并且与常规染色体核型分析和PCR检测具有较好的一致性。FISH与传统的细胞遗传学和分子生物学技术相结合,能够使遗传学异常的检测更准确,在儿童AML的诊断和分型中具有值得推广的临床价值。     

急性髓细胞性白血病M2患者形态学及免疫学分型与融合基因染色体检查的价值

背景：传统的形态学分型法仅能使70%左右的急性白血病得以准确分型,单纯的FAB分型已远远不能满足临床需要。目的：评价形态学、免疫分型、融合基因、染色体检查在急性髓细胞性白血病（M2）中的诊断价值及预后意义。方法：选择新疆医科大学第一附属医院收治的急性髓细胞性白血病患者M2型76例,男40例,女36例。用反转录-聚合酶链反应技术检测AML1/ETO融合基因的表达、R带法进行染色体核型分析、流式细胞仪免疫分型检测,应用形态学和免疫分型、融合基因、染色体检查,并持续观察,定期检查血象等相关检查,由是否能明确诊断或协助诊断,对复发有无相关检查预测性来分析其诊断价值及预后影响因素。结果与结论：76例患者中有形态学不易分类的6例患者,结合免疫分型、融合基因及染色体检查可明确,单纯髓系抗原表达较伴有干祖系抗原表达缓解率高,CD19抗原可与部分急性髓系白血病有交叉表达,且有交叉表达的有较好的预后,伴有CD7抗原表达7例均完全缓解,可能更倾向于分化成熟的细胞,具有单纯t（8,21）、融合基因阳性者预后较佳,完全缓解率高。提示形态学、免疫学分型结合融合基因、染色体检查可提高急性白血病M2的诊断准确性、判断预后。