中药诱导胃癌细胞凋亡的研究进展

细胞凋亡是指在细胞外或细胞内的信号诱导下，细胞发生的主动自杀死亡过程。通过凋亡可使体内失去生命力的细胞或生理上不需要的细胞被有序地清除，从而维持组织中细胞形成与破坏之间的平衡。如果细胞凋亡受抑制，则细胞的生长期延长，死亡率下降，细胞数目增加，表现出生长优势；应该凋亡的细胞若不发生凋亡而继续存活，则可能转化成肿瘤细胞，而促进肿瘤细胞的凋亡可以促使肿瘤的消退。自上世纪90年代开始分子生物学研究以来，人们对细胞凋亡调控基因的认识越来越深入。     

线粒体凋亡通路在声动力学疗法诱导肿瘤细胞凋亡中的作用

目的研究超声激活血卟啉诱导S180肿瘤细胞凋亡的作用机制,并探讨声动力学处理对线粒体凋亡相关蛋白表达变化的影响。方法采用频率为1.75 MHz,声强2W/cm~2的高频聚焦超声结合血卟啉处理S180腹水型肿瘤细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡率;激光共聚焦扫描显微镜观察线粒体内膜通透性的变化和细胞色素C的释放;Western blotting检测线粒体凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和Caspase-3的表达变化。结果超声结合血卟啉联合作用后,S180肿瘤细胞凋亡率显著提高,线粒体内膜通透性增强,细胞色素C释放,Bax、Caspase-3蛋白的表达明显升高,而Bcl-2表达降低。结论线粒体凋亡通路在超声激活血卟啉诱导S180肿瘤细胞凋亡中可能起重要作用。     

人参皂苷Rg3抑制B16黑色素瘤生长和诱导凋亡的实验研究

目的观察人参皂苷Rg3抑制黑色素瘤生长和诱导其凋亡的作用并探讨其可能的作用机制。方法采用B16黑色素瘤实体瘤模型和TUNEL（TdT-mediated dUTP nick-end labeling）染色观察Rg3对黑色素瘤生长和诱导凋亡的作用，免疫荧光染色方法检测easpase-3的表达情况。结果实体瘤模型中，Rg3各组瘤重明显低于对照组（P〈0．01），并且TUNEL染色和easpase-3免疫荧光染色见Rg3各组细胞阳性率均高于对照组（P〈0．05）。结论Rg3抑制B16黑色素瘤生长，并且促进肿瘤细胞easpase-3的活化和表达，诱导肿瘤细胞凋亡。     

维甲酸诱导多种肿瘤细胞凋亡相关基因克隆的研究

目的 应用基于聚合酶链式反应(PCR)技术的改良消减杂交方法克隆肿瘤凋亡相关基因，验证维甲酸调控生物细胞增殖、分化。诱导多种肿瘤细胞凋亡的作用。方法 以全反式维甲酸(a11-trans retinolc acid)诱导前列腺癌DU-145细胞、早幼粒白血病HL-60细胞和乳腺腺癌MCF-7细胞产生凋亡，在此基础上，采用基于PCR技术的改良消减杂交方法克隆肿瘤细胞凋亡相关基因。结果 在维甲酸诱导前列腺癌DU-145细胞、早幼粒白血病HL-60细胞和乳腺腺癌MCF-7细胞产生凋亡过程中，有TNF、泛素、热休克蛋白和C—erb B-2基因参与，并成功克隆出多条可能与凋亡密切相关的未知基因，均被GenBank收录，登录号为AF174394，AF144056，AF141882。结论 这种基于PCR技术的改良消减杂交方法对于差异表达基因的克隆是十分有效的。     

^188Re电脑辐射诱导不同肿瘤细胞凋亡的实验研究

目的 通过研究^188Re诱导前列腺癌PC-3细胞、乳腺癌ER-75-30细胞、肺癌A549细胞凋亡的作用及相关基因bcl-2和bax在其中的表达，为临床个体化治疗及康复干预提供理论依据。方法 人前列腺癌PC-3细胞株、乳腺癌ER-75-30细胞株和非小细胞肺癌A549细胞株经培养后，采用光镜、电镜、流式细胞仪和免疫组化方法研究^188Re诱导3种肿瘤细胞凋亡的形态学变化、时间剂量效应关系、细胞周期依赖性以及凋亡相关基因bcl-2和bax在其中的表达情况。结果 ^188Re能诱导肿瘤细胞产生凋亡的形态学变化，并且随着浓度的增大（0-240GBq/L）和时间的延长（6-48h），凋亡率增加，bcl-2表达减弱，bax表达增强，两者比值下降（PC-3由1.07&;#177;0.56、1.05&;#177;0.48下降至0.23&;#177;0.10、0.26&;#177;0.10），细胞阻滞于G2/M期，PC-3细胞对188Re的敏感性最高，其次为ER-75-30细胞，A549对188Re的敏感性最低。结论 ^188Re电离辐射能诱导肿瘤细胞凋亡，且呈现时间剂量和周期依赖性；Bcl-2和bax均参与188Re诱导凋亡过程；不同肿瘤细胞对同一种核素的敏感性不同；并为临床个体化治疗和康复干预提供理论依据。     

STAT3-siRNA诱导前列腺癌细胞凋亡机制的探讨

目的 探讨RNA干扰技术沉默STAT3基因表达诱导人前列腺癌细胞凋亡的机制。方法 针对人STAT3mRNA序列设计合成编码干扰RNA（siRNA）的DNA模板,构建pSilencer 2.1-U6-STAT3-siRNA重组质粒,转染人前列腺癌细胞株PC3,采用Western blot、Northern blot观察STAT3基因表达抑制后Bcl-2,C-Myc与Cyclin D1表达的变化,并用流式细胞技术及吖啶橙染色方法观察细胞凋亡。结果成功构建pSilencer 2.1-U6-STAT3-siRNA重组质粒,并成功转染PC3细胞;Northern blot及Western blot结果 证实重组质粒在mRNA及蛋白水平均显著抑制STAT3基因表达,抑制率分别为60%及75%,并证实随着STAT3表达的抑制Bcl-2,C-Myc及Cyclin D1的表达明显下调。FCM及吖啶橙染色结果表明上述重组质粒可诱导PC3细胞凋亡。结论 STAT3-siRNA可抑制STAT3在人前列腺癌细胞的表达,诱导肿瘤细胞凋亡。其机制与STAT3抑制Bcl-2,C-Myc及Cyclin D1表达有关。     

维生素K3和三氧化二砷在诱导白血病细胞凋亡中的协同作用

维生素Ｋ类药物作为止血药在临床应用已有多年。近年来的研究表明 ,维生素Ｋ类药物尚具有一定的抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡的作用[1] 。最近 ,我们观察了维生素Ｋ3(ＶＫ3)对ＨＬ 6 0细胞的凋亡诱导作用及其与三氧化二砷 (Ａｓ2 Ｏ3)的协同作用 ,现将结果报道如下。材料和方法1　主要试剂　Ａｓ2 Ｏ3 购于哈尔滨医科大学附属第一医院 ,ＶＫ3 为无锡第七制药厂产品 ,小牛血清购自杭州四季青生物制品公司 ,ＡｎｎｅｘｉｎＶ/ＰＩ试剂盒购自法国Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈ公司。2　细胞培养　ＨＬ 6 0细胞系引自中国科学院上海细胞生物学研…     

TRAIL联合药物诱导肿瘤细胞凋亡协同机制的研究

肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体（tumor necrosis factor-related apoptosis inducingligand,TRAIL）能选择性诱导肿瘤细胞和恶性转化细胞凋亡,对大多数正常细胞却无杀伤作用,被认为是一种非常具有发展潜力的抗肿瘤因子,近年已成为国内外研究的热点。许多学者发现在TRAIL联合各种药物作用于肿瘤细胞的过程中二者有协同效应,但不同药物与TRAIL协同诱导肿瘤细胞凋亡的机制各不相同。     

反应停诱导骨髓瘤细胞株(KM3)凋亡的初步研究

目的：观察反应停对KM3骨髓瘤细胞株的增殖抑制和诱导凋亡作用。方法：不同浓度的反应停作用于KM3细胞，光镜下计数细胞和胎盼蓝拒染法观察细胞增殖的细胞活力，细胞形态、细胞凋亡的荧光染色后的荧光显微镜检查、Annexin V-FITC和PI双染后流氏细胞仪分析判定凋亡和早期的凋亡细胞。结果：反应停在一定的剂量和一定的作用时间下可以抑制KM3细胞增殖，诱导KM3细胞凋亡，这一作用呈剂量和时间依赖性。结论：反应停诱导KM3细胞凋亡，抑制KM3细胞增殖可能是其直接抗骨髓瘤作用之一。     

甲胎蛋白诱导树突状细胞凋亡

目的探讨甲胎蛋白（alpha-fetoprotein，AFP）对树突状细胞（Dendritictic Cells，Dcs）凋亡的影响。方法联合细胞因子体外诱导培养人外周血来源树突状细胞。流式细胞仪分析经AFP外理的树突状细胞凋亡的变化，Western Blot检测树突状细胞caspase-3的表达情况。结果甲胎蛋白具有明显的促进树突状细胞凋落亡的作用，在AFP（20ug／ml）作用下，树突状细胞凋亡率及caspase-3的表达率明显增加，抗甲胎蛋白抗体能明显阻断其作用。结论甲胎蛋白促进树突状细胞的凋亡，Caspase-3参与甲胎蛋白诱导的树突状细胞凋亡。     

反义基因逆转肿瘤细胞多药耐药诱导细胞凋亡的研究

目的：探讨克服肿瘤细胞多药耐药（ＭＤＲ）的方法，提高化疗效果。方法：采用多药耐药反义基因（ｍｄｒ－１－ＡＳＰＳ－ＯＤＮ）逆转Ｋ５６２／ＡＤＭ肿瘤细胞的ＭＤＲ，而诱导肿瘤细胞凋亡。结果：ｍｄｒ－１－ＡＳＰＳ－ＯＤＮ诱导Ｋ５６２／ＡＤＭ细胞产生大量ＤＮＡ断片，流式细胞仪检测发现几乎全部ｍｄｒ－１＋Ｋ５６２／ＡＤＭ细胞发生凋亡。结论：ｍｄｒ－１－ＡＳＰＳ－ＯＤＮ能有效、特异地抑制ｍｄｒ－１基因表达，逆转肿瘤细胞的ＭＤＲ，促进阿霉素诱导Ｋ５６２／ＡＤＭ细胞凋亡，为其临床应用提供理论依据。     

榄香烯诱导人卵巢癌细胞COC1细胞凋亡的研究

目的：探讨榄香烯对人卵巢癌COC1细胞凋亡的诱导作用。方法：采用Hoechst33258和PI荧光染色法、DNA电泳及流式细胞术分析法，检测榄香烯对COC1细胞的作用。结果：经榄香烯处理的COC1细胞出现核固缩，胞浆凋亡小体形成，琼脂糖凝胶电泳呈现出细胞凋亡特征性的DNA状带。凋亡细胞发生率与药物浓度和作用时间呈正相关。结论：榄香烯对肿瘤细胞的杀伤作用主要是通过诱导细胞凋亡。     

柯萨奇病毒B3诱导HeLa细胞凋亡

目的：观测柯萨奇病毒B3（CVB3）诱导HeLa细胞凋亡的动态过程。方法：用CVB3感染HeLa细胞后,在不同时间点收集细胞,通过相差显微镜、电子显微镜、流式细胞仪和DNA缺口末端标记法（TUNEL）检测HeLa细胞的病变。结果：CVB3感染HeLa细胞4h后,细胞发生凋亡（11.79%±0.962%比4.07%±0.665%,P〈0.05）并呈时间依赖性增高,36~48h达高峰。但在病毒感染CVB3后1h时,CVB3则抑制细胞凋亡的发生（2.21%±0.448%比3.73%±0.637%,P〈0.05）。结论：CVB3可诱导HeLa细胞发生凋亡,但感染早期病毒则抑制细胞凋亡。     

PCI-24781诱导SKOV-3细胞凋亡及相关机制的研究

目的观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂PCI-24781（abexinostat）对上皮性卵巢癌SKOV-3细胞凋亡及细胞周期的影响，并研究其作用机制。 方法以不同浓度PCI-24781（0 μmol/L、0.25 μmol/L、0.5 μmol/L、0.75 μmol/L、1.0 μmol/L）处理SKOV-3细胞48 h后，用BD FACSCalibur流式细胞仪检测细胞凋亡情况，分析细胞周期分布的变化情况，使用活性氧荧光探针（DCFH-DA）检测细胞内ROS变化情况。Western blot法检测β-catenin、Wnt-5a、Caspase-8、ROR2、Cyclin D1、CDK4的表达水平。 结果经PCI-24781处理后，SKOV-3细胞凋亡率增加（P＜0.001），细胞内ROS水平呈上升趋势（P＜0.001），氧化应激增加，作用具有剂量-效应关系；β-catenin、Wnt-5a的表达水平下降，Caspase-8的表达水平上升，ROR2的表达不明显。SKOV-3细胞周期出现G1/G0期的阻滞、S期和G2/M期细胞减少（P＜0.05），细胞周期相关蛋白Cyclin D1、CDK4表达水平下降。 结论PCI-24781通过诱导Caspase-8激活和ROS的生成介导细胞凋亡，将SKOV-3细胞阻滞于G1/G0期从而抑制肿瘤细胞的增殖，对Wnt/β-catenin信号通路和非经典Wnt信号通路产生双重抑制作用。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对胶质瘤细胞的诱导凋亡作用

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（tumor necrosisfactor related apoptosis-inducingligand,TRAIL）可以诱导多种肿瘤细胞发生凋亡,并且对正常细胞没有明显的毒性作用,因此在美国已进入临床Ⅱ期药物开发阶段。     

STAT3反义寡核苷酸对HepG2肝癌细胞增殖抑制和凋亡诱导作用

目的 探讨STAT3反义寡核苷酸对HepG2细胞增殖的抑制作用和细胞凋亡的诱导作用。方法： HepG2细胞体外培养，人工合成并硫代修饰STAT3 ASODN，通过脂质体转染进入HepG2细胞，倒置显微镜下观察细胞形态学变化、 MTT法检测细胞增殖抑制程度，原位末端标记（Tunel）法检测细胞凋亡指数（AI）， RT-PCR检测细胞中STAT3 mRNA 的表达水平，流式细胞仪检测细胞周期的变化和细胞凋亡率。结果： STAT3 ASODN各浓度组对HepG2细胞的增殖有明显的抑制作用，能明显诱导细胞凋亡。结论： STAT3 ASODN能够诱导HepG2细胞凋亡。     

酪丝缬肽诱导高转移性肝癌细胞HCCLM3凋亡及机制研究

目的：观察酪丝缬肽（tyroservatide,YSV）诱导高转移性人肝癌细胞HCCLM3的凋亡,分析YSV对肿瘤细胞凋亡相关基因Bax与Bcl-2的影响。方法：建立人肝癌细胞HCCLM3的体外培养体系,用四甲基偶氮唑蓝比色法检测YSV对体外培养的HCCLM3的增殖抑制作用,流式细胞仪检测对照组与YSV剂量组的凋亡率,实时定量PCR法检测YSV对肝癌细胞中Bax与Bcl-2 mRNA表达,Western blotting检测YSV对Bax与Bcl-2蛋白表达的影响。结果：YSV可显著地抑制肝癌细胞HCCLM3的生长,当药物剂量10mg·L-1,作用72h时,抑制率为41.34%（P〈0.05）。YSV不同浓度组随着药物作用时间的延长肝癌细胞凋亡率呈升高趋势。实时定量PCR结果显示YSV能上调促凋亡基因Bax mRNA的表达,同时下调凋亡抑制基因Bcl-2 mRNA的表达。Western blotting在蛋白水平上进一步证实了实时定量PCR的结果。结论：YSV可在基因及蛋白水平上调促凋亡基因Bax的表达,同时下调凋亡抑制基因Bcl-2的表达,进而实现其诱导肝癌细胞HCCLM3的凋亡。     

胃癌细胞凋亡研究的现状

探索肿瘤细胞凋亡的诱导因素，激发肿瘤细胞凋亡并保护正常组织是治疗肿瘤的基本思路之一。胃癌是消化道常见肿瘤，其主要生长特征是癌细胞分裂生长过快，凋亡逃逸造成恶性循环。胃癌的发生与癌细胞凋亡的调节紊乱有密切关系。大量实验研究表明，胃癌细胞可通过人为地触发细胞凋亡而被清除，这些方法包括放射线、化疗药物、细胞因子、免疫细胞、单克隆抗体、中药、基因治疗、光动力治疗、高温等等。     

受控凋亡素基因逆转录病毒载体诱导人肝癌细胞凋亡

目的:构建受控重组凋亡素基因逆转录病毒载体,观察受四环素调控的凋亡素基因的表达对人肝癌细胞的影响。方法:构建重组逆转录病毒表达载体pRevTRE—VP3。调节载体pRevTet-Off和表达载体pRevTRE—VP3分别转染PT67包装细胞后,取其病毒上清液依次感染人肝癌细胞系HepG2,以四环素调控凋亡素基因在HepG2/Off-VP3细胞中的表达,以流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果:重组逆转录病毒载体pRevTRE—VP3构建成功;经PCR和RT—PCR证实凋亡素基因在HepG2细胞中得到了表达;HepG2/Off-VP3—8细胞在无四环素培养环境中凋亡率明显高于在1μg/ml四环素环境中的细胞凋亡率(P＜0．05)。结论:凋亡素基因经RevTet系统导入人肝癌细胞HepG2后,可在四环素调控下表达凋亡素并诱导HepG2细胞凋亡。     

重组Apoptin的叶酸修饰及诱导肿瘤细胞凋亡活性研究

为了使重组GST-Apoptin融合蛋白能够与肿瘤细胞靶向性结合，并发挥其特异性诱导肿瘤细胞凋亡的作用，本文采用化学方法将叶酸连接到GST-Apoptin融合蛋白，实验结果表明叶酸与GST-Apoptin融合蛋白的偶联率为6%，最佳偶联条件是20 mg/mL活化叶酸在pH 10.0条件下室温反应60 min。叶酸化的GST-Apoptin融合蛋白（folate-GST-Apoptin）具有显著诱导肿瘤细胞凋亡作用，1.0μg/mL的folate-GST-Apoptin可使50%的肿瘤细胞（KG-1）凋亡，而对正常人外周血淋巴细胞没有诱导凋亡作用。