三氧化二砷联合丁硫氨酸亚砜胺对K562/ADM细胞的作用及其机制研究

目的 研究三氧化二砷（As2O3）联合γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶抑制剂丁硫氨酸亚砜胺（BSO）对肿瘤多药耐药细胞株K562／ADM细胞的诱导凋亡效应，及对P糖蛋白（P—gp）和mdr1mRNA表达的抑制作用，探讨谷胱甘肽（GSH）的含量变化与As2O3作用效果的关系。方法As2O3（0．5、2．0、5．0μmol／L）单独及联合100μmol／LBSO作用于K562／ADM细胞，应用MTT比色法检测K562／ADM细胞的增殖活性；膜联蛋白V／碘化丙锭（AnnexinV／PI）标记法观察K562／ADM细胞的凋亡效应；分光光度法检测K562／ADM细胞内GSH含量变化；流式细胞术（FCM）检测P—gp水平变化；RT—PCR方法检测mdr1mRNA的表达变化。结果 K562／ADM细胞内的GSH含量为（81．13±3．91）mg／g蛋白，在BSO降低GSH含量后，临床剂量（0．5、2．0μmol／L）As2O3联合BSO（100μmol／L）24h内即可抑制K562／ADM细胞的增殖活性，诱导K562／ADM细胞发生凋亡，处理48h凋亡率分别为（59．29±6．01）％，（65．06±8．29）％；72h凋亡率分别为（82．15±9．28）％，（92．72±9．41）％；其诱导凋亡效果均明显强于单用As2O3，临床剂量和高剂量（5．0μmol／L）组。K562／ADM细胞P—gp表达阳性率为98．1％，mdr1mRNA的相对表达水平为1．85±0．13，临床剂量As2O3联合BSO处理48h，其抑制mdr1mRNA表达的作用效果以及处理72h对P—gP的抑制作用均明显强于单用高剂量As2O3组。结论 GSH的含量变化与As2O3的作用效果密切相关，As2O3联合BSO可有效诱导K562／ADM细胞发生凋亡，有效抑制P—gP及mdr1mRNA的表达。     

WAVE1基因在K562/A02白血病细胞多药耐药中的作用

目的 探讨WASP家族Verprolin同源蛋白1（WAVE1）基因在K562／A02白血病细胞多药耐药机制中的作用。方法 将pEFBOS—WAVE1真核表达质粒转染K562细胞构建WAVE1高表达的K562细胞，将WAVE1基因的特异性小片段干扰RNA（WAVE1siRNA）转染K562／A02细胞构建WAVE1低表达的K562／A02细胞。Western blot和RT-PCR法检测基因转染前后K562／A02细胞及K562细胞WAVE1基因及蛋白的表达；可溶性噻唑盐WST-8染色法检测阿霉素对转染前后细胞的半数抑制浓度（IC50）；Hoechest33258染色法检测细胞形态学改变并计算凋亡细胞百分率；RT—PCR检测多药耐药基因mdrl mRNA表达；Western blot检测Bcl-2表达。结果 ①与K562细胞相比，K562／A02细胞WAVE1 mRNA表达水平增加70％，蛋白表达水平增加63％。②转染WAVE1基因的K562细胞WAVE1过表达，并降低了对阿霉素的药物敏感性，使IC50从转染前的（0．05±0．00）μg／ml，增加到（2．99±0．12）μg／ml，在阿霉素浓度为1.5μg／ml时，凋亡细胞分别下降30％、35％。③转染WAVE1 siRNA的K562／A02细胞WAVE1蛋白表达水平与未转染组相比明显降低，并可增强对阿霉素的药物敏感性，使IC50从转染前的（4．29±0．15）μg／ml下降到（1．85±0．07）μg／ml，阿霉素浓度为1.5μg／ml时，凋亡细胞分别增加24％、21％。④转染WAVE1的K562细胞mdr1基因和Bcl-2蛋白表达水平均增高，而转染WAVE1 siRNA的K562／A02细胞mdr1基因和Bcl-2蛋白表达水平比转染前明显降低。结论 WAVE1参与了K562／A02细胞多药耐药的形成，其机制可能与调控mdr1和Bcl-2水平有关。     

姜黄素、红霉素逆转K562/A02细胞多药耐药机制的研究

目的研究姜黄素（curcumin，Cur）及红霉素（erythromycin，EM）对多药耐药（MDR）细胞株K562／A02的影响及作用机制。方法MTF法测定Cur、EM作用后K562／A02细胞对阿霉素（ADM）敏感性的变化。流式细胞仪测定细胞内柔红霉素的平均荧光强度（DNR MFI）。免疫组化法检测细胞膜上P—gP的表达。RT—PCR法检测细胞mdr1 mRNA水平：结果Cur、EM均可减低ADM对K562／A02细胞的IC50值，两药合用时逆转倍数可达11．3倍。K562／A02细胞内DNR MFI明显低于K562细胞（P〈0．01），Cur、EM均可明显增加K562／A02细胞内DNR MFI（P〈0．05），以两药合用时作用最为明显，Cur2．5μg／ml处理组细胞内DNR MFI略高于EM120μg／ml处理组，但差异无统计学意义（P〉0．05）。免疫组化检测结果显示K562／A02细胞P—gP表达明显高于K562细胞（P〈0．01），各组药物分别处理后，K562／A02细胞膜P—gP表达减低（P〈0．01），但仍高于K562细胞（P〈0．01）；各药物组处理5d细胞膜P—gP表达均低于3d组（P〈0．01），Cur与EM合用时细胞膜P—gP表达降低最为明湿，低于其它处理组（P〈0．01）。RT—PCR结果显示K562／A02细胞mdr1 mRNA水平明显高于K562细胞（P〈0．01），各组药物处理后，K562／A02细胞mdr1 mRNA水平均减低（P〈0．01），5d组低于3d组，但仍高于K562细胞（P〈0．01）；Cur与EM合用时K562／A02细胞mdr1 mRNA水平降低最为显著，Cur 2．5μg／ml处理5dK562／A02细胞mdr1 mRNA水平低于EM120μg／ml处理5d组（P〈0．01）。结论Cur、EM均可部分逆转K562／A02细胞的MDR，降低其P—gP的表达和功能，逆转作用有时间依赖性；两药联合应用时逆转作用明湿增强，Cur2．5μg／ml逆转作用略强于EM120μg／ml。     

环孢菌素D衍生物PSC 833逆转K562/A02细胞多药耐药的研究

目的 证实PSC833逆转剂的高效性，探讨PSC833逆转肿瘤细胞多药耐药的机制。方法 以人红白血病细胞系K562及其耐药细胞系K562／A02（耐阿霉素）为实验研究对象，采用MTT法检测细胞毒性；直接免疫荧光测定法检测P糖蛋白（P-gp）表达水平；RT－PCR法检测mdr1 mRNA水平，以流式细胞术测定两种细胞系内柔红霉素（DNR）的潴留来的反映P-gp的外排功能。结果 与K562细胞系相比，K562／A02耐药细胞系mdr1 mRNA及P－gp高表达，DNR潴留减少。1μmol/L的PSC833对K562／A02铁mdr1 mRNA及P－gp表达水平无明显影响（P＞0.05），PSC833对K562／A02细胞的DNR细胞毒性有剂量依赖性增敏作用，其增敏作用至少是环孢菌素A（CsA）、维拉帕米（Ver）的3倍。PSC833能增加K562／A02耐药细胞系的DNR潴留。1μmol/L的PSC833能使K562／A02细胞内DNR潴留量恢复至K562细胞的100.9%，而10μmol/L CsA只恢复至K562细胞的86.9%，PSC833对K562细胞系的DNR细胞毒性及DNR潴留均无明显影响（P＞0.05）。结论 PSC833较CsA、Ver逆转活性至少高3－10倍，其逆转K562／A02多药耐药的机制可能是通过抑制P－gp功能，而非直接下调mdr1 mRNA及P-gp水平。     

5溴汉防己甲素逆转多药耐药的体内体外研究

本研究旨在探讨5一溴汉防己甲素（BrTet）和汉防己甲素（Tet）对K562／A02细胞多药耐药性的逆转作用。采用MTT法检测阿霉素（ADM）联合应用BrTet、TeL,对K562／A02细胞和K562细胞增殖的影响;采用流式细胞术（FCM）检测细胞内ADM浓度和P糖蛋白（P—gp）的表达;采用RT—PCR测定细胞mdrl基因mRNA表达水平。建立裸鼠皮下移植瘤模型,比较BrTet、Tet在体内的逆转耐药作用。结果发现,BrTet在0．25、0．5以及1μmol／L浓度条件下对K562／A02细胞多药耐药性的逆转作用呈剂量依赖性。流式细胞术检测提示,BrTet显著增加K562／A02细胞内ADM浓度,并呈剂量依赖性,同时抑制P—gp的表达,下调mdrl mRNA的表达。在荷瘤鼠模型中,BrTet明显增加ADM对K562／A02移植瘤的抗肿瘤作用,从单用ADM的5．8％上升至26．1％,而在K562移植瘤中没有显著差异。结论：BrTet在体内体外试验中均显示出显著的逆转MDR作用,其活性可能与抑制P—gp的过度表达和增加抗肿瘤药物的积聚有关。     

异硫氰酸苯乙酯对K562／A02细胞阿霉素耐药影响的研究

本实验研究探讨异硫氰酸苯乙酯（phenylhexyl isothiocyanate,PHI）对K562／A02细胞的阿霉素（ADM）耐药性与敏感性的影响,并研究其可能的相关机制。运用MTT法分别检测阿霉素（ADM）以及PHI＋ADM对K562／A02细胞的生长抑制率,计算其耐药倍数;用流式细胞仪检测PHI作用前后细胞的凋亡、细胞内ADM浓度的变化和MRPI蛋白变化;分光光度仪测定细胞内还原性谷胱目肽（GSH）的含量;RT—PCR半定量检测PHI作用前后MRP1 mRNA的水平。结果显示,随着PHI浓度的增加,细胞生存率降低;两药联合应用时K562／A02细胞凋亡率均增加;当PHI≥20μmol／L时其耐药倍数有显著差异（P〈0．05）,两种细胞内ADM浓度增加亦有显著差异（P〈0．05）。单独运用1μg/ml ADM时K562／A02细胞内的GsH含量下降5％,单独运用PHI时K562／A02细胞内的GSH含量随着PHI浓度的增加先是轻度升高尔后下降,GSH含量下降点约在10μmoL／L;当PHI≥20μmol/L与1μg／ml ADM联合应用时,K562／A02细胞内的GSH含量随着PHI浓度的升高而进行性下降;而不同浓度的PHI的作用前后,两种细胞的MRP1的表达无论是蛋白水平还是基因水平都无显著差异（P〉0．05）。结论：PHI对K562／A02细胞的细胞毒作用与细胞内GSH耗竭无直接关系,PHI不但可以增强K562／A02细胞对ADM的敏感性,而且通过耗竭细胞内GSH部分地逆转K562／A02细胞对ADM的耐药。联合使用PHI可减少ADM的用量,从而降低其毒副作用。     

汉防己甲素联合柔红霉素对K562／A02细胞株P21蛋白和P糖蛋白表达的影响

本研究旨在探讨汉防己甲素（TET）对人慢性髓系白血病（CML）急性红白血病细胞株K562／A02多药耐药的逆转作用,及其逆转耐药与细胞周期依赖性激酶抑制因子（p21）、P糖蛋白（P—gp）及其基因的关系,为TET的临床应用提供新的理论基础。K562／A02细胞实验分组为：①单用柔红霉素（DNR）对照组;②DNR＋TET0．5mg／L组;⑧DNR＋TET1．0mg/L组;④DNR＋TET2．0m8／／L组。采用Western blot法检测实验各组K562／A02细胞P21的表达。采用流式细胞仪（FCM）检测实验各组细胞P—gp的表达,采用半定量PCR（RT—PCR）测定细胞MDR1基因mRNA表达水平。结果表明：K562／A02细胞中P21蛋白的表达随着TET浓度的增加而增强,P—gp蛋白的表达随着TET浓度的增加而减低。K562细胞中mdr1基因几乎无表达,K562／A02细胞中mdrl基因高表达,随着TET浓度的增加K562／A02细胞mdrl基因表达不断降低。结论：TET对K562／A02耐药具有逆转作用且呈浓度依赖性,其逆转耐药可能与其上调P21蛋白的表达、下调mdrl及P—gp的表达有关,     

葡萄糖神经酰胺合成酶抑制剂PDMP对K562/A02细胞柔红霉素耐药逆转的研究

本研究旨在探讨葡萄糖神经酰胺合成酶(glucosylceramide synthase,GCS)抑制剂D,L-threo-1-phenyl-2-decanoylamino-3-morpholino-1-propanol(PDMP)hydrochloride对K562/A02细胞株柔红霉素(daunorubicin,DNR)耐药的逆转作用及其逆转机制。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同浓度PDMP对K562细胞和K562/A02细胞的增殖抑制效应及其对K562/A02细胞DNR耐药逆转作用;用流式细胞术检测PDMP对K562/A02细胞内DNR浓度及细胞凋亡率的影响;半定量RT-PCR和Western blot方法检测K562及K562/A02细胞mdr1、GCS基因的表达以及PDMP对K562/A02细胞两种基因表达的影响。结果表明:DNR对K562和K562/A02细胞的IC50分别为0.23±0.02和7.15±0.24μg/ml,当PDMP≤20μmol/L时,对K562及K562/A02细胞株无明显生长抑制作用;20μmol/L和10μmol/L PDMP均能增加K562/A02细胞对DNR的敏感性,其耐药逆转倍数分别为2.59和1.69;两种浓度PDMP作用于耐药株48小时后能增加细胞内DNR浓度(p0.05)和细胞凋亡率(p0.01)。20μmol/L PDMP处理K562/A02细胞48小时后可在mRNA和蛋白水平下调GCS和mdr1基因的表达(p0.01)。结论:PDMP可以增强K562/A02细胞对DNR的敏感性,其机制可能与增加细胞内药物浓度及细胞凋亡率、下调GCS和mdr1基因表达有关。     

环孢菌素A、雷洛昔芬及其联合应用逆转K562/A02细胞多药耐药的研究

本研究探讨环孢菌素A（CsA）、雌激素受体抑制荆雷洛昔芬及其联合应用对K562／A02细胞多药耐药的逆转作用。采用甲基四唑蓝法（MTT）测定柔红霉素（DNR）的半数抑制量，RT-PCR法检测mdr1基因mRNA表达水平，FCM检测P-gp的表达和细胞内DNR浓度。结果表明：DNR对K562／A02和K562细胞的IC50分别为23．51和0．29mg／L，雷洛昔芬（2．5mg／L）及CsA（1mg／L）单用和两药联合处理K562／A02细胞时，DNR的IC50值分别为5．98、8．15和3．68mg／L，两药对DNR作用K562细胞的IC50没有影响。CsA及雷洛昔芬单独作用后耐药株mdr1mRNA下调微弱，联合用药下调效果明显。CsA及雷洛昔芬均可降低P-gP蛋白的表达，且具有协同作用。同时还观察到逆转剂雷洛昔芬和CsA作用后细胞内柔红霉素浓度增加，两药联合作用时效果增强。结论：CsA及雷洛昔芬均可逆转耐药。且联合作用效果增强。     

不同妊娠期妇女血微量元素水平变化分析

目的探讨不同妊娠期妇女血液微量元素变化情况。方法用原子吸收光谱分析法分别测定294例孕妇和47例健康妇女（对照组）Se、Mn、Fe、Cu、Zn水平。结果Se,与对照组（79．524±10．55μg／L）比较,早孕组（72．16±9．48μg／L）、中孕组（72．40±11.58μg／L）,P〉0．05,晚孕组（56．76±13．85μg／L）,P〈0．01;Mn,与对照组（15．00±3．25μg／L）比较,早孕组（14．10±3．73μg／L）、中孕组（15．57±3．49μg／L）,P〉0．05,晚孕组（24．24±5．43μg／L）,P〈0．01;Fe,与对照组（18．64±3．76μmol／L）比较,早孕组（22．20±4．68μmol／L）、晚孕组（12．68±4．31μmol／L）,P〈0．01,中孕组（17．76±6．13μmol／L）,P〉0．05;Cu,与对照组（16．28±2．69μmol／L）比较,早孕组（23．28±5．62μmol／L）、中孕组（25．48±3．45μmol／L）、晚孕组（28．82±4．36μmol／L）,P〈0．01;Zn,与对照组（12．83±1．16μmol／L）比较,早孕组（10．85±2．17μmol／L）、中孕组（9．71±1.70μmol／L）、晚孕组（7．81±1．36μmol／L）;P〈0．01。结论健康孕妇微量元素水平反映了微量元素之间协同、拮抗作用。随着妊娠期的推移,Fe的下降导致Mn的水平上升,Se的水平下降;而Cu的水平不断上升导致Zn水平不断下降,妊娠晚期各元素水平上升或下降尤为显著。     

小檗胺逆转K562/A02细胞耐药性及其机制

为了探讨钙调素拮抗剂小檗胺 (berbamine,BBM )逆转多药耐药的可能性及其机制 ,采用人红白血病细胞K5 6 2及其阿霉素 (ADR)诱导的耐药细胞K5 6 2 /A0 2与不同浓度ADR和BBM共培养后 ,经MTT比色法计算半数抑制浓度 (IC50 )、耐药倍数和增敏倍数 ;用流式细胞术检测细胞内ADR相对含量和P gp表达水平 ;用半定量RT PCR检测mdr1mRNA和抗凋亡基因survivinmRNA表达。结果显示 ,ADR对K5 6 2和K5 6 2 /A0 2的IC50 分别为1 16± 0 .0 9μmol/L和 37.4 7± 1.76 μmol/L ,K5 6 2 /A0 2对ADR的耐药倍数是K5 6 2的 32 .30倍。 5 μmol/L ,10μmol/L和 2 0 μmol/LBBM增加K5 6 2 /A0 2细胞对ADR的敏感性 ,并呈剂量依赖性 ,增敏倍数分别达 2 .0 1,9.6 8和4 1.18倍 (P值均 <0 .0 1)。5 μmol/L或 10 μmol/LBBM作用 2小时 ,使K5 6 2 /A0 2细胞内ADR相对含量增加到1 4 1和 1 5 2倍 (P <0 .0 1) ;作用 72小时使K5 6 2 /A0 2细胞P gp表达分别下降 4 .12 % ( P <0 .0 5 )和 2 7.0 9% (P<0 .0 1) ,且下调mdr1mRNA和survivinmRNA表达。结论 :BBM提高耐药细胞K5 6 2 /A0 2胞内的ADR浓度 ,下调mdr1mRNA、P gp及survivinmRNA的表达 ,使其对ADR的敏感性显著增高 ,从而逆转耐药性。     

mdr1和GSTπ基因缄默逆转K562/A02细胞多药耐药性的研究

目的研究短发夹状小分子干扰RNA(short hairpin RNA,shRNA)对白血病多药耐药细胞株K562/A02mdr1和谷胱甘肽S-转移酶(GST)π基因的表达和功能的影响。方法根据mdr1mRNA第79~99位和GSTπmRNA第308~327位核苷酸为作用靶点,合成针对靶区域序列的shRNA,克隆入pSilencer2.1-U6neo,克隆产物为pSilence-mdr1和pSilence-GSTπ,转染K562/A02细胞株。用实时荧光定量PCR检测K562/A02细胞mdr1和GSTπmRNA的表达;MTT法检测阿霉素对K562/A02细胞半数抑制浓度(IC50)。结果经pSilence-mdr1转染后的K562/A02细胞mdr1mRNA表达量下降了71.5%,从(2.80±1.65)×108拷贝/μg RNA下降至(3.90±2.37)×107拷贝/μg RNA(P<0.01);同时pSilence-GSTπ作用后,K562/A02细胞GSTπmRNA表达量较对照组下降了39.8%,从(2.30±1.14)×105拷贝/μg RNA下降至(5.40±2.45)×104拷贝/μg RNA(P<0.01);空载体转染后阿霉素的耐药指数为23,pSilence-mdr1转染后为8,pSilence-GSTπ转染后为10,差异有统计学意义(P<0.01)。结论shRNA可有效逆转K562/A02细胞mdr1和GSTπ的多药耐药性。     

发夹状siRNA逆转白血病K562/A02细胞株mdr1和GSTπ功能的研究

目的研究发夹状小分子干扰RNA(small RNA interference,siRNA)对白血病多药耐药细胞株K562/A02多药耐药基因(mdr1)和谷胱甘肽S-转移酶(GSTπ)基因功能的影响。方法以 mdr1 mRNA第79-99和GSTπ mRNA第308-327核苷酸为作用靶点,合成针对靶区域序列的发夹状 siRNA,克隆入pSilencer2．1-U6 neo,克隆产物为pSilence mdr1和pSilence GSTπ,转染K562/A02细胞株。用Western blot和荧光免疫组化法观察P糖蛋白(P-gp)和GSTπ蛋白的表达;MTT法检测阿霉素对K562/A02细胞半数抑制浓度(IC50)。结果 Western blot检测显示转染pSilence mdr1和pSilence GSTπ的K562/A02细胞株与K562/A02细胞对照组相比,P-gp和GSTπ的表达明显下降,分别从0．75 ±0．02和0．54±0．02下降到0．48±0．05和0．39±0．02(P值均<0．01),α-微管蛋白的表达没有变化;转染pSilence核纤层蛋白A/C的K562/A02细胞株与对照组相比,核纤层蛋白A/C表达明显下降,但P-gp和GSTπ的表达不变;荧光免疫组化显示P-gp和GSTπ阳性细胞比例从转染前的(71．25± 9．65)％和(81．25±6．49)％下降到转染后的(35．25±5:97)％和(41．25±4．43)％(P值均<0．01); 转染空载体后K562/A02细胞对阿霉素的耐药指数为23,转染pSilence mdr1和pSilence GSTπ后分别下降为8和10,差异有统计学意义(P<0．01),结论 siRNA可有效、特异地逆转K562/A02细胞株 mdr1和GSTπ的多药耐药性。     

反义寡核苷酸靶向hTERT对K562细胞株端粒酶活性和细胞凋亡的影响

本研究探讨靶向封闭端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA的反义硫代寡核苷酸(antisense phosphorothioate oligodeoxynucleotide,ASPSODN)对K562细胞目的基因抑制作用及对端粒酶活性和细胞凋亡的影响.选用3种浓度ASPSODN,分别为0.2 μmol/L、0.6 μmol/L、1.0 μmol/L,同时设空白组、脂质体组和三种相同浓度正义硫代寡核苷酸(SPSODN)作为对照,转染到人红白血病细胞株K562,于24、48小时收集细胞进行检测.用RT-PCR检测靶基因hTERT mRNA的表达,TRAP-ELISA检测细胞端粒酶活性,流式细胞仪检测细胞凋亡.结果表明①K562细胞被转染24小时后,hTERT mRNA的表达在脂质体组为0.80±0.24,在0.2 μmol/L ASPSODN组为0.69±0.12,在SPSODN组为0.72±0.25,它们与空白对照组(0.85±0.28)无统计学差异(p＞0.05),而0.6μmol/L ASPSODN组的hTERT mRNA的表达(0.42±0.16)比脂质体组明显下调(p＜0.05),而相同浓度的sPSODN组则下调不明显(0.69±0.26),1.0 μmol/L ASPSODN和SPSODN对hTERT表达都表现出一定的抑制.采用台盼蓝拒染法染色显示,经脂质体转染的1.0 μmol/L ODN无论正义或反义时,细胞死亡明显增多.②24小时端粒酶相对活性空白对照组为88.9%,脂质体作用组为77.7%,两者无显著性差异;0.2、0.6、1.0 μmol/LASPSODN作用后端粒酶相对活性分别为60.6%、52%、58%,与空白对照组相比均有显著性差异(p＜0.05),其中0.6 μmol/L ASPSODN组间与脂质体组有显著性差异(p=0.037);而0.2、0.6、1.0 μmol/L作用后SPSODN组端粒酶相对活性分别为76.1%、72.2%、65.7%,0.2和0.6 μmol/L SPSODN组与空白组、脂质体组间均无统计学差异.48小时ASPSODN各作用组则端粒酶活性有所恢复,0.2、0.6、1.0 μmol/L ASPSODN作用后端粒酶相对活性分另1为84.1%、82.3%、79.6%;而48小时0.2、0.6、1.0 μmol/L各SPSODN组端粒酶相对活性分别为74.8%、74.5%、67.9%,0.2和0.6 μmol/L SPSODN组间端粒酶活性无明显抑制.③培养48小时后0.6 μmol/LASPSODN组和SPSODN组细胞凋亡率分别为4.34%和1.83%,脂质体作用组为1.84%,空白对照组为1.07%,ASPSODN和SPSODN组两者问有统计学差异(p＜0.05),ASPSODN组与脂质体作用组及空白对照组间有显著性差异(p＜0.01).结论ASPSODN靶向hTERT能特异性抑制K562细胞hTERT mRNA的表达,明显下调K562细胞株端粒酶活性,最佳作用浓度为0.6 μmol/L,但抑制时间较短,24小时明显抑制,48小时则有所恢复.高浓度(1.0 μmol/L)寡核苷酸表现出一定的细胞毒性;48小时0.6μmol/L ASPSODN能明显诱导细胞凋亡,而SPSODN组则无此作用,两者间有显著性差异(p＜0.05).     

RbAp46基因激活IGFBP-rP1基因在K562细胞中的表达

目的探讨视网膜母细胞瘤相关蛋白46(RbAp46)基因对白血病细胞的作用机制.方法将全长RbAp46基因的cDNA转染人白血病细胞系K562细胞及人脑膜胶质瘤细胞系SHG44细胞,建立稳定过度表达RbAp46基因的细胞株,观察细胞的生物学行为的同时,通过RT-PCR方法寻找表达差异的相关基因.结果过度表达RbAp46基因的K562细胞及SHG44细胞生长受抑.表现在K562/RbAp46细胞与K562/CMV细胞于生长第4天分别为(90.00±8.40)×104和(119.58±9.87)×104,SHG44/RbAp46细胞与SHG44/CMV细胞于生长第5天分别为(89.13±4.88)×104和(149.42±10.83)×104.生长第7天时,K562/RbAp46细胞和K562/CMV细胞集落数分别为131.67±15.57和250.33±26.31(P＜0.01),SHG44/RbAp46细胞和SHG44/CMV细胞集落数分别为50.78±6.77和206.67±37.18(P＜0.01).K562/RbAp46细胞与K562/CMV细胞S期细胞分别占(48.88±4.35)%和(62.78±4.78)%(P＜0.01),G0/G1期细胞分别占(29.10±4.14)%和(22.40±2.43)%(P＜0.05),而SHG44/RbAp46细胞与SHG44/CMV细胞G0/G1期细胞分别占65.6%和48.8%,S期细胞分别占22.6%和38.4%.过度表达RbAp46基因的K562细胞出现胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白1(IGFBP-rP1)基因的诱导性表达.结论在K562细胞中可能存在RbAp46和IGFBP-rP1基因之间的调控通路.     

As2S2与STI 571协同诱导K562细胞凋亡

目的　探索As2 S2 和STI 5 71联合使用对K5 6 2细胞的诱导凋亡作用及其机制。方法　用细胞计数法研究As2 S2 对K5 6 2细胞的生长抑制作用 ;细胞凋亡的检测用流式细胞术、基因组DNA电泳、细胞形态学观察等方法 ;蛋白表达的检测采用Western blot法 ;基因表达的变化用半定量RT PCR法。结果　As2 S2 1～ 5 μmol/L作用 2 4～ 72h ,即可明显抑制K5 6 2细胞增殖 ,3～ 5 μmol/L作用 4 8～ 72h即可诱导K5 6 2细胞凋亡。 3μmol/LAs2 S2 作用 72h ,细胞凋亡率达 34.4 % ;5 μmol/LAs2 S2 作用 4 8,72h ,细胞凋亡率分别达 2 1.8%和 4 6 .0 %。 1μmol/LSTI 5 71作用 4 8h ,细胞凋亡率为 (18.4± 1.4 ) % ;5 μmol/LAs2 S2 作用 4 8h ,细胞凋亡率为 (15 .8± 1.2 ) % ;而两者合用细胞凋亡率上升为 (40 .6± 2 .0 ) %。对于U937细胞 ,单用 1μmol/LSTI5 71作用 4 8h ,细胞凋亡率为 (4.5± 1.1) % ;单用 5 μmol/LAs2 S2 作用 4 8h ,细胞凋亡率为 (6 .0± 1.2 ) % ;而两者合用 ,细胞凋亡率为 (7.3± 1.0 ) % ,无明显协同作用。As2 S2 能降低K5 6 2细胞中Bcr Abl蛋白水平 ,并抑制c Abl和Bcr AblPTK活性 ,但As2 S2 并不调变bcr abl基因表达水平。结论　As2 S2 联合STI 5 71可增强诱导K5 6 2细胞凋亡的作用 ,其机制可能     

亚硒酸钠对K562/ADR细胞系VEGF表达的影响

为了探讨亚硒酸钠对K562/ADR细胞VEGF表达的影响,分别以5、10μmol/L的亚硒酸钠对培养的K562及K562/ADR细胞进行处理,应用ELISA法检测亚硒酸钠处理前和处理后不同时间的K562及K562/ADR细胞上清液中VEGF含量,用MTT法检测逆转耐药倍数。结果表明：亚硒酸钠可以增加K562/ADR细胞对阿霉素的敏感性,其逆转耐药的倍数为3.48倍;两种细胞系分泌的VEGF含量随培养时间的延长增加,并且各个时间段的K562/ADR细胞VEGF表达均高于K562细胞（P〈0.05）;5、10μmol/L的亚硒酸钠在72小时内均不能抑制K562细胞VEGF的分泌（P〉0.05）;而作用96小时时K562细胞上清液中VEGF水平虽有下降,但未达统计学意义;5、10μmol/L的亚硒酸钠在48小时内均不能抑制K562/ADR细胞VEGF的分泌（P〉0.05）,10μmol/L的亚硒酸钠在作用72和96小时可以明显抑制VEGF的分泌（P〈0.001）,5μmol/L的亚硒酸钠在作用96小时可以抑制VEGF的分泌（P〈0.001）。结论：VEGF可能与白血病多药耐药有关,而亚硒酸钠则能抑制白血病细胞分泌VEGF。     

汉防己甲素对K562/A02细胞株SORCIN基因表达的影响

本研究旨在探讨汉防己甲素（Tet）在逆转K562/A02细胞耐药与耐药相关的可溶性钙结合蛋白（SORCIN）基因表达之间的关系,为Tet的临床应用提供新的理论基础。通过MTT法筛选出所需浓度Tet,与K562/A02细胞株孵育培养48小时后,通过MTT检测Tet对柔红霉素（DNR）细胞毒性的影响,用RT-PCR方法检测SORCIN基因表达的变化,用Western blot方法检测sorcin表达蛋白的变化。结果表明：在所选浓度范围内,Tet可以增强DNR对K562/A02的细胞毒作用,（Tet浓度为0,0.5,1.0,2.0mg/L时DNR和Tet的IC50分别为11.3±0.17,5.15±0.10,3.91±0.06,2.52±0.04mg/L,p〈0.01）;K562/A02细胞中SORCIN基因高表达,且随着Tet浓度的增加SORCIN的表达先增强后减弱（Tet浓度为0.5mg/L时增强,1.0和2.0mg/L时减弱,p〈0.05）;K652细胞中sorcin蛋白低表达,K562/A02细胞中sorcin蛋白高表达,且随着Tet浓度的增加先增强后减弱（Tet浓度为0.5mg/L时增强、1.0和2.0mg/L时减弱,p〈0.05）。结论：MTT检测显示Tet对K562/A02耐药逆转呈浓度依赖性,Tet可能通过调整SORCIN基因及蛋白的表达参与逆转K562/A02的耐药性,但并不与其耐药逆转作用完全相关。