蛋白C基因C5498T致Ⅰ型遗传性蛋白C缺陷症

目的：对一个遗传性I型蛋白C(PC)缺陷症家系进行基因突变的检测。方法：先证的蛋白C活性(PC：A)和抗原(PC：Ag)分别为26％和1．43mg／dl。用PCR法对先证PC基因的9个外显子及其侧翼、内含子序列进行扩增，PCR产物纯化后直接测序，检测其基因突变。突变位点经限制性内切酶分析证实。结果：先证表现为PC基因外显子3区杂合错义突变C6498T，引起Argl5→Trp。结论：该突变导致遗传性I型PC缺陷症，为国内首次报道。     

两个终止密码子导致的遗传性蛋白C和蛋白S缺陷症

目的:研究1个蛋白C(PC)和1个蛋白S(PS)缺陷症家系的表型诊断和基因特征。方法:PC活性(PC:A)和PS活性(PS:A)用发色底物法测定;PC抗原(PC:Ag)和PS抗原(PS:Ag)用ELISA方法测定。用PCR扩增PC和PS基因各个外显子及其侧翼序列,用直接测序法检测突变点。利用逆转录PCR(RT-PCR)分析PCmRNA水平变化。同时利用蛋白印迹分析血浆中PC含量的变化。结果:先证者1的PC:A为49%,PC:Ag为1.34mg/L,基因检测发现PC基因9号外显子的8831有G→A杂合无义突变,导致Trp372Stop;先证者2的PS:A为29%,PC:Ag为8.3mg/L,14号外显子Gln522(CAG)→Stop(TAG)。结论:G8831A杂合突变引起Trp372Stop,其可导致遗传性PC缺陷症;Gln522Stop可导致遗传性PS缺陷症。     

复合杂合突变导致遗传性蛋白C缺陷症- -家系调查

摘要:目的调查复合 杂合突变导致遗传性蛋白C缺陷症家系的临床特征与基因突变情况,并分析其基因型与临床表型的关系。方法采集先证者及其家系成员(3代5人)外周静脉血，检测蛋白C活性、蛋白S活性和抗凝血酶活性等指标以明确表型 诊断。采用PCR对先证者PROC基因所有外显子及侧翼序列进行扩增,PCR产物纯化后进行直接测序。运用ClustalX-2. 1-win软件分析突变的保守性;使用在线生物信息学软件预测突变的致病性。结果家系中有4人 存在遗传性蛋白C缺陷症,先证 者临床表现为肺栓塞和下肢深静脉血栓栓塞,其他家系成员无明显的血栓形成事件表现。基因测序发现先证者PROC基因第7号外显子存在c.541T>G 杂合错义突变(p. Phe181Val)和c.577-579delAAG杂合缺失突变( p. Lys192deletion),其父亲为 c.541T>G突变杂合子，母亲和妹妹为c.577-579delAAG 突变杂合子。保守性分析显示Phe181和Lys192在同源物种间均高度保守,生物信息学软件预测该2个突变位点均为有害突变。结论该遗传性蛋白 C缺陷症家系存在c.541T>G杂合错义突变 和e.577-579delAAG 杂合缺失突变,该复合杂合突变可能引起先证者蛋白C活性明显降低,从而导致反复深静脉血栓栓塞和肺栓塞。     

遗传性蛋白C缺陷症的研究进展

蛋白C(PC)是生理性抗凝系统PC系统重要的组成部分。遗传性PC缺陷症是由编码PC基因突变引起的常染色体遗传性疾病,其分子发病机制研究近年来有较大的进展,对突变与蛋白结构和功能改变之间的关系有较明确的认识。遗传性PC缺陷可以是仅有PC基因突变也可与其他凝血因子或抗凝因子基因突变共同存在,也是静脉血栓形成的主要危险性遗传因素之一。本文就此进行综述。     

蛋白C基因新突变His134Asn所致Ⅰ型蛋白C缺乏症

目的：研究一家族性血栓病相关病因的表型及基因型。方法：先证者、其母、二兄分别在３５，１９，３３岁起无明显诱因患反复性下肢深静脉血栓（ＤＶＴ）。对其四代１３个家庭成员的抗凝血酶Ⅲ、蛋白Ｃ（ＰＣ）、蛋白Ｓ（ＰＳ）、纤溶酶原的抗原和活性及活化的ＰＣ抗性等进行检测。结果：该家族５个成员患有Ⅰ型杂合子ＰＣ缺乏症（ＰＣ抗原和活性降低５０％左右）。ＰＣ基因各外显子及外显子、内含子连接区聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）未发现明显的异常带；亚克隆后测序发现ＰＣ的第Ⅵ外显子３４４４Ｃ→Ａ导致１３４Ｈｉｓ→Ａｓｎ变异，这是国外尚未报道的新突变，被命名为ＰＣ长沙。此突变使限制性内切酶ＨｐｈⅠ位点丧失，用ＰＣＲ／ＨｐｈⅠ进行家系分析，证实了６个家系成员（包括５个ＰＣ缺乏者）具有同样的突变。结论：Ｈｉｓ１３４Ａｓｎ是此家族ＰＣ缺乏所致ＤＶＴ的密切相关病理基因型。     

蛋白C基因G12918A突变所致Ⅰ型遗传性蛋白C缺陷症

目的研究一个遗传性蛋白C（PC）缺陷症家系的遗传表型和基因特征。方法PC抗原（PC：Ag）和PS抗原（PS：Ag）检测采用酶联免疫吸附试验，AT抗原（AT：Ag）测定采用免疫比浊法测定；PC活性（PC：A）、PS活性（PS：A）和AT活性（AT：A）采用发色底物法在Sysmex1500全自动血凝仪上进行测定。用聚合酶链反应扩增3代家系10个成员PC基因各个外显子及侧翼序列，用直接测序法检测其基因突变点。结果该家系3代10名成员中，有8名PC抗原水平在1．06～1．92mg/L（参考值3．00～6．00mg/L）之间，PC活性在41％～67％（参考值70％～140％）之间，明显低于正常参考范围；而PS：Ag和PS：A、AT：Ag和AT：A均在正常参考值范围内。PC基因测序分析：8名成员存在Ⅸ号外显子第12918位核苷酸G→T突变，密码子TGG→TGA，使第372位Trp→Stop；并在基因启动子区存在2405C／T、2418A／G、2583A／T的多态性。结论该家系为Ⅰ型遗传性PC缺陷症，PC基因Ⅸ号外显子存在第12918位核苷酸G→T突变，该突变是目前尚未报道的一个新的基因突变点；并在基因启动子区存在2405C／T、2418A／G、2583A／T的多态性。     

一个遗传性蛋白C缺陷症家系报告

遗传性蛋白Ｃ(ＰＣ)缺陷症 ,是以ＰＣ的活性 (ＰＣ∶Ａ)和抗原水平 (ＰＣ∶Ａｇ)低下为特征的常染色体显性遗传性疾病。本症以反复静脉血栓形成为主要表现。 1981年 ,Ｇｒｉｆｆｉｎ等报道了第 1个遗传性ＰＣ缺陷症家族 ,至 1995年已报道了 315例[1] ,但国内还未见报道。最近我们发现 1个遗传性蛋白Ｃ缺陷家系 ,现报告如下。病例和方法1　病例　先证者 ,男 ,33岁 ,以下肢肿胀、疼痛反复发作半年来院就诊。半年前受寒后左下肢肿胀痛 ,在外院诊断“静脉脉管炎” ,经用低分子右旋糖酐、川芎嗪和肝素治疗有所好转。 1个月前无诱因右下肢出现上述…     

遗传性蛋白C缺陷症的研究进展

蛋白C(PC)是生理性抗凝系统Pc系统重要的组成部分。遗传性PC缺陷症是由编码PC基因突变引起的常染色体遗传性疾病，其分子发病机制研究近年来有较大的进展，对突变与蛋白结构和功能改变之间的关系有较明确的认识。遗传性PC缺陷可以是仅有PC基因突变也可与其他凝血因子或抗凝因子基因突变共同存在，也是静脉血栓形成的主要危险性遗传因素之一。本文就此进行综述。     

活化的蛋白C拮抗与血栓形成的分子机制

活化的蛋白C拮抗（AcivatedProtainCresistance,APC－R）是由于APC无法正常、有效地水解、灭活FVa,使得凝血酶原酶复合物、凝血酶生成增加,造成体内高凝状态。目前发现的大部分APC－R是由于遗传性因素引起,即由于FV的单点突变（FVR506Q）使其对APC的水解产生拮抗而又保留有促凝活性。遗传性APC－R与人体静脉血栓形成有关,但二者相关性困地域、人种不同而有较大差异,其临床表现也因人而异。获得性APC－R逐渐引起重视,但其与临床疾病的相关性及发生机制尚待深入研究。     

遗传性蛋白S缺陷症研究进展

遗传性蛋白S(PS)缺陷症是一种常染色体显性遗传性疾病，在有先天性易栓症的家族中占10％^[1,2]。PS缺陷家族的杂合体有发生静脉血栓形成的危险，近年来，人们在分子生物学水平上对PS缺陷的病理机制、疾病的诊断及其相应的治疗措施方面的认识有了很大进展。本文将PS的功能、分布结构、PS基因、PS缺陷症的发病人群、临床症状、流行病学调查以及缺陷症的分型作一综述，并总结了目前PS突变数据库的突变类型及突变家系数量、分型特点等。最后介绍了目前实验室对遗传性PS缺陷症的表型诊断的实验室检查方法及基因研究手段。     

遗传性蛋白C缺陷症四个家系的分子发病机制研究

目的 对4个遗传性PC缺陷症家系进行临床表型诊断和基因型分析.方法 分别用发色底物法和凝固法测定4个家系先证者及家系成员的血浆PC:A、TPS:A和FPS:A;PC:Ag和FPS:Ag的测定采用ELISA法.采用凝血酶生成试验检测患者凝血功能的变化.PCR法扩增先证者PC和PS基因的全部外显子及其侧翼序列,PCR产物纯化后直接测序,检测其基因突变.结果 先证者1的PC:A为36%,PC:Ag 为57%,TPS:A为48%,FPS:A为18%,FPS:Ag为23.7%,基因分析显示其PC基因2号、7号和8号外显子分别存在L-34P、K150del和A209V 的杂合突变,其中L-34P和A209V来自父亲,K150del来自母亲;先证者2的PC:A为46%,PC:Ag为64.4%,TPS:A为36%,FPS:A为19.5%,FPS:Ag为20.9%,其PC基因的2号和7号外显子分别存在T66C的多态性和R147W的杂合突变,PS基因的14号外显子存在Tyr519stop的杂合突变,其中PC突变来自母亲,PS突变来自父亲.凝血酶生成试验显示先证者2及其父母的抗凝功能减弱,其中PS缺陷的先证者和其父亲的外源性活化蛋白C抑制凝血酶生成的能力下降,而其母亲没有明显变化.先证者3的PC:A为33%,PC:Ag为48.42%,其PC基因同时存在R147W和R178W突变;先证者4的PC:A为21%,PC:Ag为18.36%,基因检测结果显示先证者4是R178W和D255H的双杂合子.结论 遗传性PC缺陷症或PC、PS联合缺陷症是导致4例先证者出现静脉血栓的原因.杂合PC基因突变(L-34P、A209V、R147W、R178W和D255H)是导致4例先证者遗传性PC缺陷症的原因.     

两个遗传性蛋白C缺陷症家系临床表型和基因型变化的研究

目的对两个遗传性蛋白C（PC）缺陷症家系进行临床表型和基因突变检测。方法血浆蛋白C活性（PC：A）和抗原（PC：Ag）分别用发色底物法和ELISA法测定，蛋白S活性（PS：A）和抗凝血酶活性（AT：A）用发色底物法测定。用PCR法对先证者PC基因的9个外显子及其侧翼、内含子序列进行扩增，PCR产物纯化后直接测序，检测其基因突变。仅对先证者家系成员基因突变部位的外显子及其侧翼序列进行PCR扩增和测序。突变位点经限制性内切酶酶切分析或直接测序证实。结果先证者1（Ⅱ7）的PC：A和PC：Ag分别为1．2％和0。基因测序显示，先证者1在PC基因外显子5存在C3135G杂合错义突变，致C（TGC）64W（TGG），同时在外显子7存在T6128G杂合错义突变，致F（TTC）139V（GTC）。家系成员中，先证者的父亲（Ⅰ4）和女儿（Ⅲ3）存在T6128G杂合突变，先证者的舅舅（Ⅱ）存在C3135G杂合突变，先证者丈夫（Ⅱ8）存在外显子76161-6163或6164～6166AAG（K150或K151）杂合缺失，而其女儿（Ⅲ3）亦有此突变。先证者2（Ⅲ1）的PC：A和PC：Ag分别为50．3％、1．9mg／L，基因测序显示其存在K150或K151杂合缺失，该突变遗传自其父亲。2个家系中所有成员在PC基因启动子区中存在-1654C／T、-1641A／G、-1476A／T多态性，先证者2为CC／GG／TT纯合型。限制性内切酶PSp5Ⅱ酶切分析显示T6168G不是多态性。所有成员的PS：A和AT：A均在正常范围。结论复合杂合性PC基因突变（C64W和F139V）是导致先证者1遗传性Ⅰ型PC缺陷症的原因，杂合性Lys150或151缺失突变和PC基因启动子区CC／GG／TI纯合多态性是致先证者2遗传性Ⅰ型PC缺陷症的原因。C64W为国际首次报道，F139V、K150或151缺失突变为国内首次报道。     

遗传性蛋白C缺陷症家系的一个基因突变

目的 研究一个遗传性蛋白C（PC）缺陷症家系的遗传表型及基因特征。方法 PC活性用凝固法测定，PC抗原用ELISA方法测定。用PCR扩增2代家系12个成员中4个PC活性及抗原减低的PCⅡ-Ⅸ号外显子片段，用单链构象多态性（SSCP）分析cDNA变性后的差异，用测序法检测突变点。用限制性酶切验证突变点，同时分析家系的基因型。结果 该家系2代4名成员PC抗原水平在34．3％－67．8％（参考值80％－120％）。PC活性在22％－49％（参考值70％－130％），较正常参考范围明显减低。限制性酶切分析该家系12名成员时发现9名成员存在基因的突变。基因突变位点在Ⅶ号外显子第6219位核苷酸G→A突变，使正常编码的CGG精氨酸突变为CAG谷氨酰胺。结论 该家系为I型PC缺陷症，基因分析证明先证为杂合子型。在PCⅦ号外显子上第6219位核苷酸G→A突变，在蛋白质合成过程中第169位精氨酸被谷氨酰胺替代（R→Q），为目前国内献中尚未报道的一个基因突变点。     

In vitro characterization of missense mutations associated with quantitative protein S deficiency

OBJECTIVE: To elucidate the molecular consequences of hereditary protein S (PS) deficiency, we investigated the in vitro synthesis of the PS missense mutants in COS-1 cells and their activated protein C (APC) cofactor activities. PATIENTS: Four patients with quantitative PS deficiency suffering from venous thrombosis were examined. RESULTS: We identified three distinct novel missense mutations, R275C, P375Q and D455Y, and two previously reported missense mutations, C80Y and R314H. The P375Q and D455Y mutations were found in one patient and observed to be in linkage on the same allele. The R314H mutant showed the lowest level of expression (32.7%), and the C80Y, P375Q + D455Y, and R275C mutants exhibited a moderate impairment of expression, that is, 43.8%, 49.5%, and 72.3% of the wild type, respectively. Furthermore, pulse-chase experiments demonstrated that all mutants showed impaired secretion and longer half-lives in the cells than the wild type PS. In the APC cofactor assays, the C80Y mutant showed no cofactor activity, and the R275C mutant showed reduced activity, 62.3% of the wild type PS, whereas the R314H and P375Q + D455Y mutants exhibited normal cofactor activity. CONCLUSION: These data indicate that the C80Y and R275C mutations affect the secretion and function of the PS molecule, and that the R314H and P375Q + D455Y mutations are responsible for only secretion defects, causing the phenotype of quantitative PS deficiency observed in the patients.     

I型遗传性抗凝血酶缺陷症两种新基因突变

目的 对两例遗传性抗凝血酶(AT)缺陷症先证者及其家系进行表型诊断和基因诊断,并探讨其分子发病机制.方法 检测凝血与抗凝指标,并进行易栓症筛查和表型诊断.采用免疫比浊法和发色底物法分别检测先证者及其家系成员AT抗原(AT:Ag)和AT活性(AT:A),抽提外周血基因组DNA,PCR扩增AT基因(GI号28906)7个外显子及其侧翼序列、5'及3'端非翻译区,利用直接测序法进行基因序列分析.针对先证者的突变位点,对其家系成员进行相应基因突变检测,同时在正常人群中筛查以排除多态性.结果 先证者1和先证者2 AT:Ag分别为126 mg/L和117 mg/L,AT:A分别为49%和48%.先证者1和先证者2的AT基因2号外显子分别发现了杂合缺失突变3239～3240delCT和杂合无义突变3206A→T(K70Stop),其家系部分成员检测到相应的杂合突变.结论 两例先证者均为I型遗传性AT缺陷症,由AT基因3239-32ZlOdelCT和3206A→T(K70Stop)突变所致.     

一例遗传性蛋白C缺陷症家系的实验诊断

目的对1例遗传性蛋白C缺陷症家系进行临床表型诊断和基因突变检测。方法用发色底物法测定血浆蛋白C活性;用聚合酶链反应（PCR）法对先证者PC基因（PROC）的9个外显子及其侧翼序列进行扩增,PCR产物纯化后直接测序,检测其基因突变。家系成员DNA在先证者PROC基因突变区域扩增后测序,进行家系调查以期发现遗传规律。结果先证者蛋白C活性为38.6%,抗原为45.3%。直接基因测序分析发现先证者PROC基因外显子7区存在杂合错义突变c.565C〉T,该突变将引起编码的蛋白C 147位精氨酸被色氨酸替换（p.Arg147Trp）。家系分析发现先证者的c.565C〉T突变遗传于其父亲。结论 c.565C〉T杂合突变是导致该家系遗传性PC缺陷症的原因。     

Protein S and protein C gene mutations in Japanese deep vein thrombosis patients

OBJECTIVES: Coagulation factor V Leiden has not been detected in Japanese patients suffering from thrombosis. Hitherto, the constitutional background of Japanese thrombotic patients has never been systematically examined. We have performed a systematic investigation to determine pathogenesis for deep vein thrombosis in a Japanese population. DESIGN AND METHODS: Routine coagulation and fibrinolysis tests were performed to determine the activities of protein S, protein C, antithrombin, plasminogen and fibrinogen. Gene analysis was performed in thrombotic patients having low activities of these factors. RESULTS: Our study indicates that the frequency (19/85 = 0.22) of mutations of protein S gene in the Japanese patients was 5-10 times higher than that of mutations of protein S gene in Caucasian patients, and the frequency (8/85 = 0.09) of mutations of protein C gene was almost three times higher than that of Caucasian patients. The frequency of antithrombin gene mutation was similar in both populations. CONCLUSION: Our study reinforces that the genetic anomaly in the protein S/protein C anticoagulation system is an important risk factor for thrombophilia in the Japanese population.