血清半乳甘露聚糖抗原检测对血液病患者侵袭性曲霉病的诊断及预后的价值

目的 初步评价动态检测血清半乳甘露聚糖(GM)抗原水平对血液病患者侵袭性曲霉病(IA)的诊断价值及疗效.方法 采用ELISA法连续检测172例白血病和进行造血干细胞移植或移植后患者的613份血清标本的GM浓度,GM试验阳性定义为连续2次不同时点检测A值>0.5或单次>0.7.对GM试验阳性的患者给予抢先抗曲霉治疗.结果 按照试验中界定的界值,该诊断试验的的灵敏度为81.1%,特异度为88.2%.GM测定阳性55例,阴性117例,通过GM测定临床诊断IA者由37例增加至52例,55例GM阳性患者38例完成针对曲霉的抢先治疗,26例有效,12例无效死亡,病死率为31.6%.抗曲霉治疗前GM 水平呈缓慢上升趋势,保持在较高水平;抗真菌治疗有效患者的GM 含量呈下降趋势,无效死亡患者中呈上升趋势.结论 血清GM 检测可以为早期诊断IA提供有力证据,动态监测GM值变化趋势是评价疗效的有用指标.     

血清半乳甘露聚糖检测对器官移植术后侵袭性肺曲霉病的诊断价值

目的 前瞻性评价酶联免疫吸附试验（ELISA）检测曲霉半乳甘露聚糖（GM）抗原对器官移植术后侵袭性肺曲霉病的诊断价值。方法 采用ELISA连续检测62例器官移植术后患者血清中的GM，并根据欧洲癌症研究治疗组织及真菌研究组（EORTC／MSG）的标准将研究对象分类。分别计算各组的ELISA评价指标。结果 ELISA的敏感度为85．7％，特异度为95．7％。阳性预测值为75％，阴性预测值为97．8％，阳性似然比为19．7，阴性似然比为0．15。准确度为94．3％。结论 ELISA连续检测血清GM是一种可靠的早期诊断方法，高危人群中GM阳性的患者应采取先发积极的抗曲霉治疗。     

半乳甘露聚糖试验诊断血液病患者并发侵袭性曲霉感染的初步探讨

本研究探讨半乳甘露聚糖（galactomannan,GM）试验对侵袭性曲霉感染早期诊断的临床价值。141例患者中临床诊断为侵袭性曲霉病及拟诊断为侵袭性曲霉病103例,排除38例。在系统性抗真菌治疗前分别采集血液标本209份,通过ELISA（EBA-2单克隆抗体,双夹心法）方法检测GM（EBA-2单克隆抗体）,根据敏感性和特异性,评价GM试验的最佳阳性界定值;观察系统性抗真菌治疗前后GM水平的变化。结果表明,①按照试验中测定的界值,GM试验的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为87．5％、81．6％、66．7％、93．9％,按此标准确定为临床诊断侵袭性曲霉病48例、拟诊侵袭性曲霉病为55例;②选取多次送检标本患者（跟踪治疗过程）共62例,其中有效者50例,无效者12例。有效患者的GM水平随着治疗的进展均有所下降,治疗无效患者GM水平无变化或有升高。结论：GM试验对于侵袭性曲霉病的早期诊断具有重要意义,且GM浓度与患者疾病的预后具有相关性。     

曲霉半乳甘露聚糖检测对侵袭性曲霉病早期诊断的实验研究

目的：评价酶联免疫吸附试验（ELISA）检测曲霉半乳甘露聚糖（GM）抗原对侵袭性肺曲霉病（IA）的诊断价值,确定合适的阳性界值（cut-off）及对诊断和治疗的指导意义。方法：采用ELISA方法检测87例IA高危患者的血清曲霉GM抗原,比较cut-off 1.5、cut-off 1.0、cut-off 0.5时GM检测的敏感性、特异性、阳性预测值（PPV）、阴性预测值（NPV）。结果：cut-off 1.5时,ELISA检测的敏感性、特异性、PPV、NPV分别为50%、96%、91%和71%;cut-off 1.0时分别为65%、92%、87%和77%;cut-off 0.5时分别为75%、88%、83%和81%。结论：曲霉菌半乳甘露聚糖抗原ELISA检测可用于临床诊断侵袭性曲霉菌感染,以0.5为折点对早期诊断很有意义,有利于高危患者曲霉感染病死率的降低。     

半乳甘露聚糖检测对侵袭性曲霉病早期诊断的研究

目的评价酶联免疫吸附法(ELISA)连续检测血清半乳甘露聚糖(galactomannan,GM)抗原对侵袭性曲霉病(in-vasive aspergillosis,IA)早期诊断和疗效监测中的价值。方法92例白血病和造血干细胞移植(hematopoietic stem celltransplants,HSCT)患者纳入实验研究,共测定标本290份。采用ELISA方法检测血清中的GM,检测浓度可达到0.5ng/ml。结果以1.5为阳性界值,GM检测的敏感性为60%,特异性100%,诊断符合率88%;以0.8为阳性界值,敏感性为90%,特异性95%,诊断符合率94%。连续监测时GM可早于真菌培养方法2～20d预测曲霉感染。在GM阳性患者中,对13例病人进行抗曲霉治疗,10例有效,3例无效死亡。抗曲霉治疗前GM水平呈缓慢上升趋势,保持在较高水平,抗真菌治疗有效病人的GM含量呈下降趋势,无效死亡病人呈上升趋势。结论血清GM检测是对白血病和HSCT患者IA的早期诊断和疗效评价的有用指标。     

血液恶性肿瘤及造血干细胞移植患者侵袭性真菌感染的早期抗原诊断实验研究

本研究评价血清1,3-β-D葡聚糖(G)和半乳甘露聚糖(GM)联合检测用于血液恶性肿瘤及造血干细胞移植患者侵袭性真菌病(IFD)早期诊断的敏感度及特异度,确定GM阳性值、探讨G/GM测定前后诊断级别的变化及GM水平与疗效的关系。用双抗体夹心酶联免疫吸附分析(ELISA)测定患者血清G和GM值。结果表明:按照实验中测定的界值,G/GM联合检测的敏感度100%,特异度65.7%,阳性预测值67.6%,阴性预测值为100%;G/GM检测后临床诊断IFD由1例上升至24例,有12例非感染者上升为拟诊IFD;治疗前GM水平维持在较高水平,抗真菌治疗有效患者的GM值呈下降趋势,无效死亡患者GM值呈上升趋势。结论:G及GM实验联合检测提高了IFD诊断的敏感度,降低了假阴性的发生,具有早期诊断价值,动态监测G/GM值的变化可作为评价疗效的指标。     

血清及肺泡灌洗液半乳甘露聚糖检测对非粒细胞缺乏患者侵袭性曲霉菌感染的诊断价值

目的评价血清及肺泡灌洗液(BALF)曲霉菌半乳甘露聚糖(GM)试验对非粒细胞缺乏(中性粒细胞绝对数0.5×109/L,简称非粒缺)患者侵袭性曲霉菌病(IA)的诊断价值。方法应用酶联免疫吸附法对四川大学华西医院临床怀疑IA的206例非粒缺患者定量检测血清及肺泡灌洗液半乳甘露聚糖水平,将检测结果和临床特征进行分析。参照欧洲癌症研究和治疗组织/侵袭性真菌感染协作组和美国真菌病研究组标准、美国抗感染学会指南,将临床病例分为确诊、临床诊断、拟诊和非IA组;并分析其灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值。结果临床高危IA非粒缺患者206例,其中GM试验阳性93例,灵敏度89%,特异度83%,阳性预测值86%,阴性预测值91%,约登指数为0.72,诊断符合率78%;各组肺泡灌洗液GM水平均高于血清GM水平,肺泡灌洗液GM阳性率亦高于血清GM阳性率;确诊组+临床诊断组绘制ROC曲线,曲线下面积为0.82。结论 GM对IA的非粒缺患者的早期诊断同样具有临床意义。     

血浆（1，3）-β-D-葡聚糖抗原检测对器官移植术后患者侵袭性肺部真菌感染的诊断价值

目的探讨血浆（1,3）-β-D-葡聚糖（BG）检测（G试验）在早期诊断器官移植术后合并侵袭性肺部真菌感染（IPFI）的敏感性与特异性。方法2006年1月-2008年2月在本院器官移植中心接受器官（或组织）移植合并有肺部病变的患者60例,分别为接受造血干细胞移植（HSCT）、肾移植和肝移植。入选患者在住院期间每周采集2次全血,进行血浆G试验和血清曲霉菌半乳甘露聚糖抗原（GM）检测。10例健康志愿者均采血1次。结果32例确诊和临床诊断IPFI患者共采集35株致病型真菌,主要为曲霉菌（22株）;有12例患者G试验结果为阴性。单份血浆标本G试验阳性的敏感性为60%～71．4％,特异性为74．796-89．7％,连续双份血浆标本G试验阳性的敏感性（40％-57．1％）略有降低,但特异性（86．7％～98．3％）有所升高。G试验较痰液真菌培养平均提前8．2d出现阳性结果,差异有显著统计学意义（P〈0．01）。较典型影像学改变也平均提前3d（P〈0．05）。结论通过连续检测血浆BG浓度,G试验对器官移植术后合并IPFI的诊断敏感性接近60％,特异性则达到98％;且较微生物学培养及典型影像学改变更早出现阳性结果。     

真菌特异性抗原联合检测对侵袭性曲霉感染的早期诊断价值

目的 评价半乳甘露聚糖抗原(GM)和(1,3)-β-D-萄聚糖(BG)的检测及其联合检测对血液病和恶性肿瘤患者侵袭性曲霉感染(1A)的早期诊断价值.方法 回顾192例血液病和恙性肿瘤患者血浆BG和血清GM水平,分析BG检测和GM检测及其联合检测对侵袭性曲霉感染的敏感度、特异度,阳性预测值(PPV)、阴性预测值(NPV).结果 BG和GM联合检测对IA诊断的敏感度为86.4%,特异度为98.5%,阳性预测值为97.4%,阴性预测值为91.6%.结论 GM和BG联合检测对于血液病和恶性肿瘤患者侵袭性曲霉感染提高了敏感度和特异度,同时联合检测对LA的早期诊断有较高的临床意义.     

半乳甘露聚糖抗原动态监测与血液病患者侵袭性曲霉病抗真菌治疗预后的相关性

目的分析血清半乳甘露聚糖抗原(galactomannan,GM)检测结果在成人血液病患者侵袭性真菌感染(IFD)抗真菌治疗中的意义。方法回顾性研究在肺部曲霉感染的高危血液病患者,每周2~3次检测血清GM。按照欧洲癌症/真菌病研究组的研究和治疗组织(EORTC-MS)规定的定义对侵袭性曲霉病(IA)进行分组。结果 82例患者中确诊IA1例,临床诊断IA28例,拟诊的IFD23例,排除IFD30例。以确诊和临床诊断作为阳性病例计算GM检测的灵敏度为79.3%(23/29),以拟诊和无IFD作为阴性病例计算,试验特异度为83.0%(44/53),阳性预测值为79.3%(23/29),阴性预测值为88.0%(44/50)。本组82例患者在中位数为19.7(9~26)d开始采取预防性氟康唑治疗。GM阳性值出现时间比高分辨率计算机断层扫描(HRCT)或胸部X线检查(CXR)提前4~14 d。结论血液科高危患者血清GM每周检测2~3次,GM试验出现阳性比HRCT和CXR阳性报告提前4~14 d,GM升高与曲霉侵袭量有关。GM结果可作为侵袭性曲霉病高危人群的早期干预治疗参考指标。     

1,3-β-D葡聚糖和半乳甘露聚糖检测对ICU患者侵袭性真菌感染的诊断价值

目的评价1,3-β-D葡聚糖(BG)和半乳甘露聚糖(GM)检测对重症监护室(ICU)患者侵袭性真菌感染(IFI)的早期诊断价值。方法于2013-2015年,对452例ICU高危IFI患者(临床诊断IFI 182例,拟诊IFI 46例,排除IFI 224例),进行血清BG和GM检测,结合临床诊断,分析BG和GM检测,以及二者联合检测对IFI的诊断特异度、灵敏度、阳性预测值(PPV)和阴性预测值(NPV)。结果 BG检测对IFI的诊断灵敏度为75.0%,特异度为80.4%,PPV为75.8%,NPV为79.6%;GM检测的诊断灵敏度为25.8%,特异度为85.7%,PPV为59.5%,NPV为58.7%;二者联合检测的诊断灵敏度为87.4%,特异度为94.7%。结论 BG联合GM检测可提高对IFI的诊断效能,降低假阳性率和假阴性率,为ICU患者IFI早期诊治提供一定的依据。     

血清半乳甘露聚糖水平检测对COPD患者侵袭性肺曲霉菌感染的诊断价值

目的探究血清半乳甘露聚糖水平检测对慢性阻塞性肺疾病（COPD）患者侵袭性肺曲霉菌感染（IPA）的临床意义。方法选取42例具有IPA高危因素的COPD患者,采用回顾性诊断标准进行分组：COPD确诊IPA 组、COPD可疑IPA 组和COPD排除IPA 组,比较三组的血清半乳甘露聚糖吸光度值。以确诊和排除 IPA 的患者作为阳性和阴性病例,分析血清半乳甘露聚糖水平检测在不同阳性判断临界值下的灵敏度与特异度。结果按照回顾性标准,COPD确诊IPA 组有18例、COPD可疑IPA 组有12例、COPD排除IPA 组有12例。三组患者的吸光度值分别为：1.69±0.87、1.38±0.79和0.27±0.60。 COPD确诊IPA 组与COPD可疑IPA 组的吸光度值均高于COPD排除IPA 组,差异均有统计学意义（t分别=4.92、4.01,P均＜0.05）,而COPD确诊IPA 组与COPD可疑IPA 组之间比较,差异无统计学意义（t=0.99,P＞0.05）。不同半乳甘露聚糖阳性界定值显示：当半乳甘露聚糖取0.7作为阳性界定值时,其对COPD合并 IPA 的诊断灵敏性、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为87.30%、96.50%、87.20%及96.50%。结论血清半乳甘露聚糖的检测对于COPD患者侵染肺曲霉菌感染有较好的检测诊断作用,但并不能有效的区分COPD患者合并IPA患者的诊断级数,并且当血清半乳甘露聚糖临界值为0.7时,对于COPD患者侵染肺曲霉菌感染有较高的诊断价值。     

定量PCR检测在恶性血液病患者合并侵袭性真菌感染早期诊断中的意义

为探讨定量PCR在恶性血液病患者合并侵袭性真菌感染诊断中的应用价值,分别对40例恶性血液病患者血清中的真菌DNA进行定量PCR测定并结合半乳甘露聚糖(GM)试验及相关临床检查进行实验研究。选取烟曲霉菌高度保守的28S rRNA区段序列为目的基因设计引物和探针,提取患者血清中真菌DNA进行定量PCR检测。测定结果表明:定量PCR检测敏感性为0.89,特异性为0.85,阳性预测值为0.89,阴性预测值为0.85;GM检测敏感性为0.83,特异性为0.80,阳性预测值为0.88,阴性预测值为0.73;联合应用定量PCR和GM检测,其中1项为阳性或2项均为阳性的敏感性为0.94,特异性为0.85,阳性预测值0.89,阴性预测值0.92。结论:真菌定量PCR试验可应用于恶性血液病患者侵袭性真菌感染的诊断,与GM试验联合应用可提高诊断敏感性。     

血清曲霉菌游离DNA定量PCR检测方法的建立及应用初探

目的 建立并评价从血清中检测曲霉游离DNA的定量PCR方法.方法 合成曲霉28s rDNA基因特异广谱引物和Taqman探针,建立定量PCR检测方法,并进行方法学评价.用建立的方法检测33例患者的GM阳性血清标本.结果 定量PCR方法灵敏度为2拷贝/反应,标准曲线Y=-3.629X+40.187,相关系数R2为0.997 6.定量PCR方法检测33例患者的首次GM阳性血清标本,对诊断侵袭性曲霉感染的敏感性84％(21/25)、特异性87.5％(7/8)、阳性预测值95.5％(21/22)、阴性预测值63.6％(7/11).PCR阳性与PCR阴性病例组间侵袭性曲霉感染诊断率有统计学差异(95.5％ vs 36.4％),PCR阳性与侵袭性曲霉感染诊断有相关性(RR=2.625).结论 血清曲霉游离DNA定量PCR检测有助于侵袭性曲霉感染的早期诊断.     

炎症因子检测、GM试验和G试验对儿科重症监护室患儿侵袭性真菌病的早期诊断价值

目的探讨炎症因子检测、半乳甘露聚糖抗原检测(GM试验)和(1,3)-β-D葡聚糖试验(G试验)对儿科重症监护室(PICU)患儿侵袭性真菌病(IFD)的早期诊断价值。方法选取具有IFD高危因素的患儿250例分为确诊IFD组、拟诊IFD组和非IFD组,检测患儿血清和肺泡灌洗液中炎症因子白细胞介素(IL)-10、IL-6、IL-8和IL-17表达水平,并分别进行G试验和GM试验。比较3组患儿炎症因子表达水平差异,以及G试验和GM试验诊断IFD的灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值。结果确诊IFD组和拟诊IFD组患儿血清中IL-10、IL-6、IL-8和IL-17表达水平明显高于非IFD组,肺泡灌洗液中IL-6、IL-8表达水平明显高于非IFD组,差异均有统计学意义(P<0.05)。G试验和GM试验联合诊断IFD的灵敏度为95.97%,特异度为93.65%,阳性预测值为93.70%,阴性预测值为95.83%,均明显高于单项检测,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论GM试验和G试验联合检测能明显提高对PICU患儿IFD早期诊断的灵敏度,为临床早期治疗提供依据;动态监测PICU患儿炎症因子表达水平,有助于判断IFD的严重程度和治疗效果及预后。     

血浆(1,3)-β-D-葡聚糖抗原检测对器官移植术后患者侵袭性肺部真菌感染的诊断价值

目的探讨血浆(1,3)-β-D-葡聚糖(BG)检测(G试验)在早期诊断器官移植术后合并侵袭性肺部真菌感染(IPFI)的敏感性与特异性。方法2006年1月~2008年2月在本院器官移植中心接受器官(或组织)移植合并有肺部病变的患者60例,分别为接受造血干细胞移植(HSCT)、肾移植和肝移植。入选患者在住院期间每周采集2次全血,进行血浆G试验和血清曲霉菌半乳甘露聚糖抗原(GM)检测。10例健康志愿者均采血1次。结果32例确诊和临床诊断IPFI患者共采集35株致病型真菌,主要为曲霉菌(22株);有12例患者G试验结果为阴性。单份血浆标本G试验阳性的敏感性为60%~71.4%,特异性为74.7%~89.7%,连续双份血浆标本G试验阳性的敏感性(40%~57.1%)略有降低,但特异性(86.7%~98.3%)有所升高。G试验较痰液真菌培养平均提前8.2 d出现阳性结果,差异有显著统计学意义(P<0.01)。较典型影像学改变也平均提前3 d(P<0.05)。结论通过连续检测血浆BG浓度,G试验对器官移植术后合并IPFI的诊断敏感性接近60%,特异性则达到98%;且较微生物学培养及典型影像学改变更早出现阳性结果。     

恶性血液病患者侵袭性真菌感染GM和BG抗原检测的价值

目的 评价半乳甘露聚糖(GM)抗原和(1→3)-β-D葡聚糖(BG)抗原检测对恶性血液病患者侵袭性真菌感染(IFI)的诊断价值以及两种方法在监测抗真菌治疗效果中的作用.方法 51例恶性血液病患者当体温超过38 ℃,持续48 h以上,经广谱抗生素治疗无效,或起初有效但体温下降后再次升高时被纳入本研究.第1周采集患者静脉血2次,以后每周采血1次,至少监测4周.分别采用ELISA法和比色法检测患者血清GM和BG值.GM实验阳性定义为连续两次不同时点检测GM值＞0.5或单次＞0.8,G实验阳性定义为BG值＞80 pg/ml.患者分为确诊、临床诊断、拟诊及非真菌感染四组,21名正常志愿者作为对照.结果 51例患者共收集240份血清标本.其中确诊IFI2例,临床诊断26例,拟诊17例,非真菌感染6例.以确诊及临床诊断为真阳性组,以非真菌感染为真阴性组.GM实验在真阳性组28例中21例阳性,真阴性组6例中1例阳性,敏感性75%,特异性83.3%,阳性预测值95.5%,阴性预测值41.7%;G实验在真阳性组28例中全部阳性,真阴性组6例中4例阳性,敏感性100%,特异性33.3%,阳性预测值87.5%,阴性预测值100%.G实验的敏感性高于GM实验,差异有统计学意义(P=0.015);但特异性差异无统计学意义(P=0.242).GM实验阳性的21例患者中抗真菌治疗有效19例,GM值渐转阴性,2例无效的患者GM值持续阳性,有效组GM平均值两周后明显低于无效组,差异有统计学意义(P＜0.05);G实验阳性的患者中治疗有效者BG值逐渐下降,但未转阴;治疗无效组BG值变化无规律,总体呈上升趋势,但各时间点BG值监测对疗效无明显判断意义.结论 血清GM和BG抗原检测可以为早期诊断IFI提供有力证据,联合检测BG和GM两种抗原,可提高对曲霉菌诊断的特异性,减少假阳性.治疗中监测GM和BG值的动态变化,GM实验用于评价疗效的价值优于G实验.

Abstract：

Objective To evaluate the diagnostic value of serum galactomannan antigen (GM)and (1→3)-β-D-glucan antigen(BG) assay in invasive fungal infections( IFI ) in the patients with hematologic malignancies and the role in monitoring therapeutic response. Methods Fifty one patients with hematological malignancies met the criteria for inclusion: ①body temperature above 38 ℃ for 48 hours, ②failure to respond to broad-spectrum antibiotic treatment, or ③temperature rose again after the responded drop. Blood samples were collected twice at the first week, then once a week in at least four weeks. The double antibody sandwich enzyme-linked immunosorbent assay( EL1SA )and colorimetric assay were used for detecting GM and BG. The positive GM test is defined as two consecutive tests at different time GM value ＞ 0.5 or ＞ 0. 8 and the positive G test is defined as BG value ＞ 80 pg/ml. The patients were assigned into four groups as proven,probable, possible, and non-fungal infection respectively, and 21 normal volunteers were as controls. Results Two hundred and forty serum samples were collected from 51 patients including 2 of proven IFI, 26 probable IFI, 17 possible IFI and 6 non-fungal infection. The true-positive group including the proven and probable groups, and true negative group was the non-fungal infection group. GM tests were positive in 21 of 28 cases in true positive group, and only one of 6 cases in non-fungal infection. The sensitivity, specificity,positive predictive value and negative predictive value were 75%, 83.3%, 95.5% and 41.7%, respectively. G tests were positive in all 28 cases of the true positive group, and 4 in 6 non-fungal infection cases. The sensitivity, specificity, positive predictive value and negative predictive value were 100%, 33.3%, 87.5% and 100%, respectively. G test is more sensitive than GM test ( P = 0.015 ), but there was no significant difference in specificity of the two tests (P =0.242). In 19 of 21 patients with GM test positive, anti-fungal treatment was effective, and GM value gradually decreased to negative, two invalid patients were persistent with GM test positive. After two weeks treatment, the average GM value was significantly lower in the effective group than in the ineffective group (P ＜ 0.05 ). BG values in the responded patients showed a gradual decline similar to that of GM values, but not to negative. The changes of BG value in ineffective group varied with a trend upward. The changes in BG value had no relation with treatment effectiveness. Conclusions Serum GM and BG antigens detection provides strong evidence for early diagnosis of IFI. Combination of GM and G tests can improve the diagnostic specificity and reduce the false positive GM test seems superior to G test for monitoring GM and BG values during treatment.