骨髓增生异常综合征患者外周血白细胞分化抗原研究

骨髓增生异常综合征患者外周血白细胞分化抗原研究段连宁，伍柏松骨髓增生异常综合征（ＭＤＳ）是一种以造血前体细胞发育缺陷为特征的于细胞克隆性疾病，其异常累及髓系及淋巴细胞系。致使免疫功能障碍及免疫调节失衡，从而可能导致ＭＤＳ向白血病转变［ＢｒＪＨａｅｍａ...     

骨髓增生异常综合征外周血活化T细胞的研究

目前认为免疫功能在骨髓增生异常综合征 (MDS)发病、发展及向白血病的转变中 ,可能起重要作用[1] 。本实验通过流式细胞术和双标记技术来检测 2 0例MDS患者外周血活化T细胞的变化 ,以探讨MDS的发病机制 ,以期为预防及治疗提供理论依据。材料与方法研究对象MDS患者 2 0例 (RA 12例、RAS 1例、RAEB 5例、RAEB t 2例 ) ,男 12例 ,女 8例 ,年龄 9- 6 0岁 ,中位年龄 32岁 ,均符合MDS的诊断标准[2 ] 。所有患者均为初治 ,2周内无感染、发热 ,亦未曾输过血 ;正常对照组 12例 ,均为健康的本室工作人员 ,年龄 2 0 - 4 2岁 ,中位年龄 33 5…     

骨髓增生异常综合征患者骨髓CD34^＋细胞的研究进展

本文综述近年来对ＭＤＳ患者骨髓ＣＤ３４＾＋细胞的研究进展，表明其细胞数量与ＦＡＢ分型及预后密切相关，且其细胞的增殖和分化能力受损，其免疫表型对集落刺激因子的反应均发生改变；ＭＤＳ原发损伤是高凋亡，其ＣＤ３４＾＋细胞对Ｆａｓ，ｃ－ｍｙｃ，ｂｃｌ－２等凋亡相关蛋白的表达异于正常，提示了ＭＤＳ患者骨髓ＣＤ３４＾＋细胞无论在数量上还是质量上均发生了明显异常。     

骨髓增生异常综合征患者骨髓T辅助细胞亚群的研究

目的研究骨髓增生异常综合征(MDS)患者骨髓中辅助性T淋巴细胞(Th)亚群数量和比例改变及异常核型细胞与Th1细胞的比例,评价MDS与Th1细胞的相关性。方法用流式细胞术检测21例MDS患者、18名正常对照和13例重型再生障碍性贫血(SAA)患者骨髓Th1细胞和Th2细胞的数量和比例;检测18例MDS患者和15名正常人染色体核型,分析MDS患者肿瘤细胞负荷与Th1细胞的比例关系及MDS患者骨髓原始细胞比例与Th1细胞的相关性。结果正常对照组骨髓Th1细胞、Th2细胞、Th1/Th2比值分别为(0.48±0.10)%、(0.24±0.19)%和2.31±0.76;而MDS患者三指标分别为(0.36±0.11)%、(0.76±0.35)%和0.51±0.13。MDS患者骨髓Th1细胞减少,Th1/Th2比例明显降低(P<0.01)。SAA患者三指标分别为(4.75±0.49)%、(0.40±0.28)%和26.5±8.79,与正常对照组相比,Th1细胞明显增多、Th1/Th2比例明显升高(P<0.01)。MDS患者异常核型细胞占中期细胞的(50.00±0.10)%,而正常对照为0。随着MDS疾病进展及MDS转为AML的患者骨髓Th1细胞数量逐渐下降,原始细胞数量逐渐增多,二者呈负相关(r=-0.563,P<0.01)。结论①MDS患者T细胞免疫异常,Th1细胞与Th2细胞比例失衡,抗肿瘤细胞免疫中起主要作用的Th1细胞减少;②随着骨髓Th1细胞数量下降,MDS逐渐向白血病进展。     

细胞凋亡与骨髓增生异常综合征

细胞凋亡与骨髓增生异常综合征肖志坚郝玉书骨髓增生异常综合征（ＭＤＳ）是一组起源于髓系定向干细胞或多能造血干细胞的异质性克隆性疾患［１］，主要特征是无效造血和高危演变为急性髓系白血病（ＡＭＬ）。近年不少作者研究了细胞凋亡（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）与ＭＤＳ的...     

骨髓增生异常综合征CD34+细胞研究进展

骨髓增生异常综合征（ＭＤＳ）是一组以血细胞质、量异常和高风险发展成为急性白血病（主要是髓系白血病）为特征的恶性克隆性造血干细胞病［１］。ＣＤ３４（细胞表面磷酸化糖蛋白）选择性地表达于早期造血干（祖）细胞，可能起到使造血干（祖）细胞归巢及粘附的作用［２...     

骨髓增生异常综合征患者CD34+细胞凋亡特征

目的　调查骨髓增生异常综合征 (MDS)造血细胞CD34 抗原表达及CD34 阳性细胞凋亡状况。方法　用免疫酶标记 (碱性磷酸酶 抗碱性磷酸酶系统 ,APAAP)检测 36例MDS患者骨髓冷包埋切片中CD34 阳性细胞数量及分布特征 ,结合DNA原位末端标记技术 (ISEL)研究此类细胞的凋亡状况。14例缺铁性贫血 (IDA)患者作对照。结果　①MDS组CD34 阳性细胞较对照组明显增多 [分别为 (4 9.2± 38.5 ) mm2 和 (10 .2± 9.7) mm2 ,P <0 .0 1]。MDS组凋亡细胞数与对照组比较也增多 [分别为 (6 9.1±2 8.2 ) mm2 和 (17.8± 11.2 ) mm2 ,P <0 .0 1]。②CD34+ 细胞在MDS RAEB组最高 ,与MDS RA RAS和MDS RAEB t组比较 ,差异有显著性 (P值均 <0 .0 5 ) ,而在后两组间无明显差异 ;MDS RA RAS、RAEB组的细胞凋亡数均明显高于RAEB t组 (P值分别 <0 .0 2和 0 .0 5 )。③ 36例MDS患者中未见CD34 阳性细胞发生凋亡。④CD34 阳性细胞及凋亡细胞均多见于骨小梁间区 ,均有成簇成片状分布的趋势 ,但两类细胞很少分布于同一区域。结论　MDS造血细胞过度表达CD34 抗原 ,MDS转化过程中同时存在CD34阳性细胞和凋亡细胞增加。CD34 阳性细胞的凋亡抵抗现象提示其来自恶性造血克隆。     

骨髓增生异常综合征患者骨髓异常克隆细胞起源的初步研究

本研究旨在探讨骨髓增生异常综合征(MDS)患者骨髓异常克隆细胞的起源,即MDS患者骨髓CD34+CD38-造血干细胞和CD34+CD38+祖细胞中是否存在恶性克隆细胞及其比例。用免疫磁珠分选技术(MACS)分选9例染色体异常的MDS患者(8三体4例,含有8三体的复杂核型1例,5q-2例,含有5q-的复杂核型1例,5q-合并8三体1例)的骨髓单个核细胞(BMMNC)中的CD34+CD38-细胞和CD34+CD38+细胞,分别涂片;然后在上述涂片上通过荧光原位杂交(FISH)方法比较CD34+CD38-和CD34+CD38+两群细胞中异常克隆细胞的百分比。结果发现,这两群细胞均有异常克隆累及,但CD34+CD38-干细胞中异常克隆的比例(41.8±8.4)%低于CD34+CD38+祖细胞(72.4±7.7)%(p<0.001),而在有核细胞检测的异常克隆细胞比例为(70.8±9.2)%。结论:提示MDS患者中5q-和+8异常克隆均可能起源于造血干细胞阶段,而在祖细胞阶段异常克隆占优势。     

骨髓增生异常综合征患者T淋巴细胞亚群的特征分析

目的：检测和分析骨髓增生异常综合征（M DS）患者T淋巴细胞亚群的分布,评估M DS患者免疫功能状态。方法：采用FC 500流式细胞仪对35例M DS患者和10例正常对照组外周血标本进行T淋巴细胞亚群检测。结果：M DS组的辅助性细胞T细胞（T h）,辅助性细胞T细胞/抑制性T细胞（T h/T s）和自然杀伤细胞（NK）的表达均低于正常对照组,T s细胞的表达高于正常对照组;随着M DS疾病的进展,抑制性T细胞（T s）的表达是逐渐增加的,其中只有RA/RA S组与RAEB组之间差异有显著性（P=0.027）;M DS患者各组间T h,T h/T s比值和NK细胞的表达均无差异性。结论：T h,T s和NK细胞参与人体重要免疫功能,T淋巴细胞亚群免疫失调,则导致细胞免疫功能紊乱,T h,T s和T h/T s比值成为监测人体免疫功能、反映机体免疫状态的重要指标。     

骨髓增生异常综合征的细胞遗传学研究

目的:观察骨髓增生异常综合征(MDS)染色体的改变及其临床意义。方法:采用骨髓细胞短期培养和RHG 显带分析38例原发性 MDS 核型按 WHO 分型:难治性贫血(RA)4例;难治性贫血伴有环状铁粒幼细胞(RARS)1例:难治性贫血伴有原始细胞过多(RAEB)17例;难治性血细胞减少伴多系发育异常(RCMD)14例;MDS 不可分类型(MDS-U)2例结果:38例 MDS 患者中共检出14例异常核型(占36.8%).单纯异常9例(数日异常6例,结构异常3例),复杂异常5例,1例出现核型演变。结论:染色体核型分析对 MDS 的正确诊断、病情监测及预后评估有重要价值     

丁酸钠上调急性白血病细胞共刺激分子表达及其分子机制研究

目的 观察丁酸钠(SB)对急性h血病细胞共刺激分子表达的影响，并探讨其分子机制、方法 以流式细胞术检测NB4、HL-60、Kasumi-1、U937和Jurkat细胞经SB处理前、后CD86、CD80分子表达，同种混合淋巴细胞反应观察免疫调节功能，NF-κB试剂盒检测SB对核内NF-κB含量的影响。结果 经SB处理后，各自血病细胞株细胞CD86和CD80分子表达与对照组比较均出现不同程度上调，其中0．5mmol／L SB处理的NB4细胞组较李白对照组CD86阳性细胞率增高36．8倍，NF-κB含量增加与CD86分子上调相一致，混合淋巴细胞反应显示SB处理的细胞可明显刺激异基因淋巴细胞增殖?结论 SB可上调急性白血病细胞共刺激分子CD86和CD80，NF-κB为其参与上调CD86分子的重要的转录因子。     

IL-4对小鼠骨髓树突状细胞表面分子CD11c、CD80、CD86表达的影响及其意义

目的探讨IL-4对小鼠骨髓树突状细胞(DC细胞)表面分子CD11c、CD80、CD86表达的影响及其意义。方法对照组(n=5只,30孔)应用20 ng/ml GM-CSF,实验组(n=5只,30孔)应用20 ng/ml GM-CSF+20 ng/ml IL-4分别刺激小鼠骨髓细胞生长,隔日进行细胞换液,观察并对比细胞形态学变化,流式细胞仪测定DC细胞表面相关分子表达。结果实验组诱导小鼠骨髓细胞第7日观察可见DC细胞形态,对照组第7日未发现明显DC细胞形态,流式细胞仪测定实验组CD11c(0.546±0.289)、CD80(0.506±0.085)、CD86(0.562±0.260)表达分别较对照组CD11c(0.236±0.058)、CD80(0.279±0.096)、CD86(0.237±0.070)表达明显增高(P<0.05)。结论 IL-4可以促进小鼠骨髓DC细胞表面分子CD11c、CD80、CD86表达,促进DC细胞分化成熟。     

骨关节炎中软骨细胞CD80/CD86的表达

目的骨关节炎(osteoarthritis,OA)是最常见的一种慢性退行性骨关节疾病。近年的研究显示骨关节炎不但是一种退行性疾病,而且是一种关节内的炎症反应。通过检测OA软骨细胞CD80/CD86的表达情况,探讨软骨细胞在OA发病中的作用。方法收集10例膝关节骨关节炎患者软骨标本为病例组,同时收集8例股骨颈骨折患者软骨标本为正常对照组。进行软骨细胞培养和流式细胞技术,检测软骨细胞CD80/CD86的表达情况。进行统计学分析。结果病例组软骨细胞表达CD80的阳性细胞百分率(2.47%±0.59%)比正常对照组软骨细胞(0.94%±0.25%)高(P<0.01)。病例组软骨细胞表达CD86的阳性细胞百分率(1.71%±0.71%)比正常对照组软骨细胞(0.93%±0.47%)高(P<0.01)。结论CD80/CD86在骨关节炎患者软骨细胞中表达增加,做为抗原提呈细胞的标志分子,提示软骨细胞在骨关节炎中发挥抗原提呈作用。     

骨髓增生异常综合征患者骨髓DC1亚群的变化

目的:探讨树突状细胞1型(DC1)存骨髓增生异常综合征(MDS)发病中的作用。方法:以正常人和重型再生障碍性贫轿.(SAA)为埘照,用流式细胞仪检测 MDS、SAA 骨髓中 Th1细胞数、DC1亚群-CD11_ CD1~a~ 细胞、CD11_~ CD83~ 细胞数量及比例改变;评价 CD11_ CD83~ 细胞与 Th1细胞、网织红细胞(Ret)、中性粒细胞绝对值(ANC)的相关性。结果:与正常人比较,MDS 患者 Th1细胞及 DC1亚群均未见增高(P<0.05),CD11_ CD83~ 细胞与 Th1细胞、ANC 无显著相关性(P>0.05).但与 Ret 呈正相关(P<0.05)。SAA 的 Th1细胞、CD11_ CD1_a~ 细胞、CD11_ CD83~ 细胞、CD11_ CD83~ 细胞/CD11_ CD1_a~ 细胞均显著高于正常对照组(P<0.01)。SAA 患者 CD11_ CD83~ 细胞数与 Th1细胞呈正相关(P<0.01),与 Ret、ANC 均呈负相关(P<0.01)MDS 的 CD11_ CD1_a~ 细胞、CD11_ CD83~ 细胞、CD11_ CD83~ 细胞/CD1_a~ CD11_ 细胞均低于 SAA(P<0.01)。结论:MDS 患者 DC1亚群处于相对静息状态.但激活 DC1可能有助于 MDS 造血恢复。MDS 和 SAA 的免疫发病机制可能不同。     

MDS患者Treg细胞的变化

检测骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome MDS)患者CD4+调节性T细胞变化,探讨其在MDS发病机制中的作用。方法以CD3和侧向角设门,采用直接免疫三标法以流式细胞术检测38例初治MDS患者(RA 17例、RAS 1例、RAEB 14例、RAEB-t 6例)及11例正常对照组外周血CD3+ CD4+细胞上CTLA-4、PD-1、CD25数量和比例变化,并探讨与疾病进展的关系。结果MDS组CTLA一4、PD I．1、CD25在CD3 4-CD4+表达率分别为2．14％±1．25％(RA 1．51％±0．80％、RAEB／RAEB-t 2．65％±1．33％),1．44％±0．88％(RA 0．93％±0．63％,RAEB／RAEB-t 2．02％±0．76％),3．18％±2．11％(RA 2．80％±1．38％、RAEB／RAEB-t 3．41％±2．46％),均高于正常对照组的0．11％±0．12％, 0．09％±0．14％,1．65％±1．14％(P<0．01)。随着疾病进展,负性调控因素CTLA-4、PD-L1、CD25在RAEB／RAEB-t组亦较RA组显著增高(P<0．01)。结论与正常人免疫系统比较,MDS患者CD4+调节性T细胞升高,免疫负调控增强,并在免疫格局中占据主导地位。随着疾病进展,MDS患者免疫负调控亦相应增强,免疫监视功能低下,从而有助于恶性克隆扩张、逃逸。     

慢性乙型肝炎患者外周血CD80、CD86及其受体CD28的表达

目的研究慢性乙型肝炎患者外周血CD80、CD86及其受体CD28与其病情状态、乙型肝炎病毒复制的关系。方法用流式细胞术检测了24名健康体检者和92例慢性乙型肝炎患者外周血CD80、CD86、CD28的表达和CD8^＋CD28^＋、CD8^＋CD28^-亚群淋巴细胞,并与病毒载量和乙型肝炎e抗原（HBeAg）进行相关分析。结果慢性乙型肝炎CD80和CD86表达明显高于正常对照组和乙型肝炎病毒携带组（P〈0．01）;肝炎后肝硬化组明显高于慢性乙型肝炎组（P〈0．05）;慢性乙型肝炎轻、中、重度3组间差异也有统计学意义。慢性乙型肝炎组CD28的表达明显低于正常对照组和乙型肝炎病毒携带组（P〈0．05）。病毒载量高低和HBeAg是否阳性与外周血CD80、CD86、CD28及CD8^＋CD28^＋和CD8^＋CD28^-亚群淋巴细胞差异无统计学意义。结论CD80、CD86及受体CD28可能在慢性乙型肝炎免疫损伤过程中起重要作用,但与血清中病毒载量的变化和HBeAg阳性与否无关。     

肾脏间质树突状细胞在多器官功能障碍综合征中的变化与作用

目的探讨肾脏间质树突状细胞在多器官功能障碍综合征免疫紊乱中的影响与作用。方法腹腔注射酵母多糖制造C57BL/6小鼠MODS模型,分为正常、3～6h、12～48h、5—7d和10-12d组。观察各组小鼠肾脏间质树突状细胞的病理学变化及其表面标记物CD11c、CD205、CD80和I—A^b在MODS各期肾脏中的表达水平;流式细胞术检测外周血CD4^＋与CD8^＋的T细胞数量与比值。结果在急性损伤期,肾脏间质树突状细胞大量增生,CD80和I-A^b表达较正常组差异具有统计学意义（P〈0．01和P〈0．05）,外周血T细胞CD4^＋／CD8^＋比值则明显下降（P〈0．01）。功能衰竭期,肾脏间质树突状细胞增生至最高点,但其CD80和I-A^b表达较急性损伤期显著减少（P〈0．01）,外周血T细胞CD4^＋／CD8^＋比值下降至最低（P〈0．01）。结论肾脏间质树突状细胞参与并影响了MODS中肾脏局部与全身的免疫失衡及免疫抑制过程。     

慢性乙型肝炎患者外周血髓样树突状细胞功能分析

目的:对慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞来源的髓样树突状细胞进行功能分析。方法:实验于2005-01/2006-07在泰山医学院完成。①髓样树突状细胞来源于2005-07/12泰山医学院附属医院传染科收治的20例慢性乙型肝炎患者,男12例,女8例,年龄21～42岁,乙型肝炎病毒标志物均为HBsAg( )、HbeAg( )、HbcAb( ),乙型肝炎病毒DNA均为阳性,3个月内均未使用抗病毒药物和免疫调节剂。诊断参照2000年西安全国病毒性肝炎会议修订的临床诊断标准,排除甲型肝炎、丙型肝炎、丁型肝炎、戊型肝炎等病毒重叠感染及其他原因引起的肝脏损害。②以14例健康供血员的髓样树突状细胞作为正常对照,男8例,女6例,年龄21～36岁。③慢性乙型肝炎患者与健康供血员各取外周血20mL,肝素抗凝,用淋巴细胞分离液分离去除红细胞和粒细胞,收集外周血单个核细胞。应用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和白细胞介素4诱导培养其分化发育为髓样树突状细胞,锥虫篮染色检测细胞活力并进行细胞计数。④收集培养第10天的1×109L-1髓样树突状细胞,离心管中分别加入荧光标记抗体HLA-DR-FITC和CD86-FITC,终浓度为5mg/L,4℃标记45min,用流式细胞仪检测细胞表面表型。⑤取培养第7天的1×109L-1髓样树突状细胞,加入含体积分数为1的胎牛血清、50μg/L粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子、10μg/L白细胞介素4、1U/L肿瘤坏死因子α的新鲜培养基继续培养,24h后收集培养上清,ELISA法检测白细胞介素10与白细胞介素12的含量。⑥培养第10天的髓样树突状细胞以30Gyγ放射线灭活后,每孔分别按髓样树突状细胞:T细胞=1∶40,1∶20,1∶10,1∶5加入到已含有纯化T细胞的96孔板中,采用3H-TdR掺入法检测髓样树突状细胞刺激同种异体T细胞增殖反应的能力。结果:①髓样树突状细胞的形态学特征及生成量:慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞诱导培养10d时,呈典型的髓样树突状细胞,低密度,圆形或不规则形,表面有丰富的伸长毛刺,悬浮不贴壁,与正常人群外周血单个核细胞诱导的髓样树突状细胞形态学无明显区别。锥虫篮染色结果显示两组髓样树突状细胞活力均大于95%。慢性乙型肝炎患者髓样树突状细胞数量明显低于正常人群[(3.4±0.3)×109L-1,(5.2±0.3)×109L-1,t=17.2183,P<0.01]。②髓样树突状细胞表型分析及细胞因子含量变化:与正常人群比较,慢性乙型肝炎患者髓样树突状细胞表面CD86和HLA-DR分子表达率均明显降低(t=5.4351～8.7062,P均<0.01);培养上清中白细胞介素12的含量明显降低(t=13.7208,P<0.01),白细胞介素10的含量无明显变化。③混合淋巴细胞效应:在髓样树突状细胞:T细胞=1∶5,1∶10,1∶20,1∶40时,慢性乙型肝炎患者髓样树突状细胞激活T细胞增殖的能力明显低于正常人群(t=17.7096～28.0225,P均<0.01)。结论:慢性乙型肝炎患者外周血中髓样树突状细胞数目减少、功能降低,可能是导致机体对慢性乙型肝炎病毒感染产生免疫耐受的原因之一。     

阵发性睡眠性血红蛋白尿症淋巴细胞亚群数量异常与GPI蛋 …

目的 分析阵发性睡眠性血红蛋白尿症（ＰＮＨ）患者外周血淋巴细胞亚群数量及Ｔ、Ｂ淋巴细胞和ＮＫ细胞表面糖基磷脂酰肌醇（ＧＰＩ）蛋白表达情况,以期能深入探讨ＰＮＨ的本质。方法 ＰＮＨ患者共１５例,采用双色和三色荧光标记的单克隆抗体在流式细胞仪上分析淋巴细胞亚群分类计数和测定Ｔ、Ｂ淋巴细胞和ＮＫ细胞表面ＣＤ４８、ＣＤ５５、ＣＤ５９抗原。结果 １５例患者均有不同程度的淋巴细胞亚群数量异常,以Ｂ淋巴细胞和Ｎ