高效液相色谱法测定利福霉素S-Na盐含量的探讨

高效液相色谱法(HPLC)测定利福霉素S-Na盐的含量,采用Nova-PakC18化学键合硅胶为固定相,甲醇-水(80：20)为流动相,波长为316nm,采用外标法,其回归方程为Y=50318 107529X,r=0．9995样品回收率为97．5％。RSD为1．8％(n=6)所测值与微生物法所测效价相关性良好。r：0．9911。     

利福霉素B的选育及其发酵的研究

目的：寻找新的菌种提高利福霉素B的发酵水平。方法：对菌株AmediterraneiXCl—02进行筛选、诱变,获得新的菌株。结果：获得高产菌株AmediterraneiXC9—25,生产能力较原始出发菌株AmediterraneiXCl—02提高1．385倍,效价达到10000u／ml。结论：通过工业方法产生菌株,并对其进行筛选变种是提高利福霉素B生产能力的有效途径。     

利福霉素SV发酵工艺优化的研究

本文通过对影响利福霉素SV发酵因素一温度、溶氧和补料方式的研究，得出结论：在控制培养温度28．5℃、溶氧25％以上的条件下，采用流加方式补料工艺，利福霉素SV的发酵效价较原工艺有明显提高，此工艺已在20T发酵罐上进行工业化生产，发酵效价比原生产工艺有较大提高。     

微生物浊度法测定吉他霉素的效价

目的：建立测定吉他霉素效价的方法。方法：采用比浊法和管碟法对吉他霉素的效价进行测定并比较。结果：吉他霉素浓度在0．8～2．4u·mL^-1的范围内，浓度的对数与吸收度成良好的线性关系，回归方程：A=608．1—725．71gC（r=0．9995），平均回收率为100．9％。结论：微生物浊度法测定吉他霉素的效价简便、精确、快速。     

利福定片生产工艺对其生物利用度的影响

利福定为一多晶型化合物，但各种晶形的生物利用度有差别。利福定片生产工艺可影响晶形的转化，因而对其生物效价影响甚大，利福定片选用全粉末直接压片法有较高的生物效价 。     

利福霉素B发酵放大I．从摇瓶到15L发酵罐的发酵放大

研究了溶氧和剪切力对地中海拟分枝酸菌XC－925发酵产生利福霉素B的影响，并对利福霉素B从摇瓶到15L发酵罐的发酵放大及15L发酵罐流加补料发酵进行了研究。利用摇瓶研究结果表明地中海拟分枝酸菌XC－925发酵产生利福霉素B时对溶氧要求较高，而对剪切力不太敏感。以溶氧为依据，在15L发酵罐间歇发酵过程中，控制溶氧不低于25％，利福霉素B的发酵效价可达到1000u/ml左右，发酵周期（6d）较摇瓶发酵缩短了1d。15L发酵罐如采用流加补料发酵工艺，利福霉素B的发酵效价还会有较大幅度提高。     

利福霉素B的提取工艺研究

从地中海拟无枝酸菌的发酵液中提取利福霉素B的工艺研究。采用萃取→反萃取→二次萃取→结晶的工艺路线．可以得到纯度较高的利福霉素B中间产品。萃取时采用乙酸丁酯为萃取剂；反萃取时采用pH7．5—8．0的磷酸盐缓冲液为反萃剂，进行多级错流萃取，再经二次萃取提纯，通过冷冻结晶即得产品利福霉素B。     

利福霉素B发酵工艺研究

研究温度、溶氧、巴比妥、磷酸盐及补料方式对利福霉素B发酵的影响。结果表明在控制培养温度27℃，溶氧25％以上的条件下，采用流加补料工艺，利福霉素B的发酵效价较原工艺有明显提高，此工艺已在60m^3发酵罐中进行工业化生产，发酵效价比朱生产工艺提高了一倍以上。     

利用均匀实验优化利福霉素SV发酵培养基氮源配比

应用均匀设计的方法对利福霉素SV发酵培养基中的氮源配比进行优化。研究了氮源中各成分对发酵效价的影响。确定各成分的最佳配比并用实验验证，使摇瓶发酵效价提高了10％以上。并对利福霉素SV产生菌在新、老培养基中的代谢特性进行了比较。     

利福定片生产工艺对其生物利用度的影响

利福定为一多晶型化合物。但各种晶形的生物利用度有差别。利福定片生产工艺可影响晶形的转化,因而对其生物效价影响甚大,利福定片选用全粉末直接压片法有较高的生物效价。     

利福平(Rifampicin)

利福霉素是1957年意大利从链丝菌Streptomyces mediterranei中得到的抗革兰氏阳性细菌和结核杆菌的抗菌素。链丝菌培养液中有利福霉素A、B、C、D、E五种物质。其中A、C、D、E为碱性,不稳定,较难分离,称为利福霉素混合体,仅利福霉素B是结晶,为一比较稳定的化合物。利福霉素B易转变成为其他衍生物,如经氧化、酸水解及还原,可转变为利福霉素O、S及SV。利福霉素SV是一高效的抗革兰氏阳性菌及结核分枝杆菌的抗菌素。据报导,利福霉素SV不仅可通过利福霉素B转化,而且可以用利福霉素B的产生菌经诱变剂处理,获得突变菌种,直接生产利福霉素SV及其他组份。科学工作者试制了利福霉素B的酯、酰胺及酰肼衍生物,从中选出了Rifamide。     

利福霉素B发酵放大Ⅰ.从摇瓶到15L发酵罐的发酵放大

研究了溶氧和剪切力对地中海拟分枝酸菌XC-925发酵产生利福霉素B的影响,并对利福霉素B从摇瓶到15L发酵罐的发酵放大及15L发酵罐流加补料发酵进行了研究.利用摇瓶研究结果表明地中海拟分枝酸菌XC-925发酵产生利福霉素B时对溶氧要求较高,而对剪切力不太敏感.以溶氧为依据,在15L发酵罐间歇发酵过程中,控制溶氧不低于25%,利福霉素B的发酵效价可达到10000u/ml左右,发酵周期(6d)较摇瓶发酵缩短了1d.15L发酵罐如采用流加补料发酵工艺,利福霉素B的发酵效价还会有较大幅度提高.     

HPLC法测定滴眼用利福平片中有关物质含量

目的建立测定滴眼用利福平片中特殊杂质醌式利福平、N-氧化利福平、3-甲酰利福霉素SV及其余有关物质含量的HPLC法。方法采用Luna C8色谱柱，甲醇：乙腈：0．075mol／L磷酸二氢钾溶液：1．0mol／L枸橼酸溶液（29：32：34：4）为流动相；检测波长为254nm。醌式利福平、N-氧化利福平、3-甲酰利福霉素SV均采用加校正因子的主成分自身对照法计算。结果醌式利福平、N-氧化利福平和3-甲酰利福霉素SV的校正因子分别为1．4、1．67和1．08，3批样品中醌式利福平、N-氧化利福平、3-甲酰利福霉素SV及其余有关物质含量分别为1．1％．1．3％、0．050％．0．053％、0．025％～0．031％及0．79％～0．86％。结论该法准确、简便、快速，适用于滴眼用利福平片的质量控制。     

利福霉素钠短程治疗初治肺结核疗效观察

报道以利福霉素钠治疗初治肺结核108例，并用利福平对照观察其疗效，疗程结束，痰菌培养阴转率利福霉素组97．6％，利福平组96．9％，随访12个月细菌学复发率分别为3．4％和3．8％，两组疗效相比无统计学差异（P〉0．05）。认为利福霉素钠在短程疗效中有临床应用价值，长期应用无明显毒副作用，值得临床推广。     

力达霉素效价单位及效价测定方法的确定

目的：确定力达霉素的效价单位，并建立力达霉素效价测定方法。方法：采用DNA断裂法确定力达霉素标准品引起DNA断裂的最低浓度，并据此浓度确定力达霉素标准品的效价；采用HPLC法分析力达霉素效价与其发色团峰面积的相关性，用力达霉素发色团的峰面积表征力达霉素的效价，用HPLC法测定力达霉素的效价。结果：将首批力达霉素标准品引起pBR322DNA断裂成Ⅲ型的最低剂量规定为10^-4力达霉素单位(u)，即每1mg首批力达霉素标准品的效价为896u；力达霉素效价与其发色团峰面积呈线性关系(r=0．9995)，根据力达霉素发色团的峰面积可以确定力达霉素的效价。结论：本文采用的效价单位确定方法“溯源性”明确；采用HPLC法测定力达霉素的效价可以大大提高传统生物检定的精度。     

树脂法提取发酵液中利福霉素SV的研究

主要研究了树脂法提取发酵液中的利福霉素SV。结果表明，抚顺市鑫泰参茸保健品有限公司精细化工分公司生产的大孔吸附树脂DAl01A、DA201A，在水溶液中对利福霉素SV的最大吸附量分别为28．31mg／ml和25．19mg／ml。吸附后的DAl01A、DA201A树脂洗脱利福霉素SV的最佳洗脱剂为甲醇、乙醇70％（v／v）水溶液．发酵液经过滤后上柱吸附．洗脱后的利福霉素SV的收率分别高于85％和90％。     

低分子甲壳铵修饰胰岛素生物效价的测定

目的：研究低分子甲壳铵（LTMC）修饰胰岛素（Ins）的生物效价。方法：采用Ins效价测定方法对Ins-LTMC进行效价测定，使用量反应平行线测定双交叉设计法计算效价及试验误差。结果：Ins-LTMC效价为12．386U·mg^-1，可信限率为FL％=8．5454％，符合药典规定。结论：Ins-LT—MC效价与估计效价相当，该修饰对Ins的活性影响较小。Ins-LTMC经皮下注射给药后，具有与Ins相当的降糖效果。     

利福霉素产生菌U40的选育

利福霉素SV(Rifamycin)是广谱抗生素之一，也是合成利福平、利福定等抗结核药的重要的中间体。它是由地中海诺卡氏菌经液体发酵、提取、纯化而得。而地中海诺卡氏菌为多核的放线菌，稳定性较差，负变率较高。因此在原有生产条件不变的条件下要坚持不断的进行菌种选育工作以提高发酵水平。为此我们以S25为出发菌株，经紫外诱变处理进行菌种选育。     

通过获得链霉素抗性基因(str)突变株筛选梅岭霉素高产菌株

本文通过链霉素对梅岭霉素（meilingmycin）产生菌南昌链霉菌NS－41－80菌株孢子致死浓度的测定，采用诱变剂EMS四种不同诱变剂量对菌株的孢子进行诱变处理，诱变处理的孢子涂布在含链霉素致死浓度的高氏平板上，获得了大量的链霉素抗性基因（str）突变株。然后从链霉素抗性基因突变株进一步筛选到梅岭霉素高产菌株80－5．11－221，在摇瓶条件下，只产梅岭霉素不产南昌霉素，梅岭霉素活性效价达1500μg/ml，比出发菌株NS－41－80的摇瓶发酵效价855μg/ml提高了77．9％，该菌株连续传代六代进行摇瓶发酵，其F2代和F3代梅岭霉素发酵效价稳定，F4代至F6代随着传代数增加，其梅岭霉素发酵效价急速下降。通过EMS诱变剂量分别与抗药性突变率和链霉素抗性基因突变株产梅岭霉素产量的产势统计分析表明，菌株抗药性突变与产抗生素突变密切相关，产抗生素突变的EMS诱变剂量高于链霉素抗性基因突变诱变剂量。在0．03mol/L的EMS剂量作用下，菌株致死率为99．43％，而抗药性突变率为0．0440％，建立了梅岭霉素产生菌链霉素抗性基因突变筛选方法，为南昌链霉菌高产菌种选育研究作了有益的尝试，并有助于其它链霉菌属的抗生素产生菌育种研究。     

环桥类抗菌素,一类新的微生物代谢产物

50年代末,Sensi等曾报导从地中海链霉菌得到的代谢产物的复合物,称作利福霉素(Rifomycin),由于和当时已被命名的另一个抗菌素绛霉素(Rufomycin)混淆,后重新改名为利福霉素(Rifamycin)。最初人们分离出利福霉素A至E,以后又分离并测定了利福霉素L及Y的特性。开始以利福霉素B用化学方法进行结构改造得到利福霉素O,S及SV,后又从地中海链霉菌及另一株诺卡氏菌(Nocardia)的培养液中直接分离得到。所以这些化合物不仅能人工半合成,也是代谢产物。曾命名为Nancimycin的抗菌素实际上就是利福霉素。