病毒性心肌炎小鼠T淋巴细胞凋亡的调控与清心胶囊的干预作用

目的:观察病毒性心肌炎(VMC)T细胞凋亡与凋亡蛋白表达的变化以及清心胶囊对这一环节的干预作用.方法:复制VMCBALB/c小鼠模型,给予清心胶囊治疗后,采用光镜和透射电镜观察心肌病理改变,Annexin v/PI 双染色流式细胞术和透射电镜观察T淋巴细胞凋亡;流式细胞术检测Fas、FasL、bcl-2及Bax蛋白在T细胞上的表达.结果:(1)模型组小鼠心肌病变明显,治疗组心肌病理改变明显减轻,正常组心肌无明显病理改变.(2)与正常组比较,VMC小鼠脾T细胞的凋亡率均显著升高(P＜0.01);与模型组比较,治疗组小鼠脾T细胞的凋亡率均显著降低(P＜0.01),但与正常组比较,仍有显著性差异(P＜0.01).透射电镜下可见正常T细胞和凋亡T细胞的典型形态,模型组T细胞凋亡增多.(3)与正常组比较,模型组小鼠脾T细胞Fas、FasL表达均显著升高(P＜0.01),bcl-2表达均显著降低(P＜0.01);与模型组比较,治疗组小鼠脾T细胞FasL表达均显著降低(P＜0.01),bcl-2表达均显著升高(P＜0.01、),Fas表达无统计学差异(P＞0.05);与正常组比较,治疗组小鼠脾T细胞FasL表达无显著性差异(P＞0.05),Fas、bcl-2表达仍有显著性差异(P＜0.05);而Bax表达各组间均无显著性差异(P＞0.05).结论:VMC发病过程中存在T细胞过度凋亡现象,这与Fas、FasL表达升高和bcl-2表达降低有关;清心胶囊能够显著抑制T细胞的过度凋亡,与其下调FasL表达和上调bcl-2表达有关.     

清心胶囊对病毒性心肌炎小鼠不同分期T细胞凋亡及凋亡蛋白表达的影响

目的:观察病毒性心肌炎(VMC)不同分期T细胞凋亡与凋亡蛋白表达的变化以及清心胶囊对这一环节的干预作用.方法:参照文献方法复制VMC急性期和恢复期BALB/c小鼠模型,给予清心胶囊治疗后,采用光镜和透射电镜观察心肌病理改变,Annexin v/PI双染色流式细胞术和透射电镜观察T淋巴细胞凋亡;流式细胞术检测Fas、FasL、bcl-2及Bax蛋白在T细胞上的表达.结果:(1)无论急性期还是恢复期,模型组小鼠心肌病变明显,治疗组心肌病理改变明显减轻,正常组心肌无明显病理改变.(2)与正常组比较,VMC急性期、恢复期小鼠脾T细胞的凋亡率均显著升高(P＜0.01);与模型组比较,无论急性期还是恢复期,治疗组小鼠脾T细胞的凋亡率均显著降低(P＜0.01),但与正常组比较,仍有显著性差异(P＜0.01).透射电镜下可见正常T细胞和凋亡T细胞的典型形态,模型组T细胞凋亡增多.(3)与正常组比较,急性期、恢复期模型组小鼠脾T细胞Fas、FasL表达均显著升高(P＜0.01),bcl-2表达均显著降低(P＜0.01);与模型组比较,急性期、恢复期治疗组小鼠脾T细胞FasL表达均显著降低(P分别＜0.01、0.05),bcl-2表达均显著升高(P分别＜0.01、0.05),Fas表达无统计学差异(P＞0.05);无论急性期还是恢复期,Bax表达各组间均无显著性差异(P＞0.05).结论:VMC急性期、恢复期均存在T细胞过度凋亡现象,这与Fas、FasL表达升高和bcl-2表达降低有关;清心胶囊能够显著抑制T细胞的过度凋亡,与其下调FasL表达和上调bcl-2表达有关.     

密蒙花颗粒剂对去势雄兔泪腺细胞凋亡因子Bax、Bcl-2、Fas和FasL的影响

目的观察密蒙花颗粒剂对去势雄兔泪腺细胞凋亡因子Bax、Bcl-2、Fas和Fas L的影响,探讨密蒙花颗粒剂对去势雄兔干眼症模型的疗效。方法将密蒙花原药材制备成颗粒剂。将30只健康成年新西兰长耳白兔(雄性),随机分为空白组(A组),模型组(B组),密蒙花颗粒剂组(C组),安慰剂组(D组),睾酮组(E组)5组,每组6只。除A组外其余4组实验用兔行双侧睾丸及附睾切除术。除A、B组外,从术后第3日开始C组予密蒙花颗粒剂,按100 mg/kg灌胃,3次/日;D组予生理盐水20 m L灌胃,3次/日;E组按2 mg/kg在大腿肌肉处注射丙酸睾酮注射液,每3日注射1次。各组实验用兔,分别于术前和术后第4周各进行1次SchirmerⅠ试验(SchirmerⅠtest,SⅠT)和泪膜破裂时间(tear break-up time,BUT)测定。用药观察4周后采用空气栓塞法处死各组兔子,摘取双眼泪腺组织,采用免疫组化法对泪腺细胞凋亡因子Bax、Bcl-2、Fas和Fas L的表达进行检测,并观察泪腺组织结构形态图。结果 (1)SⅠT及BUT结果:与本组术前及术后A组比较,B、D组SⅠT及BUT均明显下降(P0.01);与B、D组术后比较,C、E组SⅠT及BUT升高,且差异均有统计学意义(P0.01)。(2)Bax、Bcl-2、Fas、Fas L表达:与A组比较,B、D组Bax、Fas、Fas L表达均明显增多,Bcl-2表达明显减少(P0.01);与B、D组比较,C、E组Bax、Fas、Fas L表达均明显减少,Bcl-2表达明显增多(P0.01)。(3)Bax、Bcl-2、Fas、Fas L表达观察结果:A组:泪腺结构清晰,未见Bax、Bcl-2、Fas、Fas L表达;B组:泪腺结构模糊,Bax、Fas、Fas L均大量表达于细胞膜和细胞浆中,呈棕黄色颗粒,Bcl-2仅少量表达;C组:泪腺结构清晰,散见Bax、Fas、Fas L表达,Bcl-2大量表达于细胞膜和细胞浆中,呈棕黄色颗粒;D组:泪腺结构模糊,Bax、Fas、Fas L均大量表达于细胞膜和细胞浆中,呈棕黄色颗粒,Bcl-2仅少量表达;E组:泪腺结构清晰,散见Bax、Fas、Fas L表达,Bcl-2未见表达。结论密蒙花颗粒剂具有与雄激素相似的抑制泪腺细胞凋亡因子Bax、Fas和Fas L表达,同时上调Bcl-2的作用,能抑制雄激素缺乏所致兔泪腺细胞的凋亡,维持泪腺基础分泌量,但其作用弱于雄激素。     

电针对吗啡戒断大鼠胸腺细胞凋亡相关基因的影响

目的:探讨电针抗吗啡戒断大鼠胸腺细胞凋亡的作用机制。方法:40只SD大鼠随机分为正常组、对照组、依赖组、电针组,连续20d递增量肌肉注射吗啡造成吗啡成瘾模型。造模后,依赖组立刻处死;对照组观察7d后处死;电针组电针双侧"足三里"穴(2/100Hz,2~4mA),每日1次,每次30min,治疗7d后处死。取大鼠胸腺,用免疫组化法检测凋亡基因Bcl-2、Bax、Fas、FasL蛋白表达。结果:与正常组比较,对照组和依赖组Bcl-2表达明显减少,Bax明显增加(P<0.01);电针组与对照组相比,Bcl-2表达上升(P<0.05),Bax表达的下降尚未达到统计学意义(P>0.05)。对照组及依赖组Fas、FasL的表达比正常组明显升高(P<0.01);电针组与对照组相比,Fas、FasL的表达均明显减少,差异显著(P<0.01)。结论:电针"足三里"穴增加吗啡戒断大鼠胸腺细胞内Bcl-2蛋白表达的水平,减少Bax蛋白表达水平,降低Bax/Bcl-2比值,抑制Fas、FasL表达水平的提高,可能是电针抗吗啡戒断大鼠胸腺细胞凋亡的作用机制之一。     

黄芪金樱子合剂改善氧化低密度脂蛋白诱导大鼠肾系膜细胞凋亡的研究

目的:观察黄芪金樱子合剂对氧化低密度脂蛋白(OX-LDL)诱导大鼠肾系膜细胞凋亡的影响及干预途径.方法:应用不同浓度(高、中、低)黄芪金樱子合剂的大鼠含药血清,与OX-LDL(浓度为100μg/ml)及大鼠肾系膜细胞(RMC)共同培养24h,采用流式细胞仪检测细胞凋亡指标AnnexinV、Caspase 3和逆转录-聚合酶联扩增法(RT-PCR)观察Caspase 3、Bcl-2/Bax、Fas、FasL表达的变化.结果:不同浓度黄芪金樱子合剂可显著减少OX-LDL诱导的RMC凋亡细胞数目(P＜0.05),抑制Caspase 3的基因和蛋白质表达(P＜0.05),降低Fas和FasL的基因表达(P＜0.05),提高Bcl-2/Bax的比率(P＜0.05),但量效关系不明显.结论:黄芪金樱子合剂具有改善OX-LDL诱导大鼠肾系膜细胞凋亡的药理学效应.     

调肝理脾方药血清对大鼠离体肝星状细胞相关凋亡基因产物的影响

目的:探讨中药复方调肝理脾方诱导大鼠肝星状细胞凋亡的环节及作用.方法:培养大鼠肝星状细胞,给予乙醛的干预,免疫细胞化学和图象半定量分析的方法测定各肝星状阳性细胞的平均灰度值.结果:中剂量和高剂量组方药血清可以通过减少Bcl-2和FasL的表达与增加p53和Fas的表达,促进活化的肝星状细胞凋亡(P＜0.01,P＜0.05),并且其诱导凋亡作用中Bcl-2的表达是高度敏感的.结论:调肝理脾方药血清可以通过减少Bcl-2和FasL的表达与增加p53和Fas的表达的环节干预大鼠肝星状细胞凋亡.     

艾灸对慢性心力衰竭大鼠心室质量指数及心肌组织凋亡相关蛋白表达水平的影响

目的:观察艾灸对慢性心力衰竭(CHF)大鼠心功能及心肌组织凋亡蛋白B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关的X蛋白(Bax)、Fas及其配体FasL表达水平的影响,探讨艾灸防治CHF的可能机制。方法:SD大鼠随机分为正常组、模型组、艾灸组、卡托普利组、艾灸+卡托普利组(简称艾卡组),每组12只。采用隔日腹腔注射盐酸多柔比星的方法复制CHF模型。艾灸组用艾条温和灸双侧"肺俞""心俞"穴;卡托普利组用卡托普利混悬液(5mg/mL,25mL/kg)灌胃;艾卡组先灌服卡托普利混悬液,再行艾灸;均每日1次,连续3周。观察大鼠一般情况及行为体征;计算左心室质量指数(LVMI)和右心室质量指数(RVMI);HE染色观察心肌组织病理变化;酶联免疫吸附法检测血清B型脑钠肽(BNP)与N末端前脑利钠肽前体(NT-pro BNP)含量;蛋白免疫印迹法检测心肌细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Fas、FasL的表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠心肌细胞出现横纹不清,细胞肿胀、空泡等情况,其LVMI和RVMI显著增高(P0.01),血清BNP、NT-pro BNP含量明显升高(P0.01),Bax及Fas、FasL表达水平显著上升(P0.01),Bcl-2表达下降(P0.01)。与模型组比较,3个治疗组LVMI及RVMI显著降低(P0.05,P0.01),血清BNP含量显著下降(P0.01),Bax及Fas、FasL表达水平均显著下降(P0.01),Bcl-2表达明显升高(P0.01),艾灸组和艾卡组血清NT-pro BNP含量下降(P0.05,P0.01)。与艾卡组比较,艾灸组与卡托普利组Bax及Fas、FasL表达水平升高(P0.05,P0.01),Bcl-2表达水平降低(P0.05)。结论:艾灸可以改善CHF大鼠心肌损伤,其作用可能与降低Bax、Fas、FasL蛋白表达,上调Bcl-2表达,抑制心肌细胞凋亡有关。     

商陆皂苷甲对BXSB小鼠狼疮肾炎凋亡的影响

目的通过观察商陆皂苷甲(Es A)对BXSB小鼠肾脏细胞凋亡的影响,探讨Es A对狼疮肾炎的作用机制。方法将24只18周龄雄性BXSB小鼠随机分为模型组、地塞米松组和Es A组,腹腔注射相应药物治疗4周后留取肾组织标本,采用原位末端标记法检测肾脏细胞凋亡情况,免疫组化检测组织中Bax、Bcl-2、Fas、Fas L表达情况。结果 13组间肾小球和肾小管细胞的凋亡指数差异有统计学意义(P0.05),Es A组凋亡指数最高,其次为地塞米松组。2与模型组比较,两治疗组小鼠肾组织Bcl-2光密度值显著下降(P0.05),Es A和地塞米松治疗组间无统计学差异(P0.05);3组间Bax的表达比较差异无统计学意义(P0.05);而3组间肾组织Bcl-2/Bax的比值比较差异有统计学意义(P0.05)。3与模型组比较,两治疗组BXSB小鼠的肾组织Fas、Fas L光密度值明显增加(P0.05),Es A和地塞米松治疗组间差异无统计学意义(P0.05)。结论 Es A具有诱导BXSB小鼠肾小球和肾小管细胞凋亡作用,其通过下调BXSB小鼠肾组织中Bcl-2表达及上调Fas、Fsa L表达而促进细胞凋亡的发生。     

黄芪糖蛋白诱导佐剂性关节炎大鼠体内细胞凋亡的研究

目的:探讨黄芪糖蛋白对佐剂性关节炎大鼠体内细胞凋亡的诱导作用。方法:建立大鼠佐剂性关节炎模型,治疗2周后,取外周血、膝关节滑膜组织,分别使用流式细胞术和原位末端标记(TUNEL)法检测外周血淋巴细胞和膝关节滑膜组织的细胞凋亡情况,使用免疫组织化学法检测膝关节滑膜组织中Fas、FasL的蛋白表达水平。结果:低剂量黄芪糖蛋白可提高外周血CD4+、CD+8细胞的凋亡比例(P<0.05),低、中、高剂量黄芪糖蛋白均可增加膝关节滑膜组织的细胞凋亡率(P<0.01),同时降低Fas表达水平(P<0.01),增强FasL表达水平(P<0.01)。结论:黄芪糖蛋白可诱导佐剂性关节炎大鼠外周血淋巴细胞及膝关节滑膜组织细胞凋亡,且调节滑膜组织中Fas、FasL的蛋白表达水平。     

痹通对AA细胞凋亡调控基因表达影响的实验研究

目的 :研究养血活血方对试验大鼠细胞凋亡调控基因Fas、FasL、Bcl- 2表达的影响。方法 :通过免疫组化法检测滑膜组织中Fas、FasL、Bcl- 2表达 ,以及给药后其表达的变化。结果 :B组大鼠滑膜组织中Fas、FasL表达较低 ,Bcl- 2表达较高 ,痹通各治疗组均可改善这一状态 ,与B组比较 ,差异具有显著性意义 (P <0 .0 5 )。与C组比较 ,E、F组疗效较好 ,差异具显著性意义 (P <0 .0 5 )。结论 :养血活血方可通过调节滑膜中Fas、FasL、Bcl- 2的表达促进滑膜细胞凋亡 ,血虚血瘀证在RA存在的可能性大于单纯血瘀证。     

青蒿琥酯对佐剂性关节炎滑膜组织中凋亡因子Fas／FasL及Bcl-2／Bax表达影响的实验观察

目的观察青蒿琥酯对佐剂性关节炎滑膜组织中凋亡因子Fas/FasL及Bc l-2/Bax表达的影响。方法雄性W istar大鼠60只随机分为6组,空白组、模型组(对照组)、青蒿琥酯I组(高剂量组)、青蒿琥酯Ⅱ组(低剂量组)、青蒿琥酯加甲氨喋呤组及甲氨喋呤组。除空白组外,各实验组用完全弗氏佐剂制备成佐剂性关节炎模型。记录用药干预后各组关节肿胀指数,免疫组化法检测滑膜组织中凋亡相关因子Fas/FasL,Bc l-2及Bax的表达情况。结果各实验组关节肿胀指数明显降低,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。滑膜组织中Fas/FasL及Bax被上调,Bc l-2被下调,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论实验证实了青蒿琥酯有诱导佐剂性关节炎病情缓解的作用,上调滑膜组织中Fas/FasL及Bax,下调Bc l-2的表达而诱导滑膜细胞凋亡可能是其机制之一。     

参芪止疱颗粒治疗复发性生殖器疱疹30例临床观察

目的 观察参芪止疱颗粒治疗复发性生殖器疱疹(RGH)的临床疗效及对外周血T淋巴细胞亚群的影响.方法 60例患者按随机数字表法分为治疗组和对照组,各30例.治疗组口眼参芪止疱颗粒;对照组口眼泛昔洛韦片,连续用药1个月,服药7天后评定近期疗效,6个月后进行抗复发疗效判定;两组患者均采用流式细胞仪测定治疗前后外周血T淋巴细胞亚群的变化,并比较两组患者症状消失时间、止痛时间、结痂时间和痊愈时间.结果 治疗组和对照组近期疗效相当,差异无统计学意义(P＞0.05);抗复发疗效治疗组优于对照组,差异具有统计学意义(P＜0.05);治疗组治疗后T淋巴细胞CD3~+、CD4~+升高(P＜0.01),对照组治疗前后上述指标无明显变化.两组治疗后CD3~+、CD4~+比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 参芪止疱颗粒治疗RGH近期疗效与泛昔洛韦相当,抗复发疗效优于泛昔洛韦片,且能提高机体免疫力,降低复发率.     

黄芪注射液对系统性红斑狼疮患者细胞凋亡和免疫功能的影响

目的研究黄芪注射液对系统性红斑狼疮（SLE）细胞凋亡和免疫功能的影响,探讨其对系统性红斑狼疮的治疗作用.方法将80例初发SLE患者随机分为常规治疗组和黄芪治疗组（在常规治疗的基础上加用黄芪注射液）.观察两组患者治疗前后外周血淋巴细胞上Fas、Bcl-2抗原的表达和T淋巴细胞亚群的变化.结果两组患者治疗后外周血淋巴细胞上Fas抗原的表达下调（P＜0.01）,Bcl-2抗原的表达以及CD4^＋亚群、CD4^＋/CD8^＋比值上升（P＜0.01）;其中,治疗后Fas抗原表达的下调、CD4^＋亚群及CD4^＋/CD8^＋比值的上升,黄芪治疗组更显著（P＜0.05）.结论黄芪注射液在一定程度上增加了激素或免疫抑制剂对细胞凋亡的抑制作用,调节T淋巴细胞亚群比例和功能趋于正常,可以作为提高系统性红斑狼疮疗效的重要治疗措施.     

CD_4~+CD_(25)~+调节性T细胞在儿童特发性血小板减少性紫癜患者中的表达及意义

目的探讨儿童特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者CD4+CD25+调节性T细胞的表达及意义。方法用流式细胞术检测27例ITP患儿和21例健康儿童外周血T淋巴细胞亚群的比例,以及CD4+T淋巴细胞表面CD25、FasL和Fas的表达率。结果ITP患儿CD3、CD4、CD4/CD8比值与对照组比较显著降低,CD4+CD25+调节性T细胞明显减少,CD4+CD25-细胞无明显改变,CD4+FasL+增多,CD4+Fas+减少。结论儿童ITP患者CD4+CD25+调节性T细胞显著减少,破坏自身免疫耐受,在ITP的发病中起重要作用。     

补肾颗粒对慢性再生障碍性贫血患者CD28、CD95表达的影响

目的探讨补肾颗粒治疗慢性再生障碍性贫血(CAA)的作用机制。方法将CAA患者分为中药组(60例)和环胞菌素A组(CsA组,16例);中药组以补肾颗粒为主辨证治疗,CsA组以环孢菌素A为主治疗,疗程6个月,另设健康对照组20名,比较健康对照组与CAA各组治疗前后CD3+、CD3+CD28+、CD3+CD95+的表达水平。结果CAA各组治疗前CD3+、CD3+CD28+、CD3+CD95+的表达均较健康对照组高(P0.05),以肾阴虚型表达异常更甚。各组治疗后CD28表达下调,CD95表达上调。结论CAA患者T细胞CD28及CD95表达异常;补肾颗粒可能通过调节CD28及CD95水平调控CAA患者T细胞的异常激活和凋亡,从而促进造血功能恢复。     

Effects of Xinfeng capsule on the Fas/FasL-mediated apoptotic pathway in patients with rheumatoid arthritis

OBJECTIVE:To observe the effects of Xinfeng capsule on the apoptosis of peripheral blood CD4+ T lymphocytes and changes in the Fas/Fas L-mediated apoptotic pathway in patients with rheumatoid arthritis(RA).METHODS:A total of 28 RA patients were included in the study;they were randomly divided into the Xinfeng capsule(XFC) group(3 capsules,3 per day)and the leflunomide(LEF) group(1 pellet,once per night).The treatment course in each groups was 12 weeks.The normal control(NC) group consisted of10 healthy people.The apoptotic rate was examined using flow cytometry.Fas,Fas L,caspase 8,caspase 3,bcl-2,and bax m RNA were examined using q RT-PCR.Apoptotic proteins Fas,Fas L,caspase8,and caspase 3 were examined using western blotting.RESULTS:After treatment,patients in the two groups all showed some trend of improvement.Disease activity indexes,joint morning stiffness time,joint swelling/tenderness number,health assessment questionnaire(HAQ) score,RA quality of life(RAQOL) questionnaire,and self-rating anxiety scale(SAS),as well as all apoptotic related indicators were reduced in both groups after treatment with no significant difference between groups.But the improvement in terms of the self-rating depression scale(SDS) in the XFC group was better than in the LEF group.RA patients showed lower apoptotic rates in CD4+ T cells,lower bax,Fas,caspase 8,and caspase 3 m RNA,and less protein expression of Fas,caspase 8,and caspase3 than in the NC group.These indicators increased after treatment.However,the level of Bcl-2 m RNA was higher in the XFC group than in the NC group before treatment,and it subsequently decreased.The XFC group expressed lower Bcl-2 m RNA than the LEF group.Negative correlations were found between ESR and the apoptotic rate in CD4 + T cells,Fas,and caspase 3;CRP and Fas;and,swollen joint count and Bax,while positive correlations were found between ESR and Bcl-2.CONCLUSION:XFC can regulate the Fas/Fas L system and promote CD4+ T cell apoptosis and thus reduce the abnormal immune response,which can improve symptoms in RA patients.     

增血汤联合生血散对特发性血小板减少性紫癜患者外周血CD4^＋T淋巴细胞表面FasL和Fas的影响

目的：观察增血汤联合生血散对特发性血小板减少性紫癜（ITP）患者外周血CD＋4T淋巴细胞表面FasL和Fas的影响,并评价其在ITP机制研究和治疗中的价值。方法：收集ITP患者26例作为治疗组,同时取35例健康体检者为对照组,应用流式细胞仪检测对照组及ITP患者治疗前后外周血CD＋4T淋巴细胞表面FasL和Fas的水平。结果：对照组及接受以上治疗后ITP患者外周血FasL水平明显低于未治疗者,两者有显著性差异（P〈0.05）,而Fas水平无明显变化。结论：ITP患者外周血淋巴细胞表达FasL增高,增血汤联合生血散可显著减少此类细胞表达,为治疗ITP提供新的方法。