Tunel染色法对胚胎期小鼠肾小体内细胞凋亡的定量学研究

目的：定量研究胚胎期小鼠肾小体发生和发育过程中的细胞凋亡现象。方法：选用昆明种成年健康小白鼠，按雌、雄比例3：1同窝饲养，以观察到雌鼠阴道栓形成的最早时间计为怀孕的开始，分别记录受孕时间。选取胚龄13天后的各日龄孕鼠，每日龄分别取3只孕鼠，每只孕鼠只取2只胎鼠。先对孕鼠用乙醚麻醉后剖腹取出胎鼠，然后行断头法将胎鼠处死，     

出生前后大鼠胸腺的体视学初步分析

<正> SD大鼠第16天的胎鼠(F16)和生后1 天(N_1)和5天(N5)的乳鼠,取其胸腺称重,测比重计算色埋前体积。组织切成小块后用戊二醛和四氧化锇先后固定,树脂包埋,作1μm切片,甲苯胺蓝染色,油镜观     

观察大鼠胚胎心内膜垫发育时的切面选择

心内膜垫 ( endocardialcushion,EC)是整个胚胎心脏发育过程中的重要部位 ,本文旨在研究不同切面时胎龄( ED) 1 1 d～ 1 9d Wistar大鼠胚胎 EC的形态学表现 ,探讨观察大鼠胚胎心内膜垫发育的最佳切面 ,为进一步开展心脏胚胎发育生物学提供形态学基础及技术支持。材料和方法 :实验动物用清洁级 ED1 1 d～ 1 9d Wistar大鼠胚胎 ,同一胎龄各取 1 5只胎鼠 ,将其经 1 0 %中性福尔马林固定 2 4hr,常规石蜡包埋 (融点 5 3℃ )、切片 (厚度 5 μm)后 HE染色 ,光镜下观察。每一胎龄各取 5只胎鼠分别行冠状切、水平切及矢状切。结果 :ED1 1 d E…     

免疫胶体金在标记超薄切片中抗原的几点体会

金标法是利用胶体金在碱性环境中带负电的性质 ,使其与抗体相吸引 ,从而将抗体标记。我们在使用免疫胶体金标记超薄切片抗原的实验中深深地体会到 ,要提高标记阳性的成功率 ,某些因素将在实验中起到很重要的作用。1、材料和方法1 .1材料　 2 0例通过光镜、免疫荧光、电镜诊断为 Ig A肾病的肾活检组织的环氧树脂包埋块。1 .2方法　取肾活检组织 ,经 0 .0 5 %戊二醛 ,1 %多聚甲醛 (二甲砷酸钠缓冲液配制 )固定 3- 4 h,1 % Os O4后固定 2 h,梯度丙酮脱水 ,Epon81 2包埋 ,6 0℃聚合 1 2 h,制备超薄切片 ( 5 0 - 70 nm) ,粘贴于带有 formar膜的…     

Slit2在小鼠肾脏发育过程中的表达

目的观察并检测Slit2在小鼠肾脏发生发育过程中的定位和表达变化,探索Slit2对肾脏发生发育的调节作用。方法分别选取胚龄(E)12、14、16、18天胎鼠和生后(N)1、7、14、21、40天仔鼠,每组随机选取10只。胚龄12天取全胚,其余各组胎鼠或小鼠剖腹取肾脏,制备石蜡切片和提取蛋白。通过免疫组织化学技术系统观察小鼠肾脏Slit2的表达和定位;通过蛋白印迹技术检测各组小鼠肾脏Slit2的表达变化。结果Slit2在胚龄12天肾脏的生肾区即开始表达。其中,Slit2在输尿管芽明显表达,在生后肾组织中仅在输尿管芽周围的间充质聚集部位表达,其余部位并无广泛表达。随着肾脏的发育,Slit2在肾小体发育的逗号小体阶段、S小体阶段有较强的表达,在Ⅲ期肾小体阶段,Ⅳ期肾小体阶段及成熟肾小体阶段有微弱的表达。在肾脏早期髓质出现后,Slit2在近端小管、远端小管和集合管均有表达。Slit2表达量从胚龄14天到胚龄16天轻度增加,从胚龄16天到生后40天逐渐减少。结论 Slit2在发育各阶段的肾小体、发育及成熟期的泌尿小管中均有表达,提示其对肾小体和泌尿小管的发育可能具有重要的作用。     

甲基丙烯酸羟乙酯塑料包埋切片技术在小鼠胎脑组织学分析中的应用

目的 探索塑料包埋切片法在小鼠胎脑组织学分析中的应用。 方法 取胚胎期13.5d（E13.5）小鼠,4% 多聚甲醛4℃固定过夜,分离胎鼠头部,甲基丙烯酸羟乙酯(HEMA)塑料包埋组织并切片;对切片进行HE 染色。 结果 与石蜡包埋相比,采用HEMA塑料包埋的方法进行胎鼠脑组织学分析,形态结构保存较完整、HE染色效果较清晰。 结论 利用塑料包埋技术进行小鼠胎脑组织学分析,优于石蜡包埋方法。     

小鼠雄性生殖细胞生后发育中的程序性死亡

为了观察小鼠睾丸生后发育过程中生殖细胞自发死亡的方式与规律。用生后０、１、４、７、１０、１３、１８和５０ｄＡ／Ｊ系不鼠，一侧睾丸用２．５％戊二醛，另一侧睾丸用４％多聚甲醛固定１８ｈ后，分别用树脂或石蜡包埋，年鉴备超薄和连续石蜡切片，进行电镜观察和ＴＵＮＥＬ染色光镜观察。电镜观察显示，在出生当日，可见个别呈死特征的变性生殖细胞，核质溶解，但无染色质聚集。核周间隙扩大，线粒体和内质网等细胞器肿胀，有空     

庆大霉素在肾近端小管吸收途径的形态学证据

利用活体肾小管显微穿刺技术 ,将 3H-庆大霉素注入近端小管腔内 ,间隔 5分钟、2 0分钟后 ,用 1%戊二醛分别固定各自的肾小管 ,摘除肾脏 ,将含有显微穿刺的肾小管取出 ,1%锇酸后固定 1小时 ,逐级酒精脱水 ,Epon812包埋 ,半薄、超薄切片 ,铀铅双重染色。光镜放射自显影切片 ,浸入 L M- 1乳胶 7～ 8秒钟 ,置 4℃冰箱中 1～ 2周 ,显影、定影、甲苯胺兰染色 ,显微镜观察并摄影。电镜放射自显影超薄切片 ,碳喷镀后 ,利用金属套环法将 Ilfore- L4核乳胶涂片 ,放置 4℃冰箱中 2～ 3个月 ,显影、定影。JEM- 12 0 0型电子显微镜观察。结果 :光镜放…     

水通道蛋白-3在小鼠肾集合管发育中的表达

目的:观察水通道蛋白-3(AQP-3)在小鼠肾集合管发育过程中的表达,探讨其与小鼠肾集合管发育的关系及作用.方法:免疫组织化学SABC染色、免疫荧光技术结合体视学方法以及免疫印迹技术检测胎鼠及仔鼠肾AQP-3的表达.结果:AQP-3在胚龄14 d的胎鼠可见微弱的表达,其表达部位为集合管主细胞的基侧面膜.体视学测量和免疫印迹均显示AQP-3从胚龄14 d的胎鼠开始表达,随着胚龄的增加,其表达量逐渐增加,到生后1 d,达到最高水平,此后其表达量几乎维持在较高水平.结论:推测AQP-3在小鼠肾发育中对水平衡具有重要的调节作用,对尿浓缩能力完善的限制性作用不大.     

电镜半薄切片应用于光镜研究的探讨

电镜半薄切片通常用于电镜超薄切片前的定位观察 ,我们在定位观察时发现 ,由于切片薄 ,结构显示清晰 ,可用于光镜研究 ,其观察结果优于石蜡切片。多年来 ,我们已将电镜半薄切片应用于实验研究和研究生课题实验。方法 :取材后将组织修为 1立方毫米左右 ,常规电镜样品处理 ,环氧树脂 6 18包埋 ,修块 ,L KBV型超薄切片机切片 ,切片厚度 1微米 ,脱树脂后 ,苏木精染色 ,H· E或甲苯胺兰染色 ,37℃温箱烤干 ,封片 ,观察。结果 :苏木精染色显示 ,细胞核呈紫兰色 ,胞浆淡兰色 ;H·E染色显示 ,细胞核为紫兰色 ,细胞质淡粉红色 ,但伊红染色较石蜡…     

血管生成素-1及其受体Tie-2在小鼠肾发育中的表达

目的:观察血管生成素-1(Ang-1)及其受体Tie-2在小鼠肾发育过程中的表达特征、作用及相互关系.方法:采用免疫组织化学和免疫印迹技术检测胚龄14、16、18 d胎鼠和生后1、3、7、14、21、42 d仔鼠Ang-1和Tie-2的表达.结果:Ang-1在胚龄14 d胎鼠肾的未分化间充质细胞中呈微弱表达,随着胚(日)龄的增加,表达逐渐增强,主要分布在肾小体,间质血管以及肾小管中.Tie-2于胚龄14 d首先出现在肾间质,以后随着肾的发育,出现在肾小体以及间质血管中.结论:Ang-1和Tie-2在小鼠肾发育过程中,对肾小体毛细血管的形成、间质血管的发育及血管稳定性的维持均发挥着重要作用.     

几种半薄切片染色法的比较与改进

半薄切片是超薄切片前的一个重要步骤。光镜检查半薄切片,可确定电镜观察部位,判断组织固定和包埋的质量。半薄切片染色法很多,我们对几种常用方法进行了一些比较和改进,现将实践中的体会介绍如下,供参考。一、方法及结果:用Epon812包埋的组织块切成1微米或1.5微米厚的半薄切片,捞到滴有蒸馏水的载片上,在烘箱内烤干,待染色。1.甲苯胺兰染色法:将染液滴于切片上,在酒精灯上加热数秒钟,勿煮沸,流水冲洗,自然干燥,树胶封固后观察。不必经酒精及二甲苯,免切片皱缩不平。如染色适度,组织染成兰色,结构清楚,而树脂无色。2.苏木精—伊红染色法:锇酸固定、树脂包埋的组织,用此法难于着色,一般须先用氢氧化钾溶液脱去树脂,然后染色.为避免氢氧化钾液对组织可能产生的损伤,我们参考Chang法改用2.5%高碘酸处理切片,并用滴     

Urocortin在人足月胎盘合体滋养细胞表达的亚细胞定位

目的: 利用冰冻超薄切片免疫电镜技术, 观察研究urocortin在人足月胎盘合体滋养细胞上的表达与亚细胞定位。方法: 取材5例足月胎盘组织块固定在4%多聚甲醛液中, 每例标本分成两部分, 一部分做常规石蜡包埋切片, 免疫组化染色, 光镜下观察; 另一部分做冰冻超薄切片, A蛋白-金免疫标记, 透射电镜下观察。 结果: (1) 光镜下观察可见: urocortin主要分布在足月胎盘合体滋养细胞的胞质内。(2) 免疫电镜下观察可见: 抗urocortin金颗粒主要见于合体滋养细胞的粗面内质网上, 也见于细胞核膜上和细胞核内。结论: 足月胎盘的合体滋养细胞能合成和分泌urocortin, urocortin在胞质内合成后可内化（internalization）入胞核内, 提示人胎盘上作为肽类激素的urocortin可能存在“胞内分泌（intracrine）”现象。     

小鼠MCMV先天感染模型的构建及神经系统感染状况的观察

目的 建立小鼠巨细胞病毒(MCMV)先天感染模型,并观察其脑组织的病理变化及感染状况.方法 取孕11～13.5d的BALB/c鼠,模型组羊膜腔微量接种K181毒株(病毒量1×103 PFU),对照组注射DMEM培养液.单独饲养5d后处死孕鼠,剖宫取出胎鼠,麻醉处死,取胎鼠脑组织制作冰冻切片.胎脑组织切片常规HE染色,光镜下观察病理学变化;采用免疫酶组化及免疫荧光法检测脑组织中的MCMV早期抗原.结果 感染组胎鼠存活率为71.9％.与对照组相比,羊膜腔内接种MCMV病毒对胎鼠存活率、吸收胎率、死胎率及胎鼠头部重量无明显影响,但可致胎鼠体重降低.感染组胎鼠脑组织出现明显的病理变化.在宫内感染组,免疫酶学组化法发现脑室区、脑室管膜下区、大脑皮质和海马区可见病毒感染细胞;免疫荧光法观察到的主要感染部位与免疫酶组化法基本一致.结论 通过羊膜腔内注射MCMV病毒成功建立MCMV先天感染小鼠模型,为研究MCMV先天感染致脑发育异常机制提供合适的整体研究模型.     

大鼠肾小体发生发育的形态学研究

为探讨大鼠肾小体胚胎及生后的发生与发育规律，本研究应用光镜石蜡连续切片技术及电镜技术，结合体视学分析的方法，对胚龄14、16、18、20日，生后1、3、5、7、14、20、40日大鼠的肾小体进行了观察研究。结果表明：胚龄14天时，输尿管芽及其分支出现，肾脏主要由无差别的间充质组成。胚龄16天时逗号小体及S小体出现，     

人植入前胚胎细胞超薄电镜切片制作

目的改进人植入前胚胎细胞超薄切片的制备方法,观察不同时期人早期胚胎细胞超微结构的变化。方法选取我院生殖中心试管婴儿助孕技术后异常受精的3原核胚胎,于2~8细胞期进行固定,改进透射电镜的常规操作方法,使用3%~4%琼脂进行预包埋,制成超薄切片后在镜下观察植入前胚胎细胞凋亡的超微结构。结果使用本方法可以对少量胚胎进行超薄切片的制作。结论使用3%~4%琼脂预包埋的方法可以成功的制作人植入前胚胎细胞的超薄电镜切片。     

碘过量对仔鼠垂体促甲状腺激素细胞的形态学影响

目的探讨碘过量时60日龄大鼠仔鼠垂体TSH细胞的形态学变化。方法将断乳1个月的Wistar大鼠,雌雄各半随机分为NI组、10HI组、50HI组和100HI。饲养3个月的雌雄鼠1:1合笼交配产生仔鼠,断乳后的仔鼠喂养同上述大鼠。测定60日龄仔鼠的血清甲状腺激素水平及垂体TSH细胞的体密度和强阳性细胞百分比。结果与NI组比较,50HI组、100HI组60日龄仔鼠的体密度和强阳性细胞百分比明显增高,而10HI组无明显改变;50HI组、100HI组的血清甲状腺素高于NI组。结论碘过量可导致仔鼠TSH细胞体积增大,强阳性细胞数据多并呈剂量依赖性,可能是由于T4升高抑制TSH细胞释放TSH,使TSH颗粒贮积在细胞内造成的。     

锇酸显示肾球旁细胞法

作者试用电镜的半薄切片,经锇酸浸镀后再复染,这样就能清楚显示肾球旁细胞。本方法,操作简单,染色过程短,方法易掌握。同时在100x的光镜下能分辨肾球旁细胞内的颗粒,以及肾小球基底膜,肾小管等的微细组织结构,基本可达到科研和教学的要求。现将方法介绍如下:一、半薄切片的制备按常规的电镜样品制作过程进行,用环氧树酯(Epoxy resin)包埋剂(Epon812)包埋。二、用超薄切片机(玻璃刀装水槽)连续切片厚1微米,裱在载玻片上,放入45℃温箱内烤干,4-24小时。三、将切片脱去环氧树酯,浸入氢氧化钾无水酒精饱和液(氢氧化钾在     

慢性缺氧对早期雄性仔鼠肝胰岛素样生长因子1基因启动子区域甲基化影响

目的:研究慢性间断性宫内缺氧(CIH)对新生雄性仔鼠肝胰岛素样生长因子1(IGF-1)基因表达及其甲基化的影响。方法:建立CIH孕大鼠模型,H-E染色观察1 d龄雄仔鼠肝细胞光镜下结构;免疫组织化学法检测肝细胞IGF-1蛋白的表达;实时荧光定量PCR法检测肝组织IGF-1 mRNA的表达;亚硫酸氢盐修饰后测序检测肝组织IGF-1启动子区域位点甲基化修饰情况。结果:CIH可致胎鼠宫内生长受限,缺氧组仔鼠低出生体质量,并出现追赶性生长;缺氧组1 d龄仔代雄大鼠光镜下肝细胞有微量脂肪滴存在,缺氧组IGF-1蛋白的表达较正常组显著下降;CIH子代大鼠肝IGF-1基因启动子甲基化率较对照组明显升高。结论:CIH可致缺氧1 d龄子代雄大鼠肝IGF-1基因启动子片段1、片段2甲基化水平增高,致肝细胞IGF-1蛋白表达水平下降,参与CIH后子代雄性大鼠肝非乙醇性脂肪肝的发生发展过程。     

母源性甲亢对仔鼠肾甲状腺素受体表达的影响

目的:研究母源性甲亢对新生仔鼠肾的影响。方法:建立妊娠合并甲亢模型,取新生1、5、10和15 d仔鼠肾。分别进行解剖学及组织病理检查,采用实时定量PCR法检测甲状腺激素受体(TR)TRα_1、TRα_2、TRβ_1在肾组织中mRNA水平表达量的变化。结果:母源性甲亢仔鼠与同期对照仔鼠相比,光镜结构未见明显异常;甲亢组TRα_1的表达量略高于对照组(仔鼠1 d上调约50%,仔鼠5 d上调约32%,仔鼠15 d上调约48%);甲亢组TRα_2的表达量略高于对照组(仔鼠1 d上调约36%,仔鼠10 d上调约33%);TRβ_1的表达差异无统计学意义。结论:母源性甲亢引起甲状腺激素受体的差异表达,以TRα_1、TRα_2的变化为主,可能在甲亢引起的子代肾损伤中扮演重要角色。