肝素对大鼠肝星状细胞中转化生长因子β1和Ⅰ型胶原的影响

目的:研究肝素与大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSC)作用后转化生长因子β1 (transforming growth factorβ1,TGF-β1)和Ⅰ型胶原表达的变化及意义.方法:大鼠肝星状细胞以1×10~8/L浓度接种于96孔培养板,每孔100μL.实验分组为肝素Ⅰ组、肝素Ⅱ组、肝素Ⅲ组,加入肝素使各组培养液中肝素浓度分别是10,100,1000 mg/L,加生理盐水为对照组(每组6孔重复3次)培养48 h.培养终止后吸取上清液-20℃冰冻保存,ELISA法检测其上清液TGF-β1和Ⅰ型胶原水平,MTT法观察细胞增殖情况.结果:肝素Ⅱ组和Ⅲ组HSC培养上清液TGF-β1水平均显著低于对照组(4.59±1.27 ng/L,3.34±1.13 ng/L vs 5.95±1.72 ng/L,P均<0.01),肝素各组Ⅰ型胶原水平均低于对照组(87.20±9.30 ng/L,73.17±12.04 ng/L vs 95.61±12.55 ng/L,63.31±10.93 ng/L vs 95.61±12.55 ng/L,P均<0.05),肝素Ⅲ组平均吸光度低于肝素Ⅰ组和对照组(0.29±0.07 vs 0.42±0.12,0.46±0.17,P均<0.05).结论:大鼠肝星状细胞在肝素作用下TGF-β1和Ⅰ型胶原分泌受抑制,其增殖减少.     

罗格列酮对肝星状细胞增殖与胶原合成的影响

目的 观察罗格列酮对肝星状细胞增殖与Ⅰ型胶原合成的影响.方法 采用HSC-T6肝星状细胞系,将培养的肝星状细胞(HSC)分为对照组、不同浓度的罗格列酮组(5、10、20 μmol/L).采用MTT法观察罗格列酮对HSC增殖的影响,采用ELISA法检测细胞培养液上清中Ⅰ型胶原的含量.结果 与对照组相比,在10、20μmol/L罗格列酮组,罗格列酮可以抑制HSC的增殖(P<0.05),同时细胞堵养液上清中Ⅰ型胶原含量分别为135.72±6.00 ng/ml、128.65±5.34 ng/ml,均低于对照组(149.35±6.65 ng/ml),差异有统计学意义(P<0.05).结论 罗格列酮可以抑制HSC的增殖,抑制肝星状细胞Ⅰ型胶原的合成.     

前列腺素E1对梗阻性黄疸大鼠肝脏缺血再灌注损伤时白介素-1β表达的影响

目的: 探讨前列腺素(PG)E1对梗阻性黄疸肝脏缺血再灌注损伤的保护作用以及对IL-1beta表达的影响. 方法: 将♂Wistar大鼠随机分为PGE1处理组(PG组, n = 18)和生理盐水对照组(NS组, n = 18). 参照Yoshidome法结扎并切断胆总管建立梗阻性黄疸模型, 1 wk后Pringle法阻断肝门15 min, 再灌注后建立胆道再通. 于缺血前15 min至再灌注60 min, PG组经门静脉持续泵入PGE1 0.5 mug/(kg·min), NS组给予等量生理盐水. 于再灌注1、6和24 h 3个时点取材, 检测血清ALT, AST, 总胆红素(total bilirubin, TBIL), 直接胆红素(direct bilirubin, DBIL)水平, 测定肝组织GSH, MDA含量. ELISA法测定肝组织IL-1beta表达, 并观察肝脏病理组织学改变. 结果: 再灌注各时点PG组血清ALT水平(1 h: 1939±1427 nkat/L vs 5596±2975 nkat/L; 6 h: 3409±1708 nkat/L vs 9279±4404 nkat/L; 24 h: 1434±274 nkat/L vs 2264±630 nkat/L)和AST(1 h: 21746±12083 nkat/L vs 37552±12382 nkat/L; 6 h: 55039±35471 nkat/L vs 98811±11126 nkat/L; 24 h: 9394±1662 nkat/L vs 27664±15856 nkat/L)、肝组织MDA含量(1 h: 0.89±0.18 mumol/g vs 1.21±0.24 mumol/g; 6 h: 1.08±0.23 mumol/g vs 1.45±0.13 mumol/g; 24 h: 1.03±0.08 mumol/g vs 1.45±0.26 mumol/g)以及肝组织IL-1beta表达水平(1 h: 304.1±67.9 ng/L vs 362.8±137.1 ng/L; 6 h: 376.8±74.6 ng/L vs 618.8±217.8 ng/L; 24 h: 273.0±69.0 ng/L vs 373.0±71.7 ng/L)均显著低于NS组(P<0.05), 而肝组织GSH含量显著高于NS组(1 h: 945.1±121.2 mg/g vs 720.0±80.1 mg/g; 6 h: 753.5±118.6 mg/g vs 553.6±140.0 mg/g; 24 h: 768.0±135.9 mg/g vs 596.3±36.4 mg/g, P<0.05), 但两者胆红素水平无明显差异(P>0.05). PG组肝脏病理组织学损伤程度也较NS组明显减轻. 结论: PGE1下调肝组织IL-1beta表达, 对梗阻性黄疸肝脏缺血再灌注损伤具有保护作用.     

丹酚酸B对肝纤维化大鼠TGF-β1、MMP-2和TIMP-2表达的影响

目的: 观察丹酚酸B盐(salvianolic acid B, SA-B)对肝纤维化大鼠肝组织转化生长因子-beta1 (TGF-beta1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶组织抑制因子-2(TIMP-2)表达的影响, 并探讨SA-B抗肝纤维化的可能机制. 方法: ♂SD大鼠30只随机分为正常对照组、模型组和丹酚酸B治疗组, 以5 mL/L的二甲基亚硝胺(DMN)建立肝纤维化模型, 治疗组在造模4 wk后给予SA-B治疗4 wk. 应用HE, Masson染色观察肝组织病理纤维化分级, 全自动生化分析仪检测ALT、AST和Alb, 放免法检测HA和LN, S-P免疫组织化学方法检测TGF-β1、MMP-2和TIMP-2蛋白质的表达. 结果: 与模型组相比, SA-B能改善肝纤维化大鼠肝脏病理组织学结构, 治疗组血清ALT、AST、HA和LN水平明显减低(87.0±28.7 U/L vs 190.4±27.4 U/L, 85.6±25.3 U/L vs 178.2±15.9 U/L, 179.7±32.8 mg/L vs 433.3±86.1 mg/L, 135.6±21.1 mg/L vs 224.7±29.2 mg/L, 均P<0.01), 经SA-B干预后TGF-beta1和TIMP-2表达明显下降, 与模型组相比有显著性差异(18.53±2.54 vs 12.78±2.65, 21.88±3.83 vs 14.69±4.51, 均P<0.01), 而MMP-2表达水平无明显变化. 结论: SA-B能改善肝纤维化大鼠肝脏病理组织学结构, 可能通过抑制TGF-beta1和TIMP-2表达而促进肝纤维化的逆转.     

双环醇对小鼠日本血吸虫病肝纤维化即早基因与TGF-β1、TIMP1及胶原表达的影响

目的: 研究双环醇对小鼠日本血吸虫病肝纤维化的治疗作用及其机制. 方法: 将80只小鼠随机分为4组, 低剂量, 高剂量治疗组和实验组各组小鼠感染日本血吸虫8 wk后, 分别以60 mg/(kg·d)、120 mg/(kg·d)双环醇治疗8 wk以及不进行任何治疗, 第4组小鼠作为正常对照组. 应用HE染色、RT-PCR及免疫组化染色法, 观察和分析不同剂量双环醇治疗前后各组小鼠肝组织病理改变和c-fos mRNA、c-jun mRNA、转化生长因子beta1(transforming growth factorbeta1, TGF-beta1)、基质金属蛋白酶组织抑制因子1(tissue inhibitor of metalloproteinase 1, TIMP1)和Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达变化. 结果: 高剂量双环醇治疗后肝纤维化组织病理损伤减轻, 高剂量双环醇组TGF-beta1、TIMP1和Ⅰ、Ⅲ型胶原含量(平均积分光密度)分别是0.1815±0.0231、0.2324±0.0536、0.1811±0.0514、0.1543±0.0603明显低于实验对照组0.2139±0.0134、0.2648±0.0361、0.2140±0.0271、0.1862±0.0217. 而低剂量双环醇与实验对照组比较无显著差异. 与实验对照组相比, 高剂量双环醇组小鼠肝组织中c-fos mRNA, c-jun mRNA表达与实验对照组和低剂量双环醇组相比显著降低(c-fos mRNA: 0.6511±0.0551 vs 0.7844±0.0852, 0.8072±0.0923; c-jun mRNA: 0.6803±0.0712 vs 0.7982±0.0902, 0.8289±0.094). 结论: 双环醇治疗血吸虫病肝纤维化作用呈剂量依赖性. 高剂量双环醇抗血吸虫肝纤维化作用可能与其抑制肝组织即早基因表达、减少TGF-beta1、TIMP1产生有关.     

雌二醇对肝纤维化大鼠Ⅰ,Ⅲ型胶原及TGFβ1表达的影响

目的:观察雌二醇对肝纤维化大鼠肝脏胶原沉积和转化生长因子β_1(TGF β_1)表达的影响,研究雌激素对肝纤维化形成的抑制作用,并探讨其可能的机制。方法:设立模型组、治疗对照组、雌二醇组和正常对照组,以四氯化碳复合因素诱导大鼠肝纤维化动物模型,雌二醇组在四氯化碳应用的同时皮下注射苯甲酸雌二醇1mg/kg,2次/wk,共8wk。大鼠肝脏HE染色与Masson染色,分级观察肝组织的炎性坏死与胶原纤维沉积变化,并观察对大鼠肝纤维化形成过程中肝脏表达Ⅰ,Ⅲ型胶原蛋白及对TGF β_1的影响。结果:与正常对照组比较,四氯化碳模型大鼠出现典型的肝纤维化表现,肝脏胶原纤维间隔广泛形成,肝小叶与肝窦内胶原增生沉积明显,Ⅰ,Ⅲ型胶原(0.58±0.26vs 6.34±2.24,1.07±0.49 vs 5.28±1.28,P值均<0.001)及TGF β_1基因表达明显增多;雌二醇应用可以明显减轻肝脏内胶原纤维增生沉积P<0.05),抑制肝脏Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白(2.47±0.76 vs 6.34±2.24,3.02±1.20 vs5.28±1.28,P值均<0.05)及TGF β_1的合成表达。结论:雌二醇可抑制肝纤维化大鼠肝脏Ⅰ,Ⅲ型胶原蛋白及TGF β_1的合成表达,发挥对肝纤维化的抑制作用。     

转化生长因子β1对不同活化状态肝星状细胞增殖与Ⅰ型胶原表达的影响

目的 观察不同活化状态肝星状细胞(HSC)对外源性转化生长因子-β_1(TGF-β_1)旁分泌刺激的生物学效应作用。方法 原代分离培养大鼠HSC,无包被塑料培养皿上分别培养1、4、7d,细胞处于静止、中间活化与完全活化状态,继以10～500 pmol/L TGF-β_1温育细胞24h,~3H—TdR掺入法测定细胞增殖,western blot法检测细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)与Ⅰ型胶原蛋白表达沉积,~3H-脯氨酸掺入与胶原酶消化法测定细胞总胶原的分泌量。100pmol/L TGF-β_1温育细胞15～90min,northern blot法检测细胞Ⅰ型前胶原mRNA的表达水平。结果 TGF-β_1浓度依赖性抑制培养1d HSC的细胞增殖,10～500 pmol/L TGF-β_1浓度组细胞内~3H—TdR掺入率分别为对照组的52.8％～16.8％,与对照组比较,q值为5.44～10.37,P<0.01。但TGF-β_1对培养4d与7d的细胞增殖无影响。随细胞活化,HSC基础性α-SMA、Ⅰ型胶原蛋白与mRNA水平明显增加,而TGF-β_1刺激各培养时间HSC以上蛋白与基因的表达。培养1、4、7d HSC基础水平与TGF-β_1刺激的总胶原分泌量分别为(804±274)dpm/孔与(1 200±708)dpm/孔;(2 966±1 701)dpm/孔与(6 160±1 123)dpm/孔;(2 580±767)dpm/孔与(4 583±1 467)dpm/孔,后2组组内比较,t值分别为3.84与2.96,P<0.01或P<0.05。以培养4d HSC     

NHE-1与肝星状细胞增殖的关系及姜黄素对其的影响

目的:研究NHE-1与肝星状细胞增殖的关系及姜黄素对其的影响, 初步探讨肝纤维化的形成机制.方法:选择肝星状细胞系作为体外研究对象,用不同浓度(1、10、20 μmol/L)的姜黄素处理大鼠肝星状细胞; 以MTT比色法测定肝星状细胞的增殖; 酶联免疫吸附法(ELISA)测定Ⅰ型胶原含量, RT-PCR法检测肝星状细胞Na+/H-泵(NHE-1 mRNA)的表达.结果:各浓度姜黄素可明显下调肝星状细胞NHE-1 mRNA表达(0.6401±0.0063, 0.2391±0.0039, 0.1437±0.0044 vs 0.7214±0.0155,P <0.05), 降低培养上清液中Ⅰ型胶原的水平(199.40±16.22, 182.37±14.72, 169.91±15.80 ng/mg pro vs 216.35±17.19 ng/mg pro,P <0.05), 抑制肝星状细胞的增殖, 并呈剂量依赖性.结论:姜黄素可能通过调控肝星状细胞NHE-1mRNA的表达来抑制HSC的增殖及Ⅰ型胶原的合成等机制, 从而抑制肝纤维化的形成.     

肝素对肝纤维化大鼠肝星状细胞增殖及分泌的影响及其作用机制

目的观察肝素在体外对肝纤维化大鼠肝星状细胞增殖及分泌的影响,并探讨其作用机制。方法应用Nycodenz分离肝纤维化大鼠的肝星状细胞置培养板中,并分为三组。A、B组分别加入1000μg/ml及2000μg/ml肝素,C组不用药。应用MTT比色法检测各组肝星状细胞的增殖状况,免疫细胞化学检测各组肝星状细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、层粘连蛋白(LN)的表达。结果OD值A组为0.0626±0.0137,B组为0.0746±0.0131,C组为0.1106±0.0198,A、B组均显著低于C组(P均<0.05),B组低于A组(P>0.05);C组肝星状细胞胞质中可见α-SMA、TGF-β1和LN明显表达,A、B组各指标表达均低于C组(P分别<0.01和<0.05),A组表达低于B组(P<0.05)。结论肝素可抑制肝纤维化大鼠肝星状细胞的增殖及胶原分泌,作用机制可能是抑制肝星状细胞表达TGF-β1。     

益肝康抑制肝星状细胞Ⅰ型胶原合成的作用机制

目的:探讨活血化瘀中药复方“益肝康”抑制肝星状细胞Ⅰ型胶原合成的作用机制。方法:应用West-ern印记检测p38的活化程度;3H-Pro掺入法检测Ⅰ型胶原合成。结果:IL-1β有明显促大鼠HSCⅠ型胶原合成作用,IL-1β(10μg/L)作用培养的HSC24小时后,3H-Pro掺入量明显高于对照组(618.33±52.69vs388.83±49.72,P<0.01),阻断p38通路后,IL-1β的促HSCⅠ型胶原合成作用受到抑制。经不同浓度p38特异性阻断剂SB203580(10μmol/L,20μmol/L,40μmol/L)预处理的各组细胞,3H-Pro掺入量分别为487.33±42.75、408.50±27.47、400.83±19.49,与对照组(未用SB203580预处理,629.67±69.88)相比,其掺入量均明显降低(P<0.01,P<0.01,P<0.01)。益肝康可抑制IL-1β诱导的HSC中p38活性,与未用IL-1β处理组相比,在分别刺激HSCs5分钟、15分钟、30分钟和60分钟,HSC p38活性受到明显抑制(P<0.05,P<0.01)。经益肝康浸膏预孵育的益肝康 IL-1β组与单纯IL-1β组相比,p38活性明显受到抑制(1.550±0.410vs2.973±0.953,P<0.01)。结论:IL-1β可促进大鼠HSCⅠ型胶原合成;细胞内p38信号蛋白参与了IL-1β促HSCⅠ型胶原合成;益肝康可通过阻断p38通路,从而发挥抑制HSCⅠ型胶原合成作用。     

甘草酸对转化生长因子β1刺激肝星状细胞信号传导的作用

目的探讨甘草酸对转化生长因子β1(TGF β1)刺激大鼠肝星状细胞(HSC)胞内信号传导通路的作用。方法体外分离、培养大鼠肝HSC,甘草酸与TGFβ1刺激的HSC共同孵育。逆转录聚合酶链反应法检测1-1000 μmol/L甘草酸对TGF β1刺激的HSC中Smad2、3、7 mRNA的表达;Western印迹法检测1-1000μmol/L甘草酸对TGF β1刺激的HSC中Smad2、3、7蛋白及Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达水平。结果TGFβ1促进HSC中Smad2、3、7 mRNA及蛋白的表达,同时促进Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达。1-1000μmol/L甘草酸抑制Smad2、3、7 mRNA及蛋白的表达,并且抑制Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达,均呈剂量依赖性。结论甘草酸可能通过干预大鼠HSC中TGFβ信号通路而减少胶原合成和发挥抗纤维化作用。     

奥曲肽对肝星状细胞胶原合成及TIMP-1、MMP-2表达的影响

目的研究奥曲肽(OCT)对体外培养的大鼠肝星状细胞(HSC)胶原分泌及TIMP-1mRNA、MMP-2mRNA表达的影响。方法体外培养大鼠HSC,HSC随机分为4组,分别加入不同浓度的OCT,用ELISA法检测细胞上清液中的Ⅰ、Ⅲ型胶原的含量,半定量RT-PCR法检测OCT对HSC中MMP-2、TIMP-1 mRNA表达的影响。结果应用OCT干预后,HSC合成Ⅰ、Ⅲ型胶原减少,TIMP-1 mRNA的表达较少,而MMP-2 mRNA表达明显增加,差异有显著性(P<0.05)。结论OCT可以抑制HSC的Ⅰ、Ⅲ型胶原的合成,增强MMP-2mRNA的表达,抑制TIMP-1mRNA的表达,这可能是OCT发挥抗肝纤维化作用的途径之一。     

IL-10对TGF-β1诱导的大鼠肝星状细胞CTGF表达的影响

目的: 探讨IL-10对大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cells, HSC)表达CTGF的影响及其抗纤维化的可能机制. 方法: 体外培养大鼠肝星状细胞系rHSC-99, 分别用不同浓度的IL-10、TGF-beta1干预和两者共同干预48 h后, 采用半定量 RT-PCR法检测各组肝星状细胞中CTGF mRNA表达水平. 结果: TGF-beta1单独干预HSC, CTGF mRNA表达水平与对照组比较均明显增强(P<0.05); 不同浓度的IL-10单独干预HSC, 各目的基因表达与对照组比较无明显统计学意义; 不同浓度的IL-10与TGFbeta1共同干预HSC, CTGF mRNA表达水平与TGF-beta1组比较均明显降低(P<0.05). 结论: IL-10可显著抑制由TGF-beta1诱导的CTGF mRNA的表达, 这可能是其抗纤维化的机制之一.     

福辛普利对自发性高血压大鼠模型血压水平及炎症反应、心血管重构的影响

目的 研究福辛普利对自发性高血压大鼠血压水平、炎症反应及心血管重构的影响。方法 选择自发性高血压大鼠作为实验动物并分为对照组和ACEI组。对照组给予生理盐水，ACEI组给予福辛普利干预。干预前后分别测定尾动脉收缩压，干预后测定心脏组织中炎性因子、重构分子的含量以及肾脏组织中炎性因子的含量。结果[结果部分应列举主要数据，并修改英文摘要] 干预后2周、4周、6周、8周时，ACEI组大鼠尾动脉收缩压呈逐步降低趋势，对照组大鼠尾动脉收缩压无明显变化，ACEI组大鼠尾动脉收缩压显著低于对照组；干预后8周，ACEI组大鼠心脏组织中NF-κB（3.28±0.64 vs 6.61±0.93）ng/mg、IL-1β（1.02±0.17 vs 1.92±0.28）ng/mg、IL-6（0.74±0.11 vs 1.87±0.30）ng/mg、TNF-α（1.46±0.22 vs 3.42±0.57）ng/mg、CTGF（152.52±25.25 vs 353.68±51.24）pg/mg、α-actinin（1.86±0.26 vs 4.25±0.67）ng/mg、MMP-9（177.53±23.15 vs 353.64±46.79）pg/mg的蛋白含量均显著低于对照组，大鼠肾脏组织中NF-κB（2.24±0.35 vs 5.58±0.79）ng/mg、IL-1β（1.42±0.19 vs 3.20±0.56）ng/mg、IL-6（1.18±0.22 vs 2.78±0.35）ng/mg、TNF-α（0.51±0.62 vs 1.24±0.19）ng/mg的蛋白含量均显著低于对照组。结论 福辛普利用于自发性高血压大鼠能够降低血压并抑制炎症反应和心血管重构。     

大鼠肝硬化形成过程中肝组织TGF-β1,Smad3,Smad7水平动态的变化

目的: 观察实验性大鼠肝硬化形成过程中, 肝组织TGF-beta1, Smad3, Smad7水平的动态变化, 研究三者在肝硬化发生过程中的作用及机制. 方法: 以SD大鼠为实验对象, 于实验开始时处死6只大鼠作为wk 0正常对照组, 剩余大鼠, 600 mL/L四氯化碳3 mL/kg, sc, 2次/wk, 复制肝硬化动物模型. 于wk 3, 6, 9, 12各处死一批大鼠, 用RT-PCR检测动物肝组织中TGF-beta1, TGF-betaRⅡ的mRNA表达水平, Western blot检测肝组织中Smad3, Smad7蛋白水平, 免疫组织化学方法检测动物肝组织中TGF-beta1的表达和定位. 结果: 正常肝组织中有少量TGF-beta1, TGF-beta RⅡ的mRNA表达. 随着肝纤维化及肝硬化的形成, 模型组wk 0, 3, 6, 9, 12, TGF-beta1, TGF-beta RⅡ和Smad3表达量分别逐渐递增(TGF-beta1: 0.19±0.12, 0.29±1.02, 0.89±0.23, 0.98±0.77, 1.7±1.00; TGF-beta RⅡ: 0.30±0.22, 0.49±0.16, 1.02±0.33, 1.51±0.72, 2.14±1.02; Smad3: 0.44±0.24, 0.84±0.69, 1.10±0.16, 1.40±0.12, 1.75±1.05), Smad7表达量呈逐渐减少(1.35±0.12, 1.09±0.78, 1.14±0.31, 1.11±0.91, 0.74±1.21). 正常肝组织TGF-beta1可见少量表达, 主要在中央静脉周围肝细胞中. 随着肝纤维化及肝硬化的形成, TGF-beta1表达增强(P<0.01). 结论: 随着肝硬化的形成, 肝脏中TGF-beta1, TGF-beta RⅡ和Smad3表达增加, Smad7表达下降.     

氧化苦参碱对实验性结肠炎大鼠肠黏膜细胞因子和核因子-κB p65表达的影响

目的: 观察氧化苦参碱注射液对大鼠实验性结肠炎的治疗效果, 探讨其作用机制. 方法: 将40只SD大鼠随机分为4组: 正常对照组、模型组、美沙拉嗪组和氧化苦参碱(OMT)组, 每组10只. 正常对照组未行造模, 其余3组大鼠均采用TNBS造模. 模型组给予生理盐水肌注, 美沙拉嗪组给予美沙拉嗪混悬液灌胃, 氧化苦参碱组给予氧化苦参碱注射液肌注. 治疗15 d后观察大鼠的腹泻、便血症状和结肠病理组织学改变, 用ELISA法检测结肠黏膜组织IL-2、IL-10的变化, 并用免疫组化技术检测大鼠结肠黏膜核因子(NF)-kappaB p65的 表达. 结果: OMT组大鼠腹泻、黏液脓血便症状得到较快控制, 大鼠黏膜组织损伤显著改善. 与模型组比较, OMT组IL-2减少(102.93±21.10 ng/L vs 231.48±40.78 ng/L, P<0.05), IL-10增多(50.13±1.40 ng/L vs 18.64±0.65 ng/L, P<0.05), NF-kappaB p65显著降低(16.02%±7.27% vs 43.05%±13.80%, P<0.01). 与正常组相比, 模型组结肠黏膜IL-2升高, IL-10减少, NF-kappaB p65表达增多, 差异均有显著性意义(102.93±21.10 ng/L vs 30.44±12.03 ng/L, 50.13±1.40 ng/L vs 58.92±3.70 ng/L, 16.02%±7.27% vs 9.57%±4.31%, 均P<0.01). OMT组与美沙拉嗪组比较, IL-2、IL-10和NF-kappaB p65的表达无显著性差异. 结论: 氧化苦参碱注射液治疗大鼠实验性结肠炎有明显效果, 其作用机制可能是通过减少IL-2的生成、促进IL-10分泌和抑制NF-kappaB p65的激活发挥治疗作用.     

TGF-β1对大鼠HSC-T6细胞增殖、细胞周期和胶原分泌的影响

目的观察TGF-β1对大鼠肝星状细胞系HSC-T6增殖、细胞周期以及分泌肝纤维化相关胶原的影响。方法采用MTT法检测细胞增殖;使用流式细胞仪检测细胞周期;采用荧光定量RT-PCR法检测SMAD3、c-myc、cdk-2、cyclinE、EGF、HGF、Bcl-2、NF-κB、MMP1、MMP9、MMP14、TIMP-1、PAI-1、α-SMA、COLⅠ及COLⅢ等基因mRNA水平;采用ELISA法检测细胞培养液COLⅠ、COLⅢ和α-SMA含量。结果与对照组比,TGF-β1处理24h及36h时,细胞形态及生长状况均无明显变化;在24h和36h时,TGF-β1处理组细胞G0/G1期细胞比率均减少(24h:57.3±8.5%vs 60.6±9.7%;36h:53.0±2.2%vs 56.6±5.0%),S期细胞比例略高(24h:30.6±7.2%vs26.4±10.1%;36h:35.2±3.7%vs 30.8±2.5%),但差异无统计学意义(P>0.05);TGF-β1处理组SMAD3、c-myc、cdk2、cyclin E、EGF、Bcl-2、NF-κB、TIMP1、PAI-1、α-SMA及COLⅠmRNA在24h和36h表达均上调,HGF、MMP1、MMP9、MMP14及COLⅢmRNA在24h时表达下调,36h时表达上调;TGF-β1处理组HSC-T6细胞分泌COLⅠ[24h:(63.0±7.4ng/ml vs 33.2±10.8 ng/ml,P<0.05;36h:58.5±6.0ng/ml vs 42.2±6.3ng/ml,P<0.05];α-SMA[24h:20.6±2.6ng/ml vs 4.2±0.7ng/ml,P<0.05;36h:59.7±14.6ng/ml vs 36.8±5.6ng/ml,P<0.05)均显著增加。结论 TGF-β1对大鼠肝星状细胞系HSC-T6显示了促增殖作用,并能促进肝纤维化相关胶原的分泌。     

心钠素对大鼠肝星状细胞活化过程中TGF-β1/Smads信号通路的影响

目的 探讨心钠素(ANP)对大鼠肝星状细胞(HSC T6)活化过程中TGF-β1/Smads信号通路的影响.方法 待HSC T6细胞贴壁后,在细胞培养瓶中加入ANP 10μmol/L培养1h,采用免疫荧光法、利用激光共聚焦显微镜观察细胞内Smad4和pSmad2/3蛋白细胞内转位.将HSC T6细胞分成空白未活化组、空白活化组、ANP1 μmoL/L组、ANP 10 μmol/L组,继续培养1h,分别提取细胞质蛋白及核蛋白,以Western blotting法检测Smad4蛋白表达水平变化.ANP作用24 h,收集细胞培养液,以ELISA法检测Ⅰ型胶原、MMP-13分泌量.结果 空白未活化组、ANP 10 μmol/L组Smad4、pSmad2/3在胞质内表达,空白活化组在核内表达;ANP1、10 μmol/L组细胞质内Smad4蛋白表达量较空白活化组增多(P均＜0.05),并随ANP浓度的增大表达增强(P＜0.05),而细胞核内Smad4蛋白表达量变化趋势与细胞质蛋白相反(P均＜0.05).ANP作用HSC T6 24 h后,细胞上清液中Ⅰ型胶原的分泌量较空白对照组减少(P＜0.05),MMP-13分泌量无明显变化.结论 ANP可在一定程度上阻断大鼠HSC T6细胞活化过程中TGF-β1/Smads信号通路的传导,减少了Ⅰ型胶原的分泌量,起到了抗肝纤维化的作用.     

RhoA/ROCK信号转导通路介导高糖诱导的大鼠肝星状细胞的增殖和胶原合成

目的 探讨RhoA/ROCK信号转导通路在高糖诱导大鼠肝星状细胞（hepatic stellate cell,HSC）增殖和胶原合成中的作用。方法 将SD大鼠肝星状细胞株HSC-T6在1640培养基中培养24 h,实验设置对照组（含5.5 mmol/L葡萄糖）、高糖组（含25 mmol/L葡萄糖）、高渗透压组（5.5 mmol/L葡萄糖+19.5 mmol/L甘露醇）、高糖+法舒地尔（12.5μmol/L、25μmol/L、50μmol/L）组。采用MTS法检测细胞增殖率;采用羟脯氨酸（hydroxyproline,Hyp）试剂盒测定细胞上清中Hyp水平;采用实时荧光定量聚合酶链式反应（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,FQPCR）测定Ⅰ和Ⅲ型前胶原mRNA的相对表达量;采用Westernblot检测肌球蛋白磷酸酶靶亚基1(myosin phosphatase target subunit 1,MYPT1)、细胞外信号调节激酶（extracellular signal-regulated kina...     

舒肝颗粒对大鼠肝星状细胞增殖及胶原分泌的影响

目的:观察舒肝颗粒对肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)增殖及胶原分泌的影响.方法:体外培养HSC-T6.设空白对照组、正常对照组和舒肝颗粒干预组,其中,舒肝颗粒干预组设7个浓度梯度.前两者加入无血清的RPMI 1640胞培养液,后者加入含舒肝颗粒的无血清RPMI 1640细胞培养液,药物终浓度分别为0.56、0.28、0.14、0.07、0.035、0.018和0.009 g/L.采用MTT法检测细胞增殖,ELISA法检测Ⅰ、Ⅲ及Ⅳ型胶原含量.结果:经48 h,舒肝颗粒干预组HSC抑制率分别为48.59%、38.24%、28.12%、21.15%、8.47%、7.26%和0.33%,明显高于正常对照组,且呈剂量效应关系.舒肝颗粒干预组细胞上清液中Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原含量较正常对照组明显降低(5.437 μg/L±0.043 μg/L、3.26μg/L±0.217μg/L、2.18μg/L±0.245μg/L vs 13.817μg/L±0.787μg/L、8.629μg/L±0.178μg/L、5.29μg/L±0.315μg/L,均P<0.01).结论:舒肝颗粒可通过抑制HSC增殖和胶原蛋白的分泌,减少胶原纤维在肝脏内的沉积,这可能是其抗肝纤维化的作用机制之一.